实验六植物多倍体的诱导及其细胞学鉴定
多倍体诱发与鉴定
4 冲洗：用70%酒精冲洗三次，保存在70%酒精中
备用。 5 解离：固定好的材料转入解离液中，解离10分钟。 解离好的材料用蒸馏水冲洗2—3次。 6 染色：染色前一定要先将材料捣碎，染色时最好 还要边捣边染，用改良石炭酸品红溶液染色10mih，使 组织染色充分。 7 压片：盖上盖玻片后，用带橡皮头的铅笔轻轻敲 打，使细胞均匀分散。 8 镜检：经镜检挑选染色体分散良好的细胞拍照。
四、 实验方法 （步骤1-4需课前准备好） 1 设置对照组：用清水培养大蒜3-5天，待根长至约0.5厘米长后 再在室温下连续培养72小时，然后再放入4摄氏度的培养箱中24小时 作取材前处理。 2 诱导 物理法：用清水培养大蒜3-5天，待根长至约0.5厘米长时，分别 放入0℃、4℃、8℃的培养箱中培养24小时取出，在室温条件下继续 培养48小时，最后再放入4℃的培养箱中24小时作取材前处理。 化学法：用清水培养大蒜3-5天，待根长至约0.5厘米长时转入 0.1%秋水仙素溶液中培养24小时取出，再转入清水中继续培养48小 时，然后用0.1%秋水仙素溶液处理3小时作取材前处理，直到根尖膨 大为止，诱导后细胞为多倍体细胞。 3 固定：切取已做好前处理的大蒜的膨大根尖，水洗后投入卡 诺氏固定液中固定，固定时间以2小时为宜。
黑麦：观察根尖形态是否发生变 化，若发生变化及时记录变化情况。
2、绘制显微镜下观察的二倍体和四倍体图像。
实验一、植物多倍体诱发与鉴定
一、实验目的 1、掌握人工诱导多倍体的原理，及其在遗传育种中 的意义。
2、掌握用物理法（不同温度处理）和化学法（秋水
仙素）诱发多倍体的方法
二、实验材料：大蒜根尖（2n=16）
三、实验试剂： 70%酒精、0.1%秋水仙素、卡诺氏固定液（无水乙醇3份、冰乙酸1份混合 配制即成）、解离液（95%乙醇3份、浓盐酸1份混合配制即成）、改良品红 改良苯酚品红染液的配制： 原液A：取3克碱性品红溶于100毫升70%酒精中（可长期保存）。 原液B：取A液10毫升加入90毫升5%苯酚水溶液中(2周内使用)。 原液C：取B液55毫升加入6毫升的冰醋酸和6毫升38%的甲醛(可长期保存)。 染色液：取C液10-20毫升，加入90-80毫升45%醋酸和1.5克山梨醇。配成的 10％～20％的石炭酸品红液，放置2周后使用，染色效果显著，该染色液的浓 度可根据需要而变更，淡染或长时间染色可用 2～10％的浓度，浓染可用 30％ 浓度，再用 45％乙酸分色。（可普遍用于植物组织的压片法和涂片法，使用23年不变质。山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用。如果没有山梨醇，也 能染色，但效果稍差。 实验用具：标签、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、培养皿、显微镜、试 剂瓶、酒精灯、吸水纸、培养箱、带橡皮的铅笔。
植物多倍体诱发及细胞学鉴定概要
植物多倍体诱发及细胞学鉴定一、实验目的1、通过实验掌握人工诱导多倍体植物的方法和技术，观察多倍体的特点。
2、利用染色体分析的方法对多倍体细胞做出准确判断。
二、实验原理（一）多倍体1、多倍体是指细胞中具有3个或3个以上染色体组的细胞或个体。
多倍体可以分为:同源多倍体(具有3个以上相同染色体组的细胞或个体，且染色体组来源于同一物种（AAA，AAAA）；异源多倍体(具有3个以上染色体组且染色体组来源于不同物种，通常由不相同的种杂交的杂种再经过染色体加倍而来（AABB，AABBDD）。
2、多倍体是适应恶劣环境条件的结果。
3、自然界多倍体产生的原因：温度骤变，使细胞分裂时染色体不分离造成；有丝分裂时染色体分离而细胞没有分裂，导致体细胞染色体加倍；减数分裂时染色体没有减数，使生殖细胞染色体加倍。
4、多倍体植物的特性：A巨大性B可孕性低C适应性强D有机合成速率增加E克服远缘杂交的不结实性（二）人工诱导多倍体的方法、原理及鉴定方法1、人工诱导多倍体的方法A、物理方法温度剧变、机械损伤、各种射线处理等B、化学方法各种植物碱、麻醉剂、植物生长激素等。
秋水仙素是诱导多倍体的最有效的方法之一。
2、秋水仙素的作用A、细胞分裂时抑制纺锤体的形成B、抑制细胞板的形成C、无残效3、诱导方法A种子浸渍处理B点滴法(滴定法) C 毛细管法D 羊毛脂法E球根处理F复合处理G离体组织水平上诱导单个细胞内染色体加倍3、鉴定方法A、间接鉴定：观察气孔的大小和花粉粒的体积最为可靠。
B、直接鉴定：直接检查花粉母细胞或根尖细胞内的染色体数目。
三、实验步骤1、取材：取大蒜（洋葱、蚕豆、小麦等）发根至0.5-1cm，然后转入盛有0.15%秋水仙素水溶液的培养皿中继续培养24小时，待观察到根部有膨大时取出固定。
与在水中培养的材料做对照。
2、固定：在卡诺固定液中固定24小时，移至70%乙醇中保存或备用。
3、解离：植物的分生组织如根尖、茎尖等需要经过处理以便除去细胞之间的果胶层并使细胞壁软化，经解离的组织才能使压片步骤顺利进行。
不同植物同源多倍体的诱发与鉴定实验设计
不同植物同源多倍体的诱发与鉴定实验设计引言：植物的多倍化是指由于染色体加倍而产生的具有多个完整染色体组的个体。
不同植物的同源多倍体（autopolyploid）可以通过各种实验诱发和鉴定，本文将就多种诱发和鉴定方法进行阐述。
一、诱发同源多倍体的方法1. 化学诱导：可以通过化学物质诱导多倍化，如染色体稳定化剂Colchicine、Oryzalin等。
