抗体的选择和保存指南
免疫组化抗体的选择、稀释和保存
免疫组化抗体的选择、稀释和保存
一、选择
选择抗体应先了解其反应谱和适用条件（包括适用切片、稀释度及温育时间等）。
使用一种新抗体时，必须首先摸索出最佳浓度，所谓最佳浓度就是能获得最佳特异反应所需抗原的最低浓度。
或者按照有关说明书的提示。
二、稀释
1.一般用0.01MPBS，PH值7.2；
2.或用0.05MTBS，PH值7.6；
三、保存
合理地保存使用抗体十分重要，这样才能最大限度地发挥抗体的作用，使抗体不致在短期内失去活性。
1. 浓缩型抗体：应先根据厂家提供的效价，将其分类。
可按5ul、10ul、20ul等至100ul为一单位分装入安瓿或0.25ml带盖塑料离心管中，并注明标记（批号、名称、效价、量），密封后放入-20°C ～ -40°C低温冰箱中保存，用时按需用量取出，稀释后置4°C冰箱保存使用，切勿反复冻存，以免效价降低。
2. 即用型抗体可置于4°C冰箱中保存。
远程运送，路途携带，邮寄抗体时，应加冰、干冰、防湿材料，以免影响效价。
衡道医学
知势而为成人达己。
抗体的保存建议
抗体的保存建议：抗体保存得当与否直接决定了抗体的活性和使用效果。
如果抗体保存得当，大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。
请按照说明书或者抗体标签上推荐的保存条件正确保存抗体！无论是保存还是运输，绝对避免反复冻融抗体！1.拿到抗体后请务必在1000-3000转离心1-2分钟后再打开管盖进行分装和保存！（由于运输过程中反复颠簸，管内微量抗体容易聚集在管盖处，一旦直接打开容易流失抗体。
请放心博士德抗体出厂时保证已装入足量。
）2.对于博士德大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃冰箱。
◇分装可以最大程度降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了多次从同一管中吸取抗体造成污染的可能性。
◇分装的量以一次实验用完为好，但建议最少不要少于10μL每份。
分装体积越小，抗体浓度可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响，同时分装次数越多移液吸头吸附的抗体也越多，可能会误认为抗体没有足量装入。
（最好用无菌的进口0.2ML离心管来分装抗体，国产的小管一般没有经过很好的硅化处理，容易吸附抗体蛋白，影响抗体活性。
）◇分装时请将无菌的微量移液器吸头先插入管底部反复吹打几次后再吸出抗体，以便抗体有效成分与抗体保护剂充分混匀。
◇复融后的分装抗体如果一次用不完，请将剩余母液保存在4℃冰箱，避免再冻起来！◇绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱的冷藏室中。
尽量将抗体保存在手动除霜冰箱里面，而不是在冰箱门上。
3.大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是基本没有影响的。
如果抗体很快（1-2周内）就能使用完，推荐在4℃保存，避免反复冻融对抗体活性的损害。
如果要长期保存则分装后-20℃保存。
4.即用型抗体请务必保存在4℃冰箱，一定不能冷冻保存。
5.特殊抗体的保存：◇酶联抗体：一般保存在4℃，尽量避免冷冻起来。
否则可能会导致酶活力的下降或者丧失。
◇偶联抗体：所有偶联抗体需要4℃避光保存。
尤其是荧光标记抗体，对光极为敏感，因此所有实验阶段也是要避光操作的。
rd抗体选择方法
rd抗体选择方法
明确实验需求：首先，需要明确实验的具体需求，例如需要检测的抗原类型、抗体的应用场合（如Western Blot、免疫组化、流式细胞术等）以及所需抗体的特异性和敏感性等。
抗体特异性验证：查看抗体供应商的产品描述和数据表，确保抗体是针对所需抗原特异性制备的，并且经过了验证。
优先选择经过多种验证方法（如免疫印迹、免疫组化、流式细胞术等）证实的抗体。
抗体来源和类型：考虑抗体的来源（如鼠、兔、人等）和类型（如多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体等）。
不同类型的抗体有其各自的优缺点，需要根据实验需求选择合适的抗体。
抗体纯度和批次一致性：抗体的纯度和批次间的一致性对于实验结果至关重要。
选择经过严格质量控制、纯度高的抗体，并尽可能选择同一批次的抗体进行实验。
抗体保存和使用条件：了解抗体的保存条件和使用方法，确保在实验过程中正确保存和使用抗体，避免抗体失活或降解。
参考同行评价和文献：查阅相关文献和同行评价，了解抗体在实际应用中的表现，优先选择经过同行验证、表现良好的抗体。
成本效益分析：在考虑抗体质量的同时，也需要考虑成本效益。
根据实验预算和需要，选择性价比高的抗体。
总之，选择适合的RD抗体需要综合考虑多个方面的因素，并参考可靠的信息和数据。
正确的选择将为实验的成功奠定坚实的基础。
简述抗体的保存方法
简述抗体的保存方法一、简介抗体是免疫系统产生的一种特殊蛋白质，具有识别和结合特定抗原的能力。
在医学研究和临床诊断中，抗体被广泛应用于免疫组化、免疫印记、免疫沉淀等实验中。
为了确保抗体的稳定性和长期保存，合理的保存方法至关重要。
二、抗体的保存条件1. 温度抗体的保存温度是决定其稳定性的重要因素。
一般而言，抗体应保存在-20℃或更低的温度下，可以有效地减缓抗体的降解速度。
对于一些特殊的抗体，如酶标抗体、荧光抗体等，应根据其特性选择适当的保存温度。
2. 冷冻液在保存抗体时，应使用含有保护剂的冷冻液，如甘油、明胶、牛血清白蛋白等。
这些保护剂可以有效地减少抗体的降解和损伤，保持其活性和稳定性。
3. 分装为了避免多次冻融对抗体的影响，应将抗体分装成小份，每份只使用一次。
分装时应注意避免空气接触，以防止氧化和污染。
4. 储存容器抗体的储存容器应选择无毒、无味、耐低温和耐腐蚀的材质，如聚丙烯、聚乙烯等。
此外，储存容器应密封良好，以防止空气和水分进入，影响抗体的稳定性。
5. 防光抗体对光敏感，容易受到光的照射而降解和失活。
因此，在保存抗体时，应将其存放在避光的环境中，如黑暗的冷冻箱或冷藏室。
三、抗体的保存期限抗体的保存期限取决于其质量和保存条件。
一般而言，抗体在-20℃下可以保存6个月至1年，而在更低的温度下，如-80℃，可以保存数年甚至更长时间。
然而，值得注意的是，抗体的保存期限并非一成不变，受到多种因素的影响，如制备工艺、纯度、稀释液、保存温度等。
四、抗体的解冻和使用1. 解冻在使用冷冻保存的抗体之前，应先将其缓慢解冻至室温。
为了避免抗体的损伤，解冻过程中应尽量避免温度的突变和震动。
2. 稀释抗体在使用前需要进行适当的稀释。
稀释液的选择应根据实验需求和抗体的特性进行，一般常用的稀释液有PBS、BSA、TBST等。
3. 使用在实验中使用抗体时，应严格按照实验方案和操作规程进行。
避免抗体与其他试剂或物质的接触，以免干扰实验结果。
多克隆抗体纯化与保存
多克隆抗体纯化与保存
多克隆抗体的纯化和保存是制备高质量抗体的重要步骤。
以下是一些关于多克隆抗体纯化和保存的常见信息：
1. 纯化方法：多克隆抗体通常通过Protein A 或Protein G 的方法从动物血清中纯化抗体。
但是，对于某些使用场景，需要利用抗原亲和层析从总IgG 抗体中进一步纯化和分离抗原特异性抗体，从而获得纯度高、非特异性背景低的多克隆抗体。
2. 保存条件：多克隆抗体可以保存在50% 的丙三醇中，或保存在饱和硫酸铵中，或保存在-20℃。
对于某些特殊抗体，如酶偶联抗体、荧光抗体等，需要保存在4℃或避光保存。
3. 保存时间：多克隆抗体的保存时间取决于其类型和纯度。
