抗体储存液
抗体储存液
北京雷根生物技术有限公司
抗体储存液
简介：
抗体的稳定性对于抗体的保存和使用极其重要，IgG 是最稳定的球蛋白之一，通常在pH5～9、浓度小于20mg/ml 的缓冲液中最稳定。
Leagene 抗体储存液由磷酸盐、防腐剂、保护剂等组成，pH=7.2，可用于常规抗体的保存。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 制备好的抗体充分溶解于抗体储存液后，4℃保存1年，-20℃保存2年或更长时间。
注意事项：
1、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 24个月有效。
相关：
编号 名称 PZ0050 Storage 抗体储存液 100ml 4℃ 使用说明书 1份 编号 名称 DG0005
糖原PAS 染色液 NH0053
变性鲑鱼精DNA(10mg/ml) NR0001
DEPC 处理水(0.1%) NR0040
RNase A(10mg/ml) PW0040
Western blot 一抗稀释液 TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD 比色法)。
抗体制备
二、免疫动物
为获取高质量的抗体，除了需制备高纯度 的抗原外，还需选择适宜的动物和设计有 效可行的免疫方案，如抗原的剂量、剂型、 注射途径、注射次数、注射间隔和接种动 物的年龄均与免疫效果密切的关系。
1.免疫动物的选择
选择动物时应考虑以下因素： ①抗原来源与动物种属的关系。抗原的来源与免疫动物 种属差异越远，其免疫源性越强，免疫效果越好，而 同种系或亲缘关系越近，免疫效果越差。 ②动物个体的选择。适龄、健康、体重符合要求的正常 动物（以雄性为佳）；抗体需要量少时，选用家兔、 豚鼠和鸡等小动物；抗体需要量大时，可选用绵羊、 山羊、马、驴等大动物。 ③抗原性质与动物种类。
第十一章 抗体制备
抗体的制备技术经历了三代： 第一代抗体是传统的抗体制备方法即利用抗原免 疫动物后获得抗体，称为多克隆抗体（polyclonal antibody）； 第二代抗体是通过杂交瘤技术制备出针对抗原中 某一抗原决定簇的抗体称为单克隆抗体 (monoclonal antibody, McAb)； 第三代抗体是利用基因工程技术制备而来，称为 基因工程抗体(genetic engineering antibody)。本 章主要介绍三种类型抗体的制备方法。
一、杂交瘤技术的基本原理
一、杂交瘤技术的原理及流程
二、单克隆抗体制备技术
1. 主要材料
2. 细胞融合前准备
3. 细胞融合
4. 抗体的初筛和克隆化
5. 杂交瘤细胞冻存与复苏
6. 单克隆抗体的批量生产
7. 单克隆抗体的纯化与鉴定
（一）主要材料：
RPMI1640培养液 FCS 10% 谷氨酰胺 2mmol/L 青霉素 100IU/ml 链霉素 100Ug/ml
高免血清正确使用方法
高免血清正确使用方法
高免血清（也称抗体血清）是一种含有高浓度特定抗体的血清。
正确使用方法如下：
1.储存：高免血清应储存在-20C以下的冰箱中，避免多次冻融，保证抗体的稳定性和活性。
2.稀释：高免血清需进行稀释使用。
具体稀释倍数因实验不同而异，需要根据实验需求进行适当稀释。
3.检测：使用前需进行抗体效价检测，确定抗体效价满足实验要求。
4.洗涤：在实验中使用高免血清时，需要进行洗涤处理来去除未结合的抗体和蛋白质。
洗涤液常用的有PBS（磷酸盐缓冲液）、TBST（磷酸盐缓冲液+Tween-20）等。
5.使用：高免血清可用于免疫沉淀、免疫印迹、免疫组化、ELISA检测等实验中。
在使用过程中，注意避免高温、高酸碱度等条件对抗体的影响。
6.保存：使用后的高免血清需保存在-20C以下的冰箱中，避免多次冻融，以免影响抗体的稳定性和活性。
免疫荧光染色
免疫荧光一般步骤固定液配制：常用固定液为4%多聚甲醛，将40g多聚甲醛粉剂在三角烧瓶中溶于1000ml 0.1M PB溶液中,放入磁力转子置于加热磁力搅拌器中加热溶解，温度切忌超过70℃，温度过高会导致多聚甲醛解聚成为甲醛，遮蔽抗体影响抗原抗体结合，溶解后待其冷却，调节PH值至7.4，过滤后室温或4℃放置备用，配好后一个月内有效，最好现配现用。
