多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)试剂盒说明书
苹果中多酚氧化酶最适-pH-的测定
实验二苹果中多酚氧化酶最适pH 的测定一、实验原理存在于果蔬中的多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）在适宜的条件下能引起果蔬的酶促褐变。
因此，多酚氧化酶对于食品加工具有重要意义。
多酚氧化酶是一种含铜离子的酶，它能催化两类不同的反应。
一是一元酚羟基化，二是邻-二酚氧化。
在一些植物中，多酚氧化酶能同时催化这两类反应；而在另一些植物中，多酚氧化酶仅能催化邻-二酚氧化，却不能催化一元酚羟基化。
如果采用邻-二酚作底物，那么随着酶催化反应进行，反应混合物的吸光值因邻-苯醌的量的增加而增大，因此可采用分光光度法测定多酚氧化酶的活力。
二、试剂和仪器试剂：0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液，pH分别为3.6、4.0、4.6、5.0和5.6、0.2mol/L 磷酸盐缓冲液，pH分别为6.0、6.5、7.0、7.5和8.0、0.01mol/L儿茶酚溶液、0.05mol/L 磷酸盐缓冲液，pH=6.5、丙酮仪器：组织捣碎机、抽滤装置、721分光光度计（含比色皿）、秒表、常规玻璃仪器、离心机三、实验步骤1、从苹果中萃取多酚氧化酶将100 g苹果迅速去梗和核后切成小块，和400mL左右预先冷冻至－26℃的丙酮一起倒入组织捣碎机中均质（20,000 rpm，2 min），然后迅速抽滤，保留滤纸上的沉淀部分，将沉淀薄层中残留的丙酮用冷风吹去，至沉淀无丙酮味。
将所得丙酮粉转移至150 mL 0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH 6.5）中，搅拌30 min，然后离心（4℃,10000 r/m,20 min），离心所得上清液如有混浊，则用8层纱布过滤，从而得到多酚氧化酶提取液。
2、不同pH下多酚氧化酶活力的测定在比色皿中分别加入1.8~1.1 mL pH为3.6的缓冲液和0.7mL儿茶酚溶液，搅匀后加入0.5~1.2mL多酚氧化酶提取液，迅速搅匀，测定反应混合物在400 nm 下的吸光值随时间的变化，参比以缓冲液代替酶液。
多酚氧化酶活性测定(免费)
末端氧化酶：处于生物氧化一系列反应的最末端， 末端氧化酶：处于生物氧化一系列反应的最末端， 把电子传递给O 的酶。 把电子传递给 2的酶。 1、细胞色素氧化酶 、 2、交替氧化酶 、 3、酚氧化酶 分为单酚氧化酶和多酚氧化酶。 多酚氧化酶。 、酚氧化酶: 分为单酚氧化酶和多酚氧化酶 4、乙醇酸氧化酶 、 5、抗坏血酸氧化酶 、
五、实验报告： 实验报告： 计算所测材料的PPO活性。选择A值变化均匀的三组数 活性。选择 值变化均匀的三组数 计算所测材料的 活性 值求平均值。 值求平均值。
一、实验目的： 实验目的： 掌握测定多酚氧化酶活性的方法； 掌握测定多酚氧化酶活性的方法；了解多酚氧化酶的特性 实验原理： 二、实验原理： 多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶， 多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化 生成醌。醌有颜色， 下有最大光吸收， 生成醌。醌有颜色，在525nm下有最大光吸收，通过分光光 下有最大光吸收 度法测定反应体系颜色变化可测定酶活性。 度法测定反应体系颜色变化可测定酶活性。 三、器材与试剂 1、仪器：低温离心机、s22pc分光光度计 、仪器：低温离心机、 分光光度计 2、试剂：儿茶酚、pH 7.2磷酸缓冲液 、试剂：儿茶酚、 磷酸缓冲液 3、材料：马铃薯 、材料：
四、实验步骤： 实验步骤： 1．称取马铃薯 克，加入 磷酸缓冲液， ．称取马铃薯0.5克 加入L pH 7.2磷酸缓冲液，少许 磷酸缓冲液 PVP，研磨匀浆，转移到离心管，再用 ，研磨匀浆，转移到离心管，再用2.5mL pH 7.2磷酸缓 磷酸缓 冲液冲洗研钵，合并提取液。 ℃ 离心15分钟 冲液冲洗研钵，合并提取液。4℃ 5000rpm离心 分钟，上 离心 分钟， 清液即为粗酶液。 清液即为粗酶液。 2．在试管中，加入 磷酸缓冲液， ．在试管中，加入2.5mL pH 7.2磷酸缓冲液，1.5mL 儿茶酚 磷酸缓冲液 以及1mL 粗酶液，空白调零以 粗酶液，空白调零以1mL磷酸缓冲液代替粗酶液。 磷酸缓冲液代替粗酶液。 以及 磷酸缓冲液代替粗酶液 3．A值测定：加入粗酶液后迅速混匀，立刻于 值测定： ． 值测定 加入粗酶液后迅速混匀，立刻于525nm下测定 下测定 反应体系的A值 每隔30秒记录一次 共记录5次 秒记录一次， 反应体系的 值，每隔 秒记录一次，共记录 次。 4．计算酶活力。按下式计算 ．计算酶活力。 PPO活性＝U/min gFW 活性＝ 活性 A值增加 值增加0.001定义为一个酶活力单位。 定义为一个酶活力单位。 值增加 定义为一个酶活力单位
实验四多酚氧化酶的活性的测定及酶学性质
实验四多酚氧化酶的活性的测定及酶学性质This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020实验四、马铃薯块茎多酚氧化酶（PPO）活性测定及酶学性质一、实验目的1掌握分光光度法测定多酚氧化酶活性的一般原理及操作技术方法。
2了解酶的活性与植物组织褐变以及生理活动之间的关系。
二、实验原理马铃薯不耐储藏，在加工过程中去皮切分后非常容易发生酶促褐变，使外观品质和营养价值大为降低，制约着马铃薯的开发利用。
酶促褐变是马铃薯加工产业必须解决的难题。
其中多酚氧化酶是导致马铃薯等果蔬发生酶促褐变的重要酶类。
多酚氧化酶活性大小直接影响酶促褐变程度。
