活细胞工作站技术

绿色荧光蛋白 （Green Fluorescent Protein, GFP)
1) 可溶性蛋白，性质稳定。 2）荧光基团相当明亮 3）荧光在活细胞中即可观察，不需固定和
组织加工。 4）GFP基团和目的基因做成融合蛋白后，
可以通过转染的方法在细胞中稳定表达。 5）表达GFP融合物的细胞能够在生活状态
特点
一. 弱激发光改善荧光检测 二. 最大程度减少因各种原因造成的图像模糊 三. 使细胞处于最佳的生理状态 四. 避免震动效应 五. 使用0.17mm厚的玻璃底培养皿
特点(一)
一. 弱激发光改善荧光检测 1. 弱光激发
汞灯：全波段 氙灯：300-700nm 2. 扩大荧光检测效率 A. 使用高数值孔径物镜
Incubate the cells : 30-40% confluent. Transfection : lipofectamine 2000 Transient transfection: used for imaging
directly. Select stable cell lines: 48h, G418, 2-3weeks
Multiple Cloning Site (MCS) of pEGFP-C1
Fra Baidu bibliotek
Other living color vectors from clontech
EBFP Vectors ECFP Vectors EYFP Vectors DsRed Vectors
……
Transfection
Transfection Protocol
1. Prepare the following solutions in 5ml sterile tubes: Solution A: dilute 1μg DNA in 100 μl serum-free DMDM Solution B: dilute 2 μl Lipofectamine2000 Reagent in 100 μl serum-free DMDM.
Otherwise the heating may not cool down properly.
Temperature sensor
CO2 Controller
参数显示屏
SmartMove
物镜转换控制
调焦控制
Control panel
环境控制系统
环境控制系统
优点
实时观测 自动聚焦 单细胞追踪 多位点成像 成像速度快 图像清晰度高
(5×,10×, 20×, 40×, 63×) B. 选择匹配的滤色片 C. 使用高灵敏度CCD, 细胞的光损伤较小
单色仪的优点
1）提供的激发光波长更精确，带宽更窄 2）不同波长的转换不需要更换任何光学元
件，更换速度很快，只需2-3ms
荧光滤色块
A4 GFP RFP CFP YFP CFP/YFP 三色
4. For each transfection, add 800 μl serum-free DMDM to each tube. Do not add antibacterial agents to medium during transfection.
Climate chamber and accessories
Heating Unit*
Tempcontrol 37-2 digital*
The Tempcontrol 37-2 digital* must always be switched off a few minutes after switching off the heating unit*.
Leica DMI6000 B
全自动数控载物台 全自动物镜转换器：定时、自动聚焦 物镜适合长时间工作在细胞生长环境中 荧光光强控制，防淬灭 超快速荧光滤块转换 参数显示屏 快捷操作控制键
Main circuit breaker
The main circuit breaker is exclusively for powering down the system in the event of danger, for service work, or if the system is not to be used for an extended period.
进行实验和检测。
Vector map of pEGFP-N1
5’ APOE 3’
MCS
http://www.clontech.com/techinfo/vectors/vectorsE/pEGFP-N1.html
Multiple Cloning Site (MCS) of pEGFP-N1
Vector map of pEGFP-C1
活细胞工作站技术 (Live Cell Imaging System)
刘雅静 Email: yjl@mail.ustc.edu.cn 中国科技大学生命科学实验中心
生物楼340
部件介绍 优点 特点 应用 使用方法 Movie
主要内容
System overview
1 Monitors 2 Control panel with on/off switch and running-time meter 3 System desk∗ 4 Mouse 5 Keyboard 6 Remote control module "SmartMove" 7 Control unit 8 Workstation (PC) 9 Leica DMI6000 B microscope 10 Antivibration stage* 11 Climate chamber*
2. Combine the two solutions, mix gently, and incubate at room temperature for 20 min.
3. Wash the cells once with 1 ml serum-free DMDM.
Transfection Protocol