单次给药毒性试验
[医药]急性毒性试验
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有毒（LD50 25～ 200）
非啮齿类
（发现毒理学研究）
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怎么做？
急性毒性试验的基本要求
※两种动物 ※两种性别 ※两种给药途径
啮齿类 非啮齿类
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两种动物：充分暴露受试物毒性, 若未采 用非啮齿类动物进行急性毒性试验，应 阐明其合理性。
两种给药途径：通常，给药途径应至少 包括临床拟用途径和一种能使原形药物 较完全进入循环的途径（如静脉注射）。 如果临床拟用途径为静脉给药，则仅此 一种途径即可。
个途径 ※如不能静脉给药可改为其它途径
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怎么做？
剂量
※化学药物最高剂量 静脉给药：2 g/kg 口服给药：2-5 g/kg
※临床拟用剂量的100-300倍
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怎么做？
给药容量：各剂量组应按等容量，不等浓 度的给药原则
最大给药容量：可参考相关的文献
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怎么做？
口服（包括灌胃）给药前通常禁食过夜 （至少小鼠3-4 h），但不禁水，给药后 仍需禁食2-4 h（小鼠1-2 h）
原因： ※胃内容影响给药容积 ※胃内容可能会影响药物的吸收
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怎么做？
观察期限
※一般给药后连续观察14天
※如给药第2周内发生动物死亡或出现新的 毒性反应时，应延长观察期限
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怎么做？
观察终点 ※死亡 ※明显毒性征状
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怎么做？
观察指标
※死亡情况 ※体重等一般情况 ※征状（Sign） ※实验室等检查
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近似致死计量法
※方法： 选取剂量序列表中的某个区段，每个剂 量（也可每隔一个剂量）给一个动物
[医药]急性毒性试验
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（发现毒理学研究）
怎么做？
急性毒性试验的基本要求
※两种动物 ※两种性别 ※两种给药途径
啮齿类 非啮齿类
两种动物：充分暴露受试物毒性, 若未采 用非啮齿类动物进行急性毒性试验，应 阐明其合理性。 两种给药途径：通常，给药途径应至少 包括临床拟用途径和一种能使原形药物 较完全进入循环的途径（如静脉注射）。 如果临床拟用途径为静脉给药，则仅此 一种途径即可。
累积剂量法
※结果 ●无动物死亡：MLD（minimum lethal dose 最小致死剂量）和LD50大于最高剂量 ●某一剂量动物全部死亡：MLD和LD50在该 剂量和前一剂量间 ●某一剂量动物部分死亡，MLD在该剂量和 前一剂量间，LD50位于首次出现死亡和全 部动物死亡的剂量间
累积剂量法
※结果 ●如无动物死亡，常以最高剂量给予动物 5-7天，以确定后续的重复给药试验中高 剂量的选择
最大给药量法（限度试验）
※适用条件 ●在合理的最大给药浓度和合理的最大给 药容量的条件下仍达不到上述剂量要求 ●更高的剂量所产生的信息不具有更进一 步的价值
最大给药量法
※方法 ●一般使用10-20只动物 ●连续观察14天 ※结果 ●无动物死亡—MLD大于限度剂量 ●动物死亡<50%--LD50>限度剂量 ●动物死亡>50%需要重新设置限度剂量或改用其 他方法
上下法—主实验
※结果： 用该方法的LD50计算软件计算LD50
LD50法
※观察—观察期14天 ●观察重点：死亡 ●体重 ●征状 ※结果：分性别根据各剂量组的死亡率用 Bliss法计算LD50
固定计量法
●动物：首选大鼠 ●剂量：5、50、500和2000
mg/kg ●观察终点：明显的毒性反应 ●实验： 预试 正式实验
单次给药毒性试验
单次给药毒性试验-近似致死剂量法
• 估计可能的毒性范围：根据小动物的毒性试验 结果、受试物的化学结构和其它有关资料，估 计可能引起毒性和死亡的剂量范围
• 按50%递增法，设计出含10-20个剂量序列表 • 根据估计，由剂量序列表中找出可能的致死剂
观察指标
• 临床症状（动物外观、行为、饮食、对刺激的反应、分泌物、排泄物 等）
• 死亡情况（死亡时间、濒死前反应等） • 体重变化（给药前、给药期结束各称重一次，观察期间可多次称重，
动物死亡或濒死时称重 • 记录所有死亡情况，出现症状以及症状的起始时间、严重程度、持续
时间、体重变化等 • 进行大体解剖（所有动物），当组织器官出现体积、颜色、质地等改
单次给药毒性试验
单次给药毒性试验 （Single dose toxicity study）
• 定义
– 是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反 应而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或 24小时内多次给予受试药物后，一定时间内所 产生的毒性反应
单次给药毒性试验目的意义
• 了解新药急性毒性强度 • 计算新药相对毒性参数 • 为临床毒副反应监护提供参考依据 • 为进一步毒性试验选择剂量提供依据 • 其它方面
• 近似致死量法 • 最大给药量法 • 最大耐受量法 • 固定剂量法 • 上下（序贯法） • 累积剂量法（金字塔法） • 半数致死量法
定义
• 最大给药量（MFD）：指动物单次或24小时内多次（2-3次）给药所采用的最 大给药剂量
• 最大耐受量法（Maximal tolerance dose, MTD)：是指动物能够耐受的而不引起 动物死亡的最高剂量；是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量
简述 药物急性毒性试验研究主要设计要点
简述| 药物急性毒性试验研究主要设计要点急性毒性（Acute toxicity）是指药物在单次或24小时内多次给予后一定时间内所产生的毒性反应。
拟用于人体的药物通常需要进行单次给药毒性试验。
单次给药毒性试验对初步阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义。