一般来说，保存在50% 的丙三醇中的抗体可以保存数年，而保存在-20℃的抗体可以保存更长时间。
4. 保存前的处理：在保存前，需要对多克隆抗体进行适当的处理，例如去除任何可能的蛋白质杂质，并进行适当的稀释，以确保保存的抗体的稳定性和有效性。
总之，多克隆抗体的纯化和保存是制备高质量抗体的重要步骤。
在进行多克隆抗体制备时，应该根据具体情况选择适当的纯化和保存方法，并严格遵守保存条件，以确保抗体的稳定性和有效性。
抗体试剂技术要求
抗体试剂技术要求随着生物医学领域的不断发展，抗体试剂作为一种重要的实验工具，被广泛应用于生物学研究、临床诊断以及药物开发等领域。
抗体试剂技术的要求包括多个方面，下面将从抗体选择、制备与储存、检测与验证等方面进行详细介绍。
抗体的选择是抗体试剂技术的关键步骤之一。
在选择抗体时，需要考虑抗体的特异性、亲和力、稳定性等因素。
特异性是指抗体只能与目标抗原特异性结合，而不与其他非特异性物质结合。
亲和力则是指抗体与抗原结合的强度，亲和力越高，抗体与抗原的结合越紧密。
稳定性是指抗体在不同条件下的保存稳定性，如耐高温、耐酸碱等。
因此，在选择抗体时，需要根据实验需求仔细评估这些因素。
抗体的制备与储存也是抗体试剂技术中不可忽视的环节。
一般来说，抗体的制备包括抗原的制备和免疫动物的免疫过程。
抗原的制备需要注意保持其天然结构和活性，以确保抗体的特异性。
免疫动物的选择则需要考虑其免疫应答能力、抗原的相似性等因素。
制备好的抗体需要正确储存，一般建议在-20℃或更低温度下保存，避免重复冻融。
此外，抗体的储存液应该选择适当的缓冲液，并添加一些保护剂，如蛋白质稳定剂，以增加抗体的稳定性。
抗体试剂技术中的检测与验证也是至关重要的一步。
在使用抗体试剂进行实验前，需要对抗体进行验证，以确保其特异性和敏感性。
常用的验证方法包括免疫印迹、免疫组化、流式细胞术等。
验证抗体时，应使用已知表达目标抗原的样本进行实验，并与负对照样本进行比较。
如果抗体的特异性和敏感性达到实验要求，则可以进行下一步实验。
除了上述内容，还有一些其他方面的要求需要注意。
例如，在实验中使用抗体试剂时，需要注意正确的稀释倍数和操作条件，避免出现误差。
此外，抗体试剂的交叉反应性也需要进行评估，以避免与其他相关物质发生非特异性结合。
最后，抗体试剂的批次一致性也是重要的要求之一，为了保证实验结果的准确性和可重复性，建议在同一批次中使用同一供应商提供的抗体试剂。
抗体试剂技术的要求包括抗体选择、制备与储存、检测与验证等多个方面。
抗体的选择与保存
抗体的选择和保存指南当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。
抗体种类繁多，品牌众多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。
一、怎样选择适合你实验需要的抗体1. 一抗选择要点（1）确定抗体的名字，注意中英文名字、它名、亚型等信息。
（2）确定你的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，还是FACS。
一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证过适用于何种实验的类型，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种实验验证，请根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的抗体。
（3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，还是Rat。
一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种物种实验，请根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。
（4）样本蛋白的结构性质。
了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性，蛋白空间构象的改变，会影响抗体的免疫亲和反应。
（5）单多克隆抗体的选择。
市面上的抗体还是以多克隆抗体为主，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。
2. 二抗选择要点（1）种属来源。
主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）标记物的选择。
有HRP、Biotin、荧光素等标记物。
一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗，以与后面的SP结合反应，而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗，如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。
二、抗体的稳定性1. 抗体的稳定性是自然界长期进化的结果。
抗体的保存
抗体的保存来源：Frdbio丨发布时间： 2019-07-18 17:26:24抗体纯化后，一般将其缓冲液置换成PBS，便于后期标记或其他用途使用，如果浓度太低，需要浓缩,抗体浓缩后浓度最好不要太高，太高容易引起沉淀。
1. 抗体的浓缩1.1 透析袋浓缩将纯化的抗体装入透析袋中，透析袋表面覆满PEG20,000进行浓缩（不要用蔗糖浓缩）。
1.1.2 超滤管浓缩将纯化的抗体转入15 ml的超滤管，3,500rpm离心12min左右（根据要浓缩的体积摸索离心时间）。
2. 抗体浓度测定取适量抗体检测OD280nm的吸光度，读数不要超过2。
如果读数超过2，再稀释，用吸光度读数除以1.35，再乘以稀释倍数即为抗体的大致浓度（mg/ml）。
抗体的浓度（mg/ml）也可以用（OD280nm-0.35×OD495nm）/1.4这个公式计算。
3. 抗体的保存3.1 纯化完的抗体推荐于PBS或者TBS溶液保存，可添加0.1%叠氮化钠防腐剂，但是叠氮化钠可能对下游实验中的辣根过氧化物酶产生抑制作用，作为免疫检测试剂开发的抗体一般使用有机化合物高分子防腐剂，避免对下游酶或者荧光染料的影响，如有需要可联系福因德生物。
3.2 分装成小管，避免污染或者反复冻融，溶解时需要缓慢解冻，不可直接放热水急速解冻。
3.3 存放抗体容器不要选择聚苯乙烯材料，可以选择玻璃或者对蛋白低吸附材料的管子。
3.4 如果抗体要进行后期标记，最好在PBS中保存，不加防腐剂，短期内使用可放4℃，长期存放-20℃保存。
3.5 如果抗体只做免疫学实验，不进行标记可以添加保护剂（1% BSA或海藻糖），还可以加30%～50%甘油，-20℃保存，此保存方法只适合下游直接使用（ELISA，IHC，WB），不适合对其进行标记开发，但其在-20℃不结冰，对抗体效价保存较好，并且使用时也不用反复冻融。
3.6 冻干可以保存更长时间，但是同样要加入很多辅料保护剂，如：海藻糖、BSA，加了保护剂后期开发较难；也可以直接不加辅料保护，直接冻干，但效价损失大。
抗体选择
抗体选择随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。
面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。
当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。
抗体种类繁多，品牌众多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。
