11-1-其他类型HPLC色谱法-离子对
高效液相色谱法习题
高效液相色谱法习题第12章高效液相色谱法习题（一）选择题单选题1. 在高效液相色谱中影响柱效的主要因素是( )A 涡流扩散B 分子扩散C 传质阻力D 输液压力2. 在高效液相色谱中，提高柱效能的有效途径是( )A 提高流动相流速B 采用小颗粒固定相C 提高柱温D 采用更灵敏的检测器3. 高效液相色谱法的分离效果比经典液相色谱法高，主要原因是( )A 流动相种类多B 操作仪器化C 采用高效固定相D 采用高灵敏检测器4. 在高效液相色谱中，通用型检测器是( )A 紫外检测器B 荧光检测器C 示差折光检测器D 电导检测器5. HPLC与GC的比较，可忽略纵向扩散项，这主要是因为( )A 柱前压力高B 流速比GC的快C 流动相黏度较小D 柱温低6．液相色谱定量分析时，要求混合物中每一个组分都出峰的是( )A 外标标准曲线法B 内标法C 面积归一化法D 外标法7．下述四种方法中最适宜分离异构体的是是( )A 吸附色谱B 反离子对色谱C 亲和色谱D 空间排阻色谱8．在液相色谱中，梯度洗脱适用于分离( )A 异构体B 沸点相近，官能团相同的化合物C 沸点相差大的试样D 极性变化范围宽的试样9．在HPLC中，范氏方程中对柱效影响可以忽略不计的因素是( )A 涡流扩散B 纵向扩散C 固定相传质阻力D 流动相传质阻力10．当用硅胶为基质的填料作固定相时，流动相的pH范围应为( )A 在中性区域B 5一8C 1一14D 2一811．高效液相色谱法中，常用的流动相有水、乙腈、甲醇、正己烷，其极性大小顺序为( )A 乙腈>水>甲醇>正己烷B 乙腈>甲醇 >水>正己烷C 水> 乙腈>甲醇>正己烷D 水>甲醇> 乙腈>正己烷12．高效液相色谱法中,使用高压泵主要是由于( )A 可加快流速，缩短分析时间B 高压可使分离效率显著提高C 采用了细粒度固定相所致D 采用了填充毛细管柱13．液相色谱的H-u曲线（）。
高效液相色谱法的种类 液相色谱操作规程
高效液相色谱法的种类液相色谱操作规程高效液相色谱法按分别机制的不同分为液固吸附色谱法、液液调配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。
1．液固色谱法使用固体吸附剂，被分别组分在色谱柱上分别原理是依据固高效液相色谱法按分别机制的不同分为液固吸附色谱法、液液调配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。
1．液固色谱法使用固体吸附剂，被分别组分在色谱柱上分别原理是依据固定相对组分吸附力大小不同而分别。
分别过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。
常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5～10μM。
适用于分别分子量200～1000的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。
常用于分别同分异构体。
2．液液色谱法使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定相，分别原理是依据被分别的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分别。
分别过程是一个调配平衡过程。
涂布式固定相应具有良好的惰性；流动相必需预先用固定相饱和，以削减固定相从担体表面流失；温度的变化和不同批号流动相的区分常引起柱子的变化；另外在流动相中存在的固定相也使样品的分别和收集多而杂化。
由于涂布式固定相很难避开固定液流失，现在已很少接受。
现在多接受的是化学键合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。
液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法（NPC）和反相色谱法（RPC）。
正相色谱法接受极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调整组分的保留时间。
常用于分别中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。
反相色谱法一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调整保留时间。
适用于分别非极性和极性较弱的化合物。
(完整版)高效液相色谱习题及答案