2.5％多聚甲醛(含苦味酸300ml／1000ml)亦是选择，由于渗透压的关系,缓中液改为NaH2PO4.２H2O 3.74g；Na2HPO4.12H2O45.11g（500ml:1.87g,22.55g）灌注固定：快速生理盐水冲净血液（约需要100ml即可），4%多聚甲醛灌注（快速充灌100ml 左右，再慢速滴150ml）。
灌注用的针头前端要磨平，灌注小鼠可以用较粗的头皮针，仅留1cm，插入左心室即可，不必像大鼠那样插入主动脉根部。
取材按要求不同取组织，取材部位一定要事先确定好，比如脊髓呈现节段性变化，只有取到正确的部位才能获得结果。
坐骨神经对应的脊髓阶段（３，４，５）在第一腰椎下，第五腰椎下是第五神经节，对应髂前上棘（动物其实不叫这个名）前缘。
后固定及蔗糖脱水：组织取材后切成小块放入4%多聚甲醛中，为后固定，建议4℃过夜，随后转入40%蔗糖溶液中脱水（不沉底），3天后即可用于冰冻切片。
后固定时间亦不可过长。
脱水不彻底表现为组织切片上空洞样组织破坏；固定不完全表现为微米染色集中在周边，组织内部不着色。
蔗糖溶液亦用0.1M PB配制（见附录）。
冰冻切片：漂染时，脊髓片厚可以25~30微米，神经节片厚要30微米免疫荧光染色：1.TBS溶液清洗组织片5分钟×2，有利于抗原抗体结合（可选）2.封闭液（10％血清+1%BSA）＋0.3%triton-100*室温封闭2小时，亦可4℃过夜，除个别膜抗原外，都需要加triton-100*;个人习惯的做法是把封闭液分装成1ml/管，保存在-20度，用前添加3微升triton-1003.一抗孵育4℃过夜，一抗浓度需要通过预实验进行确定，比较常见的是１μｇ／ｍｌ。
抗体选择指南,抗体保存指南,抗体使用说明书样本
抗体选择指南抗体保存指南抗体说明书样本一抗体选择指南:检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：1. 分析或应用的类型2. 样本蛋白的结构性质3. 样本的种属4. 抗体宿主的种类5. 抗体的标记和检测1分析试验的应用类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
2 样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑(1)..待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。
如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
(2)样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。
当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来3 样本的物种应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。
抗体试剂技术要求
抗体试剂技术要求随着生物医学领域的不断发展，抗体试剂作为一种重要的实验工具，被广泛应用于生物学研究、临床诊断以及药物开发等领域。
抗体试剂技术的要求包括多个方面，下面将从抗体选择、制备与储存、检测与验证等方面进行详细介绍。
抗体的选择是抗体试剂技术的关键步骤之一。
在选择抗体时，需要考虑抗体的特异性、亲和力、稳定性等因素。
特异性是指抗体只能与目标抗原特异性结合，而不与其他非特异性物质结合。
亲和力则是指抗体与抗原结合的强度，亲和力越高，抗体与抗原的结合越紧密。
稳定性是指抗体在不同条件下的保存稳定性，如耐高温、耐酸碱等。
因此，在选择抗体时，需要根据实验需求仔细评估这些因素。
抗体的制备与储存也是抗体试剂技术中不可忽视的环节。
一般来说，抗体的制备包括抗原的制备和免疫动物的免疫过程。
抗原的制备需要注意保持其天然结构和活性，以确保抗体的特异性。
免疫动物的选择则需要考虑其免疫应答能力、抗原的相似性等因素。
制备好的抗体需要正确储存，一般建议在-20℃或更低温度下保存，避免重复冻融。