将适宜的浓度的诱导剂溶液喷洒到植株的叶片上，使其通过气孔进入植物体内，引发多倍化。
2. 温度诱导：某些植物的花粉直接暴露在高温中，能够诱发染色体变异，进而产生同源多倍体。
诱导温度通常为35-36℃，持续时间为数小时。
3. 辐射诱导：辐射可以直接或间接地引发染色体变异，造成多倍化。
常用的辐射源包括 X 射线、γ 射线、紫外线等。
4. 细胞学处理：通过细胞培养技术，可以利用化学物质、温度或辐射等对植物细胞进行处理，再通过诱导分化和植株再生获得多倍化植株。
二、鉴定同源多倍体的方法1. 核型分析：利用生物学核型技术，可以观察染色体数目和结构是否有变化。
常用的核型分析方法有染色体计数法和比较基因组杂交法。
2. 组织学观察：通过石蜡切片技术，观察植物组织的细胞形态和染色体数目。
不同倍化水平的同源多倍体在细胞外观和染色体数目上会有明显差异。
3. 分子标记分析：利用分子标记技术，如RAPD、SSR等，可以对同源多倍体的基因组进行分析，寻找遗传多样性和差异。
4. 表型观察：观察同源多倍体在形态、生理和生殖方面的变化，通过与野生型或同源单倍体进行比较，寻找差异。
结论：通过化学诱导、温度诱导、辐射诱导和细胞学处理等方法可以实现同源多倍体的诱发，而通过核型分析、组织学观察、分子标记分析和表型观察等方法可以对诱发的同源多倍体进行鉴定。
这些方法的综合应用可以帮助我们更好地理解同源多倍体的形成机制和遗传特征，为植物进化和育种工作提供理论和实践上的指导。
参考文献：1. 黄凤林, 柯华军, 林一明. 植物同源多倍体的诱导及鉴定[J].热带农业科学, 2007, 27(3): 202-207.2. 吴访苏, 韦佳伟, 郭少婵, 等. 植物染色体工程方法优化及染色体在植物生产中的应用[J]. 生物技术通讯, 2020, 31(6): 716-721.3. Li H, Li W, Hu G, et al. Advances on Induction and Identification of Autotetraploid Plants[J]. Molecular Plant Breeding, 2021, 19(4): 1929-1937.4. Jiang J, Gill B S. Different Species-Specific Chromosome Translocations in Triticum timopheevii and Triticum turgidumSupport the D-RNA Model for Nonhomologous Chromosome Synapsis[J]. Genetics, 1994, 15(1): 215-227.。
多倍体的诱发与鉴定多倍体的诱发与鉴定多倍体的诱发与...
实验六多倍体的诱发与鉴定多倍体：三倍和三倍以上的整倍体19世纪末世纪末，，狄.弗里斯普通月见草特别大的变异型（巨型月见草巨型月见草））2n=142n=28染色体数目变异可以导致遗传性状的变化染色体数目变异可以导致遗传性状的变化。
巨大型特征烟草的叶片气孔整倍体：体细胞染色体数为染色体组整倍数的个体。
非整倍体：体细胞染色体数增加一条或几条和减少一条或几条。
一、实验目的初步掌握秋水仙碱诱发多倍体的原理与方法原理与方法；；观察同源多倍体植物观察同源多倍体植物（（器官器官））形态特征与细胞学特点态特征与细胞学特点。
二、实验原理人工诱发多倍体最有效的方法是秋水仙碱处理，秋水仙碱的作用是阻止纺锤丝的形成与活动阻止纺锤丝的形成与活动。
当秋水仙碱水溶液渗入分生组织正在分裂的细胞时仙碱水溶液渗入分生组织正在分裂的细胞时，，纺锤丝就不能形成或被破坏就不能形成或被破坏，，有丝分裂就停留在中期状态有丝分裂就停留在中期状态。
每个染色体的两个姊妹染色单体虽然彼此分开了每个染色体的两个姊妹染色单体虽然彼此分开了，，却不能向两极移动不能向两极移动，，不能形成两个子核不能形成两个子核，，于是该分生细胞的染色体数目就加倍了胞的染色体数目就加倍了。
当染色体已经加倍了的细胞不再接受秋水仙碱处理时胞不再接受秋水仙碱处理时，，它就又恢复正常的有丝分裂分裂，，结果形成多倍体组织结果形成多倍体组织。
秋水仙碱诱发多倍体的原理多倍体的鉴定形态育性细胞学观察三、试材与用品试材：：经加倍处理的黑麦根尖•试材显微镜、、载玻片载玻片、、盖用品：：恒温水浴锅恒温水浴锅、、显微镜•用品、胶头玻璃棒、碱性品红染胶头玻璃棒、镊子、、镊子玻片玻片、、1M盐酸。
盐酸。
醋酸、、45%醋酸液、0.2%秋水仙碱秋水仙碱、四、步骤与方法实验步骤种子发芽黑麦根尖染色体加倍处理十字压片制染色体临时片观察1.1.种子发芽种子发芽将吸水纸铺在培养皿中选取均匀选取均匀、、饱满饱满、、有发芽力的黑麦种子倒入培养皿中 实验方法倒入清水浸泡浸种14～18小时室温催芽36hr左右，根长至种子发芽种子发芽，0.5~1cM2.黑麦根尖染色体加倍处理把吸水纸盖在已经发芽的黑麦种子上倒入0.2％的秋水仙碱加倍处理约26小时根尖分生区以下明显增粗洗净根尖把洗净的根尖装入广口瓶倒入固定液固定1～24小时固定液固定液：：卡诺氏Ⅰ，冰乙酸冰乙酸（（1份）：）：无水乙醇无水乙醇无水乙醇（（3份）逐级转入70%乙醇中保存备用3.制片制片：：十字压片法制临时片解离水洗软化取分生区（膨大部位以上膨大部位以上））十字压片染色加盖玻片压片、敲片镜检绘图1M 1M盐酸盐酸60ºC 水浴1515～～2020分钟分钟60ºC 温水清洗清洗33～5次4545％％醋酸2～3枚碱性品红3～5分钟2n=4x=28 2n=2x=142n=4x=281.1.绘制正常细胞和加倍细胞中期分裂相各一个绘制正常细胞和加倍细胞中期分裂相各一个2.2.写出实验收获和体会写出实验收获和体会作业。