高效液相色谱法习题一、思考题1．从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。
2．液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处? 3．在液相色谱中, 提高柱效的途径有哪些?其中最有效的途径是什么?4．液相色谱有几种类型? 5．液-液分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？6．液-固分配色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？7．化学键合色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？8．离子交换色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？9．离子对色谱的保留机理是什么?这种类型的色谱在分析应用中,最适宜分离的物质是什么?10．空间排阻色谱的保留机理是什么？这种类型的色谱在分析应用中，最适宜分离的物质是什么？11．在液-液分配色谱中，为什么可分为正相色谱及反相色谱？12．何谓化学键合固定相？它有什么突出的优点？13．何谓化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱？试述它们的基本原理14．何谓梯度洗提？它与气相色谱中的程序升温有何异同之处？15．高效液相色谱进样技术与气相色谱进样技术有和不同之处？16．以液相色谱进行制备有什么优点？17．在毛细管中实现电泳分离有什么优点？18．试述CZE的基本原理19．试述CGE的基本原理20．试述MECC的基本原理二、选择题1．液相色谱适宜的分析对象是（）。
A 低沸点小分子有机化合物B 高沸点大分子有机化合物C 所有有机化合物D 所有化合物2．HPLC与GC的比较，可忽略纵向扩散项，这主要是因为（）。
A 柱前压力高B 流速比GC的快C 流动相钻度较小D 柱温低3．组分在固定相中的质量为MA(g)，在流动相中的质量为MB（g），而该组分在固定相中的浓度为CA（g·mL －1），在流动相中浓度为CB（g·mL－1），则此组分的分配系数是( )。
第十一章 色谱法
内标法
计算公式 ： mi
Ai f i ' ms As f s '
Ai f i ' mi ms As f s '
mi Ai f i 'ms Ai Ci % 100% 100% 常数 m总 As f s 'm总 As
Ai/As
Wi
内标法标准曲线
内标物的选择:
r21 =
t t
' R2 ' R1
=
V
V
' R2 ' R1
r21 同种固定液对难分离物质对的选择性度量 r21 越大，两组分分离越容易 在气相色谱中， r21的大小仅与固定相种类和 柱温有关。在液相色谱中， r21与固定相、流 动相及柱温有关。 r21是色谱定性的重要参数， 实验室之间可通用。
§2、色谱法基本理论
评价 ：简单，准确。
不适用于试样中组分不能全部出峰的情况。
§2、色谱法基本理论 适用条件： 用于测定试样中个别组分 具体方法：选用一定量的纯物质作内标, 固定内标物和样
品的取样量, 配制一系列具有相同浓度内标物和不同浓度待测 组份纯物质的一系列溶液进行测定, 以Wi(已知的待测组份含量) 对Ai/As (待测物质与内标物的峰面积之比)作图:
(2) 基线 只有流动相经过检测器时，所产生的信号， 反映实验条件的稳定情况。稳定时为直线。
tR 进 样 tM 空 气 峰 tR’
2. 关于保留值的术语 （1） 用时间表示的保留值 tR保留时间：进样柱后出现Cmax值时所需时间 tM死时间: 不与固定相作用的组分的保留时间
t R 调整保留时间:
改变柱温也可改变r21。
§2、色谱法基本理论 三、色谱定性定量方法 1. 定性分析
离子对色谱法
2. 组分溶于水，可用： 组分溶于水，可用： 1）非离子型化合物用反相色谱 SP: -C18, C8等 MP：水或缓冲溶液，甲醇，乙腈， THF的混合液 2) 可离子化化合物用反相离子对色谱 SP：-C18, C8等 MP：水或缓冲溶液（含离子对试剂），甲醇，乙 腈， THF的混合液 3）离子型化合物可用离子交换色谱 或采用反相离子对色谱 SP: -SO3H, -NR3Cl型离子交换剂 MP：缓冲液
1．离子对模型 ．
以有机碱（B）为例。调节流动相pH，使碱 转变为正离子BH+形式，则BH+与流动相中 离子对试剂（烷基磺酸盐）的反离子RSO3生成不荷电的中性离子对，此中性离子对在 固定相和流动相间达到分配平衡。 B + H+ BH+ RSO3Na RSO3- + Na+ BH+ + RSO3- (BH+ RSO3-)m (BH+ RSO3-)s