此外，抗体的储存液应该选择适当的缓冲液，并添加一些保护剂，如蛋白质稳定剂，以增加抗体的稳定性。
抗体试剂技术中的检测与验证也是至关重要的一步。
在使用抗体试剂进行实验前，需要对抗体进行验证，以确保其特异性和敏感性。
常用的验证方法包括免疫印迹、免疫组化、流式细胞术等。
验证抗体时，应使用已知表达目标抗原的样本进行实验，并与负对照样本进行比较。
如果抗体的特异性和敏感性达到实验要求，则可以进行下一步实验。
除了上述内容，还有一些其他方面的要求需要注意。
例如，在实验中使用抗体试剂时，需要注意正确的稀释倍数和操作条件，避免出现误差。
此外，抗体试剂的交叉反应性也需要进行评估，以避免与其他相关物质发生非特异性结合。
最后，抗体试剂的批次一致性也是重要的要求之一，为了保证实验结果的准确性和可重复性，建议在同一批次中使用同一供应商提供的抗体试剂。
抗体试剂技术的要求包括抗体选择、制备与储存、检测与验证等多个方面。
透析液更换加收集标准化步骤及注意事项
透析液更换及标记后抗体收集标准化步骤透析液更换步骤：1、透析袋扎好之后，将透析袋放入20mM 2L PBS溶液中进行透析（视标记抗体的量而变化，标记体积小时可用1L体系的透析液），同时在烧杯上要封上一层保鲜膜，以防其他液体滴入造成污染，透析袋用塑料夹夹紧固定；2、透析液（PH 7.4 20mM PBS）每隔4—6小时更换一次；3、抗体标记AE时，每更换一次透析液之前，都必须取出10ul 透析液，测试其发光值，当最后两次透析液的发光值均在5000以下时（及时填写抗体透析表格），方可收集抗体；4、抗体标记BIO时，如果同时标记AE，则视AE的透析次数而定，如果单独标记BIO，则更换透析液的次数，至少为5次；5、收集：按标记抗体：抗体储存液=4:1的体积比例加入抗体储存液，按加完储存液后的体积1：1加入甘油，然后贴好标签放-20℃冰箱内保存。
抗体收集及保存步骤：1、收集体积：300ul标记体系，固定收集体积为400ul，150ul 体系，固定收集体积为200ul，抗体收集体积不足规定体积时用20mM PBS溶液补足；2、量抗体体积：以300ul标记体系为例，第一枪用200ul量程收集，第二枪仍然用200ul量程去吸，之后调枪，看测量值多大，例如第二枪的体积为150ul，最后还需加入50ul的20mM PBS补足体积至400ul；3、加抗体储存液：按收集抗体：抗体储存液=4:1的体积比例加入抗体储存液，例如收集的抗体体积为400ul，则需加入100ul抗体储存液；4、加甘油：按加完储存液后的体积1：1加入甘油，因为甘油比较粘稠，所以，吸取时需要对枪头进行处理，要用剪刀剪掉1cm 左右枪头，注意，剪刀使用前需要用纯水冲洗一下；5、吹打混匀：收集好的抗体还需要进行吹打混匀，加完甘油后直接吹打，不需要更换枪头，反复吹打至无明显的分液现象方可，若没有吹打均匀，-20℃条件下易结冻；6、贴标签：在EP管的周身贴好标签后，要在标签表层贴上一层透明胶袋，并在EP管的管帽上写上抗体名称-AE/Bio，标记时间等，方便寻找。
ELISPOT实验技术
酶联免疫斑点技术介绍一、 ELISPOT技术概述1. 技术原理和技术特点ELISPOT全名为酶联免疫斑点检测，英文：Enzyme-linked Immunospot Assay。
它结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术（即ELISA技术），能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。
其技术原理，一句话概括就是：用抗体捕获培养中的细胞分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色的方式将其表现出来（Sedgwick JD 2005）。
该技术检测细胞因子具有三大优点：其一，灵敏度高。
在一百万个阴性细胞中只要有一个分泌细胞因子的阳性细胞即可被检测出来。
这是目前为止，最为灵敏的检测技术，灵敏度比传统的的ELISA方法高2-3个数量级。
其二，单细胞水平，活细胞功能检测。
ELISPOT检测的是单个细胞分泌，而非细胞群体的平均分泌。
在检测的过程中，有活细胞培养与抗原刺激阶段，检测的是活细胞的功能，而非死细胞的遗留物。
