抗体保存知多少

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抗体基础知识

抗体基础知识
安徽理工大学医学院
School of Medicine
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第 次课
授课时间 年 月 日
课程名称 免疫学检验 年 级
教师
张荣波
专业技术 职务
教案完成时间: 年 月 日
专业、层次
医学检验(本科)
授课方式 (大、小)
大 学时 4
授课题目(章、节)
第四章 单克隆抗体与基因工程抗体节 杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞后同时保持两者的主要特 征。当两个细胞紧密接触时候,其细胞膜可能融合在一起。融合细胞含有 两个不同的细胞核,称为异核体(heterokaryon),产生具有原来两个细胞
基因信息的单个核细胞,称为杂交细胞(hybid cell),包括 B 淋巴细胞杂 交细胞和 T 淋巴细胞杂交细胞。
3
辅助手段和时间 分配备注
基本内容
第三节 基因工程抗体技术 随着基因工程技术的崛起以及抗体分子遗传学的深入研究,应用基因 工程抗体改造现有优良的鼠单克隆抗体的基因,尽量减少抗体中的鼠源成 分,保留原有的抗体特异性,从而创造出新型抗体.基因工程抗体。 一、人源化抗体 人源化抗体以基因克隆及 DNA 重组技术改造将鼠源性单克隆抗体使其 大部分氨基酸序列为人源序列所取代,既保留了亲本鼠克隆抗体的亲合力 和特异性,又降低了鼠单克隆抗体的异源性。 (一)人一鼠嵌合抗体 人一鼠嵌合抗体是通过基因工程技术将人 IgC 区与鼠 IgV 区连接,导 入细胞内表达制备的抗体称为嵌合抗体。人一鼠嵌合抗体的特异性及亲合 力与亲本鼠单克隆抗体等同,但在人体内的半衰期可明显延长。 (二)抗体的表面修饰 通过改变 Ig 可变区表面残基使其人源化,降低鼠可变区的异源性。将 亲本鼠单克隆抗体 Fv 段表面暴露的骨架区中与人不同者改为人源性,使 Fv 的表面人源化,消除其免疫原而不影响 Fv 的整体空间构象。 二、小分子抗体 将抗体分子的抗原结合部位组建成分子量较小,但具有抗原结合功能 的分子片段,称为小分子抗蠢小分子抗体具有以下特点:可在大肠杆菌等 原核细胞表达生产成本降低;易于穿透血管或组织到脚胞部位,有利于疾 病的治疗;不含 Fc 段,副作用小;半衰期短,有利于毒素中和及清除。其 包括: (一)Fab 由一条完整的 L 链和一条约 1/2 的 H 链组成,只有一个抗原结合位点。 (二)Fv 和单链抗体(ScFv) Fv 由 VH 和 VL 构成,是抗体分子中保留抗原结合部位的最小功能片段。 把 VH 和 VL 用一段适当的寡核苷酸分子连接起来,使之表达为单一的肽链, 称为 ScFv。 (三)单区抗体及最小识别单位 单独重链可变区(VH)仍可保留相当程度抗原结合能力,其作用比 VL 大,称为单区抗体。

抗体制备理论知识

抗体制备理论知识

一、抗体制备相关概念概述(一)多克隆抗体的概念抗原刺激机体,产生免疫学反应,由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白,这就是免疫球蛋白,这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。

抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由一种抗原决定簇刺激机体,由一个B 淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体(Monclone antibody)。

由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗体就是多克隆抗体;除了抗原决定簇的多样性以外,同样一类抗原决定簇,也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE 和IgD 等五类抗体。

(二)免疫动物供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类,常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠及小鼠等。

动物的选择常根据抗体的用途和量来决定,也与抗原的性质有关。

如要获得大量的抗体,多采用大动物;如要是获得直接标记诊断的抗体,则直接采用本动物;如要获得间接的标记诊断用抗体,则必须用异源动物制备抗体;如果难以获得的抗原,且抗体的需要量少,则可以采用纯系小鼠制备;一般实验室采用的抗体,多用兔和羊制备。

免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物,雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适,有时甚至不产生抗体。

由于对免疫应答的个别差异,免疫时应同时选用数只动物进行免疫。

抗原是多种多样的,而且千差万别。

就其化学成分而言,有蛋白质抗原、类脂抗原、多糖类抗原和核酸抗原等。

就抗原性而言,有完全抗原和不完全抗原。

为了获得较好的抗血清,最好是选用蛋白质抗原,如要制备用于筛选细菌表达的cDNA 文库或免疫印迹的抗血清,最好选用可降解的蛋白质抗原。

不同的抗原,其免疫原性的强弱均不相同,这种免疫原性的强弱取决于抗原的分子量、化学活性基团、立体结构、物理形状和弥散速度等。

抗原的免疫剂量是依照给予动物的种类、免疫周期以及所要求的抗体特性等不同而不同。

抗体的知识

抗体的知识

抗体的知识嘿,咱今儿来聊聊抗体这玩意儿!你说抗体像不像咱身体里的小卫士呀?它们可厉害着呢!咱每天在这大千世界里,到处都是各种各样的细菌、病毒啥的,就跟那敌军似的,老想着来侵犯咱。