植物多倍体诱导及其细胞学鉴定PPT课件
玉米： 2n=2X=20，X=10，n=10，n=X； 普通小麦：2n=6X=42，X=7，n=21，n=3X 可见：n既可以等于X ，也可以是X的倍数。
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染色体倍性
• 一倍体(monoploid)：体细胞中只具有一个染
导多倍体的有效方法。 秋水仙素是从百合科秋水仙属植物秋水仙(Colchicum autumnale)
的 有种 剧子 毒及 ，故器使官用中时提要取特出别来注的意一，种切生勿物使碱药，液其进分入子眼式内为或C2口2H中25N。O6，因 秋水仙素诱导作用在于阻止有丝分裂细胞中纺锤丝的形成，而
对染色体的结构和复制无显著影响。若浓度适合，药剂在细胞中扩散 后，不致发生严重的毒害，这样纵列为二的染色体不能向两极分开， 因而便产生了染色体加倍的重组核。当药剂的作用消除后，由于多倍 体细胞继续分裂，便得到多倍体组织，以后则产生新的多倍体植株。
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４．固定 将恢复后的种子从根尖顶端切下1cm长的幼根放入广口瓶中，以卡诺氏固定液 (Carnoy‘s Fluid) （冰醋酸：乙醇=1:3）进行固定2-24h后，保存于70%乙醇溶 液中, 4℃ 冰箱保存。
5. 切取分生组织 蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，吸水纸吸净蒸馏水，置于载玻片上，切取乳白 色分生组织1mm左右。
10. 观察多倍体细胞染色体的形态并统计其染色体数目。
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六、实验结果与分析 1. 统计100个中期细胞，计算多倍体细胞的
出现率； 2. 绘制观察到的蚕豆二倍体、多倍体的中期
分裂相图。
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注意事项
• 秋水仙素处理时间应根据供试材料的细胞周期而定，当处
理时间介于供试材料细胞周期的一倍到两倍之间时，可观 察到细胞由二倍体变为四倍体，当处理时间多于供试材料 细胞周期的两倍以上时，供试材料的细胞可从四倍体变为 八倍体。因此，在培养多倍体细胞时，应注意用秋水仙素 的处理时间；此外，秋水仙素的浓度对处理效果也有影响， 应注意掌握。（蚕豆根尖在19℃条件下，一个细胞周期约 为19.3小时）
植物多倍体的诱导及细胞学鉴定
植物多倍体的诱导及细胞学鉴定实验时间：4月6日摘要一个物种细胞中染色体形态结构和数目的恒定性是这个种的重要特征。
我们把二倍体个体中能维持配子或配体正常功能的、最低数目的一套染色体称为染色体组或基因组。
当生物体内细胞染色体组数达到3组或3组以上者，称为多倍体。
多倍体在植物进化中有很重要的意义。
本实验利用大蒜作为试验材料，利用秋水仙素诱导，使生长出多倍体根尖。
然后通过制作大蒜根尖压片，观察染色体的数目，以鉴定大蒜根尖细胞是否为多陪细胞。
（本实验报告主要从多倍体的鉴定方面展开，而多倍体培育方面，将在下次报告中给出。
）1.引言生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目，这是物种的基本特征之一。
遗传学中，将二倍体生物一个配子的染色体总和称为染色体组，也叫基因组，用n表示。
以下是几种常见模式生物的染色体组数目：玉米，2n=20；拟南芥，2n=10；果蝇，2n=8；小鼠，2n=40；水稻，2n=24。
又如，小麦染色体组可表示为2n=6x=42。
其中x表示每一个染色体组的染色体数，称为染色体基数，它是物种演化过程中的染色体倍数性的关系。
多倍体是指细胞中具有3个或3个以上染色体组的细胞或个体,而多倍体可以分为:同源多倍体(具有3个以上相同染色体组的细胞或个体，且染色体组来源于同一物种（AAA，AAAA）)、异源多倍体(具有3个以上染色体组且染色体组来源于不同物种，通常由不相同的种杂交的杂种再经过染色体加倍而来（AABB，AABBDD）)。
在自然界中许多植物都是多倍体，大约有30％～35％的被子植物，其中70％的禾本科植物属于多倍体，它们在植物进化中起了重要的作用，也是植物发生变异的重要途径之一。
多倍体植物，一般被认为是适应恶劣自然环境的结果，如我国西南部地区，温度变化激烈，紫外线辐射强，许多植物产生了多倍体类型。
在自然界中，大多是因为温度骤变，导致细胞分裂时染色体不分离，从而形成了多倍体。
植物多倍体有许多特性，其中一些特性也为农业经济发展提供了帮助。
植物多倍体诱发和鉴定
实验材料、器具与试剂
（一）实验材料
洋葱根尖 ，大蒜（Aillum sativum）根尖
（二）实验器具 显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、刀片、载玻片、
盖玻片、烧杯、 1.5ml离心管、滴瓶、玻片、大培养皿、吸水纸、 铅笔、移液枪。 （三）药品试剂