单次给药毒性试验所获得的信息对重复给药毒性试验的剂量设计和某些药物临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一些与人类药物过量所致急性中毒相关的信息。
实验设计注意事项01受试物受试物应采用工艺相对稳定、纯度和杂质含量能反映临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品，并注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等，并须有研制单位的COA。
来自于市售的辅料、溶媒等应具有相关的说明和规格。
02实验动物年龄| 试验应使用年轻健康成年的动物，如果是儿童用药，必要时采用幼年动物进行试验。
种属| 可根据药代或药效结果选择合适的动物种属，试验应采用至少两种哺乳动物，从多个方面暴露药物动物毒性，选择一种啮齿类和一种非啮齿类动物，如未采用非啮齿类动物进行动物试验，应该说明理由。
性别| 通常采用雌性和雄性动物进行试验，雌雄各半。
若采用单性别动物进行试验，应阐明其合理性。
动物数| 根据研究目的，选择合适的动物数，比如小动物每组动物10只，大动物每组动物4只。
动物数应符合试验方法及其结果分析评价的需要。
体重| 试验中的啮齿类动物初始给药时的每组平均体重差异不应超过或低于平均体重的20%。
03给药途径通常情况下给药途径应至少包括临床拟用途径，或者增加一种能使药物较为完全进入全身暴露的途径如静脉给药。
急性经口给药前啮齿类动物应禁食一段时间，但禁食时间可能会影响暴露量，受到药物代谢酶的活性和受试物肠道内吸收的影响。
04给药剂量水平常用的试验方法有最大给药量法、最大耐受量法、半数致死量法等。
根据不同的试验方法选择合适的剂量，为了充分暴露毒性，高剂量可选择出现严重毒性的给药剂量或达到最大给药量，低剂量可选择未见毒性剂量，同时设空白和/或溶媒（辅料）对照组。
全身用药的毒性评价
（三）观察时间及指标
观察时间
• 给药后几小时内应严密观察动物反应，以 后每天上下午各观察一次
• 急性毒性试验必须观察7-14天，一般不超 过两周
（三）观察时间及指标
观察指标
给药前后应观察体重、进食、进水的状况，密切观 察异常应毒每性日症记状录包体括重①、行毒动性：反不应安和定死、亡多情动况、，发濒死 声；②动 和神物 病经应 理系单 组统独 织反饲学应养观：，察举死。尾后试、及验振时结颤解束、削存痉进 活挛行 动、肉 物运眼 也动观 进失察 行 调、姿解态剖异，常如；有③病自变主进神行经组系织统学反观应察：。眼球突出、 流涎、流泪、排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、呼 吸；④死亡。
• 实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受 试物后再禁食3-4小时。采用一次给药的方式进行
• 如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先 用雌性动物进行预试。
（三）固定剂量法（Fixed-dose procedure）
• 根据受试物的有关资料，从上述四个剂量中选择 一个作为初始剂量
• 若无有关资料可作参考时，可用500mg/kg作为 初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000 mg/kg进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束 预试。
<50%，LD50>限度剂量；3）死亡率>50%，重新设 计。
（一）最大给药量试验
以小鼠口服为例： 动物数不得少于10只，雌雄各半，容量一次不 超过0.4ml/10g(体重)，多次给药间隔时间不 低于4h，观察14日，记录毒性反应和体重变化。 如仍未见毒性反应或体重正常增加，则可认为 该药物小鼠最大给药量未见毒性反应，或LD50 大于最大给药量。
目 了解毒性反应剂量、时间、强度、症状、靶器官及可逆性等， 的 为临床方案提供参考、预测出现的毒性反应，制订临床防护
急性毒性试验
试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。
一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1.动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。
选用其他动物应说明原因。
年龄一般为7-9周龄。
同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%.实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。
2.饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。
若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。
应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。
3.受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。
（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。
1.伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。
2.最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。
3.最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。
4.单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。
选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。
实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。
如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。
根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg 进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。
(完整版)急性毒性试验
试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。