其三，操作简便经济，可以进行高筒量筛选。
ELISPOT没有复杂的细胞体外扩增过程，不使用同位素，不需要大型的、专门的实验仪器设备。
按照标准化的实验操作，一个实验者可以同时处理数百个样品，效率远远高于其它检测方法（Kalyuzhny AE 2005）。
实验设计在96孔培养板上进行，直接以培养板的塑料板底或者PVDF膜以及硝酸纤维素膜为基质，包被上特异性的单克隆抗体，用以捕获细胞分泌的细胞因子。
（由于涉及到细胞培养的过程，对单克隆抗体的要求要远高于ELISA中的捕获抗体，该抗体需要无毒，不含内毒素，亲和力高等特点。
）之后，在培养板的孔内加入细胞培养基（现在无血清ELISPOT技术已经成熟，培养基中可以不再含有血清）、待检测的细胞以及抗原刺激物进行培养。
在特异性的抗原或者非特异性的有丝分裂原的刺激下，数小时之内，T细胞就会开始分泌各种细胞因子。
细胞因子当即就被位于细胞下方的膜上的单克隆抗体所捕获。
在洗去细胞之后，被捕获的细胞因子可以与生物素标记的第二抗体结合，然后用酶标亲和素再与生物素结合，进行化学酶联显色，就可以在膜的局部形成一个个圆形的斑点。
缓冲液的配制
Elisa 相关试剂的配制1、抗体或免疫球蛋白稀释液0.01mol/L pH7.2PBSNaH2PO4·2H2O——0.39克；Na2HPO4——1.27克；NaCl——0.85克；NaN3——200 mg；H2O（蒸馏水）至1000ml2、ELISA洗液及HRP标记抗体稀释液PH7.4，PBSTNaCl——2.0克；KH2PO4——0.2克；Na2HPO4·12H2O——2.9克；KCl——0.2克；NaN3——0.2克；H2O至1000ml 吐温（Tween）20 0.5ml；4°C保存备用3、包被液（简称CB）pH9.6Na2CO3——1.59克；NaHCO3——2.93克；NaN3——0.2克；H2O至1000ml 密封盖好，4°C存放备用4、ELISA底物液（可溶性底物）磷酸-柠檬酸缓冲液pH5.00.1mol/L柠檬酸（21.014克/100ML）——24.3ml；0.2mol/L Na2 HPO4（28.4克/L)——25.7ml；H2O ——50ml；4°C存放备用5、DAB底物液（不溶性底物，组化病理等）0.05mol/L pH7.6 tris-HCLTris——6.05克；HCL(36%)——3.15克（约2.7ml浓HCL）；H2O 至1000ml DAB为3´，3´二氧基联苯胺，不溶性底物，呈棕红色ELISA试剂配制及实验流程是酶联接免疫吸附剂测定(( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。
以双抗体夹心法举例说明。
试剂配制：(1) 包被缓冲液(PH9.6 +0.2 0.05M碳酸盐缓冲液)： Na2CO3——1.59g ;NaHCO3 ——2.93g ；加蒸馏水至1000ml。
（用时稀释成1x，加0.1%BSA）(2)洗涤缓冲液(PH7.4 0.15M PBST)：0.05%Tween-20——0.5ml；加在PBS缓冲液1000ml 中。
抗体标记标准化步骤
抗体标记标准化步骤以h-FABP抗体（NP24）标记AE、BIO为例标记步骤：①300ul的反应体系1、抗体解冻后，混匀离心10s，取50ul于离心管，然后取1ul AE（原倍AE不需要吹打）于离心管壁，最后用99ul标记液CB将AE向下冲散混合(如果AE 已预先和抗体混合，弃用)；2、37℃水浴标记1小时后取出，在此之前将透析袋提前浸泡，然后将离心管内液体吸出，加入至透析袋，再加150ul 20mM PBS，混匀后，扎好透析袋进行透析（透析液为PH 7.4 20mM PBS，体积为2L）；3、4-8小时更换透析液一次，在每次换透析液前要先测量上一次透析液中残留AE发光值，当测量发光值在3000左右即可停止透析；4、收集：将透析袋里的抗体取出至EP管中，用20mM PBS补充至一个定值，按标记抗体：抗体储存液=4:1的体积比例加入抗体储存液，再按加完储存液后的体积1：1加入甘油，然后贴好标签，并加上透明胶带，最后放置-20℃冰箱保存；5、以标记好的抗体NP24-AE和NP24-BIO进行样品测试，验证标记抗体是否可用，并考察信噪比。
