单胺氧化酶(MAO)检测试剂盒(醛苯腙微板法)
血清单胺氧化酶试剂盒的使用说明书
血清单胺氧化酶试剂盒的使用说明书一、产品名称血清单胺氧化酶试剂盒二、预期用途本试剂盒用于体外定量测定人血清中单胺氧化酶(MAO)的活性。
三、检验原理本试剂盒采用连续监测法测定血清中单胺氧化酶的活性。
单胺氧化酶能催化苄胺生成苄醛,同时产生过氧化氢。
在过氧化物酶的作用下,过氧化氢与 4-氨基安替比林和酚反应生成红色醌类化合物,在 505nm波长处有最大吸收峰。
通过测定单位时间内吸光度的变化率,计算出单胺氧化酶的活性。
四、试剂盒组成1、试剂 1:R1成分:缓冲液、4-氨基安替比林、酚、稳定剂等。
规格:_____ml/瓶。
2、试剂 2:R2成分:苄胺、过氧化物酶、稳定剂等。
规格:_____ml/瓶。
五、适用仪器适用于具有 505nm 波长、能进行比色分析的全自动生化分析仪。
六、储存条件及有效期1、储存条件未开封试剂盒:2 8℃避光保存。
已开封试剂盒:使用后立即盖紧瓶盖,2 8℃可稳定保存 1 个月。
2、有效期:自生产之日起 12 个月。
七、样本要求1、样本类型:血清。
2、采集方法:常规静脉采血,分离血清。
3、样本保存:血清样本在2 8℃可稳定保存3 天;如需长期保存,应置于-20℃以下,避免反复冻融。
八、检验方法1、试剂准备从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温(约 30 分钟)。
分别将试剂 1(R1)和试剂 2(R2)摇匀。
2、设定参数在全自动生化分析仪上设定相关参数,包括波长(505nm)、反应温度(37℃)、样本量、试剂 1 和试剂 2 的加样量、反应时间等。
3、加样将待测血清样本和标准品分别加入相应的反应杯中。
按照设定的参数,依次加入试剂 1 和试剂 2。
4、测定启动仪器,进行测定。
仪器会自动监测反应过程中吸光度的变化,并计算出单胺氧化酶的活性。
九、计算方法以标准品浓度和对应的吸光度变化率绘制标准曲线,根据待测样本的吸光度变化率,在标准曲线上查出对应的单胺氧化酶活性值。
十、参考范围健康成年人血清单胺氧化酶活性:_____ _____ U/L。
单胺氧化酶(MAO)测定试剂盒(谷氨酸脱氢酶法)产品技术要求北京赛诺浦0
单胺氧化酶(MAO)测定试剂盒(谷氨酸脱氢酶法)适用范围:用于体外定量测定人体血清中单胺氧化酶的活性。
1.1 试剂盒包装规格试剂1:1×20mL,试剂2:1×5mL;试剂1:2×40mL,试剂2:2×10mL;试剂1:2×60mL,试剂2:2×15mL;试剂1:3×40mL,试剂2:3×10mL;试剂1:4×60mL,试剂2:4×15mL;试剂1:2×400mL,试剂2:1×200mL;试剂1:1×8L,试剂2:1×2L。
校准品(选配,冻干品):1×0.5mL;1×1mL。
质控品(选配,冻干品):1×0.5mL;1×1mL。
1.2 试剂盒主要组成成分注:校准品和质控品存在批特异性,具体活性见对应批次产品标签。
2.1 外观试剂1:无色至微黄色澄清液体;试剂2:无色至微黄色澄清液体。
校准品:类白色冻干品。
质控品:类白色冻干品。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 试剂空白试剂空白吸光度:在37℃、340nm波长、1cm光径条件下,试剂空白吸光度应不小于0.8。
试剂空白吸光度变化率:在37℃、340nm波长、1cm光径条件下,试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)应不大于0.01。
2.4 分析灵敏度测定活性在50U/L附近的样本时,吸光度变化率(ΔA/min)应不小于0.01。
2.5 线性在(2,200) U/L范围内:线性相关系数r不小于0.990。
在(40,200) U/L范围内,线性相对偏差应不大于±10%;(2,40] U/L范围内,线性绝对偏差应不大于±4U/L。
2.6 重复性重复测试两份高低活性的样本,所得结果的变异系数(CV%)应不大于8%。
2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本,测定结果的批间相对极差应不大于10%。
MAO试剂盒说明书
单胺氧化酶(Monoamine Oxidase,MAO)试剂盒说明书微量法100T/96S注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎动物的各种器官,特别是分泌腺、脑、肝脏,在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢,含量较低,具有重要的生理功能,其活性能反映肝纤维化的程度。
