【临床血液学-实验课课件】_10实验十 PT APTT 血小板功能
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计算粘附率,记录结果
注意事项
Ø 采血过程必须顺利，避免产生气泡，溶血和凝块 Ø 器材必须标准化，使用的试管，滴管必须硅化处
理，或用塑料制品。 Ø 检测前1周，禁止服用阿司匹林类可以影响血小
板的药物 Ø 血小板的计数要准确，宜作2-3次取平均值。
参考范围
• 53.9%-71.1%
临床意义：
1. 粘附率增高：见于高凝状态和血栓性疾病，如 心梗，心绞痛，动脉硬化，口服避孕药等。
VII
VLeabharlann BaiduI
V
V
IV without
IV
III without
III
II
II
VII III
Ca2+, PL X
Ca2+, PL
V
II
37度
I
Fibrin
Measure Clotting Time
Normal Range 10-14 sec
I
I
操作
1. 枸橼酸钠1:9抗凝血2ml 2. 3000转/分离心15分钟 3. PT试剂取出进行37℃温浴 4. 将血浆 100ul 加入试管内温浴1分钟 5. 加入 200ul 已温浴的PT试剂，同时启动秒
实验十
血小板功能检测（示教） PT APTT
目的要求
• 掌握PT、APTT测定的原理、方法、注意事项、临 床意义
• 掌握试管法 • 熟悉血凝仪法 • 熟悉血小板聚集仪
血小板功能检验
• 血小板黏附试验 • 血小板聚集试验
全血的PLT不能小于50×109/L
血小板黏附试验原理
• 在体内血小板具有粘附于被暴露的胶原组织和 相互之间粘附的机能，在体外血小板可粘附于带 负电荷的非生理性表面（如金属、玻璃）的机能， 同时也反应血小板的聚集功能。
临床意义
1. 增高：反映血小板聚集功能增强，见于血栓前 状态和血栓性疾病，如心梗，心绞痛，糖尿病， 脑血管病变
2. 减低：反应血小板聚集功能减低，见于血小板 无力症，巨大血小板综合征，尿毒症，肝硬化， 低（无）纤维蛋白原症等
• PT • APTT • TT • FIB
凝 血 活 酶 生 成 期
（2）缩短：
高凝状态（hypercoagulation state） 血栓性疾病 口服避孕药
PT的报告方式
• 时间（S）
• PT比值（PTR）=
待测血浆PT 正常血浆PT
• 国际标准化比值（INR）= PTRISI
International Normalized Ratio International Sensitivity Index
开启血小板凝聚仪，将诱聚剂放入仪器预热槽内进行温浴
操 用硅化移液管吸0.3mlPRP加入聚集反应杯中，并加入磁棒
作 用普通移液管准确吸0.3mlPPP加入聚集反应杯中，不加入磁棒
步
将PPP管放入反应通道内，选择血小板聚集试 验，按ENTER进行调零,调零结束后取出PPP管
骤 将PRP放入刚才的反应通道内，按ENTER，仪器读取PRP的浊度
2. 粘附率减低：见于vWD、巨大血小板综合征， 血小板无力症，肝硬化等。
血小板聚集试验
• 原理： • 在体内，血管壁受损后血小板立即粘附于受
损血管壁创面处，继而发生聚集反应形成白色血 栓。在体外，将血小板聚集诱导剂加入富含血小 板的血浆中通过血小板聚集仪观察血小板聚集反 应，称血小板聚集功能试验。
注意事项
当屏幕显示ADP时，准确加入30ul诱聚剂，同时按 ENTER,仪器进行血小板聚集的测试
测试结束，屏幕将显示最大聚集率%
注意事项
• ⑴采血时应一针见血，并避免产生气泡和溶血。止血带 不得扎时间过长
• ⑵采血当天应禁食牛奶、豆浆类脂肪性食物。 • ⑶实验在采血后3小时内完成。 • ⑷采血前1周内不应服用抑制血小板聚集的药物：如阿司
• PRP（platelet rich plasm ) 800-1000rpm,10min • PPP（platelet poor plasm ) 3000rpm,15min
•
以PPP调零，在PRP中加入血小板聚集诱导剂后，用一
涂硅小磁棒粒进行搅拌，血小板逐渐聚集，透光度增加，通
过记录仪描绘出血小板聚集的曲线，分析血小板的聚集能力。