九．HPLC分析方法 分析方法
（一）定性分析方法 定性分析方法 1．色谱鉴定法：只能对范围已知的化合物定性。 定性原理：同一物质在相同色谱条件下保留时间 （或保留体积或相对保留值）相同。 2．化学鉴定法 收集色谱馏分，在利用化学反应进行鉴定。 3. 两谱联用鉴定法： 离线： 制备HPLC获得纯组分，用UV, IR, MS NMR鉴定； 在线：联用仪
(二）分子量大于1000的组分 二 分子量大于 的组分 采用凝胶色谱法 1. 组分溶于水： 凝胶过滤色谱 SP：水溶性凝胶 MP：水溶液 2. 组分溶于有机溶剂 凝胶渗透色谱 SP：有机凝胶 MP：有机溶剂
Ai f i ms = mi = As f s
Ai f i ms As
fs =1
该法实际为内标一点法
色谱法
载气
检测器
氮气
氢火焰离子化检测器（FID）
检测温度高于柱温
一般 250 ~ 350℃
二、高效液相色谱法（HPLC法）
以液体为流动相的色谱法
（一）HPLC的速率理论
H A Cu
与气相色谱法的差别
GC法 高温（ChP 50 ~ 265℃） 纵向扩散项大（B/u）
HPLC法
室温
传质阻抗项大（Cu）
2. 载体
硅藻土型载体（红色、白色）
3. 毛细管色谱柱 填充型毛细管柱
开管型毛细管柱（WCOT、SCOT）
√
（四）气相色谱仪
气源 进样及气化系统
色谱柱和柱温箱
检测器 热导检测器 氢火焰离子化检测器
电子捕获检测器
ChP（2005）对气相色谱仪的一般要求
色谱柱 固定液 填充柱或毛细管柱（空心柱) 高沸点液体
As Cs f AR CR
内标+样品→计算杂质含量
Ax Cx f As Cs
内标物+ 杂质对照品 →校正因子
内标物+样品 →杂质含量
（2）外标法 供试品→供试品溶液
杂质对照品→对照品溶液
Ax 含量（ x） CR C AR
缺点 不易控制进样量
宜用定量环
（3）加校正因子的主成分自身对照法
2
（二）分离度（R）
除另有规定外，R≥1.5
2 t R2 t R1 R W1 W2
t R2 t R1
（三）重复性（RSD）
尾因子（T）
除另有规定外，T应0.95 ~ 1.05
W0.05h T 2d1
四、GC和HPLC在药品检验中的应用
配系数大的后流出
HPLC法
High performance liquid chromatography; HPLC
药学院药物分析教研室：柯发敏
1
高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法 的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而
35
柱的使用和维护注意事项：
高效液相色谱仪
①避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动
②应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不 应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。
③一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱 可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。 否则反冲会迅速降低柱效。
④选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固 定相被破坏
不稳
恒流泵：在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与
色谱柱引起阻力变化无关，常用
30
泵的使用和维护注意事项
高效液相色谱仪
①防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何 杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀， 因此应预先除去流动相中的任何固体微粒 （流动相 和样品必须过滤膜）
②流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流 动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时 间的情况下 ③泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否 则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产 生漏液
