GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒产品说明书
GENMED 真菌 酵母细胞内氧化应激活性氧初级荧光测定试剂盒 产品说明书
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS10016.8 v.A GENMED真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧初级荧光测定试剂盒产品说明书(中文版)主要用途GENMED真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐,在细胞氧化条件下,产生荧光,来定量检测细胞内活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种实验用真菌/酵母菌株细胞内氧化应激活性氧的分析。
可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老和代谢等的研究。
产品严格无菌,即到即用,操作简易,活体检测,性能稳定,荧光清晰。
技术背景真菌/酵母细胞是一种低等单细胞真核生物,具有细胞生长快,易于培养,遗传操作简单明了等原核生物的特点。
作为模式生物,它具有比较完备的基因表达调控机制和表达产物的加工修饰能力,在分子遗传学方面认识最早,最先作为外源基因表达的细胞宿主。
超氧自由基阴离子(superoxide radical;O2-)、过氧化氢(hydrogen peroxide;H2O2)、羟自由基(hydroxyl radical)、单线态氧气(singlet oxygen)等细胞内活性氧族(Reactive Oxygen Species;ROS)的产生和增多,将导致细胞衰老或凋亡。
2',7'-二氯荧光乙酰乙酸盐(2',7'-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)一种完全自由通过细胞膜的染色剂。
一旦被过氧化氢氧化,便产生荧光。
据此测定细胞内活性氧族的浓度。
产品内容GENMED清理液(Reagent A)毫升GENMED染色液(Reagent B)微升GENMED稀释液(Reagent C)毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED染色液(Reagent B)在-20℃冰箱里,严格避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保证6月用户自备1.5毫升离心管:用于真菌/酵母染色的容器载玻片:用于染色观察微型台式离心机:用于沉淀真菌/酵母细胞培养箱或恒温水槽:用于染色孵育比色皿:用于荧光定量分析(共聚焦)荧光显微镜:用于细胞荧光分析细胞流式仪:用于细胞荧光分析荧光分光光度仪:用于细胞荧光定量分析实验步骤实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液(Reagent B)置入冰槽里融化。
线粒体复合体Ⅱ活性检测试剂盒说明书
线粒体复合体Ⅱ活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号:BC3230规格:25T/24S 、50T/48S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
25T 溶液的配制:1、 试剂二:临用前加入0.1mL 丙酮,丙酮易挥发,使用完毕后注意封口,-20℃可保存2个月;2、 试剂二工作液:临用前根据样本量将试剂二:丙酮=10μL :1mL (约20T )混合备用,现用现配;3、 试剂三:临用前加入1mL 丙酮,充分溶解,用不完的试剂-20℃分装可保存4周,注意封口;4、 工作液的配制:临用前根据样本量将丙酮:试剂二工作液:试剂三=0.25mL :0.5mL :0.25mL (1mL ,约10T )混合备用,现用现配。
50T 溶液的配制:1、 试剂二:临用前加入0.1mL 丙酮,丙酮易挥发,使用完毕后注意封口,-20℃可保存2个月;2、 试剂二工作液:临用前根据样本量将试剂二:丙酮=10μL :1mL (约20T )混合备用,现用现配;3、 试剂三:临用前取1支加入1mL 丙酮,充分溶解,用不完的试剂-20℃分装可保存4周,注意封口;4、 工作液的配制:临用前根据样本量将丙酮:试剂二工作液:试剂三=0.25mL :0.5mL :0.25mL (1mL ,约10T )混合备用,现用现配。
产品说明:线粒体呼吸链复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶Q 还原酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,催化琥珀酸氧化生成延胡索酸,同时辅基FAD 还原为FADH 2,后者进一步还原氧化型辅酶Q 生成还原型辅酶Q ,是呼吸电子传递链的支路。
复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q 可进一步还原2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在605nm 有特征吸收峰,通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。
Coenzyme Q Reduced Coenzyme QDichlorophenolindophenol (605nm) + Reduced Coenzyme Q Reduced Dichlorophenolindophenol试剂名称/规格 25T 50T 保存条件 提取液一 液体45 mL×1瓶 液体80 mL×1瓶 2-8℃保存 提取液二 液体6 mL×1瓶 液体12 mL×1瓶 -20℃保存 试剂一 液体20 mL×1瓶 液体40 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂二 粉剂×1支 粉剂×1支 -20℃保存 试剂三 粉剂×1支 粉剂×2支 2-8℃保存 试剂四 液体3 mL×1瓶 液体6 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂五液体1.5 mL×1支液体3 mL×1瓶2-8℃保存Beijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 400-968-6088 Electron Transport C hain Complex Ⅱ注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
GENMED 髓性过氧化酶活性染色试剂盒产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS80035.1.2 v.A GENMED髓性过氧化酶活性染色试剂盒产品说明书(中文版)主要用途GENMED髓性过氧化酶活性染色试剂是一种旨在使用对苯二胺作为指示剂,分析血液和骨髓细胞样本中过氧化酶表达,所呈现棕黑色沉淀现象的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心改良、成功实验证明的。
主要适用于血液和骨髓细胞的酶活性检测。
尤其可用于血液学研究和白细胞病理分型鉴定。
产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,灵敏牢固,显色清晰。
技术背景人体髓性过氧化酶(myeloperoxidase;MPO),又称粒细胞过氧化酶(leukocyte peroxidase),主要存在于人体中性颗粒细胞(neutrophil granulocyte)中嗜天青颗粒|(azurophilic granule)里和单核细胞(monocyte)的溶酶体里。
在白血病中,急性淋巴细胞性白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia;ALL)的标志之一是髓性过氧化酶活性阴性,以此与急性骨髓性白血病(Acute Myelogenous Leukemia;AML)区别,尤其M3型的髓性过氧化酶活性100%阳性。