卡诺氏固定液（无水乙醇3份，冰醋酸1份）、改良苯酚品红染色 液、1N HCl、45%醋酸。
• 2.你观察到的被鉴定物种的 染色体数目是多少？处理后 得到了哪些染色体数目变异 类型的细胞？
实验方法
（五）染色、压片 将解离后的根尖用蒸馏水冲洗后， 放入45%醋酸中软化5min左右，制片时，取一根 尖放在洁净的载玻片上，用刀片切取1mm左右的 生长区，其余部分弃掉，滴加改良苯酚品红染色液 染色15分钟左右。用刀片在材料的上方轻压几下， 使生长区的细胞分散开来，再将多余的染料用吸水 纸吸走，加盖玻片。用铅笔上的橡皮头敲击根尖部 位，重复几次，力一次比一次大，以盖玻片不破裂 为准。
植物多倍体诱发和鉴定
实验目的
•1.了解人工诱导多倍体的 原理
•2.学习用秋水仙碱诱发多 倍体植物的方法
二、实验原理
秋水仙碱是细胞有丝分裂的抑制剂，它的主要作 用是抑制纺锤丝微管的形成，因而抑制了染色体 移向两极的运动，使细胞停滞在中期状态而不能 分裂成二个新的子细胞，而秋水仙碱对染色体结 构并无明显的影响，对细胞也不产生严重毒害， 细胞解除秋水仙碱环境后仍可正常生长分裂，因 而出现细胞含有多个染色体组的情况，亦即构成 了多倍体细胞。如果用秋水仙素处理植物的根尖， 则在根尖分生区内可检测到大量染色体加倍的细 胞
实验方法
（一）材料准备 选取大蒜瓣去皮，用透明
胶带固定放在盛有清水的培养皿中，使根部 与清水接触，在 20～25℃光照条件下培养2 天左右。待根尖长到0.5～1cm时，将清水换 成含0.1%秋水仙素的水溶液中，置阴暗处培 养1～2天，至根尖膨大为止。
实验6 植物多倍体的诱发及观察
实验6 植物多倍体的诱发及观察一、实验目的了解人工诱导多倍体的原理及一般方法，增加体细胞染色体加倍的感性认识。
二、实验原理植物多倍体是指每个细胞中的染色体数具有3套或更多套数的植物。
随着染色体组倍数的增加，有可能使一些作物的经济性状发生有利的变化。
因此，植物多倍体的研究和利用是育种工作中值得重视的途径之一。
人工诱导多倍体的方法很多，分为物理的（温度剧变、机械损伤、各种射线处理等）和化学方法的（各种植物碱、麻醉剂、植物生长激素等）诱导方法。
其中，秋水仙素是诱导多倍体的最有效的方法之一。
秋水仙素是从百合科秋水仙素属的一个种，秋水仙（Colchicum autumnale. L.）的器官和种子内提炼出来的一种植物碱。
它的化学分子式为C22H25O6N。
因有剧毒，故使用时要特别注意，切勿使药液进入眼内或口中。
秋水仙素的作用在于阻止分裂细胞形成纺锤丝，而对染色体的结构和复制无显著影响。
若浓度适合，药物在细胞中扩散后，不致发生严重的毒害，细胞经一定时期后仍可恢复正常，继续分裂，只是染色体数目加倍成为多倍性细胞，并在此基础上进一步发育成为多倍体植物。
三、实验材料、器具及试剂豌豆种子显微镜、酒精灯、水浴锅、培养皿、镊子、剪刀、解剖针、刀片、载片、盖片。
0.2－0.4%秋水仙素水溶液，FAA固定液，1％醋酸洋红，70%酒精，0.1－0.2%升汞、蒸馏水。
四、实验步骤（步骤1已完成）1.处理种子：这种方法适用于发芽快、或能在数天内发芽的种子。
先将豌豆种子洗净用水浸一天或干燥种子用0.1－0.2%升汞溶液消毒8－10分钟，再用清水洗净，然后摆放在铺有湿滤纸的一些培养皿中，其中一部分培养皿中加入0.2%秋水仙素溶液，另一部分培养皿中注入清水作为对照。
为了避免蒸发可加盖，置于培养箱中保持25℃左右使种子发芽。
种子萌发后，应继续处理24小时。
在处理过程中，仍注意药液的蒸发随时添加清水，保持原处理药液浓度。
处理后，用清水冲。
多倍体诱发及细胞学鉴定实验报告
多倍体诱发及细胞学鉴定实验报告
多倍体诱发是一种常用的细胞诱发技术，它的原理是利用染色质聚集的程序来诱发染色体复制，从而在细胞可分裂的过程中，产生多半数多倍体细胞。
多倍体诱发实验一般可以根据实验室不同需求来实施，其原理是通过建立多倍体的染色体数，为研究细胞的生物学和遗传学研究提供学习模型。
本实验中，我们采用405nm（紫外）的扫描激光束，在雪莉2-8（CHO）细胞株中进行多倍体诱发实验。
首先，在细胞培养皿中贴满CHO细胞，随后用紫外光照射4秒，以聚集染色质的形式诱导染色体复制。
随后，用培养基成功培养多倍体细胞，并经过延续文献内容，其染色体数处于巴氏体期。
之后，我们用下列材料进行了细胞学鉴定，建立了染色体数的真实状况。
首先，我们通过原子力显微镜（AFM）观察细胞的外形特征，并观察细胞的表面晶粒; 然后，以可见光成像和三维恒定焦距倒相聚焦显微镜（TIFM），进一步探讨了细胞形态和染色质结构;最后，我们采用GenePaintFISH试剂盒，对样品进行染色体染色，以求知多倍体细胞的染色体数。
经过多倍体诱发实验及细胞学鉴定，我们发现雪莉2-8细胞株有49个染色体，其中染色体I~45有2N（2倍体）、染色体46~48有3N（3倍体）和染色体49有4N（4倍体）的染色体，其中4N染色体的比例和染色体数均与AFM、TIFM和GenePaintFISH鉴定结果相符，推断考察的细胞为含有巴氏体的多倍体细胞。
结论部分，本实验通过多倍体诱发以及细胞学鉴定，鉴定出雪莉2-8 细胞株染色体数为49个，其中有2N、3N和4N三种染色体，细胞为含有巴氏体的多倍体细胞，因此本实验获得了成功的结果。
植物的多倍体诱导及其观察实验报告
植物多倍体的诱导及其鉴定一、实验目的1、通过实验，掌握化学诱导植物多倍体的原理以及方法，学习利用秋水仙素诱导植物多倍体的一般方法及多倍体诱导在植物育种上的意义。