11
3 .离子交换色谱法(ion exchange chromatography)
以离子交换树脂作为固定相，树脂上具有固定离子基 团及可交换的离子基团。当流动相带着组分电离生成 的离子通过固定相时，组分离子与树脂上可交换的离
子基团进行可逆变换。根据组分离子对树脂亲合力不
11-1 盐酸普鲁卡因
一、盐酸普鲁卡因的分析
（一）鉴别 1.水解反应 盐酸普鲁卡因 + NaOH
普鲁卡因 （白色沉淀）
油状物
对氨基苯甲酸钠 + 二乙氨基乙醇 （使湿润的红色石蕊试纸变兰色）
对氨基苯甲酸（白色）
对氨基苯甲酸钠 + HCl
具体的化学反应：
2.红外光谱法 芳伯氨基、苯环、酯基等基团
3. 指示终点的方法 (1) 永停滴定法 溶液 终点前： 无过量 HNO2
检流计 无电流
终点时：有过量 HNO2
有电流（使指针偏离零
永停在某一位置）
(2)
外指示剂法 用KI-淀粉指示剂 指示终点的原理： 2NaO2 + 2KI + 4HCl 2NO + I2 + 2KCl + 2NaCl + 2H2O
Ar-N2+Cl- +
H2N-Ar
Ar-N=N-NH-Ar
+
HCl
一般摩尔比为Ar-NH2 : HCl = 1 :
2.5~6 。
(3) 室温条件下滴定: 温度高反应速度快；每升高10℃加快2.5倍
但太高,可使Ar-N2+Cl- + H2O (4) 滴定管尖端插入液面下滴定
Ar-OH + N2
+
HCl
3.氯化物的反应 • （1）沉淀反应
• （2）氧化还原反应：在硫酸作用下，与二
氧化锰反应生成氯气，能使润湿的碘化钾
淀粉试纸显蓝色。
4.芳香第一胺反应（重氮化-偶合反应）
[鉴别] 取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸
使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴橙黄到
高效液相色谱分离检测技术
(3)缓冲溶液中缓冲剂浓度增大 ;保留时间会减小。
三、反相离子对色谱法
1、分离机制
在反相色谱法中,将一种或多种与被测离子电荷相反得离子(称为对离子 或反离子)加到极性流动相中,使其与被测离子结合,形成疏水性(中性或弱极性) 得离子对缔合物 ,而被非极性固定相(有机相)萃取,进入固定相被保留 、因待测 组分离子得性质不同、反离子形成离子对得能力不同和形成离子对疏水性得 不同,导致各组分离子在固定相中滞留时间得不同,因而出色谱柱先后不同,实现 分离、
2、固定相与流动相
(1)固定相
基质 ---合成树脂(聚苯乙烯)、纤维素和硅胶 离子交换剂 ----键合得离子交换基团
类型
符号
官能团
强阳离子交换剂 弱阳离子交换剂
SCX WCX
—SO3H —COOH
强阴离子交换剂 弱阴离子交换剂
SAX WAX
—N+R3 —NH2
(2)流动相----水缓冲溶液
选择规则 (1)增加流动相中盐得浓度,可以降低待测离子得竞争亲和力, 使其在固定相上得保留时间减少,先出色谱柱;反之,则保留时间 增大,后出色谱柱 、
2、不加校正因子得主成分自身对照法
按上述(1)法配制对照溶液并调节检测灵敏度后,取供 试品溶液和对照溶液适量,分别进样。除供试品质量标准项 下有特别规定外,供试品溶液色谱图记录得时间应为主成分 色谱峰保留时间得2倍,测量供试品溶液色谱图中各杂质得峰 面积并与对照溶液得主成分得峰面积比较,计算杂质得含量。
在无抑制柱得离子交换色谱中,进入检测器得就是高电导得洗脱剂 NaOH及被洗脱得组分NaX,后者所产生得电导得微小变化被洗脱剂得高本 底所淹没,难于检测。而加了抑制柱后,进入检测器得本底就是电导率很低 得水,因此很容易检测出具有较大电导率得HX。
离子色谱方法及应用
离子色谱中发生的基本过程就是 离子交换，因此，离子色谱本质 上就是离子交换色谱。
阳离子交换：
X m Y Rs Ym X Rs
阴离子交换：
X m Y Rs Ym X Rs
离子交换树脂上可以离解的离子和流 动相中具有相同电荷的的溶质离子之 间进行的可逆交换，根据这些离子对 交换剂有不同的亲和力而被分离。
＋
３５０ ３９ ５０ ７４ ７３ ５３ ６０
Total conductivity ＝
Anion ＯＨ－ Ｆ－ Ｃｌ－ Ｂｒ－ ＮＯ３－ ＰＯ４３－ ＳＯ４２－
（ ＋） ＋
－
１９８ ５５ ７６ ７８ ７１ ８０ ８０
（ ）－
二、离子色谱仪器
淋洗液
进样阀 泵
色谱柱
检测池
抑制器 检测器
泵液 进样
分离
检测
安装在电导池之前 提高待测离子的电导率：
提高灵敏度
Na+, Cl-
H+, Cl-