一、抗体选择总体原则1. 关于特异性的选择特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。
（1）蛋白特异性针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。
如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。
内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。
磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。
（2）种属特异性同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。
目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。
需要参照说明书注明的可反应种属信息。
一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。
（3）实验方法特异性目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。
具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。
但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是WB、IHC、IF等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。
抗体保存指南(严格遵守)
抗体保存指南收到抗体后请务必在12000rpm离心1-5分钟后再打开管盖进行分装和保存(如果抗体体积小于50ul，请延长离心时间至5分钟，以保证全部抗体均离心下来）！Abcam的抗体使用非常特殊的储存管，只有在12000rpm离心1-5分钟才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。
即使是在10000rpm离心也会导致离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象！对于Abcam大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在 -20℃ or -80℃。
o对绝大多数抗体来说，保存在-20℃是完全足够了。
没有任何证据显示保存在-80℃会有更多的好处！o分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
o分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10ul每份。
因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响o复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4℃，避免再冻起来！o抗体工作液应该当天配制当天用完，在4℃尽量不要超过1天。
o绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。
尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是没有影响的。
如果抗体很快（1-2周）会使用，推荐在4℃保存，这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。
如果要长期保存则最好是在-20℃ or -80℃。
最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体！但是，腹水形式的产品请在收到后立即冻起来！因为该类产品含有大量的蛋白酶，长期在4oC保存会导致抗体的降解！大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1-2周的时间，所以是在4℃的条件下来完成的。
4℃运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻。
这就多了一次冻融的过程）。
所以运输过程中绝对避免干冰运输！特殊抗体的保存条件：∙酶联抗体：永远保存在4℃，避免冻起来。
抗体保存注意事项
抗体保存注意事项抗体保存得当与否，直接决定了抗体的活性和使用效果！如果抗体保存得当，大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。
以abcam 抗体保存方法为主，同样也可以应用到其他绝大部分的抗体产品！1. 收到抗体后请务必在12000rpm 离心1-5min 后再打开管盖进行分装和保存！质优的抗体使用非常特殊的储存管，只有在12000rpm 离心1-5min 才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。
即使是在10000rpm 离心也会导致离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象！2. 对于大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在-20 度or -80 度对绝大多数抗体来说，保存在-20 度是完全足够了。
没有任何证据显示保存在-80度会有更多的好处！(1) 分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
(2) 分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10ul 每份。
因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响(3) 复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4 度，避免再冻起来！(4) 抗体工作液应该当天配制当天用完，在4 度尽量不要超过1 天。
(5) 绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。
尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上3. 大部分抗体收到后4 度短暂保存1-2 周对抗体活性是没有影响的。
如果抗体很快(1-2 周)会使用，推荐在4 度保存，这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。
如果要长期保存则最好是在-20 度or -80 度。
最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体！但是，腹水形式的产品请在收到后立即冻起来！因为该类产品含有大量的蛋白酶，长期在4 度保存会导致抗体的降解！4. 大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1-2 周的时间，所以是在4 度的条件下来完成的。
4 度运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害(如果使用干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻。
抗体的制备与使用指南
