常用pH缓冲液缓冲液缓冲范围

资料]常用pH缓冲溶液的配制和pH值
•常用pH缓冲溶液的配制和pH值
一、常用溶液的配制
（一）溶液配制注意事项
1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。

工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。

2．药品称量要精确。

3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在~之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。

４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。

（二）（1/15）Mol/L磷酸缓冲液
1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．），用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。

2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，.）（或者Na2HPO4·2H2O ）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。

3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。

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（三）L PB液
Na2HPO4·2H2O分子量= L溶液含L。

Na2HPO4·12H2O分子量= L溶液含L。

NaH2PO4·H2O分子量= L溶液含L。

NaH2PO4·2H2O分子量= L溶液含L。

（四）L PB缓冲液
L Na2HPO4·2 H2O溶液L
Na2HPO4·12 H2O溶液含L
LNaH2PO4·H2O溶液含L
NaH2PO4·2 H2O溶液含L
欲配L PB缓冲液则在L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。

欲配制PBS液时，则在溶液中加％的NaCl溶液即可。

（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）
（L PH ）
NaCl
KCl
Na2HPO4
（如为Na2HPO4·12H2O，则为）
KH2PO4
将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌
10min~15min，存在4℃冰箱中备用。

此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗
涤细胞培养物。

（六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer）
1．硼酸（Ｈ3BO3）
L硼酸：硼酸加水至1 000ml。

2．硼砂（Na2B4O7）
L硼砂：硼砂加水至1 000ml。

（七）巴比妥缓冲液
1．离子强度L巴比妥缓冲液
巴比妥钠
蒸馏水 3 000ml
HCl
（ N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水）
⑴ 将巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。

⑵ 加 N HCl 55ml。

⑶ 用HCl调节pH到，并加蒸馏水至4 265ml。

2． L巴比妥缓冲液
巴比妥
巴比妥钠
加蒸馏水至 1
3． L巴比妥缓冲液
巴比妥
巴比妥钠
加蒸馏水 1
（八）L醋酸盐缓冲液见表附表5
（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液）
不同pH，L
L三羟甲基氨基甲烷加х，加水稀释至100ml（见下表）
三羟甲基氨基甲烷（Tris）
分子量=
L三羟甲基氨基甲烷：，加水至1 000ml。

：取，加水至1 000ml。

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（十）L 碳酸盐缓冲液
NaHCO3
Na2CO3
溶于蒸馏水中即得。

不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。

最好小量配制。

（十一）甘油磷酸缓冲液
1．配制磷酸缓冲液
L Na2HPO4
NaH2PO4
混合即可
2．9份甘油与1份磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。

用途：用于免疫荧光试验。

（十二）Hank’s液
1．贮存液
NaCl
KCl
Na2HPO4·12 H2O
KH2PO4
葡萄糖
％酚红液
双馏水加至
115℃高压灭菌15min，冰冻保存。

2．工作液
贮存液 1份
双馏水 9份
115℃高压灭菌15min。

临用时用灭菌的％NaHCO3液调pH值至左右（溶液呈橙红
色）。

（十三）萘（钠）氏试剂（Nessler’s reagent）
配方1：氯化汞
碘化钾
20％NaOH 30ml
加蒸馏水至 100ml
配方2：碘化汞
碘化钾 8g
蒸馏水 50ml
（完全溶解后）过滤，加20％NaOH 50ml。

用途：检测溶液中氨离子。

（十四）阿氏（Alsever’s）液
葡萄糖
柠檬酸钠
氯化钠
蒸馏水 100ml
溶解后，以10%柠檬酸调节pH至，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存。

（十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液）
青霉素（40万U） 5支
链霉素（200万μg） 1支
分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）。

临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉
素100ug/ml。

（十六）洗液（清洁液）
配方1：重铬酸钾 150g
蒸馏水 300ml
浓硫酸 3 000ml
将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。

此为
强洗液。

盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上
眼镜和厚胶皮手套，以保安全。

洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。

如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。

配方2：浓硫酸 50%
蒸馏水 50%
重铬酸钾 5%
此为中等强度洗液。

配方3：重铬酸钾 100g
蒸馏水 1 000ml
加热溶解，冷却后缓慢加入
工业硫酸 100ml
此液为弱洗液，为棕红色。

使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，
经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。

缓冲液名称及常用浓度缓冲pH范围主要物质分子量
MES (2吗啉代乙磺酸)
Bis-Tris
HEPES
PIPES
MOPS
Tricine
TEA (三乙醇胺)
甘氨酸-盐酸缓冲液（L）甘氨酸Mr=
邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（L）邻苯二甲酸氢钾Mr=
磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液磷酸氢二钠Mr=
柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液柠檬酸Mr=
柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（L）柠檬酸Mr= 柠檬酸钠Mr=
乙酸-乙酸钠缓冲液（L）乙酸钠Mr= 乙酸Mr=
邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液邻苯二甲酸氢钾Mr=
磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（L）
磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液（1/15 molL）
磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（L）
巴比妥钠-盐酸缓冲液(18℃) 巴比妥钠Mr=
Tris-盐酸缓冲液L 25℃) 三羟甲基氨基甲烷（Tris）Mr=
甘氨酸-氢氧化钠缓冲液L) 甘氨酸Mr=
硼砂-氢氧化钠缓冲液L) 硼砂Na2B4O710H2O Mr=
碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液L) 碳酸钠Mr= 碳酸氢钠Mr= 碳酸钠-氢氧化钠缓冲液L)
磷酸氢二钠-氢氧化钠缓冲液
氯化钾-盐酸缓冲液（L）氯化钾Mr=
氯化钾-氢氧化钠缓冲液（L）氯化钾Mr=。