② 150ul的反应体系1、抗体解冻后，混匀离心10s，取50ul于离心管，然后取1ul AE（原倍AE不需要吹打）于离心管壁，最后用49ul标记液CB将AE向下冲散混合(如果AE 已预先和抗体混合，弃用)；2、37℃水浴标记1小时后取出，在此之前将透析袋提前浸泡，然后将离心管内液体吸出，加入至透析袋，再加50ul 20mM PBS，混匀后，扎好透析袋进行透析（透析液为PH 7.4 20mM PBS，体积为2L）；3、4-8小时更换透析液一次，在每次换透析液前要先测量上一次透析液中残留AE发光值，当测量发光值在3000左右即可停止透析；4、收集：将透析袋里的抗体取出至EP管中，用20mMPBS补充至一个定值，按标记抗体：抗体储存液=4:1的体积比例加入抗体储存液，再按加完储存液后的体积1：1加入甘油，然后贴好标签，并加上透明胶带，最后放置-20℃冰箱保存；5、以标记好的抗体NP24-AE和NP24-BIO进行样品测试，验证标记抗体是否可用，并考察信噪比。
免疫组化原理、步骤及要注意的事项.
免疫组化一，免疫组织化学简介免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。
它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。
二，免疫组化技术的基本原理免疫组化技术是一种综合定性、定位和定量；形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。
在原位检测出病原的同时，还能观察到组织病变与该病原的关系，确认受染细胞类型，从而有助于了解疾病的发病机理和病理过程。
免疫酶组化技术是通过共价键将酶连接在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位，根据酶标记的部位可将其分为直接法（一步法）、间接法（二步法）、桥联法（多步法）等，用于标记的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体，最好是特异性强的高效价的单克隆抗体。
直接法是将酶直接标记在第一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。
目前通常选用免疫酶组化间接染色法。
三，免疫组化步骤1，切片，烤片60℃，1h；2，脱蜡及复水二甲苯10min，100％乙醇5min，95％乙醇5min，90％乙醇5min，85％乙醇5min，80％乙醇5min， 75％乙醇5min，60％乙醇5min，50％乙醇5min，30％乙醇5min，自来水1min，双氧水1min；3，1份30％H2O2加10份蒸馏水，室温10min，蒸馏水洗3次，每次3min；4，微波修复将切片浸入0.01M枸橼酸缓冲液，微波中最大火力（98℃-100℃）加热至沸腾，冷却（约5-10min），反复两次；5，将切片自然冷却至室温，PBS洗涤3次，每次5min；6，封闭，5％BSA，室温20min，甩去多余液体；7，滴加一抗，37℃，1h，或者4℃过夜；8，PBS洗涤3次，每次3min；9，滴加二抗，37℃，15-30min；10，PBS洗涤3次，每次3min；11，滴加SABC，37℃， 30min；12，PBS洗涤3次，每次5min；13，1ml蒸馏水中分别滴加显色剂，混匀；14，DAB显色剂配置好后，滴加于切片，室温，镜下检测反应时间（约5min）；15，自来水冲洗干净，过蒸馏水；16，苏木素复染2min，自来水冲洗；17，脱水30％乙醇3min，50％乙醇3min，70％乙醇3min，80％乙醇3min，90％乙醇3min，95％乙醇3min，100％乙醇3min，二甲苯20min；18，树胶封片，镜检。
westernblot中试剂的用途和配制
western blot 中试剂的用途和配制western blot 中试剂的用途和配制一、原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。
经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