此外,MAO活性异常导致细胞内单胺类神经递质运转出现紊乱,从而引发多种病症。
测定原理:MAO催化单胺类底物脱氨生成相应的醛,进一步氧化成酸;底物在360nm处有特征吸收峰,测定360nm 光吸收下降的速率,计算MAO活性。
自备实验用品及仪器:天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制:提取液一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体120mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体2mL×1管,4℃避光保存。
粗酶液提取:1. 称取约0.1g样品,加1 mL预冷的提取液一充分冰浴匀浆,1000g,4℃,离心10min,弃沉淀;把上清转移到另一预冷的离心管,10000g,4℃,离心30min,弃上清;加入1mL预冷的提取液二,震荡混匀,16000g,4℃,离心40min,弃上清;沉淀加入预冷的1mL 试剂一,震荡混匀,即粗酶液(可用于可溶性蛋白浓度测定)。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,弃沉淀;把上清转移到另一预冷的离心管,10000g,4℃,离心30min,弃上清;加入1.0 mL预冷的提取液二,震荡混匀,16000g,4℃,离心40min,弃上清;沉淀加入预冷的1.0 mL 试剂一,震荡混匀,即粗酶液(可用于可溶性蛋白浓度测定),取上清置于冰上待测。
单氨氧化酶测定试剂盒(比色法)产品技术要求haomai
单氨氧化酶测定试剂盒(比色法)适用范围:本试剂盒用于体外定量测定人血清中单氨氧化酶(MAO)含量。
1.1包装规格序号规格序号规格1 试剂1:2×20ml 。
2 试剂1:2×40ml 。
3 试剂1:2×60ml 。
4 试剂1:2×80ml 。
5 试剂1:2×400ml 。
6 试剂1:5×24ml 。
7 试剂1:5L。
1.2主要组成成分本试剂由试剂1(R1)组成试剂1(R1):缓冲剂150mmol/L苄胺20mmol/Lα-酮戊二酸10mmol/L还原型辅酶0.25mmol/L表面活性剂1%防腐剂2g/L稳定剂2g/L谷氨酸脱氢酶1KU/L2.1 外观试剂盒外观应整洁,文字符号标识清晰;R1为无色澄清液体,液体试剂不得有沉淀和絮状物。
2.2 装量试剂瓶内液体装量应不少于标示值。
2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度在340nm处测定试剂空白吸光度,应>1.0A。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.01A。
2.4 分析灵敏度浓度为10 U/L的样本,吸光度差值△A>0.003。
2.5 准确性回收试验,回收率在90%~110%范围内。
2.6 重复性用不同浓度的两个样本进行检测,各重复检测10次,其批内变异系数(CV)应不超过10%。
2.7 线性2.7.1在(2,100)U/L范围内,线性相关系数r应不低于0.990;2.7.2 在(2,10]U/L范围内绝对偏差不超过±1U/L;(10,100)U/L范围内相对偏差不超过±10%。
2.8 批间差用三个批号的试剂盒测定同一份样本,试剂盒批间相对极差应不超过10%。
2.9 稳定性试剂盒在2~8℃避光保存,可稳定14个月。
取到效期后的样品检测试剂空白吸光度、空白吸光度变化率、分析灵敏度、准确度、重复性、线性范围应分别符合2.3.1、2.3.2、2.4、2.5、2.6、2.7的要求。
大鼠单胺氧化酶(MAO)说明书活性
大鼠单胺氧化酶(MAO)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中单胺氧化酶(MAO)的活性。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠单胺氧化酶(MAO)水平。
用纯化的大鼠单胺氧化酶(MAO)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入大鼠单胺氧化酶(MAO),再与HRP标记的单胺氧化酶(MAO)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的大鼠单胺氧化酶(MAO)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠单胺氧化酶(MAO)的浓度。