髓性过氧化酶活性染色方法包括联苯胺(benzidine)、二氨基联苯胺(diaminobenzidine)以及对苯二胺(p-phenylenediamine)等作为指示剂,但前二者为致癌剂。
对苯二胺与邻苯二酚,在髓性过氧化酶的催化下,发生氧化偶联反应,而产生不溶性棕黑色共聚物,用于检测髓性过氧化酶的活性。
其对苯二胺染色反应原理是:髓性过氧化酶p-phenylenediamine + pyrocatechol +H2O2→棕黑色不溶性产物产品内容GENMED清理液(Reagent A)毫升GENMED固着液(Reagent B)毫升GENMED染色液(Reagent C)毫升GENMED反应液(Reagent D)微升产品说明书1份保存方式保存GENMED染色液(Reagent C)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保证6月用户自备苏木素复染试剂盒(GMS80067):用于常规染色后复染1.5毫升离心管:用于配制染色工作液的容器小型染色缸:用于染色操作光学显微镜:用于细胞染色后观察分析实验步骤实验开始前,将试剂盒里的GENMED染色液(Reagent C)从-20℃的冰箱里取出,置入冰槽里等待溶化,并避光。
线粒体呼吸链复合体Ⅳ 细胞色素 C 氧化酶活性检测试剂盒说明书
线粒体呼吸链复合体Ⅳ/细胞色素C 氧化酶活性检测试剂盒说明书微量法注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC0945规格:100T/96S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格 保存条件 提取液液体75 mL×2瓶 2-8℃保存 试剂一液体33mL×1瓶 2-8℃保存 试剂二粉剂×2瓶 -20℃保存 试剂三粉剂×2支 2-8℃保存溶液的配制:1、 试剂二:试剂放于试剂瓶内玻璃瓶中。
临用前取1支加入13.5mL 试剂一溶解,用不完的试剂-20℃分装保存2周,避免反复冻融;2、 试剂三:试剂置于试剂瓶内EP 管中;临用前取1支加入2mL 试剂一溶解,用不完的试剂-20℃保存2周,避免反复冻融;3、 工作液的配制:临用前取0.5mL 试剂三加入到溶解好的4.5mL 试剂二中混合备用(约25T ),或者按比例现用现配。
产品说明:线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C 氧化酶,也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分,负责催化还原型细胞色素C 的氧化,并最终把电子传递给氧生成水。
还原型细胞色素C 在550nm 有特征光吸收,线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C 生成氧化型细胞色素C ,因此550nm 光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。
Reduced Cytochrome C (550nm ) Oxidized Cytochrome C注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1. 称取约0.1g 组织或收集500万细胞,加入1.0 mL 提取液,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂盒产品说明书范文(中文版)
GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂盒产品说明书范文(中文版)GMS10015v.A主要用途GENMED线粒体功能詹纳斯绿B染色试剂是一种旨在通过一种毒性较小的碱性染料特异性地使具有活性功能的线粒体呈现蓝绿色,从而判断线粒体功能的完整性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种线粒体(动物、人体、植物、昆虫等)制备物的功能检测。
产品严格无菌,即到即用,活体检测,操作简捷,性能稳定。
技术背景线粒体是细胞中重要的细胞器,其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。
线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中,如动物的心肌、肝、肾等器官和组织的细胞中。
大量制备线粒体就是从这些器官组织中提取,或从组织培养细胞中提取。
在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。
詹纳斯绿B(JanugreenB),是一种毒性较小的碱性染料。
它可以对活细胞进行直接染色,在细胞质内可以看到被染成蓝绿色的线状或颗粒小体的线粒体。
线粒体所以能显示出蓝绿色,是由于线粒体中具有细胞色素氧化酶系统,它是染料始终处于氧化状态呈蓝绿色,而在周围的细胞质中的染料被还原呈无色。
产品内容毫升毫升毫升份保存方式保存在-20℃冰箱里;GENMED染色液(ReagentB),避免光照;有效保证6月用户自备毫升离心管:用于线粒体染色的容器光学显微镜:用于线粒体染色观察分析实验步骤实验开始前,将℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液(ReagentB)置于冰槽里融化,并放在暗室里。
然后进行下列操作。
一、纯化线粒体染色1.从纯化的线粒体样品中移出至微升(含细胞中提取的线粒体)到新的预冷的毫升离心管,置于冰槽里(注意:线粒体须均匀分布,没有聚集成团)2.加入等量微升的GENMED染色液(ReagentB),轻柔混匀3.放进暗室里,在室温下孵育1分钟4.即刻移取微升到载玻片上,放上盖玻片5.在光学显微镜油镜下进行观察:功能完整的线粒体呈现蓝绿色圆形或椭圆形颗粒(注意:可见蓝绿色渐渐变淡现象)6.篮绿色强度显著减弱或呈现无色,表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失二、活体细胞染色1.将待测细胞(某细胞)移入到1.5毫升离心管2.放进微型台式离心机离心1分钟,速度为500g(或2000RPM;例如eppendorf5415)3.小心抽去上清液4.加入微升GENMED清理液(ReagentC)或GENMED保存液(ReagentA)5.加入微升GENMED染色液(ReagentB),充分混匀6.放进暗室里,在冰槽里孵育分钟7.即刻移取微升到载玻片上,放上盖玻片8.在光学显微镜油镜下进行观察:功能完整的线粒体呈现蓝绿色线状或颗粒小体9.篮绿色强度显著减弱或呈现无色,表明线粒体细胞色素氧化酶系统功能不全或功能丧失注意事项1.本产品为20次(活体细胞)或400次(纯化线粒体)操作2.所有操作均须无菌状态下进行3.线粒体样品操作须在低温下进行,且操作快速4.操作时,须戴手套5.建议染色完成后,即刻进行显微镜观察分析6.孵育时,须避免光照7.本公司提供系列线粒体试剂产品质量标准1.本产品经鉴定性能长期稳定2.本产品经鉴定显色清晰使用承诺友情提醒IFITDOESN’TWORK,RECHECKYOURE某PERIMENTTOSEEWHATYOUDIDWRONG。
细胞色素P450酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书(
细胞色素P450酶系总活性荧光定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途细胞色素P450酶系(CYP-ECOD)总活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过乙氧基香豆素脱乙基酶反应系统中乙氧基香豆素转化为羟基香豆素后荧光峰值的变化,即采用荧光法来测定样品中酶系活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种细胞或组织裂解萃取液样品(动物、人体)或纯化微粒体样品细胞色素P450酶系的总活性检测。
产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。
技术背景细胞色素P450酶是肝细胞微粒体复合功能单加氧化酶系统的总称。
其分成五十多个亚酶:CYP1至CYP51。