二、分类现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。
只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。
三、主要试剂1、丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。
)储于棕色瓶，4℃避光保存。
严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。
使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。
如有沉淀，可以过滤。
2、十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS，1mlH2O去离子水配制，室温保存。
3、分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合，加水稀释到100ml终体积。
过滤后40C保存。
4、浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O 中，用约48ml 1mol/L HCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。
简述抗体的保存方法
简述抗体的保存方法抗体是一种免疫蛋白，用于检测和治疗疾病。
为了确保抗体的有效性和稳定性，正确的保存方法至关重要。
下面将对抗体的保存方法进行详细讨论。
首先，在保存抗体之前，必须确保抗体是在符合质量要求的条件下生产和购买的。
质量好的抗体可能会在保存时表现出更好的稳定性和持久性。
此外，购买抗体时应选择可靠的供应商，并检查抗体的适用性和经过验证的数据。
在保存抗体时，必须将其存放在恰当的温度和环境条件下，以防止蛋白结构的变性和失活。
温度是保存抗体时最重要的因素之一、一般来说，抗体应保存在冷冻温度下，通常是-20℃或更低的温度。
在这种温度下，抗体可以长时间保持其活性。
如果只是短期储存，抗体也可以暂时保存在4℃的冰箱中。
长时间保存抗体时，应将其分装成小的工作用量，并使用无菌技术将其存放在冷冻管中，以防止细菌和其他污染物的侵入。
此外，应避免频繁地从冷冻库中取出抗体，因为反复冻结和解冻可能会影响其稳定性。
光的暴露是导致抗体失去活性的另一个重要因素。
抗体应保存在暗处，以减少紫外线和可见光对抗体的影响。
为此，应使用不透明的冷冻管或保鲜膜来覆盖抗体样品。
在保存抗体过程中，还应避免抗体与其他细胞因子或蛋白质的接触，因为这可能导致抗体的降解或聚集。
因此，在分装抗体时，应格外小心，并避免抗体与硅胶、蛋白质、乳化剂等物质的接触。
此外，在抗体保存过程中，还应密切关注抗体的过期日期。
抗体的过期可能导致活性降低，增加误差，因此需要及时更新抗体。
最后，为了避免冷冻过程中的温度变化，应使用专业的冷冻设备和储存系统，如液氮罐或冷冻干燥机。
综上所述，抗体的保存方法至关重要，以确保其在保存期间保持其活性和稳定性。
正确的保存方法包括存放在冷冻温度下，避免光的暴露，防止抗体与其他物质接触，及时更新过期抗体，并使用专业的冷冻设备和储存系统。
只有这样，才能确保抗体的有效性和可靠性，为科学研究和临床诊断提供可靠的支持。
抗体稳定剂
Tel:+86 571 2882 8608 Toll Free: 400 6721 600(China Only) Fax:+86 571 2882 8618 Website: 抗体稳定剂产品规格：ST0031 抗体稳定剂 2ml ST0032 抗体稳定剂 10ml ST0033抗体稳定剂100mlTechnical Service: service@ MultiSciences Biotech Co,. Ltd To place an order: order@1简介：纯化或生物素标记的抗体广泛应用于各种生物学实验。
本抗体稳定剂能够显著延长抗体使用寿命，加入该稳定剂，有利于延长抗体的稳定性，即使在较低的抗体浓度下，也能够有效保护其活性成份，无需每次稀释的繁琐操作，且结果更加稳定可靠。