试剂盒组成:样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。
加入一定量的PBS,PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
人单胺氧化酶(MAO)酶联免疫分析
人单胺氧化酶(MAO)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围:78mU/ml-5000mU/ml最低检测限:19.5mU/ml特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的人MAO,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中MAO含量。
说明1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗MAO抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗MAO抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的MAO呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate):一块(96孔)。
2.标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent)1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)。
7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)。
8.底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
单胺氧化酶测定试剂盒(谷氨酸脱氢酶法)产品技术要求haifeng
单胺氧化酶测定试剂盒(谷氨酸脱氢酶法)适用范围:适用于体外定量测定人血清中单胺氧化酶(MAO)的含量。
1.1 产品规格1.2 主要组成成分注:质控品具有批间特异性,具体值详见靶值单。
2.1 外观2.1.1 试剂盒标签标识清晰,外包装完整无破损;2.1.2 试剂:无色或淡黄色澄清液体,目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物;2.1.3 质控品:无色或浅黄色干粉,复溶后不得有任何沉淀及絮状悬浮物。
2.2 净含量净含量不低于标示值。
2.3 试剂空白2.3.1 空白吸光度测定待检试剂在主波长340nm、副波长405nm、37℃条件下:A≥0.8;2.3.2 空白吸光度变化率空白吸光度变化率△A/min≤0.004。
2.4 线性范围(7,100)U/L范围内,相关系数r≥0.990;(7,20]U/L范围内,绝对偏差不超过±2U/L;(20,100)U/L范围内,相对偏差不超过±10.0%。
2.5 分析灵敏度在产品说明书规定参数设定条件下,测定50U/L样本时,吸光度变化率△A/min≥0.020。
2.6 精密度2.6.1批内重复性CV≤10.0%。
2.6.2 批间差相对偏差R≤10.0%。
2.7 准确度与已上市产品比对:(7,100)U/L范围内,相关系数r≥0.990;(7,20]U/L 线性范围内,绝对偏差不超过±2U/L;(20,100)U/L线性范围内,相对偏差不超过±10.0%。
2.8 质控品2.8.1 赋值有效性:测定值在质控靶值范围内;2.8.2 均一性:CV≤5.0%;2.8.3 瓶间差:CV≤10.0%。
2.9 稳定性未开封试剂2℃~8℃储存,可稳定12个月。
取到效期后2个月内产品进行检测, 检测结果应满足2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7、2.8.1和2.8.2的要求。
单胺氧化酶(MAO)测定试剂盒(谷氨酸脱氢酶法)产品技术要求利德曼
单胺氧化酶(MAO)测定试剂盒(谷氨酸脱氢酶法)适用范围:本产品用于体外定量测定人体血清中单胺氧化酶(MAO)的含量。
1.1包装规格试剂(R):1×20mL;1×40mL;2×40mL;4×40mL;1×80mL;2×80mL;4×80mL。
校准品(选配):单水平1×1mL;1×3mL。
质控品(选配):单水平1×1mL;1×3mL。