可咱身体也不傻呀,这时候抗体就闪亮登场啦!抗体就好比是经过专门训练的特种兵,它们对那些坏家伙的特征那是了如指掌。

一旦有外敌入侵,抗体能迅速识别出来,然后紧紧地抱住它们,让它们没法捣乱。

这就好像是小卫士们齐心协力抓住了坏人,让他们不能再为非作歹。

你想想看,要是没有抗体,那咱的身体还不得被这些病菌闹得乱七八糟呀!说不定一个小感冒就能把咱给撂倒咯。

但是有了抗体在,咱就多了一层坚实的保护盾呀。

有时候咱生病打针、吃药,这其实也是在帮助咱的身体产生更多的抗体呢。

就像是给小卫士们提供了更厉害的武器和训练,让他们能更好地对抗敌人。

而且呀,抗体还挺聪明的。

它们可不是那种死板的卫士,它们会根据不同的敌人来调整自己的战术。

比如说这次遇到了一种新的病菌,抗体们就会赶紧研究它的弱点,然后想办法去对付它。

这是不是很神奇呀?咱的身体里可是有着一个庞大的抗体军团呢!它们时刻都在为咱的健康奋战。

你说咱是不是得好好爱护自己的身体,让这些小卫士们能更有干劲呀?咱可别老是熬夜、乱吃东西啥的,那不是给抗体们添乱嘛!咱得让抗体们知道,咱也在和它们一起努力,保持健康的生活方式,这样它们才能更好地保护咱呀!你说是不是这个理儿?所以呀,咱都要对自己的身体好一点,让抗体们能安心地守护咱。

别小看了这些小小的抗体,它们可是咱健康的大功臣呢!它们在咱身体里默默地工作着,为咱抵御着各种疾病的侵袭。

咱可得好好珍惜它们,和它们一起让咱的身体棒棒哒!。

抗体生物知识点高中总结

抗体生物知识点高中总结

抗体生物知识点高中总结抗体是一类具有抗原特异性的球蛋白分子,是免疫系统中的重要成分,通过与抗原结合来识别和清除外来病原体或异常细胞。

在高中生物课程中,抗体是一个重要的知识点,对于理解免疫系统和免疫反应具有重要意义。

本文将从抗体的结构、功能和应用等方面进行总结。

一、抗体的结构抗体的结构是由免疫球蛋白分子构成的。

免疫球蛋白分子是一种由重链和轻链组成的蛋白质,分为五个类型,分别是IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。

每个抗体分子由两个重链和两个轻链组成,形成Y字型的结构。

抗体的结构由可变区和恒定区组成,可变区决定了抗体对抗原的特异性,而恒定区则决定了抗体的功能。

二、抗体的功能1. 识别和结合抗原:抗体通过其可变区的抗原结合部位可以识别和结合不同的抗原分子,实现对外来病原体或异常细胞的识别。

2. 中和病原体:抗体与病原体结合后,可以中和其毒性,阻止其侵入宿主细胞,从而保护宿主免受感染。

3. 激活补体系统:抗体与抗原结合后,可以激活补体系统,从而引起细胞溶解、炎症反应等机体免疫反应。

4. 促进巨噬细胞的吞噬作用:抗体与病原体结合后,可以促进巨噬细胞的吞噬作用,加强清除病原体的效果。

5. 诱导细胞毒性:某些抗体还可以诱导细胞毒性,使免疫细胞对感染的细胞进行攻击。

三、抗体的应用1. 临床诊断:抗体可以作为检测手段,用于临床诊断。

例如,通过检测特定抗体的水平来判断是否感染某种病原体。

2. 免疫治疗:利用抗体对特定抗原的识别和结合能力,可以开发抗体药物,用于治疗某些疾病。

例如,单克隆抗体药物在癌症、炎症性疾病等领域具有重要应用。

3. 免疫预防:通过接种疫苗来诱导机体产生特定抗体,从而达到免疫预防的目的。

4. 免疫相关疾病治疗:某些免疫相关疾病可以通过调节抗体水平或中和特定抗体来进行治疗。

5. 生物学研究:抗体可以用作生物学研究的工具,例如,通过特定抗体的识别,可以对蛋白质、细胞等进行定位和检测。

四、抗体的产生与调节抗体的产生受到机体免疫系统的调节。

抗体相关基本知识

抗体相关基本知识

抗体相关基本知识抗体相关基本知识抗体(antibody)是⽣物体在抗原物质刺激下,由B细胞分化成的浆细胞所产⽣的、可与相应抗原发⽣特异性结合反应的免疫球蛋⽩(Ig)。

按抗体的来源,可将其分为天然抗体和⼈⼯制备的抗体,是通过对特定⽣物体免疫接种特定抗原物质后⽽获得。

⼈⼯免疫动物制备的抗体应⽤甚为⼴泛,既可以⽤于科学研究,也可以⽤于疾病的预防、诊断和治疗。

体⼀、抗体的基本结构的基本结构经x线晶体衍射结构分析发现,抗体Ig由四条多肽链组成,各肽链之间由数量不等的链间⼆硫键连接。

Ig可形成“Y”字型结构,称为I g 单体,是构成抗体的基本单位。

(⼀)重链和轻链天然Ig分⼦含有四条异源性多肽链,其中,分⼦量较⼤的两条链称为重链(heavy chain,H),⽽分⼦量较⼩的两条链称为轻链(Light chain,L)。

同⼀Ig分⼦中的两条H链和两条L链的氨基酸组成完全相同。

1.重链分⼦量为50000~75000,由450~550个氨基酸残基组成。

重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同,其抗原性也不同。

据此,可将抗体Ig分为5类(class),即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE,其相应的重链分别为µ链、δ链、γ链、α链和ε链,商品化的抗体绝⼤部分都是IgG。