一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1.动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。
选用其他动物应说明原因。
年龄一般为7-9周龄。
同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%.实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。
2.饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。
若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。
应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。
3.受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。
（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。
1.伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。
2.最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。
3.最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。
4.单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。
选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。
实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。
如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。
根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg 进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。
布洛芬注射液小鼠单次腹腔注射给药毒性的试验研究
布洛芬注射液小鼠单次腹腔注射给药毒性的试验研究目的观察布洛芬注射液单次腹腔注射以后小鼠的急性中毒反应。
方法试验采用ICR小鼠，给药后观察出现的各种应激反应和临床中毒症状。
连续观察14d后将动物安乐死，对肉眼所见异常的组织器官进行组织病理学检查。
结果给药后，小鼠出现活动减少、困倦、趴伏、呼吸减少的症状。
550、467、397、337mg/kg 组死亡动物数分别为10、9、2、1，动物死亡数随着剂量降低而减少；287mg/kg 组及溶媒对照组未见动物死亡。
结论按Bliss法计算，布洛芬注射液小鼠单次腹腔注射给药的LD50和95%可信区间为414.39mg/kg，385.17～445.89。
[Abstract] Objective To evaluate the acute toxicity of Caldolor on ICR mice. Methods After treatment，the animals were observed daily for totally 14 days. Stress reactions and clinical symptoms were observed and recorded. At the end of the observation period，the mice were sacrificed，necropsied and the major organs were taken out for pathological examination. Results After treatment，the mice appeared abnormal clinical signs such as reduced activity，sleepiness，reduced respiration. The number of dead mice for 550，467，397，337 mg/kg group were 10，9，2 and 1，respectively; There were no mouse dead in 287 mg/kg group and in the vehicle control group. Conclusion Calculated by Bliss，50% lethal dose（LD50）of intraperitoneal Caldolor in mice is 414.39 mg/kg and the 95% confidence interval is 385.17-445.89.[Key words] Caldolor；Acute Toxicity；LD50布洛芬是一个较强的前列腺素合成抑制剂，以抗炎、解热和镇痛效果确切、不良反应小等优点被广泛应用，成为全球最畅销的非处方药物之一[1-3]。
毒理学实验
七、毒理学实验（一）、急性毒性试验的定义、目的和意义急性毒性试验，又称单次给药急性毒性实验，是指在24h内一次或多次给予动物受试物后，所产生的毒性反应。
（二）、基本内容和技术要求1、实验动物可根据不同情况选用不同的实验动物，例如大鼠、小鼠、犬。
本实验随机选用健康成年的12只大鼠和12只小鼠，要求雌雄分别对半，动物初始体重不超过或低于平均体重的20%。
2、给药途径由于本品为浓缩丸，因此选用口服进行实验。
给药前将实验动物禁食24h。
3、给药剂量将大鼠和小鼠分别两只一组，分大鼠6组，小鼠6组。
然后编号。
分剂量0g/kg，1g/kg，2g/kg，3g/kg，4g/kg，5g/kg对小鼠和大鼠进行灌胃口服，20ml/kg。
然后观察小鼠反应。
一般认为口服5g/kg时未见急性毒性或死亡，可不必提高剂量进行实验。
4、观察时间及指标给药后几小时内应严密观察动物反应，之后每天上下午各观察一次，至少连续观察14d。
5、在口服给药24h后，如果没有实验动物死亡，则每组各选一只动物进行病理组织学检查；如果有动物死亡，则将死亡动物和未死亡的动物小组中选一只动物进行病理学检查。
6、实验动物临床表现与器官系统的关系急性毒性试验一般指征观察参考表（三）、长期毒性实验实验要求和内容1、实验药品要求选用符合相关制剂要求的同一批药品。
2、实验动物选用正常、健康、雌雄各半和动物体重应在平均体重的20%之内的成年各20只大鼠和小鼠。
将每种动物平均分四组，分别为高、中、低、和对照组。
3、实验动物饲养按照动物室正常标准进行饲养。