1.2 主要组成成分注:校准品和质控品浓度具有批特异性,具体数值见瓶标签。
2.1外观液体单试剂:无色或淡黄色澄清液体。
校准品:无色或淡黄色澄清液体。
质控品:无色或淡黄色澄清液体。
2.2净含量液体试剂、校准品和质控品的净含量不得低于标示体积。
2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度在37℃、(340 nm±10%范围内的)波长、1cm光径条件下,用去离子水或(生理盐水)作为样品加入试剂测试时,试剂空白吸光度应>1.0 。
2.3.2空白吸光度变化率在37℃、(340nm±10%范围内的)波长、1cm光径条件下,用去离子水或(生理盐水)作为样品加入试剂测试时,试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)应<0.004 。
2.4分析灵敏度浓度为50U/L时,吸光度变化率绝对值应≥0.015。
2.5线性在[1,100]U/L线性范围内,线性相关系数r2 ≥0.990。
在(10,100]U/L范围内测定结果的相对偏差应不大于±15%;在[1,10]U/L范围内测定结果的绝对偏差应不大于±3.0 U/L。
2.6重复性2.6.1 试剂重复性变异系数CV应<10%。
2.6.2 校准品和质控品重复性校准品和质控品的变异系数CV应<10%。
2.7批间差不同批号之间测定结果的相对极差应<15%。
2.8 准确度与选定试剂盒进行比对试验,样本浓度在[1,100]U/L范围内,相关系数r2≥0.990,样本测定结果在(10,100]U/L范围内的相对偏差应不大于±15%;在[1,10]U/L范围内的绝对偏差应不大于±3.0 U/L。
血清单胺氧化酶(MAO)的检测及临床意义
血清单胺氧化酶(MAO)的检测及临床意义一、概述单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)是一组催化多种单胺类化合物氧化脱氨的酶,广泛分布于肝、肾、胃、小肠和脑等组织中及细胞线粒体内,主要参与生物活性胺类物质的代谢灭活。
MAO催化胺类物质氧化脱胺,进而生成醛而灭活,进而被醛脱氢酶或醛还原酶催化生成酸或醇排出体外。
血清中MAO和结缔组织中的MAO性质相似,能促进结缔组织的成熟。
在胶原形成过程中,参与胶原成熟的最后阶段架桥的形成,使胶原和弹性硬蛋白相结合。
二、检测方法1、血清MAO测定有化学比色法、速率法等,目前应用较多的是速率法。
2、速率法原理:血清MAO催化苄胺的氧化反应,生成苄醛、过氧化氢和氨,氨在谷氨酸脱氢酶的作用下与α-酮戊二酸反应生成谷氨酸,同时转化NADH为NAD+,通过监测340nm波长处NADH吸光度的下降速率测定MAO活性。
三、参考区间血清MAO:12~40U/L。
不同方法测定结果可能有一定差异。
四、临床意义1、血清单胺氧化酶对诊断肝硬化和肝纤维化有一定的价值。
肝硬化时,MAO活性升高的阳性率可以高达80%以上,且活性升高与肝表面结节形成的进程相平行。
如果肝癌患者MAO增高,表明该患者同时伴有肝纤维化。
2、各型肝炎急性期患者的血清MAO活性多不升高,但急性重型肝炎时,因肝细胞坏死,线粒体释放大量MAO,可导致血清MAO活性升高。
3、肢端肥大症、结缔组织病、严重脂肪肝、慢性右心衰竭伴肝淤血等,血清MAO均会增高。
4、MAO增高还见于阻塞性黄疸、甲状腺功能亢进症、糖尿病、心功能不全及各种胶原性疾病等。
5、精神分裂症患者MAO明显降低,服用避孕药、肾上腺皮质激素、左旋多巴肼类等药物可引起MAO活性降低。
五、注意事项1、溶血不影响酶的测定结果2、标本在4℃时可稳定3d。
3、样本中氨浓度大于50umol/L,可能导致血清MAO检测结果假阳性4、个体血清MAO活性较易波动,故应多次测定5、若MAO活性超过80U/L,应将样品稀释后重新测定。
单胺氧化酶(MAO)检测试剂盒(醛苯腙比色法)
单胺氧化酶(MAO)检测试剂盒(醛苯腙比色法)简介:单胺氧化酶(Monoamine Oxidase ,MAO)是一组催化多种单胺类化合物氧化脱氨的酶,属于细胞外酶,含有铜离子,分布于肝脏、肾脏等组织的线粒体内,其含量分布为肝脏>心脏>肾脏>脑>肺>骨骼肌。
血小板、胎盘中也含有MAO 。
线粒体中的MAO 与膜紧密结合,仅少量为可溶性的,存在于细胞质中,血液和结缔组织中的MAO 为水溶性。
Leagene 单胺氧化酶(MAO)检测试剂盒(醛苯腙比色法)其检测原理是待测样品在MAO 作用下,氧化底物苄胺生成苄醛,后者经催化反应生成醛苯腙,呈棕红色,通过分光光度计检测470nm 处吸光度,根据标准曲线即可测出MAO 活力。
