性病的实验室检测及其意义

高危型 HPV病毒负荷的增加可使
女性发生宫颈癌及宫颈癌前病变的风险显著增加
梅毒实验室监测及临床意义
梅毒螺旋体也称苍白密螺旋体苍白亚种(Treponema pallidum subspecies pallidum)，是一种小而纤细的 螺旋状微生物，长5～15m，直径约0.2m，活体 平均有8～14个规则的螺旋。
避免出血），取组织渗液与载玻片上的盐水混匀，
加盖玻片置暗视野显微镜下检查。
梅毒螺旋体暗视野检查
取材
淋巴结取材：消毒淋巴结表面皮肤，用无菌干棉球 擦干。用1mL无菌注射器配12号针头，吸取无菌等渗 盐水0.25～0.5mL，以无菌操作穿刺淋巴结并注入盐 水，再吸入注射器内，反复 2 ～3 次后，取少量淋巴 液于载玻片上，加盖玻片，置暗视野显微镜下检查
梅毒螺旋体尚不能在体外培养繁殖，人是其唯
一的自然宿主。梅毒螺旋体可在家兔睾丸中生
长繁殖，用于抗原制备和实验研究。
梅毒螺旋体传代时间为30～33小时，繁殖方式主 要为横断分裂。 1998年完成了梅毒螺旋体全基因组测序。
梅毒实验室检测的特点
• • • 不同原理的方法：检测策略 临床意义解释复杂：不同方法结果判断、血清固定、前带现象 缺乏特殊梅毒的有效检测方法：胎传梅毒、神经梅毒
– 临床诊断的准确性：50%～70%，通过实验室检测手段 可帮助诊断 – 亚临床感染: 孕妇、性伴的检测等
进行HSV分型的意义
– HSV-2是该病的主要病原体， – HSV-1约占该病的30% – 两型HSV感染的预后不同
生殖器疱疹实验室诊断方法
病原学诊断 －病毒检测 －抗原检测 －DNA检测 血清学检测-抗体检测
b. 吸取0.05 mL血清或血浆作系列稀释（1:2～1:64），当稀释 到最后的第6孔时，弃去0.05 mL稀释液。从第6孔起将血清 稀释液涂布整个圈内，再涂布第5孔，依此向前到第1孔
c. 滴加抗原，旋转时间、速度和观察结果同定性试验。
非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读
甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）
衣原体培养的临床意义
• • • • 敏感性70％～80％ 特异性100％ 可用于判愈 可用于确诊
缺点
• 费时（需3～5天），费力，技术要求高 • 不宜作为临床常规检查
• 不宜用于大规模的筛查和流行病学调查
衣原体抗原快速检测的临床意义
优点： 简易，方便，快速，尤其 适用于基层单位
宫颈标本 缺点： 标本中需要足够数量的沙眼衣 原体抗原，否则有假阴性结果 阴道标本
a. 在反应板1～8孔各加等渗盐水0.05 mL b. 吸取0.05 mL血清标本（血清已灭活）置第1孔与等渗盐水混 匀，吸取0.05 mL稀释液至第2孔混匀，再吸取0.05 mL至第3 孔，如此连续稀释至第 8孔，弃0.05 mL稀释液。稀释度为原 倍、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128，必要时可 稀释至更高倍数 c. 每个稀释度加入抗原1滴 d. 旋转速度和时间同定性试验
非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读
定性试验 a. 吸取0.05 mL血清或血浆加于卡片圈内，并均匀地涂 布在整个圈内（每张纸卡有10个或12个反应圈）； b. 将抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取抗原，每个标本加 1滴抗原； c. 将卡片置水平旋转器旋转8 min，100±5转/min； d. 立即在明亮光线下观察结果。
行检测，是辅助诊断梅毒的重要手断.
梅毒血清学检测
非梅毒螺旋体抗原血清学试验
• 性病研究实验室试验 • 血浆反应素环状卡片试验 • • • • • （VDRL） （RPR、TRUST）
梅毒螺旋体抗原血清学试验