作用在于体内外源化合物(xenobiotics),包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢,即单加氧化作用(monooxygenation)和羟化作用(hydroxylation)。
乙氧基香豆素脱乙基酶(7-ethoxycoumarin O-deethylase;ECOD)的活性是细胞色素P450酶系的诊断标记,其基于ECOD广泛性催化细胞色素P450亚酶的活性。
乙氧基香豆素(7-ethoxycoumarin)在乙氧基香豆素脱乙基酶的催化下,转化为羟基香豆素(7-hydroxycoumarin)后荧光峰值的变化(激发波长368nm,散发波长456nm),来定量测定细胞色素P450酶系的活性。
乙氧基香豆素脱乙基酶反应系统为:ECOD7-ethoxycoumarin + NADPH→7-hydroxycoumarin+CH3CHO +NADP+产品内容缓冲液(Reagent A)5毫升反应液(Reagent B)500微升底物液(Reagent C)125微升终止液(Reagent D)2毫升标准液(Reagent E)100微升产品说明书1份保存方式保存在-20℃冰箱里,反应液(Reagent B)、底物液(Reagent C)和标准液(Reagent E)避免光照,终止液(Reagent D)具有腐蚀性,注意操作安全;有效保证6月用户自备1.5毫升离心管:用于标准样品配制和反应的容器培养箱:用于孵育反应200微升1厘米光径比色皿或黑色96孔板:用于荧光分析的容器荧光分光光度仪过荧光酶标仪:用于荧光分析实验步骤实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。
植物细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒产品说明书中文版
植物细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒产品说明书(中文版)主要用途植物细胞色素C氧化酶活性测定试剂是一种旨在通过细胞色素C氧化酶反应系统中还原性细胞色素C氧化后吸光峰值的降低,即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种植物组织,包括种子(seed)、叶片(leaf)、根(root)等裂解悬液中细胞色素C氧化酶的活性检测。
产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,检测敏感。
技术背景细胞色素C氧化酶(Cytochrome c oxidase)存在于真核生物的细胞线粒体上(包括植物细胞),主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量。
基于底物还原型细胞色素C(reduced cytochrome c),受到细胞色素C氧化酶的催化,转化为氧化型细胞色素C(oxidized cytochrome c),在分光光度仪下,出现吸光值的变化(550nm 波长),由此定量测定细胞色素C氧化酶的活性。
细胞色素C氧化酶反应系统为:产品内容清理液(Reagent A)毫升裂解液(Reagent B)毫升缓冲液(Reagent C)毫升反应液(Reagent D)毫升稳定液(Reagent E)微升稀释液(Reagent F)微升产品说明书1份保存方式保存清理液(Reagent A)和缓冲液(Reagent C)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里;反应液(Reagent D)避免光照;有效保证6月用户自备15毫升锥形离心管:用于样品制备的容器1.5毫升离心管:用于样品制备和保存的容器DOUNCE匀浆器:用于组织匀化微型台式离心机:用于样品制备培养箱:用于反应孵育比色皿:用于比色分析的容器分光光度仪:用于比色分析实验步骤一、样品准备1.准备好新鲜的植物组织(叶片、谷粒、种子等),并秤重以确定1克组织重量2.(选择步骤)放进预冷的15毫升锥形离心管3.(选择步骤)加入xx毫升清理液(Reagent A)清洗1次4.即刻用刀片切碎组织5.放进一个预冷的15毫升锥形离心管6.加入预冷的xx毫升裂解液(Reagent B)7.涡旋震荡5秒,充分混匀8.即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器,在冰槽里用研磨棒匀化组织(约80下)9.将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管,放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为5000g(或7500RPM,例如eppendorf 5415)10.小心移出上清液(注意:不要触碰沉淀物)到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管11.(选择步骤)如果上清液含有肉眼可见的残渣,重复离心5分钟一次,速度为5000g(或7500RPM,例如eppendorf 5415)12.即刻移入到1.5毫升离心管13.移取10微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-GMS30030.1)14.放进-70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用二、测读准备1.准备好上述制备好的样品,置于冰槽里融化2.设定好分光光度仪:温度25℃,波长550nm,间隔10秒,测读7次(共60秒),并置零或设置0秒和60秒各测读1次3.将-20℃冰箱里的试剂盒中的反应液(Reagent D)置入冰槽里融化,然后移出100微升到新的1.5毫升离心管,加入xx微升稳定液(Reagent E),轻柔混匀后,室温下暗室里静置至少15分钟(可见颜色变化),置于冰槽里,标记为反应工作液(注意:参见注意事项5),放在暗室里三、背景对照测定1.移取xx微升缓冲液(Reagent C)到新的1毫升比色皿2.加入xx微升稀释液(Reagent F)3.上下倾倒数次,混匀4.室温下孵育2分钟5.放进分光光度仪,置零6.取出比色皿,加入xx微升含有反应液(Reagent D)和稳定液(Reagent E)的反应工作液7.上下倾倒数次,混匀8.即刻放进分光光度仪检测,此为背景空对照(0秒读数-60秒读数)四、样品测定1.移取xx微升缓冲液(Reagent C)到新的比色皿2.加入100微升待测样品(注意:建议总量50微克总蛋白,且样品需澄清)3.上下倾倒数次,混匀4.室温下孵育2分钟5.放进分光光度仪,置零6.取出比色皿,加入xx微升含有反应液(Reagent D)和稳定液(Reagent E)的反应工作液7.即刻上下倾倒数次,混匀(限定在3秒之内)8.即刻放进分光光度仪检测,此为样品读数(0秒读数-60秒读数)9.计算样品活性注意事项1.本产品为20次操作,包括背景对照2.操作时,须戴手套3.样品中忌用DTT和巯基乙醇等处理4.建议测定组织细胞裂解悬液的蛋白浓度,便于计算活性单位之需;建议使用-Bradford蛋白质浓度定量检测试剂盒(GMS30030.1)5.每增加1个样品,增加反应工作液为:反应液(Reagent D)50微升+稳定液(Reagent E)3微升,以此类推。
线粒体染液-詹姆斯绿B Janus green B的使用及其原理
Cas 编号: 2869-83-2 EINECS 编号: 220-695-6 MDL 编号: MFCD00011758 Beilstein 编号:分子式: C30H31ClN6 分子量: 511.06中文别名:詹姆斯绿B,健那绿,健那绿B,双氮嗪绿,真那氏绿,詹姆斯绿,烟鲁绿,3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)苯基]偶氮]-5-苯基吩嗪翁氯化物3-Diethylamino-7-(4-dimethylaminophenylazo)-5-phenylphenazinium chloride小鼠肝细胞线粒体的Janus green B染色及观察1. 实验目的:学习超活染色的原理及方法,用詹纳斯绿B给小鼠的肝细胞线粒体染色。
2. 实验用品:(1)仪器及器材:显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、双凹载玻片(2)实验药品:蒸馏水、Ringer液、詹纳斯绿B染液(3)实验材料:小鼠3. 实验原理:(1)活体染色又称超活染色,是指对生命有机体的细胞或组织能着色又无毒害的一种染色方法。