不同类的Ig具有不同的特征,如链内和链间⼆硫键的数量和位置、结构域的数量及铰链区的长度等均不完全相同。

即使是同⼀类的Ig,其铰链区氨基酸组成和重链⼆硫键的数量、位置也不同,据此⼜可将同类Ig分为不同的亚类(subclass)。

IgG的亚类利⽤不同种属动物制备的IgG存在不同的亚类,常见的不同种属IgG亚类如下:兔:IgG(⽆亚类)⼩⿏:IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG2c,IgG3⼤⿏:IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG2c,IgM⼭⽺:IgG1,IgG2在进⾏某些抗体相关实验(如IF和FCM)的时候,我们常常需要仔细看⼀下所订购商品化抗体的IgG亚类,以⽅便我们选择同型对照(isotype control)IgG(即与⽬的蛋⽩抗体相同来源种属的相同类型正常IgG)作为抗体的阴性对照进⾏平⾏实验,以排除可能的⾮特异性染⾊结果。

抗体的保存建议

抗体的保存建议

抗体的保存建议:抗体保存得当与否直接决定了抗体的活性和使用效果。

如果抗体保存得当,大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。

请按照说明书或者抗体标签上推荐的保存条件正确保存抗体!无论是保存还是运输,绝对避免反复冻融抗体!1.拿到抗体后请务必在1000-3000转离心1-2分钟后再打开管盖进行分装和保存!(由于运输过程中反复颠簸,管内微量抗体容易聚集在管盖处,一旦直接打开容易流失抗体。

请放心博士德抗体出厂时保证已装入足量。

)2.对于博士德大部分抗体,比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃冰箱。

◇分装可以最大程度降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了多次从同一管中吸取抗体造成污染的可能性。

◇分装的量以一次实验用完为好,但建议最少不要少于10μL每份。

分装体积越小,抗体浓度可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响,同时分装次数越多移液吸头吸附的抗体也越多,可能会误认为抗体没有足量装入。

(最好用无菌的进口0.2ML离心管来分装抗体,国产的小管一般没有经过很好的硅化处理,容易吸附抗体蛋白,影响抗体活性。

)◇分装时请将无菌的微量移液器吸头先插入管底部反复吹打几次后再吸出抗体,以便抗体有效成分与抗体保护剂充分混匀。

◇复融后的分装抗体如果一次用不完,请将剩余母液保存在4℃冰箱,避免再冻起来!◇绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱的冷藏室中。

尽量将抗体保存在手动除霜冰箱里面,而不是在冰箱门上。

3.大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是基本没有影响的。

如果抗体很快(1-2周内)就能使用完,推荐在4℃保存,避免反复冻融对抗体活性的损害。

如果要长期保存则分装后-20℃保存。

4.即用型抗体请务必保存在4℃冰箱,一定不能冷冻保存。

5.特殊抗体的保存:◇酶联抗体:一般保存在4℃,尽量避免冷冻起来。

否则可能会导致酶活力的下降或者丧失。

◇偶联抗体:所有偶联抗体需要4℃避光保存。

尤其是荧光标记抗体,对光极为敏感,因此所有实验阶段也是要避光操作的。

ELISA知识简介

ELISA知识简介
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图3 甲型肝炎病人血清中IgG抗体和IgM 抗 体出现的时间和水平。
每一系B细胞只产生针对某一抗原决定簇的抗体。如将多 种抗原或含有多个抗原决定簇的抗原注入机体,将由多系 的B细胞产生相应的多种抗体,这些抗体均存在于免疫血 清中。
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免疫测定中所用的抗血清一般用抗原免疫兔、羊或马制 得。产生抗体的B细胞可在体外与繁殖力强的肿瘤细胞融 合成杂交瘤细胞。将单个杂交瘤细胞分离,在体内或体外 培养而分泌的抗体单克隆抗体monoclonal antibody, McAb或Mab)。单克隆抗体仅针对一种抗原决定簇,具 有很高的特异性。单克隆抗体通常用抗原免疫小鼠制备。 将免疫的脾细胞(含产生抗体的B细胞)与小鼠肿瘤细胞 融合,分离杂交瘤细胞,接种于小鼠腹腔,产生的腹水中 含有浓度很高的单克隆抗体。
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1.3.2 最适比例
在恒定量的抗体中加入递增量的抗原形成抗体复合物. 抗原抗体比例最合适的范围,称为等价带(zone of quivalence)。在等价带前后分别为抗体过剩带和抗原过剩带 。 如果抗原或抗体极度过剩,则无沉淀物形成,在免疫测定中 称为带现象(zone nomenon)。抗体过量称为前带( prezone),抗原地过量称为后带(postzone)。在用免疫 学方法测定抗原时,应使反应系统中有足够的抗体量,否则 测得的量会小于实际含量,甚至出现假阴性。
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1.3 抗原抗体反应
1.3.1 可逆性
抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态 平衡,其反应式为:
Ag+Ab→Ag·Ab
抗体的亲和力(affinity)是抗原抗体间的固有结合力, 可以用平衡常数K表示:K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab]