梅毒螺旋体血球凝集试验 （TPHA） 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA） 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）、 梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（ELSA） 胶体金梅毒快速检测试验
敏感性
特异性
50%
98%
33%
99%
衣原体核酸检测
现有的核酸检测方法
• PCR • LCR • SDA • TMA
• Real time PCR
衣原体核酸检测的临床意义
优 点:
敏感性：-98％ 特异性: -99％
缺
点：
实验室条件和技术要求高 成本高、费wk.baidu.com、假阳性
生殖器疱疹实验室诊断
HSV实验室诊断的意义
TRUST试验原理与RPR试验原理相同 唯 TRUST 试验的抗原中加入甲苯胺红颗粒代替活性炭颗粒指示 物，使阳性结果出现红色絮状现象，阴性结果见红色颗粒集于 中央或均匀分散。 TRUST试验方法及结果判断均与RPR试验相同。
性病的实验室检测及其意义
上海市皮肤病医院
周平玉
淋病的实验室诊断
淋病的主要实验室诊断方法
— 直接显微镜检查；
— 分离培养淋球菌；
— 非培养技术检测淋球菌细胞成份如抗原 或DNA（EIA, PCR/LCR）
显微镜检查的临床意义
• 男性尿道标本: 多形核细胞内见到形态典型的革兰阴性双球菌 具诊断价值 敏感性及特异性：95%～99% • 宫颈标本、无症状男性尿道标本 敏感性：40～70% • 不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌 感染。 如果在多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性 双球菌，需进一步培养确认。
晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，大部分病人血清反应
可能终身阳性。
非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读
1、性病研究实验室（VDRL）玻片试验
定性试验 a. 血清标本需56℃灭活30分钟备用； b. 吸取0.05mL血清放入玻片圈内，将血清涂开至整个圈内； c. 用标准针头加入1滴VDRL抗原； d. 将 玻 片置 旋 转 器 上 摇 动 4 min，180±5 次 / min， 立 即 置 10×10倍显微镜下观察。
梅毒实验室检测的特点
临床表现
一期梅毒
取材部位
溃疡 淋巴结 血液
检查方法
病原学检查 血清学检查 病原学检查
二期梅毒 血液
皮损 淋巴结
血清学检查
潜伏梅毒
三期梅毒 神经梅毒 血液
血液
血液 脑脊液
血清学检查
血清学检查 血清学检查 细胞、蛋白量检查VDRL等
梅毒血清学检测原理
当人体感染梅毒螺旋体后4周-10周左右，血 清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特 异性抗体（反应素）和抗梅毒螺旋体抗原的 特异性抗体。这些抗体均可用免疫学方法进
非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读
2、快速血浆反应素（RPR）环状卡片试验
RPR试验是VDRL试验的一种改良方法。该法 是在抗原中加入活性炭颗粒作为指示物，特制的白 色纸卡替代了玻片。试验结果易于判断，肉眼即可 观察，血清不需灭活，也可用血浆进行检测，试验 结果可保存。抗原放4℃冰箱可保存1年。
梅毒螺旋体暗视野检查
方法
在暗视野聚光器（此法用湿系暗视野聚光器）上加 一滴甘油缓冲液（甘油和 0.1mol/L PBS，pH 7.0 按 7:3配制）。 载玻片置载物台上，上升聚光器使甘油缓冲液接触
载玻片，先用10倍物镜，使物像清晰，再用40倍物
镜观察，寻找有特征形态和运动方式的梅毒螺旋体
梅毒螺旋体暗视野检查
淋球菌培养