4、药物剂量根据相应动物急性毒性的最大无症状剂量（MTD）、1/3MTD、1/10MTD 分别设高中低三个剂量。
对照组为空白对照。
5、给药方法将药物加入到饲料中，依据确定的量进行。
6、给药时间给药6个月。
7、观察指标（1）一般指标实验动物的体重，和解剖后相关脏器的重量。
每周固定时间测1次大鼠体重及摄食量，试验期间详细观察大鼠一般状况，包括外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便等，必要时应测定大鼠饮水量。
药物单次给药毒性研究技术指导原则
药物单次给药毒性研究技术指导原则一、概述急性毒性（Acute toxicity）是指药物在单次或24小时内多次给予后一定时间内所产生的毒性反应[1、2]。
狭义的单次给药毒性研究（Single dose toxicity study）是考察单次给予受试物后所产生的急性毒性反应[2]。
本指导原则所指为广义的单次给药毒性研究，可采用单次或24小时内多次给药的方式获得药物急性毒性信息。
拟用于人体的药物通常需要进行单次给药毒性试验（见注释1）。
单次给药毒性试验对初步阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义。
单次给药毒性试验所获得的信息对重复给药毒性试验的剂量设计和某些药物临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一些与人类药物过量所致急性中毒相关的信息[1]。
本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物。
二、基本原则（一）试验管理用于支持药品注册的单次给药毒性试验必须执行《药物非临床研究质量管理规范》（GLP）。
（二）具体问题具体分析单次给药毒性试验的设计，应该在对受试物认知的基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则。
对于化学药，应根据受试物的结构特点、理化性质、同类化合物情况、适应症和用药人群特点、试验目的等选择合适的试验方法，设计适宜的试验方案，并结合其他药理毒理研究信息对试验结果进行全面的评价。
对于中药和天然药物，还应考虑到其与化学药的不同特点，试验时应根据各自不同的情况进行针对性设计。
（三）随机、对照、重复单次给药毒性试验应符合动物试验的一般基本原则，即随机、对照和重复。
三、基本内容（一）受试物中药、天然药物：受试物应采用能充分代表临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品。
应采用工艺路线及关键工艺参数确定后的工艺制备，一般应为中试或中试以上规模的样品，否则应有充分的理由。
应注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件、有效期及配制方法等，并提供质量检验报告。
由于中药的特殊性，建议现用现配，否则应提供数据支持配制后受试物的质量稳定性及均匀性。
急性毒性试验
三、给药方法
(一)动物禁食
动物购入后应在实验室观察1星期，口服给药前，为减少吸收差异和大容量 给药造成胃急性扩张，小鼠和大鼠至少应停食4 -6h，要求一夜停食(不停水)， 投药后再停食3-4h。
(二)给药途径
中药新药除临床给药途径外，—、二类新药还希望其他给药途径，水溶性 药
物应同时采用静脉给药途径，其他如油剂，混悬剂之类可采用皮下给药途径。 腹腔汁射在人体极少用，中药粗制剂成分复杂，动物毒性试验中也尽可能少 用，以避免腹腔刺激性的干扰。
(一)观察指标
不能把求得致死剂量看作是急性毒性实验的唯一要求。发现毒性症状及毒性反应 的靶器官同样是急毒实验非常重要的目的。给药前后应观察体重、进食、进水的状 况，密切观察异常毒性症状，特别是给药后的一、二日。以后1日至少观察1次，观 察7 日观察症状包括①行动：不安定、多动、发声；②神经系统反应：举尾、振颤、 痉挛、运动失调、姿态异常；③自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流汨、排尿、 下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸；④死亡。应每日记录体重、毒性反应和死亡情况， 濒死动物应单独饲养，死后及时解削进行肉眼观察和病理组织学观察。试验结束存 活动物也进行解剖，如有病变进行组织学观察。
(二}致死剂量计算
可用Bliss点斜法、简化机率法、改进寇氏序贯法等计算最小致死量或半数致死量。 Bliss法严谨精确，缺点是计算非常繁复。但近代有计算机软件，汁算方法可推荐 Bliss法。各种方法原则基本相同，如：①剂量刘数值应为等差，即剂量应按等比级 数排列；②各组动物数应相等；③死亡率应在50％上下基本对称分布等。但各种方 法还各有特殊设计要求，如有的要求Dm和Dn必须为100％和0％死亡率等，可参考有 关专著，此处不赘述。如受试物毒性低，测不出LD50，可求得最大给药量。
急性毒性试验
急性毒性试验试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。
一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1．动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。
选用其他动物应说明原因。
年龄一般为7-9周龄。
同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%。
实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。
2．饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。
若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。
应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。
3．受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。
（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。
1．伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。
2．最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。
3．最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。
4．单次口服固定剂量方法（Fixed-doseprocedure）。
