单次给药毒性试验
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• 根据估计，由剂量序列表中找出可能的致死剂 量范围，在此范围内，每间隔一个剂量给一只 动物，测出最低致死剂量和最高非致死剂量， 然后用二者之间的剂量给一只动物，此剂量即 为所要求的近似致死剂量
单次给药毒性试验要求
• 试验动物
– 啮齿类：大鼠或小鼠 – 非啮齿类：犬、猴或其它
• 作为一类创新药物必须用两种动物（啮齿 类和非啮齿类）；其它类酌情用二种动物 • 动物体重：小鼠18-22g，同次体重相差不超 过平均体重20%；大鼠120-150g，同次体重 不超过平均体重20%；犬用成年犬 • 性别：雌雄各半
– 动物短期致癌试验高剂量应是MTD – 主要药效学剂量限度、安全药理和药代动力学 剂量也要参考急性毒性的LD50
试验目的和意义-其它方面
• 系列化合物的合格率分析（除理化性质为 主外）也参考LD50
• 复方中药物的相互作用，有时也通过拆方 及合用的LD50来判别相互作用的性质
单次给药毒性试验常用试验方法
单次给药毒性试验
单次给药毒性试验 （Single dose toxicity study）
• 定义
– 是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反
应而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或
24小时内多次给予受试药物后，一定时间内所
产生的毒性反应
单次给药毒性试验目的意义
• • • • • 了解新药急性毒性强度 计算新药相对毒性参数 为临床毒副反应监护提供参考依据 为进一步毒性试验选择剂量提供依据 其它方面
– 实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试物后再禁食3-4小时。如无资料证明雄 性动物对受试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。根据受试物的有关资料，
单次给药毒性试验-LD50法
• LD50测定法剂量设计
– 预试验：找出0%及100%估计致死量 – 正式试验：根据预试验药物毒性大小一般在1:0.6-1:0.9范围
结果分析与评价
• 根据上述观察指标的结果判断受试物引起 的毒性反应性质、严重程度、可恢复性及 安全范围 • 根据毒性可能涉及的部位，综合大体解剖 和组织病理学检查结果，初步判断毒性靶 器官。
试验目的和意义-新药急性毒性强度
动物及给药途径 剧毒 毒 有害
大鼠LD50 ig（mg/kg)
≤25
25-200
200-2000
大鼠或兔经皮LD50 （mg/kg)
≤50
50-400
400-2000
大鼠LC50（mg/L/4h)Байду номын сангаас
≤0.5
0.2-2
2-20
试验目的和意义-相对毒性参数
• • • • 治疗指数TI=LD50/ED50 安全系数SF=LD5/ED95 可靠或确实安全系数CSF=LD1/ED99 LD50/ED50，越大越安全
•
各给药途径的容量
– 小鼠一般：0.4-0.5ml/20g，大鼠1ml/100g
– 小鼠最大：口服不超过0.8ml/20g，其他途径不超过0.5ml/20g
– 大鼠最大：口服不超过2ml/100g，其他途径不超过1ml/100g
观察指标
• 临床症状（动物外观、行为、饮食、对刺激的反应、分泌物、排泄物
– LD5基本无害量 – LD1肯定无害量 – ED95基本有效量 – ED99肯定有效量
试验目的和意义-为临床毒副反应监护提供参考
• • • • •
中毒症状 起始时间 持续时间 恢复时间 对抗试验为临床急救提供依据
试验目的和意义-为重复给药、蓄毒试 验剂量选择提供依据 • 重复给药毒性剂量设计
等）
• 死亡情况（死亡时间、濒死前反应等） • 体重变化（给药前、给药期结束各称重一次，观察期间可多次称重，
动物死亡或濒死时称重
• 记录所有死亡情况，出现症状以及症状的起始时间、严重程度、持续 时间、体重变化等 • 进行大体解剖（所有动物），当组织器官出现体积、颜色、质地等改 变时，应进行组织病理学检查