多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)又称酪氨酸酶、儿茶酚酶、酚酶等．是自然界中分布极广的一种含铜氧化酶．普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中。
植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成醌，使组织形成褐变．以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。
研究多酚氧化酶的特性对食品的加工与保藏工艺有非常重要的意义。
因此，检测食品中多酚氧化酶具有重要意义。
多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，在一定的温度、pH条件下，有氧存在时，能使催化邻苯二酚氧化生成有色物质，单位时间内有色物质在410nm处的吸光度与酶活性强弱成正相关，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD值的变化确定PPO的酶活大小。
多酚氧化酶邻苯二酚（儿茶酚）＋1∕2O2——————→邻醌＋H2O三、试验材料、试剂及试验用品1．材料：马铃薯块茎。
2．仪器：分光光度计；离心机；恒温水浴；研钵；试管；移液管；容量瓶3．试剂：L 磷酸缓冲液（pH=）；L邻苯二酚；L磷酸氢二钠；L磷酸二氢钠；10mmol/L 柠檬酸；10mmol/L抗坏血酸；10mmol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA）；10mmol/L亚硫酸钠四、实验方法：1.多酚氧化酶的提取取马铃薯块茎样品，加入预冷的磷酸缓冲液（）3ml，研磨匀浆，转移到离心管中，再用7mL磷酸缓冲液冲洗研钵，合并提取液，在４℃下离心（8000r/min）5min，取上清液为多酚氧化酶提取液，并量取粗酶液体积。
土壤多酚氧化酶(Solid-Polyphenol oxidase,S-PPO)试剂盒说明书
货号：MS2934 规格：100管/96样土壤多酚氧化酶（Solid-Polyphenol oxidase，S-PPO）试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：S-PPO主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放，催化土壤中芳香族化合物氧化成醌，醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成有机质和色素，完成土壤芳香族化合物循环，用于土壤环境修复。
测定原理：S-PPO能够催化邻苯三酚产生有色物质，后者在430nm有特征光吸收。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、乙醚50mL（不允许快递）和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：粉剂×1瓶，临用前加入12mL蒸馏水，用不完的试剂仍4℃保存；试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂三：乙醚50mL×1瓶，4℃保存；（自备）样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至430nm，蒸馏水调零。
（注意：1、因乙醚粘度小，易掉液，吸取前需先将枪头在上层液里润洗2~3次，再转移测定；2、乙醚易挥发，转移到96孔板后立即测定，最好一个一个测定）。
S-PPO活力计算：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准条件下测定的回归方程为y = 8.97x -0.003；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值A。
单位的定义：每天每g土样中产生1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。
S-PPO活力（mg /d/g 土样）＝(A+0.003) ÷8.97×V反总÷W÷T=80×(A+0.003)T：反应时间，1h=1/24d； V反总：反应体系总体积0.6mL；W：样本质量，0.02g。
b.用96孔板测定的计算公式如下第1页，共1页标准条件下测定的回归方程为y = 4.485x -0.003；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值A。
多酚氧化酶制备与性质
多酚氧化酶制备与性质多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）是存在于多种植物、真菌和动物体内的一种酶类。
它主要参与生物体内多酚类物质的氧化反应，是一种铜酶，催化氧化物质依靠两种配位的单核铜中心。
多酚氧化酶具有高度的催化活性和种类多样的底物适应性，常用于食品产业、医药业和环境污染治理等方面。
多酚氧化酶分离、纯化和制备是开展其相关研究和应用的前提。
其制备方法可分为传统分离、分子生物学技术和重组工程等三种方法。
传统分离方法是采用离心、滤纸剖分、离子交换层析、凝胶过滤层析或超滤等方法，通过化学检测和活性检测手段获得多酚氧化酶。
但这种方法存在着操作麻烦、纯化度低、产率不高等缺点。
分子生物学技术则是利用基因克隆和表达工具，从源头上获得多酚氧化酶基因序列进行提取和纯化。
目前研究中常用的是PCR扩增、应用大肠杆菌或酵母菌实现异源表达等方法。
重组工程方法是指将多酚氧化酶基因定向插入宿主细胞中，结合合理培养条件，利用重组合成技术得到具有高活性和高特异性的多酚氧化酶。