降低背景电导 (淋洗液) :
减少噪音
Na+, HCO3Na+, OH-
H2CO3 H2O
极限摩尔电导值
（unit：μS/m equivalent）
Cation Ｈ＋ Ｌｉ＋ Ｎａ＋ Ｋ＋ ＮＨ４＋ Ｍｇ ２＋ Ｃａ２＋
12943
阳极 废液
Na+, X- 在 NaOH 淋洗液中
阴极
废液
H2O, O2H+来自H+ + O2
H2O
H+ + OH-
H2O
H+, X -
Na+
H+ , X- in H2O
【大学课程】分析化学第20章 高效液相色谱法
梯度洗脱装置
外梯度（高压梯度）: 利用两台高压输液泵，
将两种不同极性的溶剂按 一定的比例送入梯度混合 室，混合后进入色谱柱。
内梯度（低压梯度）: 一台高压泵, 通过比
例调节阀,将两种或多种 不同极性的溶剂按一定 的比例抽入高压泵中混 合。
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（2）进样装置
流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示：
3 L2
L2
0.75cm
2021/11/1
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液相色谱仪（3）
Agilent 1200 LC Systems
安捷伦1200 液相色谱系统
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液相色谱仪（4）
2021/11/1
二、流程及主要部件
1.流程
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2.主要部件
（1）高压输液泵：
主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高 速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性
以固体吸附剂为固定相，如硅胶、氧化铝等，较常使用的 是5～10μm的硅胶吸附剂。流动相可以是各种不同极性的 一元或多元溶剂。
（二）液-液分配色谱：LLC
有正相色谱和反相色谱之分
正相色谱（NPC)
反相色谱(RPC)
固定相极性
大
小
流动相极性
小
大
流动顺序 流动相极性↑，
极性小的组分先
流出 k↓，tR↓
极性大的组分先
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小结
• 掌握Van Deemter 方程在HPLC中的表现形式； • 掌握正相色谱和反相色谱的区别； • 掌握化学键合相色谱，特别是反相键合相色谱
离子对色谱法
A
水相
+B
+ 水相
A B
+ 有机相
A- —待测离
由于离子对A-B+具有疏水性,可被非极性 固定相提取.其它待测离子A1,A2, A3……..因与B离子间的成对能力不同,而 形成不同疏水性的离子对,它们在柱内的 保留值不同,从而达到各组分离子相互分 离的目的. (2)动态离子交换 认为离子对试剂的疏水部分,吸附到固定相并 形成动态的离子交换表面,待测离子被保留在 这个动态的离子交换表面上.
分子量 水溶性 >2000
方法
流动相 水
可溶或不溶 排阻色谱
<2000 可溶但不离 酚,醚,胺等:化学键合相色谱 各种 解 分子量较大的:排阻色谱 水 可溶且离解 酸或阴离子:阴离子交换色谱 缓冲液 碱或阳离子:阳离子交换色谱 不溶 多官能团化合物,异构体,稳定 各种 化合物:液固吸附色谱.如脂溶 性维生素,酚,醇 不稳定化合物,同系物:化学键 各种 合相色谱. 相对分子量较大且尺寸不同的化 各种 合物:排阻色谱(如增塑剂)
5,金属含氧酸的测定(电镀液等) 6,有机化合物分析 7,食品,饮料中的有机酸,酸味剂,防腐剂,风 添加剂等 8,有机胺类化合物; 9,药物和农药(特别是无紫外吸收的化合物) 10,表面活性剂 11,过渡金属离子的分析
五.排阻色谱法 Steric exclusion chromatography(SEC)
K SEC
[C s ] V R V 0 = = [C m ] Vi
尺寸排阻色谱中任何组分的分配系数应符合: 0 ≤ KSEC ≤ 1 大于排阻极限的分子,KSEC=0 , VR = V0 小于排阻极限的分子,KSEC=1.0 , V R = V0 + V i
离子色谱、气相色谱、GC-MS知识点
离子色谱、气相色谱、GC-MS知识点第七节离子色谱法(一)基础知识分类号：W7-0一、填空题1．离子交换色谱主要用于有机和无机、离子的分离。
答案：阴阳2．离子排斥色谱主要用于酸、酸和的分离。