简述抗体的保存方法

简述抗体的保存方法

简述抗体的保存方法一、简介抗体是免疫系统产生的一种特殊蛋白质,具有识别和结合特定抗原的能力。

在医学研究和临床诊断中,抗体被广泛应用于免疫组化、免疫印记、免疫沉淀等实验中。

为了确保抗体的稳定性和长期保存,合理的保存方法至关重要。

二、抗体的保存条件1. 温度抗体的保存温度是决定其稳定性的重要因素。

一般而言,抗体应保存在-20℃或更低的温度下,可以有效地减缓抗体的降解速度。

对于一些特殊的抗体,如酶标抗体、荧光抗体等,应根据其特性选择适当的保存温度。

2. 冷冻液在保存抗体时,应使用含有保护剂的冷冻液,如甘油、明胶、牛血清白蛋白等。

这些保护剂可以有效地减少抗体的降解和损伤,保持其活性和稳定性。

3. 分装为了避免多次冻融对抗体的影响,应将抗体分装成小份,每份只使用一次。

分装时应注意避免空气接触,以防止氧化和污染。

4. 储存容器抗体的储存容器应选择无毒、无味、耐低温和耐腐蚀的材质,如聚丙烯、聚乙烯等。

此外,储存容器应密封良好,以防止空气和水分进入,影响抗体的稳定性。

5. 防光抗体对光敏感,容易受到光的照射而降解和失活。

因此,在保存抗体时,应将其存放在避光的环境中,如黑暗的冷冻箱或冷藏室。

三、抗体的保存期限抗体的保存期限取决于其质量和保存条件。

一般而言,抗体在-20℃下可以保存6个月至1年,而在更低的温度下,如-80℃,可以保存数年甚至更长时间。

然而,值得注意的是,抗体的保存期限并非一成不变,受到多种因素的影响,如制备工艺、纯度、稀释液、保存温度等。

四、抗体的解冻和使用1. 解冻在使用冷冻保存的抗体之前,应先将其缓慢解冻至室温。

为了避免抗体的损伤,解冻过程中应尽量避免温度的突变和震动。

2. 稀释抗体在使用前需要进行适当的稀释。

稀释液的选择应根据实验需求和抗体的特性进行,一般常用的稀释液有PBS、BSA、TBST等。

3. 使用在实验中使用抗体时,应严格按照实验方案和操作规程进行。

避免抗体与其他试剂或物质的接触,以免干扰实验结果。

初中抗体知识点总结

初中抗体知识点总结

初中抗体知识点总结一、抗体的结构人体内的抗体主要由两类重链和两类轻链组成,形成四股链的Y型结构,每个Y型结构的末端有一个可以与抗原结合的抗原结合位点。

抗体的结构决定了它的功能,包括结合病原体、启动免疫反应、清除有害物质等。

二、抗体的功能1. 结合病原体:抗体可以特异性地识别和结合病原体表面的抗原,从而标记病原体并直接清除它们;2. 激活免疫细胞:抗体可以识别并结合免疫细胞上的受体,激活免疫细胞发起免疫反应;3. 中和毒素:某些抗体可以结合和中和毒素,阻止其对细胞的伤害;4. 促进炎症反应:抗体可以激活补体系统,促进炎症反应,加强免疫反应的效果;5. 提供免疫记忆:一旦人体接触过某种病原体,相应的抗体将被保存在体内,待下次再次接触同种病原体时,能够更快速地产生免疫应答。

三、抗体的产生B细胞是产生抗体的主要细胞,它们在免疫应答中扮演关键角色。

在免疫应答开始时,B 细胞可以通过多种途径接触和识别外源抗原,诱导其活化并产生特异性抗体。

B细胞分化为浆细胞后,便可以产生大量的抗体并释放到体液中,发挥免疫作用。

四、抗体的类别在人体内,存在多种类型的抗体,包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM等,每种类型的抗体在体内发挥着不同的免疫功能。

例如,IgG是在体内浓度最高的抗体,它可以穿透胎盘,提供母胎免疫和早期免疫;IgA则主要存在于黏膜表面,起到清除黏膜内病原体的作用;IgE主要参与过敏反应等。

五、抗体在疾病诊断和治疗中的应用1. 临床诊断:检查患者血液中特定类型抗体的浓度,可以判断其是否感染了某种病原体,对某些自身免疫性疾病的诊断也很有帮助;2. 药物治疗:一些药物是通过模拟抗体的作用来治疗疾病的,例如单克隆抗体;3. 免疫接种:通过接种疫苗,人体可以产生针对特定病原体的抗体,从而在将来与该病原体再次接触时,迅速产生免疫应答。

六、抗体治疗抗体治疗是一种利用外源性抗体来治疗疾病的方法,它通常包括单克隆抗体和多克隆抗体两种类型。

抗体保存指南(严格遵守)

抗体保存指南(严格遵守)

抗体保存指南收到抗体后请务必在12000rpm离心1-5分钟后再打开管盖进行分装和保存(如果抗体体积小于50ul,请延长离心时间至5分钟,以保证全部抗体均离心下来)!Abcam的抗体使用非常特殊的储存管,只有在12000rpm离心1-5分钟才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。

即使是在10000rpm离心也会导致离心不完全,导致出现抗体的量不足的现象!对于Abcam大部分抗体,比较合适的保存方式是分装后保存在 -20℃ or -80℃。

o对绝大多数抗体来说,保存在-20℃是完全足够了。

没有任何证据显示保存在-80℃会有更多的好处!o分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。

o分装的量以一次实验用完为好,最少不能少于10ul每份。

因为分装体积越小,抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响o复融后的分装抗体如果一次用不完,将剩余母液保存在4℃,避免再冻起来!o抗体工作液应该当天配制当天用完,在4℃尽量不要超过1天。

o绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。

尽量将抗体保存在冰箱里层,而不是门上大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是没有影响的。

如果抗体很快(1-2周)会使用,推荐在4℃保存,这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。

如果要长期保存则最好是在-20℃ or -80℃。

最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体!但是,腹水形式的产品请在收到后立即冻起来!因为该类产品含有大量的蛋白酶,长期在4oC保存会导致抗体的降解!大部分抗体的运输条件:一般的运输过程需要1-2周的时间,所以是在4℃的条件下来完成的。