这种方法的优势在于产量高、纯度高且结构相对稳定。
多酚氧化酶性质的主要特点包括多酚类物质的高效氧化反应、菌落变色和储存特性。
多酚类物质的高效氧化反应：多酚氧化酶主要针对多酚类物质进行高效氧化反应。
例如，多酚氧化酶可以催化咖啡因氧化成黑色物质，其颜色变化的过程符合米氏方程（Michaelis-Menten equation），表现出一定的反应速率和反应程度。
菌落变色特性：多酚氧化酶具有天然菌落颜色的变色特性，这是因为多酚氧化酶可以催化多酚类物质氧化成黑色色素，从而产生的颜色变化可以用于分析检测和实验研究。
储存特性：多酚氧化酶可以保存在含钾的磷酸盐缓冲液中，并且可以在冷藏条件下保持其催化活性和稳定性。
但是为了避免酶的降解和变性，一般应该避免恶劣的环境和条件。
综上，多酚氧化酶是一种广泛存在于生物体内的酶类，具有高效催化和底物适应性等优势。
其制备方法包括传统分离、分子生物学技术和重组工程等三种方法。
多酚氧化酶结构简式
多酚氧化酶结构简式1.引言1.1 概述概述:多酚氧化酶(polyphenol oxidase, PPO)是一类广泛存在于动物、植物和微生物中的酶类。
它们在生物体内起着重要的催化作用，参与多酚化合物的氧化反应。
多酚氧化酶是一类相对复杂的酶，具有多种结构类型和催化机制。
在生物体中，多酚氧化酶通常表现出明显的催化活性，使得多酚化合物发生氧化反应。
这些多酚化合物主要是一些具有酚性羟基的化合物，例如酪醇、儿茶酚等。
多酚氧化酶催化作用产生的氧化产物可以具有颜色，可使黄色的多酚化合物转变为棕色或黑色，这在水果和蔬菜的切割表面暴露于空气时常常会观察到。
这种氧化反应在生物体内起到一定的保护作用，限制了氧化反应对生物体的损害。
多酚氧化酶具有多种不同的结构类型，如多聚物、双功能酶等。
酶的催化活性往往与其特定的结构密切相关。
通过对多酚氧化酶结构的研究，可以更好地理解其催化机制，并为其在工业和农业等领域的应用提供理论基础。
本文将重点介绍多酚氧化酶的结构特点、分类和功能，并探讨其在生物体内的重要性和在不同领域的应用前景。
对于进一步理解和应用多酚氧化酶具有重要的意义。
1.2文章结构1.2 文章结构本文将按照以下结构进行论述多酚氧化酶的相关内容：1) 引言：首先对多酚氧化酶进行一个概述，解释其定义和功能。
这一部分将介绍多酚氧化酶在生物体内的重要性和作用机制。
2) 正文：接着，将详细讨论多酚氧化酶的分类和特点。
这部分将对多酚氧化酶的不同分类进行介绍，包括酪氨酸酶、过氧化物酶和过氧化氢酶等。
同时，还将探讨多酚氧化酶的结构特点，如其催化机制和底物特异性等。
3) 结论：最后，将总结多酚氧化酶在生物体内的重要性以及其未来的应用前景。
这一部分将强调多酚氧化酶在生物学研究、制药工业和环境保护等领域的潜在应用，并展望其可能的发展方向。
通过以上结构，本文将全面而系统地介绍多酚氧化酶的结构简式，使读者对多酚氧化酶有一个清晰的了解。
同时，也将为该领域的研究者提供一定的参考和启发，以推动多酚氧化酶的进一步研究和应用。
酶活测定方法
二十、果蔬中多酚氧化酶活性的测定一、目的要求了解多酚氧化酶的作用，掌握果蔬组织中多酚氧化酶活性的测定方法。
二、基本原理多酚氧化酶（Polyphenol oxidase, PPO）是一种以铜为辅基的酶，能催化多种简单酚类物质氧化形成醍类化合物，醍类化合物进一步聚合形成呈现褐色、棕色或黑色的聚合物。
在后熟衰老过程或在采后的贮藏加工过程中，果蔬出现的组织褐变与组织中的多酚氧化酶活性密切相关。
多酚氧化酶催化邻苯二酚氧化形成的产物在420 nm处有最大光吸收峰。
因此，可利用比色法测定多酚氧化酶的活性。
三、材料、仪器及试剂（一）材料梨、苹果、马铃薯等。
（二）仪器及用具研钵、高速冷冻离心机、分光光度计、计时器、移液器、离心管、试管、容量瓶（lOOmL、1000 mL）。
（三）试剂1.100 mmol/L、pH 5. 5 醋酸缓冲液母液A （200 mmol/L醋酸溶液）:量取11.55 mL冰醋酸，加蒸馅水稀释至1 000 mLo母液B （200 mmol/L醋酸钠溶液）：称取16.4 g无水醋酸钠（或称取27. 2 g三水合乙酸钠），用蒸馅水溶解、定容至1 000 mLo取68 mL母液A和432 mL母液B混合后，调节pH至5. 5 ,加蒸/留水稀释至1 000 mL o2.提取缓冲液（含1 mM PEG、4% PVPP 和1% Triton X-100）称取340 mg PEG 6000 （聚乙二醇6000）、4 g PVPP （聚乙烯毗咯烷酮，Polyvinyl - polypyrrolidone ）,取1 mL Triton X-100 ,用100 mmol/L > pH 5.5 醋酸缓冲液溶解、稀释至100 mLo3.50 mmol/L 邻苯二酚称取275 mg邻苯二酚，用50 mmol/L、pH 5. 5醋酸缓冲液溶解、稀释至50 mLo四、实验步骤（-）酶液制备称取5.0 g果蔬组织样品，置于研钵中，加入5.0 mL提取缓冲液，在冰浴条件下研磨成匀浆，于4°C、12 000Xg离心30 min,收集上清液即为酶提取液，低温保存备用。
马铃薯多酚氧化酶的分离钝化中所用的实验技术
马铃薯多酚氧化酶的分离钝化中所用的实验技术马铃薯多酚氧化酶（polyphenol oxidase, PPO）是一种广泛存在于植物细胞内的氧化酶，在水果和蔬菜加工中发挥着重要作用。
由于其具有强氧化作用，它可以在加工过程中抑制色素、气味和味道的变化。
因此，分离PPM与钝化处理（inactivation）是加工马铃薯产品中非常重要的一步。
本文就分离和钝化PPM的实验方法作一详细报道。
一、实验设计实验的目的是通过胰蛋白酶分离马铃薯多酚氧化酶，然后通过过滤、冷冻干燥和钝化处理，使PPM能够抵抗非常低的温度和相对湿度，以保持它在制备马铃薯加工产品时良好的功能性。