2.学习利用细胞学方法观察鉴定多倍体的特点以及诱导染色体加倍后的细胞学表现，利用染色体分析的方法对多倍体的细胞做出准确判断。
二、实验原理生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目，这是物种的基本特征之一。
多倍体是细胞中具有3个或3个以上的染色体组的生物体。
在植物育种上，利用多倍体可以改良作物的经济性状，同时还可以利用多倍体克服远缘杂交过程中的障碍。
利用一些化学因素诱导植物产生多倍体，秋水仙素是诱导多倍体形成最有效和常用的药品之一，利用秋水仙素处理正在进行有丝分裂的细胞，可以抑制纺锤丝的形成，使细胞有丝分裂中期纺锤丝断裂或纺锤体形成受抑制，有丝分裂后期，复制的染色体无法移向两级，细胞内的染色体加倍，形成多倍体。
因此在适宜浓度的秋水仙素作用下，它既可以有效的阻止纺锤体的形成，又不至于对细胞发生较大的毒害，因此，细胞经一定时期后仍可恢复正常，继续分裂，只是染色体数目加倍成为多倍性细胞，并在此基础上进一步发育成为多倍体植物。
将秋水仙素处理的植物根尖，制成临时装片，利用显微镜观察根尖分生区细胞中的染色体数目而确定是否形成染色体。
三、实验材料、器具及试剂1、实验材料：发芽的蚕豆，蚕豆幼苗2、实验器具：显微镜、解剖针、小试管、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、试管、培养皿、烧杯。
3、实验试剂：秋水仙素： 0.1%浓度。
卡诺固定液：3份95％酒精与1份冰醋酸配制而成。
1mol/l盐酸，45%醋酸，改良苯酚品红，70%酒精。
四、实验步骤1、取材：将种子消毒，并于无菌水中浸泡24小时后，将蚕豆种子（2n=16）培养在培养皿内的湿滤纸上，室温或28℃发芽，待胚根长达1~2cm时，取出萌发的种子，用自来水洗2~3次，备用。
2、预处理：将胚根长到1~2cm的蚕豆种子移到盛有0.1%秋水仙素的润湿的的吸水纸的培养皿内，室温下处理48h,待观察到根部有膨大时取出固定，与在水中进行培养的蚕豆种子（一般植物生长周期为17~18h）做对照。
诱导实验报告
一、实验名称植物多倍体诱导实验二、实验目的1. 掌握化学诱导植物多倍体的原理和方法。
2. 学习利用秋水仙素诱导植物多倍体的一般方法。
3. 了解多倍体诱导在植物育种上的意义。
4. 学习利用细胞学方法观察鉴定多倍体的特点。
5. 掌握染色体分析的方法对多倍体的细胞做出准确判断。
三、实验原理生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目，这是物种的基本特征之一。
多倍体是细胞中具有3个或3个以上的染色体组的生物体。
在植物育种上，利用多倍体可以改良作物的经济性状，同时还可以利用多倍体克服远缘杂交过程中的障碍。
秋水仙素是一种诱导植物多倍体形成最有效和常用的药品之一。
利用秋水仙素处理正在进行有丝分裂的细胞，可以抑制纺锤丝的形成，使细胞有丝分裂中期纺锤丝断裂或纺锤体形成受抑制，有丝分裂后期，复制的染色体无法移向两级，细胞内的染色体加倍，形成多倍体。
四、实验材料与仪器材料：1. 植物种子或幼苗（如小麦、水稻、玉米等）2. 秋水仙素3. 0.1%的H2O2消毒液4. 无菌水5. 移液枪、吸管等仪器：1. 培养皿2. 烧杯3. 移液器4. 显微镜5. 细胞计数板五、实验步骤1. 将植物种子或幼苗进行表面消毒，消毒液为0.1%的H2O2，消毒时间约为30秒。
2. 将消毒后的植物种子或幼苗放入培养皿中，加入适量无菌水，保持湿润。
3. 将秋水仙素加入无菌水中，配制成一定浓度的溶液。
4. 将配好的秋水仙素溶液倒入培养皿中，使植物种子或幼苗浸泡在溶液中。
5. 将培养皿放入恒温培养箱中，保持适宜的温度和湿度。
6. 经过一定时间后，取出植物种子或幼苗，用无菌水冲洗干净。
7. 将冲洗干净的植物种子或幼苗放入新的培养皿中，加入适量无菌水，继续培养。
8. 经过一段时间后，观察植物种子或幼苗的生长状况，并记录数据。
9. 利用显微镜观察植物细胞的染色体，进行染色体分析。
10. 根据染色体分析结果，判断植物种子或幼苗是否为多倍体。
六、实验结果与分析1. 经过实验，大部分植物种子或幼苗在秋水仙素处理后，生长状况良好，表现为叶片颜色加深、植株高度增加等。
植物多倍体的诱发与鉴定实验报告
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实验六植物多倍体的诱导及其细胞学鉴定.doc
实验六植物多倍体的诱导及其细胞学鉴定一、实验目的通过实验掌握植物多倍体的方法和技术，观察多倍体的特点及染色体加倍后的细胞学表现。
利用染色体分析的方法对多倍体的细胞作出准确判断。
二、实验原理生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目，这是物种的基本特征之一。
多倍体是细胞中具有3个或3个以上的染色体组的生物体。
自然界中有许多植物是多倍体，也是变异发生的重要途径之一。
多倍体在形态较二倍体植物个体大，叶片上的气孔也很大，较易辩认。
多倍体研究在育种具有重要的意义。
利用一些诱发因素可以人工诱导植物产生多倍体。
这些因素包括物理的因素、化学因素等。
其中最为有效是化学药品是秋水仙素，秋水仙素colchicine（C22H25O6N）是1937年发现的，是从百合科植物秋水仙的种子和球茎中提取出来的一种植物碱。