抗体的制备与使用指南一、抗体的制备。
1. 免疫原的选择。
- 对于制备抗体，首先要确定合适的免疫原。
如果是针对蛋白质抗原，要保证其纯度尽可能高。
例如，从细胞裂解物中纯化目标蛋白，可以采用亲和层析等方法。
对于小分子半抗原（如药物分子等），通常需要将其与大分子载体蛋白（如牛血清白蛋白）偶联，以增强其免疫原性。
- 免疫原的剂量也很关键。
一般来说，初次免疫时，对于小鼠等小动物，蛋白质抗原的剂量可在10 - 100μg之间，具体剂量需要根据抗原的性质和动物的种类进行优化。
2. 动物的选择与免疫。
- 动物选择。
- 常用的动物有小鼠、大鼠、兔子等。
小鼠因为繁殖快、成本低，是实验室制备单克隆抗体时常用的动物。
兔子则常用于制备多克隆抗体，其血清中抗体产量相对较高。
- 免疫程序。
- 对于小鼠，初次免疫可采用皮下注射或腹腔注射的方式。
以皮下注射为例，可在小鼠背部多点注射免疫原。
初次免疫后，间隔2 - 4周进行加强免疫，加强免疫的剂量可以适当减少，一般为初次免疫剂量的1/2 - 1/3。
经过2 - 3次加强免疫后，可检测动物血清中的抗体效价。
3. 单克隆抗体的制备。
- 细胞融合。
- 在小鼠免疫后，取其脾脏细胞（其中含有产生抗体的B淋巴细胞），与骨髓瘤细胞（如SP2/0细胞系）在聚乙二醇（PEG）的作用下进行融合。
融合后的细胞具有两种细胞的特性，既能产生特异性抗体，又能在体外无限增殖。
- 筛选阳性克隆。
- 利用次黄嘌呤 - 鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）缺陷型的骨髓瘤细胞和HAT （次黄嘌呤 - 氨基蝶呤 - 胸腺嘧啶核苷）选择培养基进行筛选。
在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因为缺乏HGPRT酶而死亡，未融合的脾细胞在体外不能长期存活，只有融合成功的杂交瘤细胞能够生长。
然后通过ELISA等方法筛选出产生特异性抗体的阳性克隆。
- 克隆化培养。
- 对筛选出的阳性克隆进行克隆化培养，常用的方法有限稀释法和软琼脂平板法。
限稀释法是将细胞悬液进行连续稀释，使每个孔中理论上只含有一个细胞，然后培养这些细胞，形成单克隆的细胞集落，从而得到稳定分泌特异性抗体的单克隆细胞系。
关于抗体保存不容错过的知识点
关于抗体保存不容错过的知识点抗体的保存方法一般会直接影响抗体的活性和使用效果。
在保存得当的情况下，大部分抗体可以存放数月甚至数年，一般情况需严格按照抗体说明书来进行保存。
抗体保存温度和条件① 抗体收到后，需在12000rpm离心1~5分钟，再打开管盖进行分装和保存，如果抗体体积不足50 ul，可延长离心时间至 5 分钟，从而确保抗体全部离心下来。
② 对于多数抗体而言，分装成小等份并冻存于-20℃或-80℃是最佳选择。
腹水形式的产品收到后需立即冻存，因为该类产品含有大量的蛋白酶，长期在置于4℃条件会导致抗体的降解。
•分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤，以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。
•小等份只需冻融一次，如有剩余，可将剩余物保存于4℃。
小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。
小等份应不小于10μl；等份越小，储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。
•抗体工作液应该当天配制当天用完，在4℃尽量不要超过1天。
③ 抗体的运输：一般选择4℃运输，避免了反复冻融对抗体活性的损害；如若选择干冰运输，收到抗体是冰冻的，分装时解冻，会增加一次冻融的过程，所以运输过程中尽量避免干冰运输。
特殊抗体保存条件•酶联抗体：保存在4℃，避免冻存以降低或丧失酶活性；•偶联抗体：需保存在棕色管或是用锡箔纸避光于4℃保存，荧光抗体对光敏感，操作时应严格避光；•IgG3的同型对照：保存于4℃避免冻存，反复冻融会导致抗体变性，形成多聚体；抗体保存注意事项① 加入甘油：对于大多数抗体，可加入50%的甘油来避免反复冻融。
甘油在-20℃可降低冰点，但不建议加入甘油的抗体保存于-80℃，该温度已经超过了甘油的冰点；② 加蛋白保护剂：蛋白在高浓度时不易降解，正如有些抗体会加入BSA作为稳定剂的原因，同时加入蛋白也可减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。
但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。
保存抗体指南
抗体保存指南不同类型抗体的保存指南，用以避免抗体污染或损伤请不时核查数据表以获取特定保存建议。
对于未正确保存的抗体，Abcam不予保证。
如果恰当保存和处理，大多数抗体应能保持活性数月乃至数年。
保存温度和条件对于我们的很多抗体而言，分装成小等份并冻存于-20o C 或-80o C 是最佳保存条件。
分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤，以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。
小等份只需冻融一次，如有剩余，可将剩余物保存于4o C. 在收到抗体时，在10,000 × g 下离心20 秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液，并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。
小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。
小等份应不小于10 µl; 等份越小，储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。
在大多数情况下，收到抗体时在4o C 下保存一至两周，然后再冷冻进行长期保存是可接受的，但也许腹水液是例外，它可能包含蛋白酶，因而应该尽快冻存。
同样，遵照数据表上的建议是重要的。
免责条款和其它特别条件：∙酶偶联抗体不应冻存，而应保存于4o C. 冻融不仅影响抗体结合能力，还会降低酶活性。
∙无论偶联至荧光染料、酶还是生物素，偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹. 暴露于光线中将损害偶联物的活性。
特别是荧光偶联物易受到光漂白影响，在实验的所有阶段都应避光。
∙IgG3 同型抗体具有解冻时形成聚集物的独特趋势，应始终保存于4o C.用叠氮化钠防止污染为了防止微生物污染，可将叠氮化钠加入抗体制备品中达到0.02% (w/v). 的终浓度。
很多Abcam抗体已经包含这种防腐剂抗体已经包含这种防腐剂，所用浓度范围为0.02 至0.05%。
这会标示在数据表上标题为“保存缓冲液”的栏目。
不使用叠氮化钠的情形：∙如果用抗体染色或处理活细胞，或如果用抗体进行体内研究，一定要使用不包含叠氮化钠的制备品。
该抗菌剂也对大多数其它生物具有毒性：它阻断细胞色素电子传递系统。
简述抗体的保存方法
简述抗体的保存方法抗体是一种免疫蛋白，用于检测和治疗疾病。
为了确保抗体的有效性和稳定性，正确的保存方法至关重要。
下面将对抗体的保存方法进行详细讨论。
首先，在保存抗体之前，必须确保抗体是在符合质量要求的条件下生产和购买的。
质量好的抗体可能会在保存时表现出更好的稳定性和持久性。
此外，购买抗体时应选择可靠的供应商，并检查抗体的适用性和经过验证的数据。