为了实施以上实验，首先从马铃薯中提取 Enzyme Raw Powder （ERP），然后用进行分离和纯化的方法，将ERP中的PPO分离出来，进行过滤、冷冻干燥和钝化处理。
最后，测试所得的产品是否符合特定的质量要求。
本研究中使用的所有原料都来自经过性能认证的合格的马铃薯中提取的低PPM。
二、PPM萃取ERP中的酶分子通常不能直接分离出来，一般采用胰蛋白酶（trypsin）分解ERP中多酚氧化酶中的蛋白质，以溶解PPM，并将其从ERP中分离出来。
在实验中，ERP通过减压滤饼制成粉状，然后加以混合和萃取，得到含有PPO的悬浮液。
在萃取过程中，要考虑时间、温度、pH值、萃取次数，以及胰蛋白酶的用量等因素，以保证分离效果的最佳化。
三、PPO的过滤将萃取的悬浮液通过SMB技术（spontaneous migration morphsim）进行过滤，以获得PPO滤渣，然后再对其进行过滤、冻结干燥和静电分集等技术处理，可实现对PPO的进一步纯化和分离。
本实验采用的技术是根据回收率和活性结合电泳(electrophoresis)以及紫外-可见光谱(ultraviolet–visible spectroscopy)、高效液相色谱(high performance liquid chromatography)、活性元素大小分馏(size exclusion chromatography)等多种方法，达到实验要求的高质量产品。
多酚氧化酶的实验报告
1. 了解多酚氧化酶的活性测定原理及方法。
2. 掌握分光光度法测定多酚氧化酶活性的操作技术。
3. 通过实验，分析影响多酚氧化酶活性的因素。
二、实验原理多酚氧化酶（PPO）是一种含铜的氧化酶，广泛存在于植物组织中。
在适宜的条件下，PPO催化酚类物质氧化形成醌类物质，使植物组织发生褐变。
本实验采用分光光度法测定多酚氧化酶活性，以邻苯二酚为底物，通过测定反应过程中吸光度的变化来计算酶活性。
三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜马铃薯、0.1mol/L邻苯二酚溶液、pH6.8磷酸盐缓冲液、NaF溶液、5%三氯乙酸溶液、硫脲、0.01mol/L间苯二酚、蒸馏水。
2. 仪器：分光光度计、匀浆机、离心机、恒温水浴、移液器、试管等。
四、实验步骤1. 酶液的制备：取新鲜马铃薯150g，洗净后切块，加入150mL NaF溶液，匀浆后用四层纱布过滤。
取滤液50mL，于3500r/min离心5-10min，取上清液。
2. 酶活性测定：取3支试管，分别编号为A、B、C。
向A、B、C三管中加入0.1mol/L邻苯二酚溶液1mL、pH6.8磷酸盐缓冲液2mL，向A、B管中加入酶液0.5mL，C管不加。
将三管置于恒温水浴中，在反应时间分别为0、10、20、30、40、50min时，取出A、B、C三管，分别加入5%三氯乙酸溶液1mL，摇匀后于410nm波长处测定吸光度。
3. 数据处理：以邻苯二酚为标准曲线，计算酶活性。
五、结果与分析1. 标准曲线的绘制：以邻苯二酚浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 酶活性计算：根据标准曲线，计算不同反应时间下的酶活性。
3. 影响酶活性的因素分析：通过实验，分析温度、pH、底物浓度、酶浓度等对酶活性的影响。
1. 成功掌握了分光光度法测定多酚氧化酶活性的原理及操作技术。
2. 通过实验，分析了影响多酚氧化酶活性的因素，为后续研究提供了依据。
七、实验讨论1. 在实验过程中，发现温度对酶活性有显著影响。
PPO化学品说明书
PPO化学品说明书
1、多酚氧化酶(PPO)试剂盒说明书绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日*价格为准。
4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后,将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、电话等以传真、EMail、短信、电话等形式通知我们。
注意事项
①多酚氧化酶(PPO)试剂盒说明书加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
避免用手接触,有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
多酚氧化酶实验报告
一、实验目的1. 理解多酚氧化酶（PPO）在植物组织中的作用及其活性测定的原理。
2. 掌握分光光度法测定PPO活性的操作技术。
3. 分析不同条件下PPO活性的变化，如pH值、温度等。
二、实验原理多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，广泛存在于植物组织中。
它能够催化酚类物质与氧气反应生成醌类物质，进而引起植物组织的褐变。
本实验采用分光光度法测定PPO的活性，通过测量反应体系在特定波长下的吸光度变化来反映酶的活性。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：马铃薯、茶叶、茶叶提取物等。
2. 试剂：0.03M磷酸缓冲液（pH 6.0）、0.01mol/L邻苯二酚溶液、5%三氯乙酸溶液、0.01mol/L的间苯二酚溶液、0.01mol/L的NaF溶液、pH 6.8的磷酸盐缓冲液、硫脲等。
四、实验步骤1. 酶提取：取一定量的马铃薯或茶叶，加入适量磷酸缓冲液（pH 6.0），用匀浆机充分匀浆，过滤，收集滤液。
2. 酶活性测定：取适量酶液，加入0.01mol/L邻苯二酚溶液，在410nm波长下测定吸光度。
3. 酶活性计算：根据吸光度变化计算酶活性，公式如下：\[ 酶活性 = \frac{ΔA}{Δt} \times V_{底物} \]其中，ΔA为吸光度变化，Δt为反应时间，V_{底物}为底物体积。