培养法为诊断淋病的金标准。
从选择性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。

初步鉴定淋球菌的主要依据
菌落特征 氧化酶试验
革兰染色
淋球菌培养的的临床意义

培养特异性：100%，敏感性 81-100% 。
宫颈、无症状男性尿道、直肠、咽部标本等 可发现无症状淋球菌感染患者； 可用于进一步作药敏试验； 可用于治疗后的判愈试验。
非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读
大或中等大小的絮状物，液体清亮: 絮状物较小，液体较清亮: 絮状物较小，均匀分布，液体混浊 抗原颗粒稍粗，无凝集 抗原颗粒均匀，针状细小: 3+-4+强阳性反应 2+ 阳性反应 1+ 弱阳性反应 ± 可疑 – 阴性反应
非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读
定量试验
应做淋球菌培养

淋病其它诊断技术
核酸检测的特点及临床意义
• 不依赖于活的病原体的存在，无需特殊运送条件； • 敏感性高，不仅适合尿道或宫颈标本，还可以采用 尿液、阴道标本； • 不能进行抗生素敏感性试验；
• 用于判愈试验需在治疗后至少3 周以上进行.
沙眼衣原体感染的实验室诊断
• 细胞培养法 • 免疫层析快速抗原检测 • 酶联免疫抗原检测 • 核酸扩增检测
非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读
中到大的黑色絮状物，液体清亮 小到中的黑色絮状物，液体较清亮 小的黑色絮状物，液体混浊 仅见活性炭颗粒集于中央一点或均匀分散
3+-4+ 2+ 1+ －
强阳性 阳性 弱阳性 阴性
非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读
定量试验
RPR定量试验的指证与VDRL试验相同 a. 在圈内加入0.05 mL等渗盐水（一般作6～8个稀释度），勿 将盐水涂开
结果及解释
暗视野显微镜下，典型的梅毒螺旋体呈白色发光, 其 螺旋较密而均匀。运动规律，运动性较强，其运动
方式包括①旋转式，围绕其长轴旋转；②蛇行式, 全
身弯曲如蛇行；③伸缩其螺旋间距离而移动。观察 其运动形式有助于与其他螺旋体相鉴别。
梅毒螺旋体暗视野检查
结果及解释
未检出螺旋体不能排除梅毒的诊断，阴性结果可能 说明：①螺旋体数量不足(单次暗视野显微镜检查阳 性率小于50%)。②患者已接受抗生素或杀灭梅毒螺 旋体的药物治疗。③损害接近自然消退。④损害不 是梅毒。
非梅毒螺旋体抗原血清学试验
• 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。
• 非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速，敏
感性和特异性较好。适用于梅毒的筛查。 • 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效 观察、判愈、复发或再感染的指征。
非梅毒螺旋体抗原血清学试验
存在假阳性反应
①技术性假阳性反应 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶 血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。 ②生物学假阳性反应 是由于患者有其他疾病、吸毒或生理状 态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性
梅毒螺旋体暗视野检查
材料
暗视野显微镜、钝刀（刮勺）、载玻片、注射器、
注射针头、无菌等渗盐水。
梅毒螺旋体暗视野检查
取材
皮肤粘膜损害取材：首先在载玻片（厚度为 1.0 ～
1.2mm）上滴加50～100μ L盐水备用。然后用棉拭子
取无菌盐水轻轻擦去皮损上的污物。如皮损上有痂 皮，可用钝刀小心除去。再用钝刀轻轻地刮数次（
非梅毒螺旋体抗原血清学试验
• 所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本成分都是一 样的，包括RPR、TRUST等
• 基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇
• 抗原抗体结合形成复合物、凝集成网状沉淀颗粒、肉 眼可观察结果 • 方法敏感性和特异性都基本相似
非梅毒螺旋体抗原血清学试验
• 未经治疗的病人和部分经过治疗的患者，其血清内的反应素可 长期存在。 • 经正规治疗后，反应素可以逐渐减少，并可转为阴性 早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后 3 个月，其 抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。 一期梅毒1年后绝大部分转为阴性 二期梅毒2年后大部分转为阴性。
病原学检测
暗视野显微镜检查 银染色镜检 核酸检测
血清学检测
非梅毒螺旋体抗原血清学检测 VDRL USR RPR TRUST 梅毒螺旋体抗原血清学检测 FTA-ABS TPPA/ APHA ELISA 发光法
胶体金法
梅毒螺旋体暗视野检查
原理
暗视野映光检查是采用一个特殊的聚光器，分为干系 和湿系两种，其中央均为黑漆所遮蔽，仅在圆周边留 有光线斜角处，光线只可从其圆周边缘斜角射到载玻 片上。梅毒螺旋体检查一般采用湿系聚光器。倘若斜 射光线遇到载玻片上的物体，如螺旋体等，物体会发 光显现。本法检查梅毒螺旋体对于梅毒有病原学诊断 的价值。
梅毒螺旋体透明而不易被染色，在普通显微镜
下不易发现，只有在暗视野显微镜、免疫荧光
或Fontana镀银染色等特殊染色下才能观察到
。
梅毒螺旋体在体外不易生存，离开人体很快死
亡，其生存最适温度为37℃。煮沸、干燥、肥
皂水以及一般的消毒剂很容易将其杀死。
梅毒螺旋体不耐热，加热至42℃ 2个小时可将 它杀死，100℃时立即死亡；但耐低温，在0℃ 时可存活 48 小时，置于 -78 ℃数年仍具有传染 性。
HSV血清学检测的意义


HSV感染的血清流行病学调查
感染者性伴的HSV感染状况的判断 孕妇产前监测 HSV型特异性血清抗体检测是发现亚临床及无症
状生殖器HSV感染者的最可行手段，对于防止性伴间
和母婴间HSV传播有着重要意义
HPV-DNA检测的意义

HPV感染流行病学调查

HPV DNA 定型