能够抑制细胞有丝分裂时形成的纺锤体，染色体虽然完成了复制，但是不能形成两个子细胞，因而使染色体的数目加倍。
含加倍的染色体的体细胞再分裂出来的子细胞，染色体数目都比原来的体细胞增加了一倍，就形成了一个多倍体植株。
三、实验试剂和用具秋水仙素：0.02%、0.05%、0.1%浓度。
卡诺固定液：3份95％酒精与1份冰醋酸配制而成。
龙胆紫溶液：将0.5克龙胆紫溶解在100毫升，2％醋酸溶液中配制成0.5％龙胆紫溶液。
醋酸洋红溶液：将1克洋红与100毫升冰醋酸混合后煮沸，煮时可加锈铁钉一枚，略具铁质的1％醋酸洋红染液能增强染色效果。
搪瓷盘、镊子、剪刀、烧杯、培养皿、恒温水浴锅、纱布、试管。
四、实验材料催芽的玉米种子、玉米幼苗。
五、实验方法（一）玉米种子的处理和检测（1）玉米种子的处理：浸泡催芽的水稻种子的秋水仙素浓度为0.02%、0.05%、0.1%，浸泡时间为12h、24h、48h。
浸泡后用蒸馏水冲洗三次，继续用培养皿培养一周。
（2）、多倍体检测：剪取根尖（或胚芽）2-3mm,投入盛有10%HCL的培养皿中解离10min，再清水漂系2次。
植物多倍体的诱导及其细胞学鉴定
植物多倍体的诱导及其细胞学鉴定植物多倍体的诱导及其细胞学鉴定摘要多倍体诱发在植物乃至在动物中都已经有了很广泛的应用，此次实验通过对大蒜根尖细胞进行多倍体诱发，初步了解并掌握了仍诱导多倍体的方法和技术，并对诱导组织进行了染色和压迫观察，进行了细胞学鉴定，掌握了判断多倍体细胞的方法和技术。
1.引言多倍体这个名词在人们的日常生活中也许并不多见，但在自然界中多倍体的分布却十分广泛，人们平时的饮食生活中，也有多倍体的身影。
现已知自然界大约有30％~35％的被子植物，70％的禾本科植物属于多倍体，它们在植物进化中起了重要的作用，也是变异发生的主要途径。
而我们平时吃的山药是四倍体，小麦是异源六倍体，大豆是异源四倍体，香葱也是四倍体。
自然形成的多倍体大多是植物对恶劣的自然环境的适应，而自从1937年美国学者布莱克斯利（A.F.Blakeslee）等，用秋水仙素加倍曼陀罗等植物的染色体数获得成功以后，秋水仙素就被广泛应用于细胞学、遗传学的研究和植物育种。
花卉方面：矮牵牛、金鱼草、鸡冠花等多倍体植物多表现为叶片肥厚、花色艳丽、花期长、花瓣多等特点，观赏价值得到了提高；药材方面，板蓝根四倍体有效成分含量比普通二倍体对照高出约40%；林木方面，四倍体桑树及刺槐在生长量及抗逆性方面都较之二倍体对照有了较大提高；经济作物方面，多倍体水稻的稻粒比普通水稻更加饱满、肥大。
另外，在倍性育种的过程中，育种家们还发现，植物多倍体除了适应性强、有机合成速率增加、果实大等优点外，还可克服远源杂交的不结实性和诱变率高的优点，由此可见，在人工诱导植物多倍体的基础上，如能结合其它育种手段，以培育出高质量的植物新品种，大有潜力可挖。
现在，动物多倍体诱变也逐渐发展起来，最显著的应用便是鲍的诱变。
人们发现，鲍的多倍体个体具有生长速度快、抗病力强、个体大等优点，具有明显的增产效果，极具推广价值。
而利用水压法、温度法等方法，也已经实现了工业化的批量生产。
植物多倍体诱发和鉴定实验报告
植物多倍体诱发和鉴定实验报告一，试验目的1.通过试验掌握植物多倍体化学诱导的原理和方法研究用秋水仙素进行植物多倍体诱导的常用方法和多倍体诱导对植物育种的重要性。
2、学会用细胞学方法来观察和识别多倍体特征及诱导染色体加倍的细胞学表现并通过染色体分析对多倍体细胞作出精确判断。
二，实验原理生物体内细胞核内均存在着比较稳定的染色体数量，这也是最基本的物种特征。
多倍体指细胞内有三个或更多染色体组存在的生物体。
在植物育种中，用多倍体可使作物经济性状得到改善，但也能用多倍体来克服远缘杂交时遇到的阻碍。
用某些化学因素来诱导植物多倍体的发生，其中秋水仙素对诱导多倍体的发生作用最大，也是目前使用频率最高的药物，用秋水仙素来处理进行有丝分裂过程中的细胞能抑制纺锤丝发生，从而在细胞有丝分裂过程中期纺锤丝被打断或者纺锤体的发生受到抑制，而在有丝分裂过程后期复制染色体不能移动到2个水平上，在细胞中染色体发生倍增而发生多倍体。
所以当秋水仙素浓度合适时，既能有效地阻断纺锤体生成，也不会对细胞产生很大毒害，所以细胞经过一段时间之后仍然能恢复正常而持续分裂，只需染色体数量倍增为多倍性细胞就能以此为基础进一步发展成多倍体植物。
用秋水仙素加工植物根尖制作临时装片并在显微镜下观察根尖分生区细胞内染色体的数量来判断染色体形成与否。
三，实验的材料，用具和试剂1.试材：萌发蚕豆及蚕豆幼苗2.实验器具，显微镜，解剖针，小试管，刀片，镊子，载玻片，盖玻片，吸水纸，试管，培养皿，烧杯等。
3.实验试剂为秋水仙素，浓度为1度。
卡诺固定液：由三种95%酒精和一种冰醋酸混合制成。
1mol·l-1盐酸、1mol·L-1醋酸、改良苯酚品红、1mol-1酒精。
四，试验步骤1.取材：种子经消毒后在无菌水中浸泡24 h,取蚕豆种子（2n=16）置于培养皿中湿滤纸中，常温或28℃条件下催芽，胚根长1~2cm,取催芽种子用自来水冲洗2~3遍待用。
2.预处理：取胚根长1~2cm蚕豆种子，移入装有蚕豆种子秋水仙素湿润吸水纸培养皿中，常温处理48h后，观察根部膨大情况后取出固定不动，并以水中培养蚕豆种子（通常植物生长周期17~18h）作对照。
植物多倍体的诱发和鉴定
植物多倍体的诱发和鉴定一、实验目的通过实验，进一步了解人工诱导多倍体的原理，并初步掌握用秋水仙素诱发多倍体的一般方法及细胞学鉴定。