这种染色方法常用的是化学染料。
目的:显示生活中细胞的某种结构,不影响细胞的生命活动或产生任何的物理、化学变化以致细胞的死亡。
应用:研究生活状态下细胞的形态结构和生理病理状态。
(2)通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。
体外活体染色又称超活染色,它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块,以染料溶液浸染,染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分,主要是靠染料的“电化学”特性。
碱性染料的胶粒表面带阳离子,酸性染料的胶粒表面带有阴离子,而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子,这样,它们彼此之间就发生了吸引作用。
但并非任何染料均可用于活体染色,理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料,且使用时需要配成稀淡的溶液。
一般说来,最为适用的是碱性染料,这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性,易于被细胞吸收。
线粒体 裂解液
技术背景
线粒体是细胞中重要的细胞器,其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体中含有丰富 的细胞色素氧化酶系统、细胞凋亡相关蛋白和独立的核外 DNA。通过线粒体溶解,可以进行相关蛋白的独 立分析。
产品内容
GENMED 裂解液(Reagent A) 产品说明书
毫升 1份
保存方式
保存在 4℃冰箱里,有效保证 6 月
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A
GMS12055 v.A
GENMED 裂解液 VI:线粒体裂解液产品说明书(中文版)
主要用途
GENMED 裂解液 VI:线粒体裂解液是一种旨在通过非离子性化学裂解处理,使线粒体膜结构破坏而获得 线粒体内的活性蛋白酶系统的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。 其适用于各种线粒体(动物、人体、植物、昆虫等)的内容物预制备。可以被用于细胞凋亡、信号传递、 古生物、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。
1
8. 转移到 1.5 毫升离心管
9. 放进微型台式离心机离心 2 分钟,速度为 16000g(或 13000RPM,例如 eppendorf 5415)
10.小心移取上清液到新的
毫升离心管――此为所有可溶性线粒体蛋白系统
11.若暂时不予后续处理,保存在-20℃冰箱里
12.继续进行下列操作:
操作一、可溶性线粒体蛋白电泳
2. (选择步骤)如果线粒体样品不是颗粒状态,而是液体状态且容积过大,置入 4℃超速离心机离心 20
分钟,离心速度为 10000g
3. (选择步骤)小心抽去上清液
4. 加入
微升 GENMED 裂解液(Reagent A)到线粒体颗粒样品中
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途线粒体呼吸链复合物I(NADH-辅酶Q还原酶)活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂,通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后峰值的降低,即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适合于各种纯化线粒体样品(动物、人体、酵母)以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-辅酶Q还原酶的特异性活性检测。
其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。
产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,检测敏感。
技术背景线粒体呼吸链复合物I,通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶(reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase;NADH-CoQ reductase),又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase;NADH dehydrogenase),是线粒体电子传递链中最大的结构成分:含有30至40多个多肽结构。
其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH-辅酶Q还原酶(NADH:Q Reductase)。
复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体(泛醌;ubiquinone)的能量转移反应,为整个呼吸链反应系统的第一步。
基于辅酶Q底物,在鱼藤酮存在与否的情况下,通过NADH-辅酶Q还原酶的催化,转化成还原型泛醌(CoQH2),同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),在分光光度仪下产生吸收峰值的变化(340nm 波长),由此定量测定NADH -辅酶Q还原酶的特异活性。
MPT比色法检测试剂盒说明书
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
编号 GMS10095.3 GMS10095.3A GMS10095.3B GMS10095.3C GMS10095.1 GMS10095.2 GMS10095.2 GMS12226
规格 10/50 次 10/50 次
10 次 50 次 50 次 10 次 100 次 20 次 20 次 10 次
3
GMS10014.1 GMS10014.2 GMS10014.3 GMS10014.4 GMS10014.5 GMS10014.6
GMS10015 GMS10016.1 GMS10016.2 GMS10016.3
吸光值比值降低,表明膜通道孔活性(MPTP)增强
9. 构建膜通道孔诱导开放曲线:纵座标(Y)为吸光值比值(A540/Initial A540),横座标(X)为时间(秒)
注意事项
1. 本产品为 20 次操作 2. 操作时,须戴手套 3. 使用时,避免污染母液,尤其是 GENMED 缓冲液(Reagent A) 4. 线粒体样品中忌用磷酸盐、EDTA、钙镁离子等处理 5. 建议使用未经诱导或抑制处理的样品作为阴性对照 6. 建议孵育完成后,即刻进行检测分析 7. 可以使用 540nm 波长的滤波器或者 440nm 波长的滤波器 8. 可以使用分光光度仪检测,0.2 毫升比色皿替代酶标板 9. 540nm 波长的 0 分钟读数通常 0.8 为理想状态;而 540nm 波长的 0 分钟读数通常 0.2 为理想状态 10.样本测定 1 分钟或其它检测时间读数低于 0 分钟读数表明膜通道孔开放 11.如果膜通道孔为瞬时开放(transient),则吸光读数缓慢降低 12.GENMED 诱导液(Reagent B)含有氯化钙,用户可以使用其它诱导剂替代,例如磷酸盐,二氧化钾
GENMED心肌黄酶活性染色试剂盒 产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS80039.1 v.A GENMED细胞NADH心肌黄酶活性染色试剂盒产品说明书(中文版)主要用途GENMED细胞NADH心肌黄酶活性染色试剂是一种旨在使用人工电子受体染料二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝(MTT),受到NADH心肌黄酶催化还原,产生不溶性蓝黑色色素沉淀,来细胞中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心改良传统方法、成功实验证明的。