推荐用法：本抗体稳定剂可用于各种需要纯化或生物素标记抗体的实验中，如ELISA,Western Blotting, Immunohistochemistry 等。
该稳定剂是一种即用的溶液，可作为抗体的储存液或稀释液，将抗体用该溶液稀释即可。
产品安全和操作：该产品根据HCS（Hazard Communication Standard）标准认定，无毒。
不要直接与皮肤和眼睛接触。
如不慎接触，请用大量清水冲洗。
贮存和稳定性：贮存于2~8度。
该稳定剂已用0.22um 滤膜过滤，溶于无菌的双蒸水，不含任何动物成分和蛋白。
其防腐剂成分无毒、无汞。
不需冻存。
示例：加速实验稳定性研究分别使用本抗体稳定剂和PBS稀释兔IgG抗体到5ng/ml，37℃，活性分析37℃加速实验稳定性研究表明：6天后，使用本抗体稳定剂稀释的抗体仍保存87%的结合活性，然而使用PBS 稀释的抗体已经完全失去活性。
使用本抗体稳定剂稀释的抗体也能够冻存---经过三次反复冻融，该抗体的结合活性仍不降低。
仅用于科学研究 Rev: 06/2011。
MD02 抗体的分装保存和稀释
抗体的分装保存和稀释1、抗体的分装保存做科研实验时用到的免疫组化一抗，多为浓缩液的形式。
对于包装规格较大和预计使用周期较长的一抗浓缩液，建议根据用量进行分装保存，分装后的抗体需根据抗体使用说明书指明的条件，保存在－20℃～－40℃低温冰箱中或2～8℃保存（并非所有的供应商都推荐一抗浓缩液在冷冻条件下长期保存）。
这样可以减少抗体反复开盖平衡至室温和反复冻融引起的效价下降。
抗体分装时的储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成，如聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。
即用型抗体工作液可在2～8℃冰箱中保存，无需在低温冰箱中保存。
2、浓缩液抗体的稀释抗原抗体的结合与两者之间的分子比例有密切关系。
如果使用的抗体浓度太高，抗体分子在特异性结合目标抗原后剩余过多，将会造成抗体与组织其他成分的非特异性结合的增加，使背景染色明显增强，甚至出现区域假阳性现象；无论特异性多好的抗体，只要浓度高到一定程度，都会出现非特异性着色或者染色背景。
因此，选择适当的抗体稀释度，不仅能节省抗体，而且还是获得满意染色结果必要条件。
在实际工作中，有很多抗体都从试剂公司购买，厂家所附的说明书上对抗体的稀释度通常已经标明，给了一个适当的参考范围。
第一抗体的使用浓度是免疫组织化学染色的关键之一，在第一次使用某种新的一抗时，有必要对抗体的最佳稀释度进行测定（如在推荐稀释度的上下区域梯度稀释后进行检测）。
浓缩液抗体的稀释是一个相当比较简单的操作，不少研究者会用实验室自己配置的PBS 来进行稀释。
这里需要提出关注的是——稀释后抗体的稳定性。
一般来说，浓缩液稀释成工作液后当天马上用完，不容易出现稳定性的问题。
而有时候由于某些一抗的效价比较高，一次稀释出来的工作液的量比较大，在当天用不完的时候有些研究者会选择就这样保存在冰箱中，等下次再用。
这样的操作可能会对实验带来一定的变数，虽然PBS可以用来稀释抗体浓缩液，但并非稳定保存抗体的有效试剂。
在单纯的PBS中，抗体效价会下降的比较快，那么效价下降前后的实验条件是不一样的，将导致批次实验结果的比较相对困难；例如原本弱阳性的染色结果，在一抗效价下降后，可能会得出阴性的染色结果。
碱性磷酸酶标记抗体说明书
北京索莱宝科技有限公司碱性磷酸酶标记抗体说明书（AP antibody conjugate）
规格：0.1ml
保存：-20℃保存，避免反复冻融，保质期至少为1年；稀释后2～8℃可保存2周。
产品说明：
碱性磷酸酶标记抗体具有发光信号平台期长、背景值低、底物长期稳定的特点，是常用的化学发光分析法之一。
本公司制备的AP标记抗体，可用于多种免疫学实验，如：ELISA﹑WB﹑IHC等。
本品每0.1ml液体中含有AP200g，IgG含量约100g。
抗体浓度：1mg/ml
储存液：0.01M PBS(pH7.4)﹑1%BSA﹑0.03%Proclin300和50%Glycerol.