4. 影响因素实验：分别考察pH值、温度、底物浓度等因素对PPO活性的影响。
五、实验结果与分析1. 酶活性测定：通过分光光度法测定，得到不同样品的酶活性数据，如表1所示。
表1 不同样品的酶活性| 样品 | 酶活性（U/mg） || -------- | -------------- || 马铃薯 | 1.23 || 茶叶 | 0.98 || 茶叶提取物 | 1.57 |从表1可以看出，茶叶提取物的酶活性最高，马铃薯次之，茶叶最低。
2. 影响因素实验：（1）pH值：在pH 4.0～7.0范围内，PPO活性随pH值升高而增加，在pH 6.0时达到最大值，随后逐渐下降。
多酚氧化酶失活温度
多酚氧化酶失活温度多酚氧化酶（Polyphenol oxidase，PPO）是一种广泛存在于植物和动物中的酶类。
它在生物催化反应中起着重要的作用，特别是在食品加工和酿造过程中。
然而，多酚氧化酶的活性受到温度的影响，高温会导致其失活。
本文将探讨多酚氧化酶失活的温度范围及其影响。
多酚氧化酶的活性受到温度的调控，不同的多酚氧化酶对温度的敏感程度有所差异。
一般而言，多酚氧化酶的活性在较低温度下较低，随着温度的升高，活性逐渐增强，直到达到一个最适温度。
然而，当温度进一步升高时，多酚氧化酶的活性开始下降，最终失活。
多酚氧化酶的失活温度范围与其来源和性质有关。
一些研究表明，植物中的多酚氧化酶失活温度一般在60-70摄氏度之间。
例如，苹果中的多酚氧化酶在65摄氏度左右失活。
而动物组织中的多酚氧化酶失活温度范围可能更高，可达到70-80摄氏度。
以豆科植物中的多酚氧化酶为例，其失活温度约为75摄氏度。
多酚氧化酶失活的温度范围对食品加工和酿造过程具有重要意义。
在食品加工中，多酚氧化酶的活性会导致食品的褐变，降低食品的品质。
因此，在高温处理食品时，需要注意控制温度，以避免多酚氧化酶的活性过高而引起食品品质的下降。
在酿造过程中，多酚氧化酶的活性可以促进酒类中花青素的氧化反应，从而影响酒类的色泽和风味。
因此，合理控制多酚氧化酶的失活温度，能够保证酿造产品的品质。
多酚氧化酶失活的机制与其蛋白质结构的改变有关。
当温度升高时，多酚氧化酶的蛋白质结构发生变化，导致其活性中心的构象发生改变，从而影响酶的催化效率。
此外，高温也会引起酶蛋白质的部分变性和聚集，进一步导致酶失活。
因此，温度是影响多酚氧化酶活性的重要因素之一。
除了温度，其他因素如pH值、金属离子和抑制剂等也会对多酚氧化酶的活性产生影响。
在实际应用中，需要综合考虑这些因素，以达到最佳的酶反应条件。
多酚氧化酶在一定的温度范围内活性逐渐增强，但当温度超过一定范围时，多酚氧化酶会失活。
甘薯中多酚氧化酶活性的测定及褐变控制
甘薯中多酚氧化酶活性的测定及褐变控制一、本文概述本文旨在探讨甘薯中多酚氧化酶（Polyphenol Oxidase，PPO）活性的测定方法，并深入研究如何控制甘薯在加工和储存过程中因PPO活性过高引发的褐变现象。
甘薯作为一种重要的农作物，其营养价值和经济价值均较高，但在加工和储存过程中，甘薯常因PPO的作用而发生褐变，这不仅影响了甘薯的外观品质，还可能降低其营养价值，甚至影响消费者的接受度。
因此，研究甘薯中PPO活性的测定方法和褐变控制技术，对于提高甘薯的加工品质和储存稳定性具有重要的理论和实践意义。
在本文中，我们将首先介绍PPO的基本性质及其在甘薯中的功能，然后详细阐述PPO活性的测定方法，包括常用的比色法、光谱法等。
接着，我们将分析甘薯褐变的原因和机理，探讨影响PPO活性的各种因素，如温度、pH值、抑制剂等。
在此基础上，我们将提出一系列控制甘薯褐变的策略和方法，如物理法、化学法和生物法等，并对各种方法的优缺点进行比较和评价。
我们将对甘薯中PPO活性的测定及褐变控制的研究前景进行展望，以期为甘薯的加工和储存提供更为有效的技术支持。
二、甘薯中多酚氧化酶的活性测定在甘薯中，多酚氧化酶（Polyphenol Oxidase，PPO）是一种关键的酶，参与了甘薯褐变的过程。
为了更深入地了解甘薯褐变的机制并寻找有效的褐变控制方法，对甘薯中多酚氧化酶的活性进行精确测定显得尤为重要。
测定多酚氧化酶活性的方法主要基于酶催化底物氧化产生有色产物的原理。
在本研究中，我们采用了经典的邻苯二酚法来测定甘薯中多酚氧化酶的活性。
将甘薯样品进行匀浆处理，以获得含有多酚氧化酶的酶液。
然后，将适量的酶液与底物邻苯二酚混合，并在适宜的温度和pH条件下进行反应。
随着反应的进行，邻苯二酚被多酚氧化酶催化氧化，生成有色产物。
通过测定有色产物的吸光度，可以间接反映多酚氧化酶的活性。
为了获得准确的结果，我们在测定过程中严格控制了实验条件，包括温度、pH值、底物浓度和反应时间等。
多酚氧化酶(PPO)检测试剂盒(邻苯二酚微板法)
多酚氧化酶(PPO)检测试剂盒(邻苯二酚微板法)简介：多酚氧化酶(polyphenol oxidase ，PPO)是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶，普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中，甚至在土壤中腐烂的植物残渣上都可以检测到多酚氧化酶的活性，多酚氧化酶是一种蛋白体Leagene 多酚氧化酶(PPO)检测试剂盒(邻苯二酚比色法)检测原理是以邻苯二酚作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于酶标仪420nm 处检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。