主要适用于各种动物细胞的心肌黄酶活性定性检测。
产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,显色清晰。
技术背景心肌黄酶(Diaphorase),又称为硫辛酰胺脱氢酶(lipoamide dehydrogenase),黄递酶,二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase),二氢硫辛酸脱氢酶(dihydrolipoyl dehydrogenase)等。
因早期从猪心肌中提取,产品又呈现荧光的黄绿色蛋白质,故被称为心肌黄酶。
分子量102000至110000。
NADH心肌黄酶直接和黄素蛋白(Flavoprotein)反应,释放出氢原子,将氧化型黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)还原为还原型黄素腺嘌呤二核苷酸(FADH2),传递氢原子给氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD),而形成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH),作为电子供体,还原人工电子受体,例如染料四氮唑兰(tetrazolium)化合物,包括硝基蓝四氮唑(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)和二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide;MTT),产生不溶性甲暨色素,由此用于鉴别内脏神经细胞等各种动物细胞。
产品内容GENMED清理液(Reagent A)毫升GENMED固着液(Reagent B)毫升GENMED染色液(Reagent C)毫升GENMED反应液(Reagent D)毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED染色液(Reagent C)和GENMED反应液(Reagent D)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保证6月用户自备2毫升离心管:用于配制染色工作液15毫升锥形离心管:用于配制染色工作液培养箱:用于反应孵育光学显微镜:用于切片染色后观察分析实验步骤操作一、25cm2细胞培养瓶染色染色开始前,将 ℃冰箱里的试剂置于室温下融化;移取 毫升GENMED染色液(Reagent C)到新的 毫升离心管,加入 微升GENMED反应液(Reagent D),混匀后,标记为GENMED染色工作液,置于冰槽里,避免光照。
纯化线粒体呼吸控制率RCR定量检测试剂盒说明书
植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒
真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒
活体细胞线粒体跟踪试剂盒 活体细胞线粒体长期跟踪试剂盒
全血线粒体 DNA 萃取试剂盒 纯化线粒体 DNA 萃取试剂盒 细胞/组织线粒体 DNA 萃取试剂盒 细胞/组织基因组/线粒体 DNA 同步萃取试剂盒 动物血小板线粒体 DNA 萃取试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体 DNA 萃取试剂盒 植物线粒体 DNA 萃取试剂盒 动物硬组织线粒体 DNA 萃取试剂盒 非突触体脑组织线粒体分离试剂盒 植物线粒体粗提分离试剂盒 植物活性线粒体分离试剂盒 植物高质纯化线粒体分离试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体粗提分离试剂盒 真菌/酵母细胞活性线粒体分离试剂盒 真菌/酵母细胞高质纯化线粒体分离试剂盒 细胞 ATP 生物发光法定量检测试剂盒 纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒 动物血小板线粒体粗提分离试剂盒 动物血小板活性线粒体分离试剂盒 动物血小板高质纯化线粒体分离试剂盒 动物全血线粒体粗提分离试剂盒 动物全血活性线粒体分离试剂盒 动物全血高质纯化线粒体分离试剂盒 超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒 线粒体超氧化物歧化酶(Mn/Fe SOD)分离试剂盒 超氧化物歧化酶(SOD)标准曲线测定试剂盒 纯化线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 细胞/组织线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 植物线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 全血线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒
技术背景
线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。线粒体结构完 整,功能正常,底物充分,电子传递形成的质子梯度不断被消耗,电子得以顺畅传递,氧气快速消耗,其 耗氧率大,为III态呼吸。ADP耗竭,质子梯度不能消耗,阻碍电子传递,氧气消耗减少,为IV态呼吸。 呼 吸控制率(respiratory control ratio或respiratory control index;RCR),又称呼吸调节比,是指III态(加入ADP) 的呼吸速率与IV态(ADP耗竭)的呼吸速率之比。正常线粒体的RCR为3至10:RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤,呼吸障碍;RCR增高意味着细胞活动旺盛,代谢加快。
线粒体复合体Ⅰ活性检测试剂盒使用说明
线粒体复合体Ⅰ活性检测试剂盒使用说明微量法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号:BC0515规格:100管/96样产品内容:试剂一:液体100mL×1瓶,-20℃保存;试剂二:液体20mL×1瓶,-20℃保存;试剂三:液体1.5mL×1瓶,-20℃保存;试剂四:液体25mL×1瓶,-20℃保存;试剂五:液体1mL×1支,-20℃保存;试剂六:粉剂×1支,-20℃保存,用时加入2mL蒸馏水,现配现用。
工作液的配制:临用前将试剂五转移到试剂四中混合溶解;现配现用;产品简介:复合体Ⅰ(EC 1.6.5.3)又称NADH-CoQ还原酶或NADH脱氢酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体内膜中最大的蛋白复合物。
该酶催化一对电子从还原生成O2.-,是呼吸电子传递链上产生O2.-的主要部位。
测NADH传递给CoQ,同时可使O2定该酶活性,不仅可以反映呼吸电子传递链(ETC)状态,而且可以反映活性氧(ROS)生成状态。
复合体Ⅰ能够催化NADH脱氢生成NAD+,在340nm下测定NADH的氧化速率计算出该酶活性的大小。
试验中所需的仪器和试剂:紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、样本的前处理:组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:(1)准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
(2)将组织匀浆600g,4℃离心5min。
(3)弃沉淀,将上清液转移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。
(4)上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄露的复合体Ⅰ(此步可选做)。
(5)步骤(4)中的沉淀即为线粒体,加入200uL试剂二和2uL试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3秒,间歇10秒,重复30次),用于复合体Ⅰ酶活性测定。