二、实验原理染色体是遗传物质的主要载体。
每一个物种都具有特定的形态特征。
各个物种细胞内染色体的数目都是相对恒定的，这是一个重要的生物学特征。
染色体数目和结构的改变，将会导致生物性状的改变。
遗传学中把二倍体生物配子中所具有的染色体成为一个染色体组，通常用n来表示。
而一个染色体组中包含的染色体数目成为染色体基数，用x表示。
同一个染色体组的各个染色体的形态、结构和连锁基因群都彼此不同，但它们构成一个完整而协调的体系。
细胞中染色体数目的变异类型有两类：整倍体变异和非整倍体变异。
整倍体变异指体细胞中染色体数目按染色体组的基数（x）成倍数增加或减少的现象。
具有两套染色体组的生物体成为二倍体，体细胞中含有三个或三个以上染色体组的整倍体为多倍体。
多倍体按其来源可以分为：同源多倍体和异源多倍体，同源多倍体是指具有三个或三个以上相同染色体组的细胞或个体；异源多倍体是体细胞中含有两个以上不同类型染色体组的多倍体。
自然界中的多倍体主要存在于植物中，动物中的多倍体很少。
多倍体可以在自然条件下产生，也可以人工诱导形成。
人工诱导多倍体通常采用物理方法和化学方法。
物理方法有高温、低温、超声波、嫁接和切断等，化学方法是使用秋水仙素、异生长素、萘骈乙烷来诱导多倍体。
在诱导多倍体的方法中，以应用化学药剂更为有效，其中以秋水仙素效果最好，使用广泛。
秋水仙素阻碍有丝分裂中细胞纺锤体的形成，这样细胞不能分离，产生染色体加倍的核。
本实验用适当浓度的秋水仙素处理洋葱或大蒜根尖，待根尖膨大后制片观察，可诱发多倍体。
三、实验材料大蒜根尖四、实验方法与步骤（一）根尖多倍体的诱发将大蒜去掉老根，置于盛水的培养皿上，25℃条件下培养发根，待不定根长出1cm时取出洗净，把水晾干后移到0.1%秋水仙素溶液中，根尖朝下，使根部浸没在药液中，于10℃培养箱中低温培养，直到根尖膨大为止。
植物多倍体的人工诱导和鉴定概要
植物多倍体的人工诱导和鉴定
实验原理 实验用品 实验目的 实验步骤
作业
实验目的
掌握诱发多倍体的一般方法 了解人工诱导多倍体的原理、方法 及其在植物育种上的意义 观察植物染色体数目的变化引起植 物其它器官的变异
实验步骤
1. 2.
3.
4. 5.
6.
种子萌发 先将种子清水洗净，浸种。待露白后置于培 养皿中发芽。 预处理 当根长1cm时，取出洗净吸干，用0.05—0.1% 秋水仙素溶液浸根处理24～36小时，根尖明显膨大时 用固定液固定。 酸解 将材料放入青霉素瓶中西净， 1moL/LHCl60oC 进行酸解，不同的材料的酸解时间不同.(大麦8-10分 钟) 染色 酸解后洗净材料，将根尖部分切下（约1mm）， 加改良石炭酸品红染色. 压片 染色后盖上盖片，用大拇指按压有材料的部位， 粗滤纸吸干多余染液，再用铅笔头轻敲，使重叠细胞 分散，得到理想的分裂相. 观察 低倍镜找到分散良好的分裂相后换高倍镜或油 镜.
作业
Hale Waihona Puke 分别绘制染色体分散良好的加倍细胞核 和未加倍细胞图。 秋水仙素处理后，根尖为什么会发生膨 大？
实验原理
自然界各种生物的染色体数目一般是相当稳定的， 这是物种的重要特征。由于各种生物的来源不同，细 胞核内可能具有一个或一个以上的染色体组，凡是细 胞核中含有一套完整染色体组的就叫做单倍体，亦用 n表示。具有两套染色体组的生物体称为二倍体，以 2n表示。细胞内多于两套染色体组的生物体则称为多 倍体。在整倍体中，又可按染色体组的来源，区分为 同源多倍体和异源多倍体。凡增加的染色体组来自同 一物种或者是原来的染色体组加倍的结果，称为同源 多倍体。如果增加的染色体组来自不同的物种，则称 为异源多倍体。
植物多倍体的诱发和鉴定
6 镜检：将原生质体悬浮液滴在载玻片上，轻 轻盖上盖玻片，先在低倍镜下找到原生质体，再换 成高倍镜仔细观察。
实验报告：
1 画出在显微镜下看到的原生质体的图像；
2 在整个实验操作过程中需要注意哪些问题？
结果与讨论：
1 预期结果：完整的原生质体形态上是圆球状 的，颜色鲜艳，富含细胞质。
2 讨论： ① 选择合适的材料是实验成功的首要因素， 请问该实验选材时注意什么问题？ ② 酶解时酶液的组成及浓度如何确定？ ③ 研究原生质体的意义是什么？
2 多倍体诱导：将水换成0.1%的秋水仙素溶液， 在阴暗处培养2天左右。
3 固定：11：30左右将剪取根尖1~2cm冲洗后 转移至卡诺氏固定液中，室温下处理3~8小时。
4 解离：将冲洗后的根尖放入1mol/L的盐酸中， 室温下处理10~15min。
5 染色：切取1~2mm的分生区，用改良苯酚品 红染液染色10~20min。
6 压片：盖上盖玻片，在酒精灯上烤片。然后 固定盖玻片，用铅笔垂直、用力敲击盖片几下，将 材料压成一层细胞。
8 镜检：先在低倍镜下找到细胞，再换成高倍 镜仔细观察。
请注意比较该实验结果与 有丝分裂实验结果有何不 同？
实验报告：
1 说明秋水仙素诱发多倍体的原理是什么？ 2 画出在显微镜下看到的多倍体细胞的图像；
3 酶解：在培养皿中放入混合酶液，将去掉下 表皮的叶片剪成小块，去下表皮面向下铺于酶液中， 充分接触酶液。25~30℃，酶解2~3小时。
4 过滤：酶解后的混合物用双层漏斗进行过滤， 只允许单细胞和原生质体通过。
5 纯化：用比原生质体比重大的20%蔗糖溶液， 离心后原生质体漂浮在溶液的表面。
过滤后的混实验选用大蒜。
实验用品：
植物多倍体的诱发及鉴定