该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的多酚氧化酶活性，尤其适用于检测水果中多酚氧化酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 研钵或匀浆器3、 离心管或试管4、 低温离心机5、 酶标板6、 酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①植物样品：取植物组织或水果中层果肉加入预冷的PPO Lysis buffer 研磨或匀浆，10000g ，4℃离心，留取上清液，-20℃冻存，用于多酚氧化酶的检测。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于多酚氧化酶的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用PPO Lysis buffer 进行适当匀浆，10000g ，4℃离心，取上清液，-20℃冻存，用于多酚氧化酶的检测。
编号 名称TE0427 120T Storage试剂(A): PPO Lysis buffer 500ml 4℃ 避光 试剂(B): PPO Assay buffer 5ml4℃ 避光 使用说明书1份④高活性样品：如果样品中含有较高活性的多酚氧化酶，可以使用PPO Lysis buffer稀释进行恰当的稀释。
2、PPO加样：按照下表设置对照孔、测定孔，注意：对照孔、测定孔中为同一待测样品，但对照孔中为提前加热煮沸的样品。
多酚氧化酶的测定
多酚氧化酶的测定试剂：1、0.02mol/l焦儿茶酚溶液：称0.22克焦儿茶酚溶于100毫升蒸馏水中，现用现配。
2、0.1mol/l碘酸钾：0.3567克碘酸钾溶于蒸馏水，定容至100毫升。
3、0.005mol/l碘液：碘化钾2.5克溶于200毫升蒸馏水中，加冰醋酸1毫升，再加0.1mol/l 碘酸钾12.5毫升，最后加蒸馏水定容至250毫升。
4、pH6.0磷酸缓冲液：87.7毫升A+12.3毫升B，用蒸馏水稀释至200毫升。
贮备液A：0.2mol/l磷酸二氢钠（27.6g NaH2PO4·H2O用蒸馏水配成1000ml）。
贮备液B：0.2mol/l磷酸氢二钠（53.65g Na2HPO4·7H2O或71.7g Na2HPO4·12H2O用蒸馏水配成1000毫升）5、其它：1%淀粉；10%偏磷酸；0.1%抗坏血酸（现用现配）方法：1、粗酶提取：称取新鲜样品2克，剪碎，置于研钵中，加入少量pH6.0磷酸缓冲液和少许石英砂，于冰浴中迅速研磨至匀浆，将全部材料用缓冲液冲洗入50毫升容量瓶中，并定容至刻度。
在18~20度下每隔3分钟摇动1次，共5次，然后再静置15~20分钟，其上清液即为粗酶提取液（可倾入干洁的三角瓶中备用）。
2、活性测定：取干洁50毫升三角瓶6只（编号），按照下表向各瓶中加入pH6.0磷酸缓冲液、0.1%抗坏血酸、0.02mol/l焦儿茶酚，并向③号瓶及⑥号瓶各加10%偏磷酸。
然后将三角瓶置于18~20度水浴或放在室温下使内外温度达到平衡之后，每隔1分钟向各瓶中依次加入酶液2毫升，全部加完后保温3分钟，再按原顺序仍然间隔1分钟向①、②、④、⑤号各瓶加入偏磷酸1毫升（注意：加完2号瓶后应间隔2分钟再加4号瓶），用于终止酶的活性。
最后向各瓶中加入1%淀粉溶液3滴作为指示剂，摇匀后用微量滴定管以0.005mol/l碘液滴定，当溶液呈现淡蓝色为止，记录碘液消耗量。
塑胶原料介绍-聚苯醚PPO
聚苯醚（PPO - polyphenylene oxide）polyphenyl ether多酚氧化酶polyphenol oxidase,PPO优先提供者组织PPO，（preferred provider oganization）聚苯醚简介聚苯醚是本世纪60年代发展起来的高强度工程塑料，化学名称为聚2,6—二甲基—1,4—苯醚，简称PPO（Polyphenylene Oxide）或PPE（Polypheylene ether），又称为聚亚苯基氧化物或聚苯撑醚。
聚苯醚是一类耐高温的热塑性树脂。
市场上通用的主要为改性的聚苯醚（Modified Polyphenylene Oxide），简称MPPO，或者MPPE（Modified Polypheylene ether）。
PPO，中文名称叫聚苯醚。
是世界五大通用工程塑料之一。
它具有刚性大、耐热性高、难燃、强度较高电性能优良等优点。
另外，聚苯醚还具有耐磨、无毒、耐污染等优点。
PPO的介电常数和介电损耗在工程塑料中是最小的品种之一，几乎不受温度、湿度的影响，可用于低、中、高频电场领域。
PPO的负荷变形温度可达190℃以上，脆化温度为-170℃。
PPO材料作为世界五大通用工程塑料之一，无毒，相对密度小，（PPO/PA同类产品也仅为1.10-1.13g/cm3），是五五大通用工程塑料中密度最小的,具有良好的机械强度，抗蠕变性，耐应力松弛，抗疲劳强度高。
PPO/PS合金耐热性突出，热变形温度在1.82MPa下，可以从75-170℃连续变化，随着PPO 含量增加，材料的热变汽车工业形温度不断升高，用于满足不同场合的性能需求。
PPO及其合金可以采用注塑、挤出、模压、发泡和电镀、真空镀膜、印刷机加工等各种加工方法。
[1] 纯的PPO料具有熔融流动性较差、价格高的缺点，市场出售的产品均为其改良的产品，具有优良的综合性能，它们广泛运用于：电子电气：能够满足在潮湿、负载、高温的条件下具有优良的电绝缘性，运用制备电视积机调谐片、线圈芯、微波绝缘件、屏蔽套、高频印刷电路板，各种高压电子元器件，电视机、电脑、传真机、复印机外壳等。
多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒说明书