选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。
实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。
如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。
根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。
药物单次给药毒性研究技术指导原则
药物单次给药毒性研究技术指导原则一、概述急性毒性（Acute toxicity）是指药物在单次或24小时内多次给予后一定时间内所产生的毒性反应[1、2]。
狭义的单次给药毒性研究（Single dose toxicity study）是考察单次给予受试物后所产生的急性毒性反应[2]。
本指导原则所指为广义的单次给药毒性研究，可采用单次或24小时内多次给药的方式获得药物急性毒性信息。
拟用于人体的药物通常需要进行单次给药毒性试验（见注释1）。
单次给药毒性试验对初步阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义。
单次给药毒性试验所获得的信息对重复给药毒性试验的剂量设计和某些药物临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一些与人类药物过量所致急性中毒相关的信息[1]。
本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物。
二、基本原则（一）试验管理用于支持药品注册的单次给药毒性试验必须执行《药物非临床研究质量管理规范》（GLP）。
（二）具体问题具体分析单次给药毒性试验的设计，应该在对受试物认知的基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则。
对于化学药，应根据受试物的结构特点、理化性质、同类化合物情况、适应症和用药人群特点、试验目的等选择合适的试验方法，设计适宜的试验方案，并结合其他药理毒理研究信息对试验结果进行全面的评价。
对于中药和天然药物，还应考虑到其与化学药的不同特点，试验时应根据各自不同的情况进行针对性设计。
（三）随机、对照、重复单次给药毒性试验应符合动物试验的一般基本原则，即随机、对照和重复。
三、基本内容（一）受试物中药、天然药物：受试物应采用能充分代表临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品。
应采用工艺路线及关键工艺参数确定后的工艺制备，一般应为中试或中试以上规模的样品，否则应有充分的理由。
应注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件、有效期及配制方法等，并提供质量检验报告。
由于中药的特殊性，建议现用现配，否则应提供数据支持配制后受试物的质量稳定性及均匀性。
急性毒性试验
急性毒性试验
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二、试验准备
试验应在符合GLP试验室内进行，试验样品质量和稳定性应符合要求，与药效学及 临床试验一致。
(一)样品液配制
中药材町用浓缩煎剂或浸膏，中药制剂可用不含辅料提取物加水或用o．5％羧基纤 维素钠，0．5％吐温—80，5％阿拉伯胶等混悬剂、增溶剂配成混悬液等，尽可能配成 水溶液，水不溶性成份可用植物汕配成油溶、乳浊液。也有用乙醇、聚乙醇等溶剂配 成样品液者，但溶剂本身急性毒性能干扰试验结果，所以，急性毒性试验汇报中应对 样品液配制方法加以详细说明，必要时设溶剂对照组。
急性毒性试验
第7页
第二节 急性毒性试验方法
一、LD50测定
最小致死量是使动物刚好致死药品剂量，但因为药品性质，给药方法和个 体差异，每只动物最小致死量确很大差异，试验和统训学原理表明一群动物 最小致死量平均值相当于半数致死量。半数致死量测定方法很多，但试验没 计大同小异，所不一样者为算方法不一样，其试验方法以下：
急性毒性试验
第12页
(二)安全性评价
(1)依据急性毒性试验结果判断供试药品毒性强弱、类型。我国尚无统—要求。
(2)急性毒性试验结果对临床研究有指导意义，能够为临床研究时探索安全有 效剂量防止出现急性不良反应提供依据。
不过，鉴于人体与各种动物对各类化合物吸收、分布、代谢、排泄以及各类 型毒性反应差异，尚无规律可循，现有化学药品统计数据表明，在进行临床研 究时，仍应依据试验结果参考文件资料报道进行由低到高安全治疗剂量探索。
(二)样品液浓度及给药容量
为了求得最低致死且或半数致死量，需要设不一样剂量组，使个别组反应率在50％ 以上，个别组反应率在50％以下。不一样剂量设定有两种方式，—是浓度一定不一样 给药容量，另—种是容量一定不一样给药浓度，二者各有所长。
《药物单次给药毒性研究技术指导原则》解读
更 改为 “ 单次给 药毒性试验 ” ， 两 个 名 称 意 义 相 同 （ 下 文 阐述 ） ， 因此本 文 中两名 称通用 。
１ 指 导 原 则 修 订 目 的
异， 因此通 过合 并修 订 ， 统 一技 术规 范 。
２ 指 导 原 则 修 订 背 景 ２ ． １ 国 际 背 景 国 际 上 对 急 性 毒 性 试 验 的 认 识 不
［ Ｋｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ］ ｓ ｉ ｎ ｇ ｌ ｅ ｄ ｏ ｓ ｅ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ；ａ ｃ ｕ ｔ ｅ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ； ｇ ｕ ｉ ｄ ａ ｎ ｃ ｅ ２ ０ １ ４年 ５月 １ ３日国家食 品药 品监 督 管 理总 局 发布 了《 药 物单 次给 药 毒性 试 验 技术 研 究 技 术指 导 原则 》 ， 为 利 于 新 药 研 究 评 价 中全 面 理 解 该 指 导 原 则， 本 文结 合该 指导 原 则 的起 草背 景 和 专 家讨 论 意 式 稿并 发布 。本 指导原 则 的修订 目的是 ： ① 适应 新
ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｇ ｕ ｉ ｄ ａ ｎ ｃ ｅ，ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈｅ ｄ ｒ ａ ｆ ｔ ｂ ａ ｃ ｋ ｇ ｒ ｏ ｕ ｎ ｄ ａ ｎ ｄ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｔ ａ ｄ ｖ ｉ ｃ ｅ ｓ ｄ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｇ ｕ ｉ ｄ ａ ｎ ｃ ｅ ｄ ｒ ａ ｆ ｔ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ，ａ ｎ ｄ ｐ ｒ ｅ ｓ ｅ ｎ ｔ ｓ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｑ ｕ ｉ ｒ ｅ ｍｅ ｎ ｔ ｓ ｏ ｆ ｓ ｉ ｎ ｇ ｌ ｅ ｄ ｏ ｓ ｅ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ｓ ｔ ｕｄ ｙ ｆ ｏ ｒ ｐ ｈａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｉ ｎ Ｃｈ ｉ ｎ ａ ．
药物单次给药毒性研究技术指导原则
附件2药物单次给药毒性研究技术指导原则一、概述急性毒性（Acute toxicity）是指药物在单次或24小时内多次给予后一定时间内所产生的毒性反应[1、2]。
狭义的单次给药毒性研究（Single dose toxicity study）是考察单次给予受试物后所产生的急性毒性反应[2]。
本指导原则所指为广义的单次给药毒性研究，可采用单次或24小时内多次给药的方式获得药物急性毒性信息。
拟用于人体的药物通常需要进行单次给药毒性试验（见注释1）。
单次给药毒性试验对初步阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义。
单次给药毒性试验所获得的信息对重复给药毒性试验的剂量设计和某些药物临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一些与人类药物过量所致急性中毒相关的信息[1]。
本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物。
二、基本原则（一）试验管理用于支持药品注册的单次给药毒性试验必须执行《药物非临床研究质量管理规范》（GLP）。
（二）具体问题具体分析单次给药毒性试验的设计，应该在对受试物认知的基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则。
对于化学药，应根据受试物的结构特点、理化性质、同类化合物情况、适应症和用药人群特点、试验目的等选择合适的试验方法，设计适宜的试验方案，并结合其他药理毒理研究信息对试验结果进行全面的评价。
对于中药和天然药物，还应考虑到其与化学药的不同特点，试验时应根据各自不同的情况进行针对性设计。
（三）随机、对照、重复单次给药毒性试验应符合动物试验的一般基本原则，即随机、对照和重复。
三、基本内容（一）受试物中药、天然药物：受试物应采用能充分代表临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品。
应采用工艺路线及关键工艺参数确定后的工艺制备，一般应为中试或中试以上规模的样品，否则应有充分的理由。
应注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件、有效期及配制方法等，并提供质量检验报告。
由于中药的特殊性，建议现用现配，否则应提供数据支持配制后受试物的质量稳定性及均匀性。
药物毒代动力学研究技术指导原则
药物毒代动力学研究技术指导原则一、概述毒代动力学研究目的是获知受试物在毒性试验中不同剂量水平下的全身暴露程度和持续时间，预测受试物在人体暴露时的潜在风险（注释1）。
毒代动力学是非临床毒性试验的重要研究内容之一，其研究重点是解释毒性试验结果和预测人体安全性，而不是简单描述受试物的基本动力学参数特征。
毒代动力学研究在安全性评价中的主要价值体现在：（一）阐述毒性试验中受试物和/或其代谢物的全身暴露及其与毒性反应的剂量和时间关系；评价受试物和/或其代谢物在不同动物种属、性别、年龄、机体状态（如妊娠状态）的毒性反应；评价非临床毒性研究的动物种属选择和用药方案的合理性。
（二）提高动物毒性试验结果对临床安全性评价的预测价值。
依据暴露量来评价受试物蓄积引起的靶部位毒性（如肝脏或肾脏毒性），有助于为后续安全性评价提供量化的安全性信息。
（三）综合药效及其暴露量和毒性及其暴露信息来指导人体试验设计，如起始剂量、安全范围评价等，并根据暴露程度来指导临床安全监测。
本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物。
生物制品的毒代动力学研究可参考本指导原则（注释2）。
二、基本原则毒代动力学研究需执行《药物非临床研究质量管理规范》（GLP）（注释3）。
毒代动力学试验通常伴随毒性试验进行，常被称为伴随毒代动力学试验。
开展研究时可在所有动物或有代表性的亚组或卫星组动物中进行，以获得相应的毒代动力学数据（注释4）。
三、基本内容（一）暴露量评估毒代动力学试验的基本目的是评估受试物和/或其代谢物的全身暴露量，常通过适当数量的动物和剂量组来开展研究。
伴随毒代动力学研究所用动物数量应保证能获得足够的毒代动力学数据。
由于毒性试验中通常采用两种性别动物，暴露测定也应包括两种性别的动物。
选择单性别动物时应说明理由（注释5）。
暴露评估应考虑以下因素（注释6）：血浆蛋白质结合、组织摄取、受体性质和代谢特征的种属差异、代谢物的药理活性、免疫原性和毒理学作用。
在血浆药物浓度相对较低时，特殊的组织或器官也可能会有较高水平的受试物和/或其代谢物。
苦豆子总生物碱的单次给药毒性试验
[2]胡素连，潘鹏翔，喻征兵，等.跌打消痛片的祛瘀、抗炎作用研究[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（17）：151-153. [3]蒋孟良，董桂兰，易延逵，等.伤痛外搽酊活血祛瘀作用的研究[J].中成药，2000，22（11）：60-62.[4]蒋孟良，黄政德，易延逵，等.酒炙丹参大黄对大鼠血液流变学影响的研究[J].中国中药杂志，2001，26（11）：783-785. [5]林桂平，卢春颜，邝巧芬，等.复方丹参注射液抗心肌缺血及活血化瘀作用的实验研究[J].中国中医药科技，2014，21（3）：251-254.[6]祝晓雯，宋燕，金若敏，等.水蛭超细粉及水煎液活血化瘀作用的比较研究[J].中药新药与临床药理，2011，22（1）：33-37. [7]蒋孟良，黄芝蓉，彭延古，等.活络止痛丸制备工艺筛选的研究[J].中成药，2004，26（2）：154-156.[8]胡素连，蒋晓煌，蒋孟良，等.用镇痛与刺激实验优选乳香最佳炮制工艺的研究[J].中成药，2013，35（7）：1515-1517，1586. [9]蒋孟良，易延逵，陈军.伤痛外搽酊镇痛抗炎作用的实验研究[J].湖南中医学院学报，1999，19（3）：15-17.[10]雷亚锋，王冬.自制抗生丸对大鼠外伤瘀血模型血液血管方面的影响[J].中国疗养医学，2007，16（11）：680-681. [11]李胜利，方苏亭，李列大，白芍止眩方对动物活血止痛调节的实验研究[J].中国中医骨伤科杂志，2009；17（6）：13-17. [12]蒋晓煌，蒋孟良，贺卫和，等.胶艾汤不同炮制组方对动物激素水平与凝血机制的影响[J].湖南中医药大学学报，2017，37（6）：113-115.[13]蒋晓煌，蒋孟良，贺卫和，等.胶艾汤不同炮制组方对动物子宫收缩、PT与纤溶活性的影响[J].中国医院药学杂志，2017，37（5）：53-56.*通讯作者苦豆子总生物碱的单次给药毒性试验曹晓东张谦张微肖云峰王芳（内蒙古医科大学新药安全评价研究中心内蒙古自治区新药筛选工程研究中心呼和浩特010018）摘要：昆明种小鼠灌胃苦豆子总碱，进行单次毒性试验，记录急性中毒症状，剖检组织病理学检查发现靶器官并以Bliss法计算苦豆子总生物碱的半数致死量。