GENMED活体细胞线粒体损伤 氧化荧光测定试剂盒 产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS10017.1 v.A GENMED活体细胞线粒体损伤/氧化荧光测定试剂盒产品说明书(中文版)主要用途GENMED活体细胞线粒体损伤/氧化荧光测定试剂是一种旨在通过特异性染色剂分析线粒体膜心磷脂的变化来定性或定量测定线粒体内含质量以及自由基、氧化物等对细胞线粒体的毒性与损伤作用的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。
产品严格无菌,即到即用,操作简易,活体检测,性能稳定。
技术背景心磷脂(Cardiolipin)是线粒体膜上的主要成分之一。
它对细胞氧化特别敏感。
线粒体脂类分解,致使心磷脂显著减少,最终造成线粒体的严重损害。
Nonyl-Acrydine Orange是一种可自由通过细胞膜的染色剂,特异性地染色线粒体上的心磷脂,并发出荧光。
一旦线粒体膜质量减少或受到损害以及被氧化,其荧光显著减弱。
产品内容GENMED清理液(Reagent A)毫升GENMED染色液(Reagent B)微升GENMED稀释液(Reagent C)毫升GENMED保存液(Reagent D) 毫升产品说明书 1份保存方式保存GENMED染色液(Reagent B)在-20℃冰箱里,避免光照,其余的保存在4℃冰箱里,有效保证12月用户自备胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(GMS12024):用于细胞脱离完全细胞培养液(GMS12052):用于细胞操作所需的培养基毫升锥形离心管:用于细胞操作的容器毫升离心管:用于细胞染色的容器血细胞计数仪:用于细胞计数台式离心机:用于沉淀细胞细胞流式仪:用于细胞荧光分析比色杯:用于细胞荧光分析的容器荧光显微镜:用于观察荧光细胞荧光分光光度仪或酶标仪:用于细胞荧光定量分析实验步骤一、 脱离或悬浮细胞分析实验开始前,将 ℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液(Reagent B)置入冰槽里融化,GENMED稀释液(Reagent C)放进 ℃恒温水槽里预热。
动物细胞组织细胞色素C释放凋亡检测试剂盒产品说明书(中
动物细胞/组织细胞色素C释放凋亡检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途动物细胞/组织细胞色素C释放凋亡检测试剂是一种旨在从动物细胞或活体组织中分离出线粒体和细胞浆组分,从而检测细胞色素C的转运,即由线粒体释放到细胞浆,来探测细胞凋亡的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的线粒体和细胞浆组分的制备。
可以被用于后续蛋白质西方杂交等实验。
产品不含污染性蛋白水解酶和核酶,即到即用,性能稳定,分离到位,质量保证。
技术背景细胞色素C(CYTOCHROME C)在细胞凋亡中扮演着重要作用。
细胞色素C位于线粒体内外膜之间。
当细胞凋亡时,它从线粒体内释放到细胞浆里,引起一系列的信号通道的下游反应。
产品内容清理液(Reagent A)毫升裂解液(Reagent B)毫升净化液(Reagent C)毫升强化液(Reagent D)毫升保存液(Reagent E)毫升活性液(Reagent F)微升溶解液(Reagent G)毫升上样液(Reagent H)微升产品说明书1份保存方式保存净化液(Reagent C)和活性液(Reagent F)在-20℃冰箱里,避免反复冻融;其余的保存在4℃冰箱里;有效保证6月用户自备HANK平衡盐缓冲溶液(GMS12028)或PBS缓冲溶液(GMS12033):用于清理细胞硬组织处理液(Reagent I):用于促进硬组织表面溶解胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(GMS12024):用于细胞脱离完全细胞培养液(GMS12052):用于细胞培养所需的培养基15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器50毫升锥形离心管:用于样品操作的容器1.5毫升离心管:用于样品操作的容器4℃(微型)台式离心机:用于样品操作DOUNCE匀浆器:用于裂解组织细胞抗细胞色素C抗体:用于蛋白质西方杂交实验步骤一、动物软组织线粒体分离(组织匀浆法)实验开始前,将试剂盒里的活性液(Reagent F)冻融,然后移出xx微升活性液(Reagent F)和xx毫升净化液(Reagent C)到xx毫升的裂解液(Reagent B)里,混匀后,放进冰槽里,标记为裂解工作液。
NADPH-细胞色素 C 还原酶活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4372
NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性检测试剂盒说明书注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
可见分光光度法货号:UPLC-MS-4372规格:50T/48S产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一粉剂×2瓶4℃保存试剂二液体80mL×1瓶4℃保存试剂三粉剂×2瓶-20℃保存试剂四粉剂×2支4℃保存溶液的配制:1、试剂一:临用前取一瓶加入50mL蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂4℃保存可保存4周;2、试剂三:临用前取一瓶加入1.3mL蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂-20℃分装保存2周,避免反复冻融。
3、试剂四:临用前取一支加入275μL蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂-20℃分装保存4周,避免反复冻融。
产品说明:细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。
NCR作为P450酶系的重要一员,催化氧化型P450还原再生。
NCR催化NADPH还原氧化型细胞色素C,还原型细胞色素C在550nm处有特征吸收峰;通过测定550nm 吸光度的增加速率,来计算NCR活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、恒温培养箱/水浴锅、低温离心机、超速离心机、研钵/匀浆器、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、粗酶液提取(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、除去细胞核和线粒体等:称约0.5g组织,加入4℃预冷的1mL试剂一,冰上充分研磨,10000g,4℃离心30min,取上清液,转移到超速离心管中。
2、粗制微粒体:4℃,100000g,离心60min,弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1mL试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100000g离心30min,弃上清液。
GENMED纯化线粒体溶解试剂盒产品说明书(中文版)
纯化细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 真菌/酵母细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒
植物细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 线粒体功能詹纳斯绿 B(JGB)染色试剂盒 细胞内氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒 细胞内氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒 活体组织氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒 活体组织氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒 冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒 冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒 真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒 真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒 活体细胞氧化应激活性氧(ROS)染色试剂盒 冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)染色试剂盒 活体细胞氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒 细胞内氧化应激活性氧(ROS)红色荧光测定试剂盒
4
GMS50004 GMS30034.1 GMS30034.2 GMS30034.3 GMS30034.4 GMS30034.5 GMS30034.6 GMS50005 GMS50006 GMS50007
GMS50008 GMS50009
GMS50010
GMS50083
GMS10063.1 GMS10063.2 GMS10063.3 GMS10095 GMS12198 GMS50067 GMS50068.1
名称 动物细胞/组织线粒体粗提分离试剂盒 动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒 动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒
动物硬组织线粒体粗提分离试剂盒 动物硬组织活性线粒体分离试剂盒 动物硬组织高质纯化线粒体分离试剂盒 纯化线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 活体细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 完全线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 活体组织线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒
GENMED 植物线粒体 DNA 萃取试剂盒 产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS20023.7 v.A GENMED植物线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书(中文版)主要用途GENMED植物线粒体DNA萃取试剂是一种旨在通过物理或化学破膜及离心处理方法,从植物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体细胞器,然后进一步生物酶处理以获得高质量的线粒体DNA的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
适合于各种新鲜植物组织,包括叶片(leaf)、谷粒(grain)、种子(seed)、以及培养细胞的线粒体核酸成分的分离。
用于后续的杂交、克隆、酶切、PCR 分析等。
产品即到即用,操作简易,性能稳定,无核酶污染,萃取纯度和产量皆高。
技术背景线粒体细胞器的研究是现代细胞生物学的最重要的课题之一。
线粒体成为生物衰老、古生物、细胞凋亡、能量代谢等研究的主要对象。
线粒体DNA的分离和定量以及突变分析是研究中必不可少的。
产品内容GENMED清理液(Reagent A)毫升GENMED裂解液(Reagent B)毫升GENMED净化液(Reagent C)毫升GENMED强化液(Reagent D)毫升GENMED保存液(Reagent E)毫升GENMED破膜液(Reagent F)毫升GENMED酶解液(Reagent G)微升GENMED萃取液(Reagent H)毫升GENMED浓缩液(Reagent I)毫升GENMED沉淀液(Reagent J)毫升GENMED纯化液(Reagent K)毫升GENMED缓冲液(Reagent L)毫升产品说明书 1份保存方式保存GENMED净化液(Reagent C)、GENMED酶解液(Reagent G)、GENMED萃取液(Reagent H)和GENMED浓缩液(Reagent I)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里,有效保证6月用户自备15毫升锥形离心管:用于线粒体初步制备物的存放50毫升锥形离心管:用于细胞或组织收集后离心或清洗1.5毫升离心管:用于保存线粒体4℃台式离心机:用于沉淀细胞4℃超速离心机:用于分离细胞器成分微型台式离心机:用于沉淀核酸DOUNCE匀浆器:用于裂解细胞58℃恒温水槽:用于孵育反应物涡旋震荡仪:用于混匀实验步骤一、植物组织线粒体DNA分离(物理法)实验开始前,将试剂盒里的GENMED净化液(Reagent C)冻融,然后移出 毫升GENMED净化液(Reagent C)和 毫升的GENMED裂解液(Reagent B)到15毫升锥形离心管里,混匀后,标记为GENMED裂解工作液,置入冰槽里备用。
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4
GMS10016.6 GMS10016.7 GMS10016.8 GMS10067.1 GMS10067.2 GMS10067.3 GMS10111.1 GMS10111.2 GMS10104.1 GMS10104.2
GMS10104.3
GMS10104.4
GMS10104.5
GMS10104.6
3. 移取
微升 GENMED 缓冲液(Reagent A)到新的 1 毫升比色杯
4. 加入
微升 GENMED 稀释液(Reagent C)
5. 放入分光光度仪,置零
6. 取出比色杯,加入
微升含有 GENMED 反应液(Reagent B)和 GENMED 稳定液(Reagent D)的 GENMED
11.上下倾倒数次,混匀
12.放入分光光度仪,置零
13.取出比色杯,加入
微升含有 GENMED 反应液(Reagent B)和 GENMED 稳定液(Reagent D)的 GENMED
反应工作液
14.即刻上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
15.即刻放入分光光度仪检测,此为样品读数(0 秒读数-60 秒读数),通常活性读数差值为正数
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A
GMS10014.2 v.A
GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒产品说明书(中文版)
主要用途
GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂是一种旨在通过测定纯化的可溶性完整线粒体样品 中的细胞色素 C 氧化酶的活性,即采用比色法测定受到细胞色素 C 氧化酶催化的氧化反应的权威而经典的 技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体(动物、人体、植物、 昆虫等)细胞色素 C 氧化酶的活性检测。产品严格无菌,即到即用,活体检测,操作简捷,性能稳定。
(550nm 波长),来定量测定细胞色素 C 氧化酶的活性。细胞色素 C 氧化酶反应系统为:
4 cytochromec2+ + 8H+ + O2 ⎯细⎯胞⎯色素⎯C氧⎯化⎯酶→ 4 cytochromec3+ + 2H2O + 4H+
还原型
氧化型
(高吸收峰)
(低吸收峰)
产品内容
GENMED 缓冲液(Reagent A) GENMED 反应液(Reagent B) GENMED 稀释液(Reagent C) GENMED 稳定液(Reagent D) 产品说明书
GMS10016.4
GMS10016.5