在保存抗体时，必须将其存放在恰当的温度和环境条件下，以防止蛋白结构的变性和失活。
温度是保存抗体时最重要的因素之一、一般来说，抗体应保存在冷冻温度下，通常是-20℃或更低的温度。
在这种温度下，抗体可以长时间保持其活性。
如果只是短期储存，抗体也可以暂时保存在4℃的冰箱中。
长时间保存抗体时，应将其分装成小的工作用量，并使用无菌技术将其存放在冷冻管中，以防止细菌和其他污染物的侵入。
此外，应避免频繁地从冷冻库中取出抗体，因为反复冻结和解冻可能会影响其稳定性。
光的暴露是导致抗体失去活性的另一个重要因素。
抗体应保存在暗处，以减少紫外线和可见光对抗体的影响。
为此，应使用不透明的冷冻管或保鲜膜来覆盖抗体样品。
在保存抗体过程中，还应避免抗体与其他细胞因子或蛋白质的接触，因为这可能导致抗体的降解或聚集。
因此，在分装抗体时，应格外小心，并避免抗体与硅胶、蛋白质、乳化剂等物质的接触。
此外，在抗体保存过程中，还应密切关注抗体的过期日期。
抗体的过期可能导致活性降低，增加误差，因此需要及时更新抗体。
最后，为了避免冷冻过程中的温度变化，应使用专业的冷冻设备和储存系统，如液氮罐或冷冻干燥机。
综上所述，抗体的保存方法至关重要，以确保其在保存期间保持其活性和稳定性。
正确的保存方法包括存放在冷冻温度下，避免光的暴露，防止抗体与其他物质接触，及时更新过期抗体，并使用专业的冷冻设备和储存系统。
只有这样，才能确保抗体的有效性和可靠性，为科学研究和临床诊断提供可靠的支持。
抗体保存注意事项
抗体保存注意事项抗体保存得当与否，直接决定了抗体的活性和使用效果！如果抗体保存得当，大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。
以abcam 抗体保存方法为主，同样也可以应用到其他绝大部分的抗体产品！1. 收到抗体后请务必在12000rpm 离心1-5min 后再打开管盖进行分装和保存！质优的抗体使用非常特殊的储存管，只有在12000rpm 离心1-5min 才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。
即使是在10000rpm 离心也会导致离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象！2. 对于大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在-20 度or -80 度对绝大多数抗体来说，保存在-20 度是完全足够了。
没有任何证据显示保存在-80度会有更多的好处！(1) 分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
(2) 分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10ul 每份。
因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响(3) 复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4 度，避免再冻起来！(4) 抗体工作液应该当天配制当天用完，在4 度尽量不要超过1 天。
(5) 绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。
尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上3. 大部分抗体收到后4 度短暂保存1-2 周对抗体活性是没有影响的。
如果抗体很快(1-2 周)会使用，推荐在4 度保存，这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。
如果要长期保存则最好是在-20 度or -80 度。
最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体！但是，腹水形式的产品请在收到后立即冻起来！因为该类产品含有大量的蛋白酶，长期在4 度保存会导致抗体的降解！4. 大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1-2 周的时间，所以是在4 度的条件下来完成的。
4 度运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害(如果使用干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻。
如何选择合适的流式抗体
如何选择合适的流式抗体随着流式细胞术应用领域的日益广泛，流式抗体及荧光标记产品的种类、数量也在不断增多，加上多色分析实验方案需求的增长，逐渐产生了抗体难选择、荧光难搭配等问题，给实验顺利开展带来了诸多困扰。
流式抗体如何选择，也成为了流式技术是否能被成功应用的关键因素之一。
如何从众多的流式厂商中筛选出最适合您的抗体，优宁维交给您方法：第一：满足所需抗体的基本要求（抗原、识别种属、能用于流式实验）①目标蛋白特异性：确定目的细胞的特异性表面标记或者胞内标记，确定检测指标；②识别种属：严格按照样本种属来源进行选择，流式抗体基本无法进行种属交叉反应；③可用于流式实验,说明书中明确标注经FC 实验测试，最好有实验数据图和用量说明；在查询抗体时这三要素是抗体查询必需填写项，下面是正确示范案例图1（参考优宁维官网高级查询）流式微信公众号：流式专家或UNIV-FCMsolution图1第二：确定流式细胞仪的配置（激光器+探测器）图2任何发荧光的物质分子都具有这两个特征光谱：第一个是激发光谱（Excitation，Ex）：–是指能特异性地激发某种荧光素的一定波长范围内的光线，也称为吸收光谱。
–吸收波峰（最大吸收波长）。
第二个是Ex-Max 发射光谱（Emission）：–是指某一波长激发光引起荧光素发射的一定波长范围内的荧光。
–发射波峰（最大发射波长）：Em-Max 发射波峰--最大发射波长。
（如图2）那么荧光素跟我们的流式抗体选择有什么关系？在设计流式配色方案前，根据可能需要同时检测指标的多少，先确定需要在哪台流式细胞仪上机检测，对该仪器的参数配置，要了解以下几个方面信息：①激发器：常见的流式细胞仪有 405，488nm 和 635nm 三个激光器，不同流式仪器激光器配置不同，但有些机器在购买时只装了一个激光器，需要注意的是，型号相同的机器也未必激光配置相同;激光器是跟荧光素的激发波长相关，所选择荧光素一定是流式仪器激光激发范围内的。
抗体的储存条件
抗体的储存条件抗体由于性质和所使用的储存条件不同，其存储的“保质期”可能从几周到几年不等。
尽管每个抗体存储的最佳条件是独特的，但我们还是能够总结出一些关于抗体存储建议和一般准则。
抗体的储存时间取决于抗体固有的性质和储存条件。
抗体（尤其是酶）必须存放在适当的温度和pH值范围。
为了维持蛋白质的活性、防止其聚集，经常保存在一定浓度的甘油，蔗糖，或类似的物质里面。
1、低温储存对于抗体的保存至关重要。
一般来说，抗体最好存放在≤4℃的清洁，灭菌的玻璃或塑料管。
贮存在室温下通常会由于微生物的生长导致抗体退化和/或失活。
抗体储存液放在4℃环境中1天或者几周内其活性不会受到明显影响。
另外，抗体中可以加入终浓度为50％的甘油或乙二醇储存于-20℃。
通常我们为了避免反复冻融，可以分装抗体。
我还可以加入抗微生物药物（如叠氮化钠或硫柳汞）以避免微生物的生长。
带有标记的抗体最好存放在终浓度为50％的甘油或乙二醇里并防止在-20℃的环境中。
尽管有些酶结合物可以不加抗冻剂储存在-20℃，但是这些抗体必须分装使用以防止反复冻融，尤其是碱性磷酸酶偶联对冻融特别敏感。