4℃运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害(如果使用干冰运输,那么收到时抗体是冻起来的,为了分装就需要解冻。

这就多了一次冻融的过程)。

所以运输过程中绝对避免干冰运输!特殊抗体的保存条件:∙酶联抗体:永远保存在4℃,避免冻起来。

抗体保存注意事项

抗体保存注意事项

抗体保存注意事项抗体保存得当与否,直接决定了抗体的活性和使用效果!如果抗体保存得当,大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。

以abcam 抗体保存方法为主,同样也可以应用到其他绝大部分的抗体产品!1. 收到抗体后请务必在12000rpm 离心1-5min 后再打开管盖进行分装和保存!质优的抗体使用非常特殊的储存管,只有在12000rpm 离心1-5min 才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。

即使是在10000rpm 离心也会导致离心不完全,导致出现抗体的量不足的现象!2. 对于大部分抗体,比较合适的保存方式是分装后保存在-20 度or -80 度对绝大多数抗体来说,保存在-20 度是完全足够了。

没有任何证据显示保存在-80度会有更多的好处!(1) 分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。

(2) 分装的量以一次实验用完为好,最少不能少于10ul 每份。

因为分装体积越小,抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响(3) 复融后的分装抗体如果一次用不完,将剩余母液保存在4 度,避免再冻起来!(4) 抗体工作液应该当天配制当天用完,在4 度尽量不要超过1 天。

(5) 绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。

尽量将抗体保存在冰箱里层,而不是门上3. 大部分抗体收到后4 度短暂保存1-2 周对抗体活性是没有影响的。

如果抗体很快(1-2 周)会使用,推荐在4 度保存,这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。

如果要长期保存则最好是在-20 度or -80 度。

最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体!但是,腹水形式的产品请在收到后立即冻起来!因为该类产品含有大量的蛋白酶,长期在4 度保存会导致抗体的降解!4. 大部分抗体的运输条件:一般的运输过程需要1-2 周的时间,所以是在4 度的条件下来完成的。

4 度运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害(如果使用干冰运输,那么收到时抗体是冻起来的,为了分装就需要解冻。

简述抗体的保存方法

简述抗体的保存方法

简述抗体的保存方法抗体是一种免疫蛋白,用于检测和治疗疾病。

为了确保抗体的有效性和稳定性,正确的保存方法至关重要。

下面将对抗体的保存方法进行详细讨论。

首先,在保存抗体之前,必须确保抗体是在符合质量要求的条件下生产和购买的。

质量好的抗体可能会在保存时表现出更好的稳定性和持久性。

此外,购买抗体时应选择可靠的供应商,并检查抗体的适用性和经过验证的数据。

在保存抗体时,必须将其存放在恰当的温度和环境条件下,以防止蛋白结构的变性和失活。

温度是保存抗体时最重要的因素之一、一般来说,抗体应保存在冷冻温度下,通常是-20℃或更低的温度。

在这种温度下,抗体可以长时间保持其活性。

如果只是短期储存,抗体也可以暂时保存在4℃的冰箱中。

长时间保存抗体时,应将其分装成小的工作用量,并使用无菌技术将其存放在冷冻管中,以防止细菌和其他污染物的侵入。

此外,应避免频繁地从冷冻库中取出抗体,因为反复冻结和解冻可能会影响其稳定性。

光的暴露是导致抗体失去活性的另一个重要因素。

抗体应保存在暗处,以减少紫外线和可见光对抗体的影响。

为此,应使用不透明的冷冻管或保鲜膜来覆盖抗体样品。

在保存抗体过程中,还应避免抗体与其他细胞因子或蛋白质的接触,因为这可能导致抗体的降解或聚集。

因此,在分装抗体时,应格外小心,并避免抗体与硅胶、蛋白质、乳化剂等物质的接触。

此外,在抗体保存过程中,还应密切关注抗体的过期日期。

抗体的过期可能导致活性降低,增加误差,因此需要及时更新抗体。

最后,为了避免冷冻过程中的温度变化,应使用专业的冷冻设备和储存系统,如液氮罐或冷冻干燥机。

综上所述,抗体的保存方法至关重要,以确保其在保存期间保持其活性和稳定性。

正确的保存方法包括存放在冷冻温度下,避免光的暴露,防止抗体与其他物质接触,及时更新过期抗体,并使用专业的冷冻设备和储存系统。

只有这样,才能确保抗体的有效性和可靠性,为科学研究和临床诊断提供可靠的支持。

抗体小知识

抗体小知识

科技名词定义中文名称:抗体英文名称:antibody;Ab定义1:能与相应抗原(表位)特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。

应用学科:免疫学(一级学科);免疫系统(二级学科);免疫分子(三级学科)定义2:在人和动物体内,由于抗原或半抗原入侵刺激机体而在细胞中产生的免疫球蛋白。

能可逆、非共价、特异地与相应抗原结合,形成抗原-抗体复合体。

应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科);总论(二级学科)定义3:机体内B细胞在抗原刺激下所产生的具特异性免疫功能的球蛋白。

应用学科:水产学(一级学科);水产生物病害及防治(二级学科)定义4:具有抗原结合部位,能与抗原分子上相应表位发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。

应用学科:细胞生物学(一级学科);细胞免疫(二级学科)本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布求助编辑百科名片Y型抗体结构示意图抗体(antibody)指机体的免疫系统在抗原刺激下,由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。