该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:1、 蒸馏水2、 离心管或小试管3、 比色杯4、 分光光度计操作步骤(仅供参考):1、 准备样品:①血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,冻存,用于MAO 的检测。
②细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,-70℃冻存,用于MAO 的检测。
高活性样品:如果样品中含有较高活性的MAO ,可以使用MAO Assay buffer 稀释。
编号 名称TE0253 50T TE0253 100T Storage试剂(A): 苄醛标准(5mmol/L) 1ml 2ml 4℃ 避光 试剂(B): MAO Assay buffer 50ml 100ml RT 试剂(C): 苄胺缓冲液 50ml 100ml 4℃ 避光 试剂(D): 苄醛显色液 25ml 50ml 4℃ 避光 试剂(E): 苄醛显色缓冲液 50ml100mlRT使用说明书1份④(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MAO含量。
单胺氧化酶检测试剂盒(酶循环法)产品技术要求九强
单胺氧化酶检测试剂盒(酶循环法)适用范围:本试剂盒用于体外定量测定人血清或血浆中单胺氧化酶(MAO)的含量。
1.1 包装规格包装规格见表1。
表1 包装规格1.2主要组成成分主要组成成分见表2。
表2 主要组成成分注:不同批号的质控品赋值有差异,具体赋值详见靶值单。
2.1 外观试剂1为无色澄清液体,目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物;质控品复溶后为淡黄色澄清液体,目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。
试剂盒标签标识清晰,外包装完整无损。
2.2 净含量试剂的净含量应不少于标称量。
2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度A340nm下测定空白吸光度应≥0.8000。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率A340nm下测定的空白吸光度变化率(ΔA/min)应≤ 0.0050。
2.4 准确度与已上市产品进行比对试验:在[2,100.0]IU/L区间内,相关系数r≥0.975,在[2.0,20.0] IU/L区间内测定的绝对偏差应不超过±2IU/L,在(20.0,100.0] IU/L区间内测定的相对偏差应不超过±10%。
2.5 分析灵敏度样本浓度为7.0IU/L时,其吸光度变化率在0.0100~0.1000之间。
2.6 线性区间在[2,100.0] IU/L区间内,线性相关系数r≥0.99,在[2.0,20.0] IU/L 区间内测定的绝对偏差应不超过±2IU/L,在(20.0,100.0] IU/L区间内测定的相对偏差应不超过±10%。
2.7 测量精密度2.7.1 重复性对高、低不同浓度的同一血清样本或质控品重复测定10次,其测定值的变异系数(CV%)应不大于10%。
2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差(R)应不大于10%。
2.8 瓶间精密度质控品瓶间精密度应≤10%。
2.9 稳定性2.9.1 试剂稳定性试剂在2℃~8℃密封避光保存,有效期为12个月。
在试剂盒有效期满后一个月以内,应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7.1的要求。
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单胺氧化酶(MAO)检测试剂盒(醛苯腙比色法)
简介:
单胺氧化酶(Monoamine Oxidase ,MAO)是一组催化多种单胺类化合物氧化脱氨的酶,属于细胞外酶,含有铜离子,分布于肝脏、肾脏等组织的线粒体内,其含量分布为肝脏>心脏>肾脏>脑>肺>骨骼肌。
血小板、胎盘中也含有MAO 。
线粒体中的MAO 与膜紧密结合,仅少量为可溶性的,存在于细胞质中,血液和结缔组织中的MAO 为水溶性。
Leagene 单胺氧化酶(MAO)检测试剂盒(醛苯腙比色法)其检测原理是待测样品在MAO 作用下,氧化底物苄胺生成苄醛,后者经催化反应生成醛苯腙,呈棕红色,通过酶标仪检测吸光度,根据标准曲线即可测出MAO 活力。