答案：有机无机弱醇类3．离子对色谱主要用于表面活性的离子、离子和络合物的分离。
答案：阴阳金属4．离子色谱仪中，抑制器主要起降低淋洗液的和增加被测离子的，改善的作用。
答案：背景电导电导值信噪比5．离子色谱分析样品时，样品中离子价数越高，保留时间，离子半径越大，保留时间。
答案：越长越长6．离子色谱中抑制器的发展经历了几个阶段，最早的是树脂填充抑制柱、管状纤维膜抑制器，后来又有了平板微膜抑制器。
目前用得最多的是抑制器。
答案：自身再生7．在离子色谱分析中，为了缩短分析时间，可通过改变分离柱的容量、淋洗液强度和，以及在淋洗液中加入有机改进剂和用梯度淋洗技术来实现。
答案：流速二、判断题1．离子色谱(IC)是高效液相色谱(HPLC)的一种。
( )答案：正确2．离子色谱的分离方式有3种，即高效离子交换色谱(HPIC)、离子排斥色谱(HPIEC)和离子对色谱(MPIC)。
它们的分离机理是相同的。
( )答案：错误正确答案为：它们的分离机理是不同的。
3．离子色谱分析中，其淋洗液的流速和被测离子的保留时间之间存在一种反比的关系。
( )答案：正确4．当改变离子色谱淋洗液的流速时，待测离子的洗脱顺序将会发生改变。
( )答案：错误正确答案为：待测离子的洗脱顺序不会改变。
5．离子色谱分离柱的长度将直接影响理论塔板数(即柱效)，当样品中被测离子的浓度远远小于其他离子的浓度时，可以用较长的分离柱以增加柱容量。
( )答案：正确6．离子色谱分析阳离子和阴离子的分离机理、抑制原理是相似的。
( ) 答案：正确7．离子色谱分析样品时，可以用去离子水稀释样品，还可以用淋洗液做稀释剂，以减小水负峰的影响。
( )答案：正确8．离子色谱分析中，水负峰的位置由分离柱的性质和淋洗液的流速决定，流速的改变可改变水负峰的位置和被测离子的保留时间。
HPLC的常用术语及符号
HPLC的常用术语及符号第一部分色谱曲线1、色谱图（chromatogram）：色谱柱流出物通过检测器系统时所产生的响应信号对时间或流动相流出体积的曲线图，或者通过适当的方法观察到的纸色谱或薄层色谱斑点、谱带的分布图。
2、（色谱）峰（chromatographic peak）：色谱柱流出组分通过检测器系统时所产生的响应信号的微分曲线。
3、峰底（peak base）：峰的起点与终点之间的连接的直线（图1 中的CD）。
4、峰高（h ，peak height）：色谱峰最大值点到峰底的距离（图1 中的BE）。
5、峰宽（W，peak width）：在峰两侧拐点（图1 中的F ，G）处所作切线与峰底相交两点的距离（图1中的KL）。
6、半高峰宽（W h/2，peak withd at half height）：通过峰高的中点作平行于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离（图1 中的HJ）。
7、峰面积（A，peak area）：峰与峰底之间的面积（图1中的CHEJDC）。
8、拖尾峰（tailing peak）：后沿较前沿平缓的不对称的峰。
9、前伸峰（leading peak）：前沿较后沿平缓的不对称的峰。
（又叫伸舌峰、前延峰）10、假峰（ghost peak）：除组分正常产生的色谱峰外，由于仪器条件的变化等原因而在谱图上出现的色谱峰，即并非由试样所产生的峰。
这种色谱峰并不代表具体某一组分，容易给定性、定量带来误差。
（又叫鬼峰）11、畸峰（distrorted peak）：形状不对称的色谱峰，前伸峰、拖尾峰都属于这类。
12、反峰（negative peak）：也称倒峰、负峰，即出峰的方向与通常的方向相反的色谱峰。
14、原点（origin）：纸或薄层板上滴加试样部位的中心点（图２）。
15、斑点（spot）：平面色谱法中，组分在展开和显谱后呈现近似圆形或椭圆形的色区（图2）。
16、区带（zone）：在色谱柱、纸或薄层板上被分离组分所占的区域。
反相离子对高相液相色谱法
反相离子对高相液相色谱法
反相离子对高效液相色谱法（Reversed-Phase Ion Pair HPLC）是一种高效液相色谱法，主要用于分离和分析具有不同电离程度的化合物。
它是一种常用的分离技术，具有较高的灵敏度和分辨率。
在反相离子对高效液相色谱法中，样品通过与离子对试剂（如缓冲液中的酸或碱）发生离子对形成，从而在固定相和流动相之间实现分离。
离子对试剂的类型和浓度以及流动相的组成会影响分离效果。
反相离子对高效液相色谱法的应用领域广泛，包括生物化学、药物分析、环境监测等。
它具有以下优点：
1.分离效果较好，可实现对复杂样品的分析。
2.灵敏度高，检测限低，有助于检测痕量化合物。
3.操作简便，重复性好，适用于批量分析。