带有标记的抗体通常可以在甘油或乙二醇中于-20℃保存1-2年。
但是，在冷冻保护剂的污染物可能会影响酶的活性。
一些研究人员发现多克隆抗体在血清中于-20℃保存十年其活性损失不大。
然而，一旦抗体被纯化后，储存在50%的甘油中于-20℃保存，即使没有冻融，其活性的损失也可以观察到，尽管其进程仍然非常缓慢。
但许多研究者需要将这些多克隆抗体注射到动物体内，为了避免内毒素的干扰，一般都不加入甘油。
而且大量研究表明：即使没有甘油，只要你不反复冻融，抗体也可以存储在-20℃几年甚至几十年。
另一个重要的事情是，该抗体浓度应高于1毫克/毫升，因为稀的抗体容易失去活性而且容易造成物理吸附导致的损失。
而单克隆抗体可以用两种方式保存：第一，保存在50％的甘油存放于-20℃；第二，也是比较好的方式，将其保存在饱和硫酸铵于4℃或-20℃（4℃更好）保存。
抗体的选择和留存指南
抗体选择指南抗体保存指南抗体说明书样本一抗体选择指南:检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：1.分析或应用的类型2.样本蛋白的结构性质3.样本的种属4.抗体宿主的种类5.抗体的标记和检测1分析试验的应用类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
2 样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑(1)..待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。
如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
(2)样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。
当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来3 样本的物种应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。
免疫组织化学技术中抗体的选择方法和注意事项
免疫组织化学技术中抗体的选择方法和注意事项免疫组织化学技术是一种广泛应用于免疫学和细胞生物学领域的实验技术，它主要依赖于对特定蛋白或抗原进行抗体的选择和使用。
选择合适的抗体对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将就免疫组织化学技术中抗体的选择方法和注意事项进行详细介绍。
一、抗体的选择方法1. 确定研究目标：在选择抗体之前，首先需要明确研究的目标是什么，需要检测的蛋白或抗原是什么。
根据研究的目标确定所需的抗体种类和特异性。
2. 确认抗原的性质：对于欲检测的抗原，需要确认其组织定位和表达水平，以便选择合适的抗体。
如果已知抗原的性质，比如分子量、糖基修饰等，可以直接搜索或定制相应的抗体。
3. 参考文献和数据库：在选择抗体时，可以通过文献和数据库检索已有的相关研究成果，了解不同抗体的性能和应用情况，以便做出更加合理的选择。
4. 质控信息：选择抗体时需要考虑其质量控制信息，包括生产厂家、批号、适用应用、稀释比例、保存条件等，确保选用的抗体质量可靠。
5. 进行验证实验：在选择抗体之后，需要进行验证实验，比如免疫印迹、免疫组化等，以确定抗体的特异性和敏感性。
二、注意事项1. 特异性：选择抗体时需要确保其对目标抗原具有特异性。
常规的方法包括免疫印迹、免疫组化、免疫沉淀等实验来验证抗体的特异性。
2. 敏感性：抗体的敏感性对于检测低表达水平的抗原至关重要。
需要选择具有较高灵敏度的抗体，确保能够检测到目标抗原的微量表达。
3. 交叉反应：避免选择具有较高的非特异性或交叉反应的抗体，以免对实验结果造成干扰。
4. 应用范围：在选择抗体时需要考虑其适用的应用范围，比如免疫印迹、免疫组化、流式细胞术等，确保选用的抗体符合实验需求。
5. 存储条件：选用抗体后需要严格按照生产厂家提供的存储条件进行保存，以确保抗体的稳定性和活性。
在免疫组织化学技术中，抗体的选择对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
通过上述所述的选择方法和注意事项，科研工作者可以更加科学合理地选择适合的抗体，并在实验中取得更加可靠和准确的结果。
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抗体选择指南抗体保存指南抗体说明书样本一抗体选择指南:检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：1. 分析或应用的类型2. 样本蛋白的结构性质3. 样本的种属4. 抗体宿主的种类5. 抗体的标记和检测1分析试验的应用类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
2 样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑(1)..待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。
如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
(2)样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。
当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来3 样本的物种应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。
4 一抗宿主物种的选择一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，最好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。
如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG的细胞裂解物样本的western blotting检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgG，在western blot检测中则结合出现IgG分子50 and 25 kDa的重链和轻链条带。
5 二抗的选择二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。
建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用，二抗一般连接荧光素FITC或发光团。
6 双重染色抗体的选择用未偶联一抗进行细胞培养物或组织切片的双重免疫染色要求一抗来源于不同物种并且二抗分别识别其中之一，二抗说明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。