表不断轻轻倾斜试管，记录凝固时间 6. 重复2次取均值报告
[意 义] 外源性凝血系统的筛选试验
比正常参考值延长或缩短3秒以上有临床意义。
（1）延长：
1．因子II、V、VII、X 单独或联合缺乏 2．严重纤维蛋白原降低（尤其<1g/L时） 3．Vitk缺乏症、严重肝病 4．纤溶亢进（如DIC后期） 5．循环中抗凝物质增加，如 SLE
Principle of PT
in Blood
in Plasma
PT Reagent
XIII
XIII
XII
XII
IX
IX
Blood X Sampling X
Extrinsic System III
IV
Tissue Factor Calcium (Ca2+)
without
IX Trisodium IX VIII Citrate VIII
血小板黏附试验
一定量 的血液
一定时间之后，一定量的血 小板粘附在容器内表面
0.7ml，粘附15min
利用粘附前后的 血小板之差，计
算粘附率
• 用硅化试管采集1：9枸橼酸钠抗凝血7.2ml 用硅化移液管吸取0.8ml混匀的抗凝血至小粘附瓶内 将粘附瓶内的抗凝血用血球计数仪计数粘附前血小板数目
将粘附瓶塞入粘附仪器内的橡皮塞，并做平衡 打开粘附仪电源，按START键,仪器进入旋转粘附 测试完毕，取出粘附瓶,再同前计数粘附后的血小板数目
A
P
T
T
Ⅻa
Ⅲ
Ⅶa
Ⅺa
Ca2+
Ⅸa Ⅷ,PF3 ,Ca2+
Ⅹa
P
Ⅴ,PF3 ,Ca2+
T
凝血酶原 (Ⅱ)
凝血酶 (Ⅱa)
纤维蛋白原 (Ⅰ)
纤维蛋白 (Ⅰa)
血浆凝血酶原时间
（Prothrombin time, PT） 【原理】
组织因子(兔脑、胎盘、肺组织浸液) Ca2+ 血浆
[参考值] QUIK法：11-13s
匹林、潘生丁、肝素、双香豆素等 • ⑸所用器具均必须硅化处理 • ⑹PRP调至血小板数目为220×109/L，PPP调至血小板数
目为20×109/L以下
参考范围
• ADP--------62.7±16.1 • Adr--------67.8±17.8 • 胶原--------71.7±19.3 • 瑞斯托酶素-----87.5±11.4
注意事项
Ø 采血过程必须顺利，避免产生气泡，溶血和凝块 Ø 器材必须标准化，使用的试管，滴管必须硅化处
理，或用塑料制品。 Ø 检测前1周，禁止服用阿司匹林类可以影响血小
板的药物 Ø 血小板的计数要准确，宜作2-3次取平均值。
参考范围
• 53.9%-71.1%
临床意义：
1. 粘附率增高：见于高凝状态和血栓性疾病，如 心梗，心绞痛，动脉硬化，口服避孕药等。
VII
VLeabharlann BaiduI
V
V
IV without
IV
III without
III
II
II
VII III
Ca2+, PL X
Ca2+, PL
V
II
37度
I
Fibrin
Measure Clotting Time
Normal Range 10-14 sec
I
I
操作
1. 枸橼酸钠1:9抗凝血2ml 2. 3000转/分离心15分钟 3. PT试剂取出进行37℃温浴 4. 将血浆 100ul 加入试管内温浴1分钟 5. 加入 200ul 已温浴的PT试剂，同时启动秒
实验十
血小板功能检测（示教） PT APTT
目的要求
• 掌握PT、APTT测定的原理、方法、注意事项、临 床意义
• 掌握试管法 • 熟悉血凝仪法 • 熟悉血小板聚集仪
血小板功能检验
• 血小板黏附试验 • 血小板聚集试验
全血的PLT不能小于50×109/L
血小板黏附试验原理
• 在体内血小板具有粘附于被暴露的胶原组织和 相互之间粘附的机能，在体外血小板可粘附于带 负电荷的非生理性表面（如金属、玻璃）的机能， 同时也反应血小板的聚集功能。
临床意义
1. 增高：反映血小板聚集功能增强，见于血栓前 状态和血栓性疾病，如心梗，心绞痛，糖尿病， 脑血管病变
2. 减低：反应血小板聚集功能减低，见于血小板 无力症，巨大血小板综合征，尿毒症，肝硬化， 低（无）纤维蛋白原症等
• PT • APTT • TT • FIB
凝 血 活 酶 生 成 期
（2）缩短：