– LD50法（1/10，1/50，1/100） – MTD法（1，1/3，1/10)
• 蓄积性毒性剂量设计
– 1/10LD50，然后按等比级数1.5倍逐渐递增
试验目的和意义-为特殊毒性试验剂量选择提供依据
– 生殖毒性试验高剂量为母鼠MTD
– 致突变试验
• 啮齿类动物微核试验高剂量为1/2 LD50 • 精原细胞染色体畸变试验高剂量应为1/2 LD50
• • • • • • • 近似致死量法 最大给药量法 最大耐受量法 固定剂量法 上下（序贯法） 累积剂量法（金字塔法） 半数致死量法
定义
• 最大给药量（MFD）：指动物单次或24小时内多次（2-3次）给药所采用的最 大给药剂量 • 最大耐受量法（Maximal tolerance dose, MTD)：是指动物能够耐受的而不引起 动物死亡的最高剂量；是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量 • 半数致死量（Median lethal dose, LD50）：预期引起50%动物死亡的剂量，该 值是统计学处理推算出的结果 • 单次口服固定剂量法：选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量
给药方法
• 动物禁食
– 为减少吸收差异和大容量给药造成急性扩张，小鼠和大鼠至少应停食4-6h，要求一夜停
食（不停水），给药后再禁食3-4h
•
给药途径
– 中药新药除临床给药途径外，一、二类水溶性药应同时采用静脉给药途径，其他如油剂、 混悬剂之类可擦爱用皮下给药途径。腹腔注射在人体极少用，中药粗制剂成分复杂，动 物毒性试验中也尽可能少用，以避免腹腔刺激性的干扰。
内设计4-7档剂量
• LD50计算方法
– Bliss法 – 改进寇氏法 – 点斜法
– 简化概率单位法
单次给药毒性试验-最大给药量法
• 最大体积的给药量1次或1日内2-3次给予动 物，以小鼠为例容量一次不超过0.4ml/10g， 多次给药间隔时间不低于4h。
单次给药毒性试验-近似致死剂量法
• 估计可能的毒性范围：根据小动物的毒性试验 结果、受试物的化学结构和其它有关资料，估 计可能引起毒性和死亡的剂量范围 • 按50%递增法，设计出含10-20个剂量序列表
单次给药毒性试验要求
• 试验动物
– 啮齿类：大鼠或小鼠 – 非啮齿类：犬、猴或其它
• 作为一类创新药物必须用两种动物（啮齿 类和非啮齿类）；其它类酌情用二种动物 • 动物体重：小鼠18-22g，同次体重相差不超 过平均体重20%；大鼠120-150g，同次体重 不超过平均体重20%；犬用成年犬 • 性别：雌雄各半
– 动物短期致癌试验高剂量应是MTD – 主要药效学剂量限度、安全药理和药代动力学 剂量也要参考急性毒性的LD50
试验目的和意义-其它方面
• 系列化合物的合格率分析（除理化性质为 主外）也参考LD50
• 复方中药物的相互作用，有时也通过拆方 及合用的LD50来判别相互作用的性质
单次给药毒性试验常用试验方法
单次给药毒性试验
单次给药毒性试验 （Single dose toxicity study）
• 定义
– 是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反
应而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或
24小时内多次给予受试药物后，一定时间内所
产生的毒性反应
单次给药毒性试验目的意义
• • • • • 了解新药急性毒性强度 计算新药相对毒性参数 为临床毒副反应监护提供参考依据 为进一步毒性试验选择剂量提供依据 其它方面
– 实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试物后再禁食3-4小时。如无资料证明雄 性动物对受试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。根据受试物的有关资料，
单次给药毒性试验-LD50法
• LD50测定法剂量设计
– 预试验：找出0%及100%估计致死量 – 正式试验：根据预试验药物毒性大小一般在1:0.6-1:0.9范围