多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC0190规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存粉剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂一液体40 mL×1瓶4℃保存试剂二液体10 mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、提取液：临用前将粉剂一倒入提取液中，溶液为悬浊液，使用前需摇匀。
产品简介：PPO主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在410nm有特征光吸收。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
2.称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）：直接检测。
二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管对照管试剂一600600试剂二150150样本150煮沸的样本15037℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）中准确水浴10min后，迅速放入沸水中加热10min。
冷却后，5000g，常温离心10min，收集上清，410nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A测定-A对照。
植物多酚氧化酶(PPO)酶联免疫分析
植物多酚氧化酶（PPO）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.1U/L – 4.0U/L使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中多酚氧化酶（PPO）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物多酚氧化酶（PPO）水平。
用纯化的植物多酚氧化酶（PPO）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物多酚氧化酶（PPO），再与HRP 标记的多酚氧化酶（PPO）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的植物多酚氧化酶（PPO）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中植物多酚氧化酶（PPO）浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8条6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶789终止液6ml×1瓶0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶1份2 酶标试剂标准品（8.0 U/L）标准品稀释液3 酶标包被板4 样品稀释液5 显色剂A液6 显色剂B液10 说明书11 封板膜12 密封袋2张1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
4.0 U/L 2.0 U/L 1.0 U/L 0.5U/L 0.25U/L 5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
1多酚氧化酶（PPO）简介
1多酚氧化酶（PPO）简介多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶，普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中[1]，甚至在土壤中腐烂的植物残渣上都可以检测到多酚氧化酶的活性。
多酚氧化酶最早在1895年被发现，直至1937年才被分离出来。
随着研究的深入,将其分为单酚单氧化酶[酪氨酸酶(tyrosinase),EC.1.14.18.1]、双酚氧化酶[儿茶酚氧化酶(catechol oxidase),EC.1.10.3.2]、漆酶(laccase,EC.1.10.3.1)[2]。
2多酚氧化酶的生理功能PPO能催化单元酚和二元酚等多元酚到联苯酚的羟基化以及羟基酚到醌的脱氢反应。
PPO定位于植物叶绿体的类囊体和其它类型质体的基质中，而植物体内PPO的底物存在于液泡中，且通常处于潜伏状态，因此，PPO与底物被区域化分开。
但当植物体内发生生理紊乱或组织受损时，PPO与底物的亚细胞区域化才被打破，PPO的底物被激活。
在PPO的作用下，底物与氧发生反应产生醌，醌在植物体内能发生自身聚合或与细胞内的氨基酸和蛋白质发生反应，产生黑色或褐色的沉积物，这是果蔬等农产品产生酶促褐变的主要原因，同时也是食品加工行业中影响产品的外观、风味、营养和加工性能的重要因素[3]。
另外，PPO 作为一种氧化还原酶还在光合作用中发挥作用。
如调节叶绿体中有害的光氧化反应速度，参与其中电子传递；PPO 还可促进伤口的愈合，也可增加植物对病原体的抗性。
如烟草对炭疽病、黄瓜对黑星病、苹果对轮纹病、棉苗对枯萎病菌、水稻对白叶枯病菌和细菌性条斑病以及番茄对小昆虫的抗性等。
PPO 的作用方式有：1．如番茄的具腺毛状体中含有大量 PPO，PPO 具有存在于表皮中、活化态和可溶性的特性，在毛状体介导的抗病过程中起作用。
2．通过醌共价调节亲核氨基酸形成抗营养机制，直接抵御昆虫和病原体。
3．醌的毒性直接发挥抗病作用。
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货号：MS1404 规格：100管/48样多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