丹参注射液小鼠单次给药毒性试验研究
丹参注射液小鼠单次给药毒性试验研究郎彤\戴晓莉2,薛云2(1.潍坊市第二人民医院，山东潍坊261041;2.山东省药学科学院，山东济南250100)摘要：目的观察单次静脉和腹腔注射给予丹参注射液后对小鼠产生的毒性。
方法采用经典半数致死量(LD50)法进行小鼠单次给药毒性试验，动物分组后以不同的剂量静脉或腹腔注射给药1次，药后观察小鼠反应，检 测体重和死亡率，连续观察14 d后剖检，观察主要脏器的病变。
结果丹参注射液小鼠单次静脉和腹腔注射给药半数致死量分别为3.2 g •kg-1和6.3 g •kg-1。
死亡小鼠毒性症状主要表现为俯卧不动、抽搐、呼吸困难、昏迷、尿失禁继而死亡。
结论丹参注射液大剂量腹腔和静脉注射可致小鼠全部死亡，但其半数致死量分别为临床用药剂量的65和129倍，安全范围较大。
关键词：丹参注射液；单次给药毒性；小鼠；半数致死量中图分类号：R994.39文献标识码:A文章编号:2095-5375(2018)04-0201-003d o i：10.13506/j.c n k i .jp r.2018.04.004The study of single-dose toxicity of Danshen Injection in miceLANG Tong1 ,DAI Xiaoli2 ,XUE Yun2(1. Weifang No.2 Hospital,W eifang 261041,C hina \2.Shandong Academyo f Pharmaceutical Sciences , Jinan 250100, China)Abstract ：Objective To study the single-dose toxicity of Danshen Injection by intravenous and intraperiatoneal injections in mice.Methods The single-dose toxicity of Danshen Injection in mice was evaluated with classical LD50.Animals were divided into different groups and administered with different dose for one time.The general symptoms, body weight and mortality were obser^^ed after administration.The animals were autopsied and lesion of main organs were obser^^ed after continuous obser^^ation for 14 days.Results The LD_5〇of Danshen Injection in mice was 3.2 g •kg1after intravenous injection and 6.3 g •kg 1after intraperitoneal injection.The main acute toxicity symptoms of dead mice were prone position, convulsion, dyspnea, coma, urinar^^ incontinence and eventually to death. Conclusion Danshen Injection can induce all mice to be dead.The LD50of Danshen Injection in mice was 65 times of clinical dosage for intravenous injection and 129 times of clinical dosage for intraperitoneal injection. The safety scope of Danshen Injection was very large.Key words：Danshen Injection;Single-dose toxicity;Mouse;Half lethal dose丹参（Saliia miltiorrhirn)是植物丹参的根茎，性 微寒，味苦，是应用已有上千年历史的最常见中药材 之一[1]。
丹参注射液小鼠单次给药毒性试验研究
丹参注射液小鼠单次给药毒性试验研究郎彤;戴晓莉;薛云【摘要】目的观察单次静脉和腹腔注射给予丹参注射液后对小鼠产生的毒性.方法采用经典半数致死量(LD50)法进行小鼠单次给药毒性试验,动物分组后以不同的剂量静脉或腹腔注射给药1次,药后观察小鼠反应,检测体重和死亡率,连续观察14 d 后剖检,观察主要脏器的病变.结果丹参注射液小鼠单次静脉和腹腔注射给药半数致死量分别为3.2 g?kg-1和6.3 g?kg-1.死亡小鼠毒性症状主要表现为俯卧不动、抽搐、呼吸困难、昏迷、尿失禁继而死亡.结论丹参注射液大剂量腹腔和静脉注射可致小鼠全部死亡,但其半数致死量分别为临床用药剂量的65和129倍,安全范围较大.【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2018(037)004【总页数】3页(P201-202,233)【关键词】丹参注射液;单次给药毒性;小鼠;半数致死量【作者】郎彤;戴晓莉;薛云【作者单位】潍坊市第二人民医院,山东潍坊261041;山东省药学科学院,山东济南250100;山东省药学科学院,山东济南250100【正文语种】中文【中图分类】R994.39丹参(Salvia miltiorrhiza)是植物丹参的根茎，性微寒，味苦，是应用已有上千年历史的最常见中药材之一[1]。
丹参具有活血化瘀之功效，丹参注射液属于《国家基本药物目录》中的中药注射剂，临床上主要用于心绞痛、冠心病、心肌梗死、心肌炎以及辅助抗肿瘤等疾病[2－3]。