主要分布在血清中,也分布于组织液及外分泌液中。

目录概念多克隆抗体的制备单克隆抗体的制备概述生物活性抗体结构抗体基因重排单克隆抗体抗体的多样性抗体的功能抗体规律抗体的分类按作用对象按理化性质和生物学功能按可见反应按抗体来源世界著名抗体公司Santa公司Abcam公司Abgent公司AbMARTProteintech GroupMBLCell Signaling Technology(CST) Zymed Laboratories公司台湾AbnovaChemiconPierce公司BDPeproTechCaymanAssay DesignDynal Biotech ASA.DSL公司罗氏公司(Roche)BioLegend公司eBioscience公司BioVision. Inc.MABTech电影基本信息上映日期剧情简介概念多克隆抗体的制备单克隆抗体的制备概述生物活性抗体结构抗体基因重排单克隆抗体抗体的多样性抗体的功能抗体规律抗体的分类按作用对象按理化性质和生物学功能按可见反应按抗体来源世界著名抗体公司Santa公司Abcam公司Abgent公司AbMARTProteintech GroupMBLCell Signaling Technology(CST) Zymed Laboratories公司台湾AbnovaChemiconPierce公司BDPeproTechCaymanAssay DesignDynal Biotech ASA.DSL公司罗氏公司(Roche)BioLegend公司eBioscience公司BioVision. Inc.MABTech电影基本信息上映日期剧情简介展开编辑本段概念最初有人用电泳证明血清中抗体活性在γ球蛋白部分,故曾把抗体统称为丙种(γ)球蛋白。

抗体储存秘籍,一般人我不告诉!

抗体储存秘籍,一般人我不告诉!

抗体储存秘籍,一般人我不告诉!抗体由于性质和所使用的储存条件不同,其存储的“保质期”可能从几周到几年不等。

尽管每个抗体存储的最佳条件是独特的,但还是能够总结出一些关于抗体存储建议和一般准则。

一:低温对抗体的保存至关重要一般来说,抗体最好存放在≤4℃的清洁,灭菌的玻璃或塑料管。

贮存在室温下通常会由于微生物的生长导致抗体退化和/或失活。

抗体储存液放在4℃环境中1天或者几周内其活性不会受到明显影响。

另外,抗体中可以加入终浓度为50%的甘油或乙二醇储存于-20℃。

通常我们为了避免反复冻融,可以分装抗体。

还可以加入抗微生物药物(如叠氮化钠或硫柳汞)以避免微生物的生长。

带有标记的抗体通常可以在甘油或乙二醇中于-20℃保存1-2年。

但是,在冷冻保护剂的污染物可能会影响酶的活性。

一些研究人员发现多克隆抗体在血清中于-20℃保存十年其活性损失不大。

然而,一旦抗体被纯化后,储存在50%的甘油中于-20℃保存,即使没有冻融,其活性的损失也可以观察到,尽管其进程仍然非常缓慢。

单克隆抗体可以用两种方式保存:第一,保存在50%的甘油存放于-20℃;第二,也是比较好的方式,将其保存在饱和硫酸铵于4℃或-20℃(4℃更好)保存。

在大多数情况下,冻干的抗体最好是存放在-20℃。

二:向抗体储存液中加入抗氧化剂是防止抗体因氧化失效的关键步骤氧化反应是某些酶,尤其是巯基酶的共同问题。

为了防止氧化反应对抗体的破坏,我们可以向抗体中加入一些还原剂(如二硫苏糖醇(DTT)或2 - 巯基乙醇(2-ME))。

实验证明:越高的pH环境和温度,有酶活性的抗体的保存时间越短。

此外,加入0.1mM的铜离子,其氧化率增加;而加入金属螯合剂EDTA可增加有效期。

三:蛋白质稳定剂和抗生素对抗体的稳定储存发挥着重要作用蛋白质稳定剂可以延长大多数蛋白质在4℃或-20℃的保质期。

而25-50%的甘油或乙二醇等防冻剂有助于稳定抗体,防止在-20℃环境中形成冰晶,避免其破坏蛋白质的结构。

抗核抗体血标本储存标准

抗核抗体血标本储存标准

抗核抗体血标本储存标准
抗核抗体血标本的储存标准主要包括以下几个方面:
1. 采血管的选择:通常使用普通透明的采血管进行采血,以防止血液标本中的部分光敏物质分解。

2. 采血量:一般为3ml,且不进行抗凝处理。

3. 储存温度:标本应保存在2\~8℃的条件下,避免反复冻融。

4. 储存时间:抗核抗体血标本一般需要在72小时内进行检测,以避免出现假阳性或假阴性的结果。

如果无法在72小时内完成检测,建议将标本保存在2\~8℃的条件下,但最长不得超过7天。

5. 注意事项:在储存和运输过程中,应避免标本受到日光、紫外线和人工光源的直接照射,以保持标本的稳定性和准确性。

此外,应定期对储存的标本进行质量检测,以确保其有效性。

需要注意的是,抗核抗体血标本的储存标准可能因不同的检测方法和实验室而有所差异。

因此,在进行抗核抗体检测时,应遵循所在实验室或医疗机构的相关规定和指南。

抗体生物知识点总结初中

抗体生物知识点总结初中

抗体生物知识点总结初中抗体的结构:抗体是由两部分构成的,在抗体的分子结构中,可以分为两个部分:一部分是单一特异性的,氨基酸序列基本一样的构成的,因而具有相同的抗原特异性;而另一部分则说抗原结合部位则全部由俄碱和轻链组成。