高凝状态（hypercoagulation state） 血栓性疾病 口服避孕药
PT的报告方式
• 时间（S）
• PT比值（PTR）=
待测血浆PT 正常血浆PT
• 国际标准化比值（INR）= PTRISI
International Normalized Ratio International Sensitivity Index
开启血小板凝聚仪，将诱聚剂放入仪器预热槽内进行温浴
操 用硅化移液管吸0.3mlPRP加入聚集反应杯中，并加入磁棒
作 用普通移液管准确吸0.3mlPPP加入聚集反应杯中，不加入磁棒
步
将PPP管放入反应通道内，选择血小板聚集试 验，按ENTER进行调零,调零结束后取出PPP管
骤 将PRP放入刚才的反应通道内，按ENTER，仪器读取PRP的浊度
2. 粘附率减低：见于vWD、巨大血小板综合征， 血小板无力症，肝硬化等。
血小板聚集试验
• 原理： • 在体内，血管壁受损后血小板立即粘附于受
损血管壁创面处，继而发生聚集反应形成白色血 栓。在体外，将血小板聚集诱导剂加入富含血小 板的血浆中通过血小板聚集仪观察血小板聚集反 应，称血小板聚集功能试验。
注意事项
当屏幕显示ADP时，准确加入30ul诱聚剂，同时按 ENTER,仪器进行血小板聚集的测试
测试结束，屏幕将显示最大聚集率%
注意事项
• ⑴采血时应一针见血，并避免产生气泡和溶血。止血带 不得扎时间过长
• ⑵采血当天应禁食牛奶、豆浆类脂肪性食物。 • ⑶实验在采血后3小时内完成。 • ⑷采血前1周内不应服用抑制血小板聚集的药物：如阿司
• PRP（platelet rich plasm ) 800-1000rpm,10min • PPP（platelet poor plasm ) 3000rpm,15min
•
以PPP调零，在PRP中加入血小板聚集诱导剂后，用一
涂硅小磁棒粒进行搅拌，血小板逐渐聚集，透光度增加，通
过记录仪描绘出血小板聚集的曲线，分析血小板的聚集能力。
表不断轻轻倾斜试管，记录凝固时间 6. 重复2次取均值报告
[意 义] 外源性凝血系统的筛选试验
比正常参考值延长或缩短3秒以上有临床意义。
（1）延长：
1．因子II、V、VII、X 单独或联合缺乏 2．严重纤维蛋白原降低（尤其<1g/L时） 3．Vitk缺乏症、严重肝病 4．纤溶亢进（如DIC后期） 5．循环中抗凝物质增加，如 SLE
Principle of PT
in Blood
in Plasma
PT Reagent
XIII
XIII
XII
XII
IX
IX
Blood X Sampling X
Extrinsic System III
IV
Tissue Factor Calcium (Ca2+)
without
IX Trisodium IX VIII Citrate VIII
血小板黏附试验
一定量 的血液
一定时间之后，一定量的血 小板粘附在容器内表面
0.7ml，粘附15min
利用粘附前后的 血小板之差，计
算粘附率
• 用硅化试管采集1：9枸橼酸钠抗凝血7.2ml 用硅化移液管吸取0.8ml混匀的抗凝血至小粘附瓶内 将粘附瓶内的抗凝血用血球计数仪计数粘附前血小板数目
将粘附瓶塞入粘附仪器内的橡皮塞，并做平衡 打开粘附仪电源，按START键,仪器进入旋转粘附 测试完毕，取出粘附瓶,再同前计数粘附后的血小板数目
A
P
T
T
Ⅻa
Ⅲ
Ⅶa
Ⅺa
Ca2+
Ⅸa Ⅷ,PF3 ,Ca2+
Ⅹa
P
Ⅴ,PF3 ,Ca2+
T
凝血酶原 (Ⅱ)
凝血酶 (Ⅱa)
纤维蛋白原 (Ⅰ)
纤维蛋白 (Ⅰa)
血浆凝血酶原时间
（Prothrombin time, PT） 【原理】
组织因子(兔脑、胎盘、肺组织浸液) Ca2+ 血浆
[参考值] QUIK法：11-13s
匹林、潘生丁、肝素、双香豆素等 • ⑸所用器具均必须硅化处理 • ⑹PRP调至血小板数目为220×109/L，PPP调至血小板数
目为20×109/L以下
参考范围
• ADP--------62.7±16.1 • Adr--------67.8±17.8 • 胶原--------71.7±19.3 • 瑞斯托酶素-----87.5±11.4