名称 动物细胞/组织线粒体粗提分离试剂盒 动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒 动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒
动物硬组织线粒体粗提分离试剂盒 动物硬组织活性线粒体分离试剂盒 动物硬组织高质纯化线粒体分离试剂盒 纯化线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 活体细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 完全线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 活体组织线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒
保存方式
毫升 毫升 毫升 微升 1份
GENMED 缓冲液(Reagent A)和 GENMED 稀释液(Reagent C)保存在 4℃冰箱里,其余的保存在-20℃ 冰箱里;GENMED 反应液(Reagent B)避免光照;有效保证 12 月
用户自备
1.5 毫升离心管:用于反应液配制的容器 石英比色杯:用于比色的容器 分光光度仪:用于比色分析
16.(选择步骤)重复实验步骤 9 至 15,测读新的样品
四、 计算样品活性:
方法一:按照操作步骤规定
样品读数
0.1ml(样品蛋白容量 )
− ×
背景读数
21.84(摩尔吸光系数
)=样品活性
•
单位
⋅
min
−1
⋅
ml-1
或
摩尔细胞色素C
⋅
min
−1
⋅
ml−1
样品读数 −
0.002mg(样品蛋白量 ) ×
技术背景
细胞色素 C 氧化酶(Cytochrome c oxidase)存在于真核生物的细胞线粒体上,主要通过氧化磷酸化为细胞 提供能量。作为线粒体外膜功能的生物标记,通过线粒体膜上的酶活性变化,来衡量线粒体外膜的完整性:
基于还原型细胞色素 C(reduced cytochrome c)转化为氧化型细胞色素 C(oxidized cytochrome c)的变化
活体组织氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒
冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒
规格 10/50 次 10/50 次
10 次 50 次 50 次 10 次 100 次 20 次 20 次 10 次 20 次 20 次 20 次 20 次 20 次 20 次 20 次 20 次 20 次 100 次 8/20 次 40/100
背景读数
21.84(摩尔吸光系数
)=样品活性
•
单位
⋅
min
−1
⋅
mg-1
或
摩尔细胞色素C
⋅
min
−1
⋅
mg
−1
方法二:未知待测样品蛋白浓度
(样品读数 − 背景读数)× 样品稀释倍数
0.1ml(样品蛋白容量)× 21.84(摩尔吸光系数
)=样品活性
•
单位
⋅
min
−1
⋅
1
或
摩尔细胞色素C
⋅
min
−1
稳定液(Reagent D)1.5 微升,以此类推。配制反应工作液时,须根据样本数量配制实际工作液容量 5. 系统操作过程中,背景测定只需 1 次 6. 分光光度计波长严格设置在 550nm,误差 10nm 将不产生信号 7. 加样后 3 秒内进行比色测定 8. 比色测定后,比色杯须清洗彻底 9. 背景空对照 0 秒读数通常 0.2 至 0.8 为理想状态 10.背景空对照的正常读数差值(0 秒-60 秒)通常为 0.001 至 0.005(正负即可) 11.样品 0 秒读数通常和背景空对照 0 秒读数一致 12.样本测定 60 秒读数低于 0 秒读数表明具有酶活性 13.样本酶活性单位通常在 0.4 至 40 毫单位 14.酶活性单位浓度定义:在 25℃室温下,pH 7.0 的情况下,每单位酶在单位时间内(每分钟)氧化 1 微
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IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
编号 GMS10014.2 GMS10014.2A GMS10014.2B GMS10014.2C GMS10014.2D GMS10014.1 GMS10014.3 GMS10014.4 GMS10014.5 GMS10014.6 GMS10059 GMS30034.1
反应工作液
7. 上下倾倒数次,混匀
8. 即刻放入分光光度仪检测,此为背景空对照(0 秒读数-60 秒读数),正常读数差值为 0.001 至 0.005
三、 样品测定
9. 移取
微升 GENMED 缓冲液(Reagent A)到新的比色杯
10.加入 100 微升待测样品(注意:建议总量 2 微克线粒体蛋白:完整线粒体而非裂解形式)
摩尔的细胞色素 C 15.建议待测样本线粒体蛋白浓度为 2 微克/100 微升;如果样本酶活性过低或过高,即 60 秒读数不变或为
零,则可以增加或降低样本量(本公司提供 GENMED 纯化线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 GMS30034.1 为后续的线粒体蛋白浓度测定的预处理试剂盒和 GENMED 纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒 GMS10059) 16.本公司提供系列线粒体试剂产品
冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒 真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒 真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒
活体细胞氧化应激活性氧(ROS)染色试剂盒 冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)染色试剂盒 活体细胞氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒 细胞内氧化应激活性氧(ROS)红色荧光测定试剂盒 冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)红色荧光测定试剂盒 纯化线粒体氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒 纯化线粒体氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒 膜电位依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧(ROS)
⋅
ml−1
2
样品活性 • 单位 ⋅ min−1 ⋅ ml-1 或 摩尔细胞色素C ⋅ min−1 ⋅ ml−1
样品蛋白浓度 • mg ⋅ ml-1
= 样品活性 • 单位 ⋅ min−1 ⋅ mg-1 或 摩尔细胞色素C ⋅ min−1 ⋅ mg−1
注意事项
1. 本产品为 20 次操作,包括背景对照 2. 操作时,须戴手套 3. 线粒体样品中忌用 DTT 和巯基乙醇等处理 4. 每增加 1 个样品,增加 GENMED 反应工作液为:GENMED 反应液(Reagent B)50 微升+GENMED
室里备用。然后进行下列操作。
一、 测读准备
1. 准备好含有细胞色素 C 氧化酶的样品(例如纯化的线粒体样品等),置于冰槽里融化 2. 设定好分光光度仪:温度 25℃,波长 550nm,时延 5 秒,间隔 10 秒,测读 6 次(共 60 秒),并置零或
设置 0 秒和 60 秒各测读 1 次
二、 背景对照测定
GMS10017.1
GMS10017.2
GMS10017.3
GMS10018
GMS10019.1
GMS10019.2 GMS10019.3 GMS10020.1 GMS10020.2 GMS20023.2 GMS20023.1 GMS20023.3 GMS20023.4 GMS20023.5 GMS20023.6 GMS20023.7 GMS20023.8 GMS10047 GMS10048.1 GMS10048.2 GMS10048.3