植物多倍体的诱发与鉴定一、实验目的1、掌握人工诱导多倍体的原理，及其在遗传育种中的意义。
2、掌握用秋水仙素诱发多倍体的方法。
二、实验原理自然界各种生物的染色体数目是相对恒定的，这是物种的重要特征。
遗传学上把一个配子的染色体数，称为染色体组(或称基因组)，用n表示。
一个染色体组内每个染色体的形态和功能各不相同，但又互相协调，共同控制生物的生长和发育、遗传和变异。
由于各种生物的来源不同，细胞核内可能具有一个或一个以上的染色体组，凡是细胞核中含有一套完整染色体组的就叫做单倍体，也用n表示。
具有两套染色体组的生物体称为二倍体，以2n表示。
细胞内多于两套染色体组的生物体称为多倍体，这类生物细胞内染色体数目的变化是以染色体组为单位进行增减的，所以称作整倍体。
多倍体普遍存在于植物界，目前已知道被子植物中约有l／3或更多的物种是多倍体，除了自然发生的多倍体物种之外，还可采用高温、低温、X射线照射、嫁接和切断等物理方法人工诱发多倍体植物。
在诱发多倍体方法中以应用化学药剂更为有效。
如秋水仙素、异生长素，富民农等，都可以诱发多倍体，其中以秋水仙素溶液效果最好，使用最为广泛。
秋水仙素溶液的主要作用是抑制细胞分裂时纺锤体的形成，使染色体向两极的移动被阻止，而停留在分裂中期的分布，这样细胞不能继续分裂，从而产生染色体数目加倍的核。
若染色体加倍的细胞继续分裂，就形成多倍性的组织．由多倍性组织分化产生的性细胞，可通过有性繁殖方法把多倍体繁殖下去。
如果将种子用秋水仙素浸渍，也可诱导多倍体植株产生。
多倍体已成功地应用于植物育种。
用人工方法诱导的多倍体，可以得到一般二倍体所没有的优良经济性状，如粒大、穗长、抗病性强等。
三倍体西瓜、三倍体甜菜、八倍体小黑麦已在生产上得到广泛的应用。
染色体加倍后必须进行鉴别，同源多倍体主要是根据形态特性来判断，如叶色、叶形及气孔和花粉粒的大小。
最为可靠的方法，是待收获大粒种子后，再将这些大粒种子萌发，制备根尖压片，然后检查细胞内的染色体数目，只有染色体数目加倍了，才能证明植株已诱变成为多倍体。
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实验六植物多倍体的诱导及其细胞学鉴定
一、实验目的
通过实验掌握植物多倍体的方法和技术，观察多倍体的特点及染色体加倍后的细胞学表现。
利用染色体分析的方法对多倍体的细胞作出准确判断。
二、实验原理
生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目，这是物种的基本特征之一。
多倍体是细胞中具有3个或3个以上的染色体组的生物体。
自然界中有许多植物是多倍体，也是变异发生的重要途径之一。
多倍体在形态较二倍体植物个体大，叶片上的气孔也很大，较易辩认。
多倍体研究在育种具有重要的意义。
利用一些诱发因素可以人工诱导植物产生多倍体。
这些因素包括物理的因素、化学因素等。
其中最为有效是化学药品是秋水仙素，秋水仙素colchicine（C22H25O6N）是1937年发现的，是从百合科植物秋水仙的种子和球茎中提取出来的一种植物碱。
能够抑制细胞有丝分裂时形成的纺锤体，染色体虽然完成了复制，但是不能形成两个子细胞，因而使染色体的数目加倍。
含加倍的染色体的体细胞再分裂出来的子细胞，染色体数目都比原来的体细胞增加了一倍，就形成了一个多倍体植株。
三、实验试剂和用具
秋水仙素：0.02%、0.05%、0.1%浓度。
卡诺固定液：3份95％酒精与1份冰醋酸配制而成。
龙胆紫溶液：将0.5克龙胆紫溶解在100毫升，2％醋酸溶液中配制成0.5％龙胆紫溶液。
醋酸洋红溶液：将1克洋红与100毫升冰醋酸混合后煮沸，煮时可加锈铁钉一
枚，略具铁质的1％醋酸洋红染液能增强染色效果。
搪瓷盘、镊子、剪刀、烧杯、培养皿、恒温水浴锅、纱布、试管。
四、实验材料
催芽的玉米种子、玉米幼苗。
五、实验方法
（一）玉米种子的处理和检测
（1）玉米种子的处理：浸泡催芽的水稻种子的秋水仙素浓度为0.02%、0.05%、0.1%，浸泡时间为12h、24h、48h。
浸泡后用蒸馏水冲洗三次，继续用培养皿培养一周。
（2）、多倍体检测：剪取根尖（或胚芽）2-3mm,投入盛有10%HCL的培养皿中解离10min，再清水漂系2次。
将漂洗后的根尖（或胚芽）放入0.5％龙胆紫溶液或1％醋酸洋红溶液中染色3-5min，制片，然后镜检观察染色体的倍性。
记录结果（表6-1）。
表6-1 玉米种子检测结果统计
（二）玉米幼苗和处理和检测
（1）玉米幼儿苗的处理
在玉米幼苗的幼芽长到3-5mm时，用解剖刀在芽上作一纵切，然后用一浸有秋水仙素(0.02%浓度)溶液的纱布条包在切口处,纱布条的另端浸在一个盛有秋水仙素水溶液的小烧杯内, 烧杯的口用封口膜封好以防处理液蒸发,处理12h.隔天后再处理1次,然后将幼苗洗干净,种到花盆内或地里。
同时种植没有处理过的幼苗作为对照。
（2）形态观察和细胞学鉴定：比较处理与对照的外部形态有什么差异，将叶面的表皮撕下，在显微镜下观察，多倍体植物的气孔比二倍体大很多，叶片也比较肥厚。
用根尖压片法制成染色体载玻片标本，在显微镜下认真观察和计数，与对照进行对比。
六、注意事项
1、本实验所用的秋水仙素溶液具有强致癌性，请在使用过程中务必注意安全，尤其是不能乱倒废液。
2、由于本实验涉及的时间较长，应认真记录各时期植物变化情况。
七、作业及思考题
1、与对照植物相比，处理后的植物有哪些不同特征？
2、使用秋水仙素诱导多倍体应注意哪些问题？。