抗体结构大体分为两部分:可变区(V)和恒定区(C)。

可变区是抗体分子与抗原产生特异性结合的部分,而恒定区则是决定抗体的生物学功能和结构的部分。

抗体的作用:抗体在机体内主要通过以下几种方式发挥作用:第一,中和抗体可以中和病原体,使病原体不能与宿主细胞结合,因而无法进一步感染宿主细胞,从而保护机体免受感染;第二,沉淀抗体可以使病原体凝聚成复杂的结构,从而有利于巨噬细胞的吞噬和清除;第三,激活补体抗体与抗原结合后,抗体的Fc部分可以激活补体,从而引发一系列的免疫反应,最终清除病原体;第四,增强吞噬能力某些抗体还能够与巨噬细胞结合,增强巨噬细胞的吞噬能力;第五,诱导溶解抗体还可以与抗原结合后,直接引起抗原的溶解。

抗体的产生:抗体的产生是由机体的免疫系统来完成的,当机体受到外来病原体侵袭时,免疫系统会产生抗体应对。

具体来说,抗体的产生经过以下几个主要的步骤:首先,在机体接触到抗原后,抗原会被抗原呈递细胞(如巨噬细胞、树突细胞)捕获,抗原与B细胞表面的B细胞受体结合,从而激活B细胞;然后,活化的B细胞会分化成浆细胞,浆细胞就是能够分泌抗体的细胞;最后,浆细胞分泌抗体,抗体会进入血液循环,对抗病原体。

抗体的分类:抗体可以分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五种类型,每一种抗体在机体内都起着特定的功能:IgG是体液免疫的主要抗体,可以穿过胎盘保护胎儿,除此之外,还可以促进巨噬细胞的吞噬作用。

IgA是黏液膜免疫的主要抗体,主要在呼吸道和消化道发挥作用。

IgM主要在机体初次感染时产生,能够起到很好的中和病原体的作用。

IgD的功能还不太清楚,主要分布在B细胞表面起到识别抗原的作用。

IgE主要与过敏反应相关,当机体受到抗原的侵袭后,可以释放大量的IgE,进一步激活组织细胞,引起过敏反应。

抗体的高考知识点总结

抗体的高考知识点总结

抗体的高考知识点总结一、抗体的结构抗体是由免疫球蛋白分子组成的,免疫球蛋白分子又分为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM等几种类型。

其中,IgG是最常见的类型,占免疫球蛋白总量的75%,它是由两条轻链和两条重链组成的Y形结构。

每条链都由两个区域组成,即变区和恒定区。

变区决定了抗体的特异性,而恒定区决定了抗体的生物活性。

二、抗体的功能1. 中和病原体抗体能够与病原体结合,使其失去活性,从而起到抵御病原体入侵的作用。

例如,IgA能够中和病原体,阻止其侵入黏膜表面;IgG和IgM能够中和病毒和细菌,阻止其侵入细胞。

2. 促进病原体的吞噬和溶解抗体与病原体结合后,能够促使巨噬细胞、鈣离子螯合蛋白等吞噬细胞对其进行吞噬和溶解。

3. 激活补体系统抗体能够激活补体系统,进一步加强免疫反应,促使病原体的溶解和清除。

4. 促进细胞毒性反应抗体能够结合靶细胞表面的抗原,诱导自身毒性T细胞杀伤靶细胞,发挥细胞毒性作用。

三、抗体的合成抗体主要由B细胞合成,B细胞在体内遇到抗原后,会产生相关的抗体,形成免疫应答。

免疫应答包括原发性和继发性免疫应答两种类型,原发性免疫应答是指初次接触抗原后B细胞合成抗体,继发性免疫应答是指再次接触相同抗原后,B细胞迅速产生大量抗体。

四、抗体的应用1. 临床诊断抗体在临床诊断中起着重要的作用,例如,ELISA和Western blot等方法都是基于抗体的特异性结合原理而开发的。

2. 免疫治疗利用抗体对特定抗原表面的特异性结合作用,可以开发抗体药物治疗疾病,如抗体药物治疗肿瘤、炎症性疾病等。

3. 免疫诊断利用抗体对特定抗原的特异性结合作用,可以开发免疫诊断试剂盒,用于检测疾病的诊断和预防。

4. 抗体工程通过蛋白工程技术可以改变抗体的结构和功能,使其更适应临床应用的需要。

以上就是关于抗体的结构、功能、合成和应用的总结。

了解抗体的相关知识有助于理解免疫系统的工作原理,有助于预防和治疗疾病。

希望以上内容对即将参加高考的同学们有所帮助。

关于抗体保存不容错过的知识点

关于抗体保存不容错过的知识点

关于抗体保存不容错过的知识点抗体的保存方法一般会直接影响抗体的活性和使用效果。

在保存得当的情况下,大部分抗体可以存放数月甚至数年,一般情况需严格按照抗体说明书来进行保存。

抗体保存温度和条件① 抗体收到后,需在12000rpm离心1~5分钟,再打开管盖进行分装和保存,如果抗体体积不足50 ul,可延长离心时间至 5 分钟,从而确保抗体全部离心下来。

② 对于多数抗体而言,分装成小等份并冻存于-20℃或-80℃是最佳选择。

腹水形式的产品收到后需立即冻存,因为该类产品含有大量的蛋白酶,长期在置于4℃条件会导致抗体的降解。

•分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤,以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。