中药注射液为我国特有的药物品种，临床上应用广泛，但因其成分复杂，其不良反应事件也越来越频发，中药注射液的安全性也越来越受到关注[4]。
因此，为了更好地评估中药注射剂的安全性和有效性，我国启动了中药注射剂再评价工作。
随着临床上应用越来越广泛，丹参注射液的不良反应也经常发生，其主要的不良反应包括变态反应、心动过缓、心动过速、药物性肝炎、腹泻、肌肉震颤及尿毒症等[5－6]。
本实验按照中药注射液再评价的技术规范要求，在药物非临床研究质量管理规范(GLP)条件下对丹参注射液进行了单次给药毒性再评价研究，为其临床应用及不良反应监测提供参考。
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等）
• 死亡情况（死亡时间、濒死前反应等） • 体重变化（给药前、给药期结束各称重一次，观察期间可多次称重，
动物死亡或濒死时称重
• 记录所有死亡情况，出现症状以及症状的起始时间、严重程度、持续 时间、体重变化等 • 进行大体解剖（所有动物），当组织器官出现体积、颜色、质地等改 变时，应进行组织病理学检查
结果分析与评价
• 根据上述观察指标的结果判断受试物引起 的毒性反应性质、严重程度、可恢复性及 安全范围 • 根据毒性可能涉及的部位，综合大体解剖 和组织病理学检查结果，初步判断毒性靶 器官。
试验目的和意义-新药急性毒性强度
动物及给药途径 剧毒 毒 有害
大鼠LD50 ig（mg/kg)
≤25
25-200
200-2000
大鼠或兔经皮LD50 （mg/kg)
≤50
50-400
400-2000
大鼠LC50（mg/L/4h)
≤0.5
0.2-2
2-20
试验目的和意义-相对毒性参数
• • • • 治疗指数TI=LD50/ED50 安全系数SF=LD5/ED95 可靠或确实安全系数CSF=LD1/ED99 LD50/ED50，越大越安全
给药方法
• 动物禁食
– 为减少吸收差异和大容量给药造成急性扩张，小鼠和大鼠至少应停食4-6h，要求一夜停
食（不停水），给药后再禁食3-4h
•
给药途径
– 中药新药除临床给药途径外，一、二类水溶性药应同时采用静脉给药途径，其他如油剂、 混悬剂之类可擦爱用皮下给药途径。腹腔注射在人体极少用，中药粗制剂成分复杂，动 物毒性试验中也尽可能少用，以避免腹腔刺激性的干扰。
• 根据估计，由剂量序列表中找出可能的致死剂 量范围，在此范围内，每间隔一个剂量给一只 动物，测出最低致死剂量和最高非致死剂量， 然后用二者之间的剂量给一只动物，此剂量即 为所要求的近似致死剂量
单次给药毒性试验要求
• 试验动物
– 啮齿类：大鼠或小鼠 – 非啮齿类：犬、猴或其它
• 作为一类创新药物必须用两种动物（啮齿 类和非啮齿类）；其它类酌情用二种动物 • 动物体重：小鼠18-22g，同次体重相差不超 过平均体重20%；大鼠120-150g，同次体重 不超过平均体重20%；犬用成年犬 • 性别：雌雄各半
单次给药毒性试验
单次给药毒性试验 （Single dose toxicity study）
• 定义
– 是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反
应而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或
24小时内多次给予受试药物后，一定时间内所
产生的毒性反应
单次给药毒性试验目的意义
• • • • • 了解新药急性毒性强度 计算新药相对毒性参数 为临床毒副反应监护提供参考依据 为进一步毒性试验选择剂量提供依据 其它方面
– LD50法（1/10，1/50，1/100） – MTD法（1，1/3，1/10)
• 蓄积性毒性剂量设计
– 1/10LD50，然后按等比级数1.5倍逐渐递增
试验目的和意义-为特殊毒性试验剂量选择提供依据
– 生殖毒性试验高剂量为母鼠MTD
– 致突变试验
• 啮齿类动物微核试验高剂量为1/2 LD50 • 精原细胞染色体畸变试验高剂量应为1/2 LD50
• • • • • • • 近似致死量法 最大给药量法 最大耐受量法 固定剂量法 上下（序贯法） 累积剂量法（金字塔法） 半数致死量法
定义
• 最大给药量（MFD）：指动物单次或24小时内多次（2-3次）给药所采用的最 大给药剂量 • 最大耐受量法（Maximal tolerance dose, MTD)：是指动物能够耐受的而不引起 动物死亡的最高剂量；是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量 • 半数致死量（Median lethal dose, LD50）：预期引起50%动物死亡的剂量，该 值是统计学处理推算出的结果 • 单次口服固定剂量法：选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂基本有效量 – ED99肯定有效量
试验目的和意义-为临床毒副反应监护提供参考
• • • • •
中毒症状 起始时间 持续时间 恢复时间 对抗试验为临床急救提供依据
试验目的和意义-为重复给药、蓄毒试 验剂量选择提供依据 • 重复给药毒性剂量设计
– 实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试物后再禁食3-4小时。如无资料证明雄 性动物对受试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。根据受试物的有关资料，
单次给药毒性试验-LD50法
• LD50测定法剂量设计
– 预试验：找出0%及100%估计致死量 – 正式试验：根据预试验药物毒性大小一般在1:0.6-1:0.9范围
– 动物短期致癌试验高剂量应是MTD – 主要药效学剂量限度、安全药理和药代动力学 剂量也要参考急性毒性的LD50
试验目的和意义-其它方面
• 系列化合物的合格率分析（除理化性质为 主外）也参考LD50
• 复方中药物的相互作用，有时也通过拆方 及合用的LD50来判别相互作用的性质
单次给药毒性试验常用试验方法
内设计4-7档剂量
• LD50计算方法
– Bliss法 – 改进寇氏法 – 点斜法
– 简化概率单位法
单次给药毒性试验-最大给药量法
• 最大体积的给药量1次或1日内2-3次给予动 物，以小鼠为例容量一次不超过0.4ml/10g， 多次给药间隔时间不低于4h。
单次给药毒性试验-近似致死剂量法
• 估计可能的毒性范围：根据小动物的毒性试验 结果、受试物的化学结构和其它有关资料，估 计可能引起毒性和死亡的剂量范围 • 按50%递增法，设计出含10-20个剂量序列表
•
各给药途径的容量
– 小鼠一般：0.4-0.5ml/20g，大鼠1ml/100g
– 小鼠最大：口服不超过0.8ml/20g，其他途径不超过0.5ml/20g
– 大鼠最大：口服不超过2ml/100g，其他途径不超过1ml/100g
观察指标
• 临床症状（动物外观、行为、饮食、对刺激的反应、分泌物、排泄物