7荧光和化学发光标记连接于二抗的标记物是为了检测抗体的结合，选择标记物依赖于几个参数：检测方法：荧光或着色沉淀，荧光标记物用特殊波长的光激发时发射出可见光，下表列出了几种荧光素的分子特征：荧光素颜色激发波发射波长分子量Aminomethylcoumarin (AMCA) Blue 353 440 410Fluorescein (FITC) Green 495 528 390Fluorescein (DTAF) Green 495 528 530Rhodamine (TRITC) Red 550 570 444Texas Redtm Red 596 620 625Cy2tm Green 489 505 897Cy3tm Orange 552 565 949Cy3.5tm Scarlet 581 596 1,286Cy5tm Far-Red 650 667 975Cy5.5tm Near Infra-Red 678 703 1,312Cy7tm Near Infra-Red 743 767 1,001R-Phycoerythrin (RPE) Red 488 575 240,000B-Phycoerythrin (BPE) Red 545 575 240,000C-Phycocyanin Red 618 640 110,000R-Phycocyanin Red 615 620 110,000二抗连接标记酶HRP and AP与其底物产生有颜色的沉淀物辣根过氧化物酶Horseradish peroxidase (HRP)碱性磷酸酶Alkaline phosphatase (AP)AEC (red) Fast red (pink)DAB (brown) INT (yellow / brown)NBT (brown / purple)New Fuchsin (red)TNBT (purple)Vega red (pink)封片介质（仅免疫组化）. AEC, Fast Red, INT 或其它水性发光基团是可以醇溶的并要求水性封片. 除上述之外的发光基团是有机的所以最好使用有机性封片介质。
荧光素标记物要求水性封片介质，藻红蛋白(藻青素/ 藻红素要求不添加甘油的水性封片介质，因其有淬灭荧光的效应，生物素化的抗体通常用于加强亲和素-生物素-酶或荧光素复合物（ABC试剂或亲和素或链霉亲和素连接酶或荧光素的信号）抗体保存指南抗体保存得当与否，直接决定了抗体的活性和使用效果！如果抗体保存得当，大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。
本指南以abcam抗体保存方法为主，同样也可以应用到其他绝大部分公司的抗体产品！请谨记！无论何时请按照说明书推荐的保存条件正确保存抗体！1. 收到抗体后请务必在12000rpm离心20-30s后再打开管盖进行分装和保存！质优的抗体使用非常特殊的储存管，只有在12000rpm离心20-30s才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。
即使是在10000rpm离心也会导致离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象！∙对于大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在-20度or -80度对绝大多数抗体来说，保存在-20度是完全足够了。
没有任何证据显示保存在-80度会有更多的好处，∙分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10ul每份。
因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4度，避免再冻起来！抗体工作液应该当天配制当天用完，在4度尽量不要超过1天。
绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。
尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上3. 大部分抗体收到后4度短暂保存1-2周对抗体活性是没有影响的。
如果抗体很快（1-2周）会使用，推荐在4度保存，这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。
如果要长期保存则最好是在-20度or -80度。
最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体！但是，腹水形式的产品请在收到后立即冻起来！因为该类产品含有大量的蛋白酶，长期在4度保存会导致抗体的降解！4. 大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1-2周的时间，所以是在4度的条件下来完成的。
4度运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻。
这就多了一次冻融的过程）。
所以运输过程中绝对避免干冰运输！特殊抗体的保存条件：6. 酶联抗体：永远保存在4度，避免冻起来。
否则会导致酶活性的下降或者丧失7. 偶联抗体：所有偶联抗体都是在棕色管中或使用锡箔纸避光保存。
尤其是荧光抗体，对光极为敏感，因此在所有的实验阶段也是要避光操作的！8. IgG3的同型对照：永远保存在4度，避免冻起来。
因为如果出现冻融过程，该抗体非常容易形成多聚体无论是保存还是运输，绝对避免反复冻融！反复冻融会导致抗体变性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力！抗体保存其它相关信息：关于加入甘油保存：有些人会加50%的甘油到抗体中来避免反复冻融，甘油在-20度会降低冰点。
这对很多抗体可能是可行的。
但是abcam仅对非常小的一部分抗体检测过其在这种条件下的稳定性；而abcam只对按照推荐条件保存的抗体提供质量保证！加入甘油的溶液不建议在-80度保存，因为这已经超过了甘油的冰点。
如果您要加入甘油来保存抗体的话，请谨慎注意无菌操作，避免污染！关于蛋白保护剂：蛋白在高浓度时更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），这就是为什么在抗体中加入BSA之类作为稳定剂的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。
但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。
关于叠氮化钠（sodium azide）的使用：为了防止微生物污染，叠氮化钠经常被加入到抗体中（终浓度0.02% (w/v)）。
Abcam的很多抗体已经含有了0.02％-0.05%的叠氮化钠，在说明书的“Storage buffer”中有标明的。
在下述情况中不能使用叠氮化钠：∙如果抗体用于染色或处理活细胞，用于体内研究：叠氮化钠在抵抗微生物的同时，对其它大部分有机物也是有毒的，因为它阻断了线粒体的cytochrome electron transport system.∙要偶联带有氨基基团的抗体：叠氮化钠会干扰任何含有氨基基团的偶联，因此在进行偶联之前，应将叠氮化钠去除。
偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存，但是浓度只能是0.01％。
对于需要偶联的抗体，thimerosal (merthiolate)可以替代叠氮化钠作为保护剂！注：叠氮化钠的去除方式：可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除！IgG的分子量是150kDa (IgM 是~ 600kDa); 叠氮化钠的分子量只有65Da。