•小等份只需冻融一次,如有剩余,可将剩余物保存于4℃。

小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。

小等份应不小于10μl;等份越小,储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。

•抗体工作液应该当天配制当天用完,在4℃尽量不要超过1天。

③ 抗体的运输:一般选择4℃运输,避免了反复冻融对抗体活性的损害;如若选择干冰运输,收到抗体是冰冻的,分装时解冻,会增加一次冻融的过程,所以运输过程中尽量避免干冰运输。

特殊抗体保存条件•酶联抗体:保存在4℃,避免冻存以降低或丧失酶活性;•偶联抗体:需保存在棕色管或是用锡箔纸避光于4℃保存,荧光抗体对光敏感,操作时应严格避光;•IgG3的同型对照:保存于4℃避免冻存,反复冻融会导致抗体变性,形成多聚体;抗体保存注意事项① 加入甘油:对于大多数抗体,可加入50%的甘油来避免反复冻融。

甘油在-20℃可降低冰点,但不建议加入甘油的抗体保存于-80℃,该温度已经超过了甘油的冰点;② 加蛋白保护剂:蛋白在高浓度时不易降解,正如有些抗体会加入BSA作为稳定剂的原因,同时加入蛋白也可减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。

但是如果抗体要用来标记的话,则不能加入蛋白稳定剂,因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。

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抗体保存知多少
通常情况下,抗体经恰当保存和处理,大多数应能保持活性数月乃至数年。

当然,不同类型抗体,其保存的方法也可能不一样,以下就抗体的保存,提供一些参考!
一、保存温度和条件
对于很多抗体而言,保存在-20℃是完全足够了,没有任何证据显示保存在-80℃会有更多的好处!分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤,以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。

小等份只需冻融一次,如有剩余,可将剩余物保存于4oC. 在收到抗体时,在10,000 ×g 下离心20 秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液,并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。

小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。

小等份应不小于10 µl; 等份越小,储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。

在大多数情况下,收到抗体时在4oC 下保存一至两周,然后再冷冻进行长期保存是可接受的,但也许腹水液是例外,它可能包含蛋白酶,因而应该尽快冻存。

同样,遵照说明书上的建议是重要的。

大部分抗体的运输条件:一般的运输过程需要1-2周的时间,所以是在4℃的条件下来完成的。

对于特殊的抗体,如酶、荧光素等偶联抗体、IgG3同型抗体等抗体的保存有其注意事项:
1、偶联抗体酶偶联抗体不应冻存,而应保存于4oC. 冻融不仅影响抗体结合能力,还会降低酶活性。

无论偶联至荧光染料、酶还是生物素,偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹. 暴露于光线中将损害偶联物的活性。

特别是荧光偶联物易受到光漂白影响,在实验的所有阶段都应避光。

2、IgG3的同型对照保存在4℃,避免冻起来。

因为如果出现冻融过程,该抗体非常容易形成多聚体
二、用叠氮化钠防止污染
为了防止微生物污染,可将叠氮化钠加入抗体制备品中达到0.02% (w/v). 的终浓度。

但是有时不能使用叠氮化钠,有以下两中情形:
(1)、如果用抗体染色或处理活细胞,或如果用抗体进行体内研究,一定要使用不包含叠氮化钠的制备品。

该抗菌剂也对大多数其它生物具有毒性:它阻断细胞色素电子传递系统。

(2)、叠氮化钠会干扰氨基参与的任何偶联,应在偶联进行前除去。

偶联后,
抗体可保存于叠氮化钠中,除此以外,0.01% 硫汞撒(硫柳汞)不含伯胺,也是可接受的替代物。

叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤从抗体溶液中除去。

IgG 的分子量为150,000 道尔顿(IgM 为约600,000);叠氮化钠的分子量为65 道尔顿。

截留分子量为14,000 道尔顿的微透析装置可保留抗体同时使叠氮化物向外扩散。

在保持于4oC 的磁性搅拌器上的烧杯中,每毫升抗体使用至少一升冷PBS 并搅拌透析装置6 小时。

更换PBS 两次,每次更换搅拌至少6 小时。

如有可能,所有材料都应灭菌并且所得的制备物应无菌操作。

三、冷冻/融化损伤
重复冷冻/融化循环可使抗体变性,导致其形成使抗体结合能力
降低的聚集物。

保存于-20oC 对于大多数抗体是适当的;保存于
-80oC 无明显优势。

冰箱不能为无霜型。

这些冷冻和融化之间的循环(以减少结霜)恰恰是应该避免的。

出于相同原因,抗体试剂瓶应置于具有最小温度波动的冰箱区域,例如朝冰箱后部放置而不是置于门架上。

有些研究人员加入冷冻保护剂甘油达到50% 的终浓度以防止
冷冻/融化损伤;甘油可将凝固点降低至低于-20oC。

虽然这对于很多抗体是可接受的,但还是不能确保在该保存条件下的稳定性,通常我们参考具体产品说明书提供的保存方法。

在这里,我们也一般不建议将包含甘油的溶液保存于-80oC,因为该温度低于甘油的凝固点。

还要注意甘油可被细菌污染。

如果加入甘油或任何冷冻保护剂,则应当小心操作,以得到无菌制备物。

应避免抗体在稀释至工作浓度后在4℃下保存超过一天。

蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解,理想的浓度为1 mg/ml 或更高。

这是在抗体溶液中加入蛋白质例如BSA 作为稳定剂的理论基础。

加入的蛋白质也有助于减少抗体因结合于容器壁上而造成的损失。

对于打算进行偶联的抗体而言,由于稳定蛋白质会与抗体竞争,降低了偶联的效率,所以不应加入稳定蛋白质。

此文章由广州深华生物技术有限公司编辑修改。

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