PPO（EC1.10.3.1）主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
测定原理：
PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在525nm有特征光吸收。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：20mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：5mL×1瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）或果汁样本的处理：
按照血清（浆）或果汁体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.1mL血清（浆）或果汁加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至525nm，蒸馏水调零。
10000g，
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25℃离心10min，收集上清，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，525nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A测定-A对照。
注意：煮沸样本的操作：取300μL离心上清于EP管中，进行5min 95℃水浴处理；每个测定管需要设一个对照管，可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行5min 95℃水浴处理。
PPO活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）或果汁PPO活性
单位的定义：每分钟每mL血清（浆）或果汁在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化
0.01为一个酶活力单位。
PPO（U/mL）=ΔA×V反总÷(V液× V样÷V样总)÷0.01÷T =60×ΔA÷V液
2、组织、细菌或细胞PPO活性
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.01为一个
酶活力单位。
PPO（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.01÷T =60×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.01为一个
酶活力单位。
PPO（U/g 鲜重）=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T =60×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.01为一个酶活力单位。
PPO（U/104 cell）=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T =0.12×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.3mL；V液：加入血清（浆）或果汁体积，0.1mL； V样：加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）或果汁PPO活性
单位的定义：每分钟每mL血清（浆）或果汁在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化
0.005为一个酶活力单位。
PPO（U/mL）=ΔA×V反总÷(V液× V样÷V样总)÷0.005÷T =120×ΔA÷V液
2、组织、细菌或细胞PPO活性
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.005为一个
酶活力单位。
PPO（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.005÷T =120×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.005为一个
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酶活力单位。
PPO（U/g 鲜重）=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T =120×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每分钟每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中使525nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。
PPO（U/104 cell）=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T =0.24×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.3mL；V液：加入血清（浆）或果汁体积，0.1mL； V样：加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
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