然而，反相离子对高效液相色谱法也存在一些局限性，如对温度和流速的敏感性较高，以及可能出现的峰形扭曲等。
在实际应用中，需要根据具体需求和样品特性选择合适的条件，以实现最佳分离效果。
。
高效液相色谱法的常见问题及解决方法
高效液相色谱法的常见问题及解决方法高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法，这些方法在使用的过程中往往会遇到诸如鬼峰、基线漂移、拖尾、分叉峰、保留时间漂移、柱压过高等系列问题，如何解决这些问题呢?1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定;②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等;③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡;关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定;②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出;③流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合;2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子;②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子;③可能柱超载，减少进样量;3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法①样品量不足，解决办法为增加样品量;②样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子;③样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改换检测器;④检测器衰减太多。
调整衰减即可;⑤检测器时间常数太大，解决办法为降低时间参数;⑥检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗;⑦检测池中有气泡。
解决办法为排气;⑧记录仪测压范围不当。
调整电压范围即可;⑨流动相流量不合适。
调整流速即可;⑩检测器与记录仪超出校正曲线。
解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在?如何解决?①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理;②比例阀失效，更换比例阀即可;③泵密封垫损坏，更换密封垫即可;④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法;⑤系统检漏，找出漏点，密封即可;⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。
高效液相色谱法基本知识 (1)优选全文
10.2 HPLC的分类与基本原理>>
10.2.2 基本原理>>1. Van Deemter方程式
⑴Van Deemter方程在气相色谱中的表现形式
填充柱：H A B Cu u
毛细管柱：H B Cu，无多径项，无涡流扩散，A 0 u
10.1概述>>
1.基本概念与特点
概念：高效液相色谱法(HPLC)是在20世纪60年代 末，以经典液相色谱为基础，引入了气相色谱的理 论，在技术上采用了高效固定相、高压输液系统和 高灵敏度的在线检测器，从而发展起来的一种新型 分离分析技术。随着科学和技术的不断改进与发展， 目前已成为应用极为重要、广泛的分离分析手段.
开管～OTCEC 填充～PCEC
胶束～ MEKC 壁处理～ CEC 键合相～ CEC 毛细管凝胶～ CGE
10.2 HPLC的分类与基本原理>>
10.2.2 基本原理
HPLC与经典LC和GC在基本原理、概念和方法基 本上相同，主要差别是流动相的性质不同。因此， 某些公式的表现形式或参数的含意有些差别。
离子对色谱(ion pair chormatography，IPC) 在流动相中加入与被测离子相反电荷的离子对试剂， 使之形成中性的离子对化合物，从而增加样品离子 在非极性固定相中的溶解度，使分配系数增加，分 离改善。分配系数的大小主要取决于离子对化合物 的解离平衡常数和离子对试剂的浓度。