使用cut off 14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除抗体说明书样本Product Name NFkB p105 / p50 antibody [E381] (注:E381是指克隆号)Product type Primary antibodiesDescription Rabbit monoclonal [E381] to NFkB p105 / p50Immunogen A synthetic peptide corresponding to residues in the nuclear factor NFkB p50 subunit.Reacts with Hu, Ms, Rat (注:人小鼠大鼠)Specificity This antibody will detect both forms: p50 and p105.Tested applications Flow Cyt, ICC, IHC-P, WB(流式细胞分析免疫细胞化学免疫组织化学-石蜡包埋westernbloting)Application notes Recommended dilutionsFlow Cyt: 1/30.ICC: 1/250 - 1/500.IHC-P: 1/250 - 1/500.WB: 1/5000. Detects bands of approximately 50 and 105 kDa (predicted molecularweight: 50 and 105 kDa).Is unsuitable for IP.Not yet tested in other applications.Optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.Positive control HeLa cell lysate; human prostate carcinomaCellular localization Nuclear, but also found in the cytoplasm in an inactive form complexed to an inhibitor (Ikappa B).Research areas Cancer>>Signal transduction>>Nuclear signaling>>NFkB pathwayChromatin>>Transcription>>Transcription FactorsNuclear Signaling>>Nuclear Signaling Pathways>>NFkB pathwayNuclear Signaling>>Transcription>>Other factorsCell Biology>>Signal Transduction>>Nuclear Signaling>>NFkB PathwayImmunology>>Innate Immunity>>Macrophage / Inflamm.Cell Biology>>Apoptosis>>Intracellular>>NFkB>>p50Relevance NFkB is a transcription regulator that is activated by various intra and extra cellular stimulisuch as cytokines, oxidant free radicals, ultraviolet irradiation, and bacterial or viralproducts. NFkB is a family of transcription factors that consists of homo and heterodimersof NFkB1/p50 and RelA/p65 subunits, and controls a variety of cellular events includingdevelopment and immune responses. All members share a conserved amino terminusdomain that includes dimerization, nuclear localization, and DNA binding regions, and acarboxy terminal transactivation domain. Serines 529 and 536 in the transactivationdomain of RelA/p65 are phosphorylated in response to several stimuli including phorbolester, IL1 alpha and TNF alpha as mediated by IkB kinase and p38 MAPK. Serine 529 islocated in a negatively charged region (amino acids 422-540) that is phosphorylated in response to phorbol myristate acetate plus calcium ionophore activation. Phosphorylation of serines 529 and 536 is critical for RelA/p65 transcriptional activity. Activated NFkB translocates into the nucleus and stimulates the expression of genes involved in a wide variety of biological functions. Inappropriate activation of NFkB has been associated with a number of inflammatory diseases while persistent inhibition of NFkB leads to inappropriate immune cell development or delayed cell growth.Alternative names for NFkB p105 / p50 antibody [E381] (ab32360) Database linksThe links below go to external sites and will open in a new browser windowEntrez Gene4790 (Human) 18033 (Mouse) 81736 (Rat)GeneCard G C04P103880 (Human) Omim164011 (Human)SwissProt P 19838 (Human)P25799 (Mouse) Q63369 (Rat)Unigene 431926 (Human) Raised in Rabbit Clonality Monoclonal Clone number E381 Isotype IgGPurity Protein A purifiedStorage bufferPreservative: 0.01% Sodium AzideConstituents: 40% Glycerol, 0.05% BSA, 0.15M Sodium chloride, 50mM Tris glycine. pH 7.4Material safety datasheets (MSDS) for this product:FormLiquidStorage instructionsShipped at 4°C. Upon delivery aliquot and store at -20°C. Avoid freeze / thaw cycles.。