结果分析与评价
• 根据上述观察指标的结果判断受试物引起 的毒性反应性质、严重程度、可恢复性及 安全范围 • 根据毒性可能涉及的部位，综合大体解剖 和组织病理学检查结果，初步判断毒性靶 器官。
试验目的和意义-新药急性毒性强度
动物及给药途径 剧毒 毒 有害
大鼠LD50 ig（mg/kg)
≤25
25-200
200-2000
大鼠或兔经皮LD50 （mg/kg)
≤50
50-400
400-2000
大鼠LC50（mg/L/4h)Байду номын сангаас
≤0.5
0.2-2
2-20
试验目的和意义-相对毒性参数
• • • • 治疗指数TI=LD50/ED50 安全系数SF=LD5/ED95 可靠或确实安全系数CSF=LD1/ED99 LD50/ED50，越大越安全
•
各给药途径的容量
– 小鼠一般：0.4-0.5ml/20g，大鼠1ml/100g
– 小鼠最大：口服不超过0.8ml/20g，其他途径不超过0.5ml/20g
– 大鼠最大：口服不超过2ml/100g，其他途径不超过1ml/100g
观察指标
• 临床症状（动物外观、行为、饮食、对刺激的反应、分泌物、排泄物
– LD5基本无害量 – LD1肯定无害量 – ED95基本有效量 – ED99肯定有效量
试验目的和意义-为临床毒副反应监护提供参考
• • • • •
中毒症状 起始时间 持续时间 恢复时间 对抗试验为临床急救提供依据
试验目的和意义-为重复给药、蓄毒试 验剂量选择提供依据 • 重复给药毒性剂量设计
等）
• 死亡情况（死亡时间、濒死前反应等） • 体重变化（给药前、给药期结束各称重一次，观察期间可多次称重，
动物死亡或濒死时称重
• 记录所有死亡情况，出现症状以及症状的起始时间、严重程度、持续 时间、体重变化等 • 进行大体解剖（所有动物），当组织器官出现体积、颜色、质地等改 变时，应进行组织病理学检查
– LD50法（1/10，1/50，1/100） – MTD法（1，1/3，1/10)
• 蓄积性毒性剂量设计
– 1/10LD50，然后按等比级数1.5倍逐渐递增
试验目的和意义-为特殊毒性试验剂量选择提供依据
– 生殖毒性试验高剂量为母鼠MTD
– 致突变试验
• 啮齿类动物微核试验高剂量为1/2 LD50 • 精原细胞染色体畸变试验高剂量应为1/2 LD50
• • • • • • • 近似致死量法 最大给药量法 最大耐受量法 固定剂量法 上下（序贯法） 累积剂量法（金字塔法） 半数致死量法
定义
• 最大给药量（MFD）：指动物单次或24小时内多次（2-3次）给药所采用的最 大给药剂量 • 最大耐受量法（Maximal tolerance dose, MTD)：是指动物能够耐受的而不引起 动物死亡的最高剂量；是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量 • 半数致死量（Median lethal dose, LD50）：预期引起50%动物死亡的剂量，该 值是统计学处理推算出的结果 • 单次口服固定剂量法：选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量
给药方法
• 动物禁食
– 为减少吸收差异和大容量给药造成急性扩张，小鼠和大鼠至少应停食4-6h，要求一夜停
食（不停水），给药后再禁食3-4h
•
给药途径
– 中药新药除临床给药途径外，一、二类水溶性药应同时采用静脉给药途径，其他如油剂、 混悬剂之类可擦爱用皮下给药途径。腹腔注射在人体极少用，中药粗制剂成分复杂，动 物毒性试验中也尽可能少用，以避免腹腔刺激性的干扰。
内设计4-7档剂量
• LD50计算方法
– Bliss法 – 改进寇氏法 – 点斜法
– 简化概率单位法
单次给药毒性试验-最大给药量法
• 最大体积的给药量1次或1日内2-3次给予动 物，以小鼠为例容量一次不超过0.4ml/10g， 多次给药间隔时间不低于4h。
单次给药毒性试验-近似致死剂量法
• 估计可能的毒性范围：根据小动物的毒性试验 结果、受试物的化学结构和其它有关资料，估 计可能引起毒性和死亡的剂量范围 • 按50%递增法，设计出含10-20个剂量序列表