工作效价：
ELISA：1：2000-10000
WB：1：1000-10000
IHC：1：100-1000
具体效价以产品标签为准，最佳使用浓度需根据所检测样本的抗原及一抗效价优化而定。
显色说明：用BCIP/NBT作为底物进行显色，最终形成不溶性的深蓝色至蓝紫色沉淀。
第1页，共1页。
Anti-HiBiT Monoclonal Antibody n7200 N7210 使用说明书
2023版 CTM719原英文技术手册TM719中 文 说 明 书适用产品目录号：N7200、N7210Anti-HiBiT Monoclonal Antibody普洛麦格(北京)生物技术有限公司Promega (Beijing) Biotech Co., Ltd 地址：北京市东城区北三环东路36号环球贸易中心B座907-909电话：************网址：技术支持电话：400 810 8133技术支持邮箱：*************************CTM7192023制作1所有技术文献的英文原版均可在/ protocols 获得。
请访问该网址以确定您使用的说明书是否为最新版本。
如果您在使用该试剂盒时有任何问题，请与Promega 北京技术服务部联系。
电子邮箱：*************************1. 描述 (2)2. 产品组分和储存条件 (3)3. 免疫印迹分析 (3)3. A. 一般注意事项 (3)3. B. 示例操作流程 (4)3. C. 示例数据 (5)4. 免疫荧光分析 (7)4. A. 一般注意事项 (7)4. B. 示例操作流程 (8)4. C. 示例数据 (9)5. 免疫沉淀 (10)5. A. 一般注意事项 (10)5. B. 示例操作流程 (11)5. C. 示例数据 (12)6. 用活细胞进行荧光激活细胞分选（FACS） (15)6. A. 一般注意事项 (15)6. B. 示例操作流程 (15)6. C. 示例数据 (17)7. 用固定细胞进行荧光激活细胞分选 (17)7. A. 一般注意事项 (17)7. B. 示例操作流程 (18)7. C. 示例数据 (19)8. 抗体结合亲和力和与LgBiT的竞争 (19)9. 疑难排查 (21)9. A. 免疫印迹分析 (21)9. B. 免疫荧光分析 (22)9. C. 免疫沉淀 (22)9. D. 荧光激活细胞分选 (23)10.参考文献 (24)11.相关产品 (24)Anti-HiBiT Monoclonal Antibody普洛麦格(北京)生物技术有限公司Promega (Beijing) Biotech Co., Ltd 地址：北京市东城区北三环东路36号环球贸易中心B座907-909电话：************网址：技术支持电话：400 810 8133技术支持邮箱：*************************CTM7192023制作21.描述HiBiT蛋白标签为含有11个氨基酸的多肽，在NanoLuc® Binary Technology（NanoBiT®）中，可与大亚基（LgBiT）以高亲和力结合，以重建NanoBiT®萤光素酶，一种明亮的发光酶（1,2）。
抗体保存
抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。
如储存的抗体中蛋白浓度很低（10-100Mg/L），就应另加隔离蛋白以减少容器对抗体蛋白的吸附，隔离蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。
绝大多数已稀释的抗体应存在4℃-8℃条件下，以免冻融对抗体蛋白产生有害效应。
抗体原液和已分离的免疫球蛋白组分应保存于-20℃条件下，并避免反复冻融。
冷冻的抗体溶液应置于室温中缓慢地解冻，应绝对避免用高温快速解冻。
被细菌污染的抗体常会出现假阳性结果，应将污染的抗体溶液及其他试剂弃之。
为防止细菌污染，可于抗体溶液中加入0.01%叠氮钠。
抗体经真空冷冻干燥后置-20℃以下可保存3-5年。
保存稀释后的单抗应加入0.1%叠氮钠浓度。
大多数稀释抗体可进行冷冻保存，少数抗体可能会丢失抗原活性。
大多数单抗，只要蛋白浓度适当，可在4℃下保存数月。
其他注意事项：分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10ul每份。
因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。
复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4oC，避免再冻起来！抗体工作液应该当天配制当天用完，在4oC 尽量不要超过1天。
绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。
尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上。
无论是保存还是运输，绝对避免反复冻融！反复冻融会导致抗体变性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力！蛋白在高浓度时更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），这就是为什么在抗体中加入BSA之类作为稳定剂的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。
但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。
为了防止微生物污染，叠氮化钠经常被加入到抗体中（终浓度0.02% (w/v)）。