⑴ 常用离子对试剂 分离碱类：用烷基磺酸盐为离子对试剂。如十二烷 分基离磺酸酸类钠：，用正四戊丁/己基/庚季/铵辛盐磺(酸PI钠C-(API)C，-B如5/6四/7/8丁)等基。胺 磷酸盐(TBA)等。
离子对反相高效液相色谱法原理
离子对反相高效液相色谱法原理一、概述高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析技术，广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。
离子对反相高效液相色谱法（IP-RP-HPLC）是HPLC的一种变种，在分析离子化合物的研究中具有重要的地位。
本文将介绍IP-RP-HPLC的原理及其应用。
二、离子对反相高效液相色谱法原理1. 反相色谱反相色谱是HPLC分析中常用的一种分离方法。
在反相色谱柱中，填料是由亲水性的羟基矽胶和疏水性的碳链组成，样品在柱内由于亲水性和疏水性的差异而发生分离。
通常，极性物质在反相色谱柱中被快速洗脱，而非极性物质则被慢慢洗脱。
2. 离子对反相色谱在IP-RP-HPLC中，离子对试剂（例如磺酸盐、磺酰胺盐）被加入到流动相中，形成离子对复合物。
这些离子对复合物可以与离子化合物中的离子结合，使其变成中性物质，从而改变了其在反相色谱柱上的保留行为。
3. 原理离子对复合物的形成可以产生静电作用，改变了离子化合物在反相色谱柱上的分布。
这种作用不仅限于离子对复合物与离子化合物之间的相互作用，还包括离子对复合物与填料表面及样品分子之间的相互作用。
离子对反相色谱法可以提高对离子化合物的灵敏度和选择性。
4. 应用IP-RP-HPLC广泛应用于离子化合物的分析中，例如有机酸、无机阴离子、阳离子等。
尤其在环境监测和食品安全领域，各种离子对试剂的不断发展使得离子对反相色谱法成为分析离子化合物的重要手段之一。
三、总结离子对反相高效液相色谱法通过引入离子对试剂，改变了样品在反相色谱柱中的分布规律，增强了对离子化合物的分析能力。
随着离子对试剂的不断发展和完善，IP-RP-HPLC在离子化合物分离分析中的应用前景将更加广阔。
4. 分析方法的优势离子对反相高效液相色谱法具有许多优势，使其成为分析离子化合物的首选方法之一。
该方法可以提高对离子化合物的灵敏度和选择性。
通过引入离子对试剂，可以形成离子对复合物，使得离子化合物的分析变得更加精确和可靠。
离子对色谱柱
离子对色谱柱是一种用于分离离子对的色谱柱。
离子对是指具有不同电荷的化合物之间的相互作用。
离子对色谱柱通常用于分离离子对混合物中的化合物，例如离子对色谱柱可以用于分离离子对混合物中的离子对。
离子对色谱柱通常使用离子交换树脂作为固定相。
离子交换树脂是一种具有离子交换基团的聚合物，可以通过交换不同电荷的离子来实现分离。
离子对色谱柱的分离原理是基于离子对之间的相互作用力。
当离子对混合物通过离子对色谱柱时，离子对之间的相互作用力会被打破，从而实现分离。
离子对色谱柱的分离效果受多种因素影响，例如离子对的性质、色谱柱的选择、流动相的组成、流速等。
因此，在使用离子对色谱柱进行分离时，需要根据混合物的性质和分离要求选择合适的离子对色谱柱和流动相组成，调整流速等参数，以获得最佳的分离效果。
总之，离子对色谱柱是一种用于分离离子对混合物中的化合物的色谱柱。
它的分离原理基于离子对之间的相互作用力。
在使用离子对色谱柱进行分离时，需要根据混合物的性质和分离要求选择合适的离子对色谱柱和流动相组成，调整流速等参数，以获得最佳的分离效果。
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第十一章其他类型高效液相色谱法
离子对色谱法
（ion-pair chromatography，IPC）
一、概述
分析对象：
有机酸、碱、两性化合物、盐、强极性化合物
二、分离原理
定义：在色谱体系中加入合适的与样品离子电荷（A+）相反的离子（B-，称为反离子，counterion)，使其与样品离子结合生成弱极性的离子对（呈中性），进而进行分离的一种色谱分离分析技术。
离子对形成与两相间分配示意图
碱性化合物
酸性化合物
吴春勇
Inertsil C18色谱柱（5μm，4.6
mm×150 mm）；
甲醇－5 mmol/L磷酸二氢钾溶
10 mmol/L
液（含有十二烷基磺
酸钠，用磷酸调节pH至
3.5±0.05），（64∶36）为
流动相；
流速：1.0 ml/min；
10ml/min
紫外检测波长：330 nm；
柱温：室温
吴春勇
三聚氰胺极性强，其溶解性决定其不可能使用正相色谱柱进行分离，选
较好
V 乙腈∶V 缓冲液为8∶92的分离度和峰形为较好。
2）流动相pH的确定
考察范围：pH 2.5～4
16.672 min。
16.672min。