该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:
自备材料:
1、 蒸馏水
2、 离心管或小试管
3、 比色杯
4、 分光光度计
操作步骤(仅供参考):
1、 准备样品:
①血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,冻存,用于MAO 的检测。
②细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,冻存,用于MAO 的检测。
高活性样品:如果样品中含有较高活性的MAO ,可以使用MAO Assay buffer 稀释。
编号 名称
TE0251 100T Storage
试剂(A): 苄醛标准(5mmol/L) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): MAO Assay buffer 50ml RT 试剂(C): 苄胺缓冲液 5ml 4℃ 避光 试剂(D): 苄醛显色液 2.5ml 4℃ 避光 试剂(E): 苄醛显色缓冲液 5ml
RT 使用说明书
1份
④(选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计 算单位蛋白重量组织或细胞内的MAO 含量。
2、 稀释标准品:用MAO Assay buffer 稀释苄醛标准(5mmol/L)至0.5mmol/L ,即为苄
醛标准工作液,4℃保存,备用。
以苄醛标准工作液(0.5mmol/L),按下表制备标准曲线。
3、 MAO 检测:按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注
意避免产生气泡。
如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
4、 混匀,酶标仪检测吸光度值,以蒸馏水调零,读取各管吸光度值。
一般应数小时内检测
完毕。
绘制标准曲线,根据(A 测定-A 空白)之差值在标准曲线上查出MAO 活力单位。
酶活力高于上限者,应将样品稀释后重新测定,结果乘以稀释倍数。
计算:
MAO 活性单位的定义:在37℃ 1ml 血清中MAO 1h 催化底物产生1nmol 苄醛为一个MAO 酶活力单位。
根据酶活性定义,计算出样品中的MAO 活性。
以标准管苄醛nmol 数为横坐标,以吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,用(A
测定-A 空
白)之差值在标准曲线上查出待测样品的苄醛
nmol 数。
血清MAO 活力(U/ml 或nmol/h ∙ml)=苄醛(nmol)×V T ×N/t ×V s =苄醛(nmol)×2.5
加入物
0 1 2 3 4 5 6 7 8 苄醛标准工作液(μl) 0 1 2 4 8 12 16 20 24 MAO Assay buffer(μl) 75 74 73 71 67 63 59 55 51 相当于苄醛(nmol/孔) 0 0.5 1 2 4 6 8 10 12 相当于MAO 单位(nmol/h ∙L) 0
12.5
25
50
100
150
200
250
300
空白管 标准管 测定管 待测样品(如血清等)(μl) 10 — 10 MAO Assay buffer(μl) 25 25 25 苄胺缓冲液(μl)
50
50
50
混匀,37℃水浴2h 。
苄醛显色液(μl) 25 25 25 苄胺缓冲液(μl) 25
—
—
混匀,37℃水浴20min 。
苄醛显色缓冲液(μl) 50 50 50 蒸馏水(μl)
50
50
50
组织MAO活力(U/mg或nmol/h∙mg)=苄醛(nmol)×V T×N/(t×V s×待测样品蛋白浓度mg/ml)
式中:
V T=待测样品总体积(μl)
N=待测样品检测前的稀释倍数
V s=检测时所用样品体积(μl)
t=反应时间(min)
注意事项:
1、胆红素浓度小于257μmol/L,血红蛋白浓度小于4g/L,对 MAO活力检测没有影响。
2、若更换为国际单位,应除以60。
3、加入苄醛显色缓冲液后,应1h内检测完毕。
4、在皂化过程中,震荡不要剧烈,以免形成乳化层。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6个月有效。
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