生物化学与分子生物学常用试剂配方

30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide 100mL

将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。0.45µm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。

【保存条件】

4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存

【注意事项】

丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。

5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液----- 5×Tris-Glycine buffer （SDS-PAGE电泳缓冲液）

称取15.0gTris，94.0g甘氨酸（glycine），5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。得0.125mol/L Tris-1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释5倍。【保存条件】

室温保存，两年有效。

【注意事项】

配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。

电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液。

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS 配制20mL

【组分浓度】10%(w/v)SDS

【配制方法】

称取2g高纯度的SDS置于100~200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68℃加热溶解，滴加浓盐酸调节PH至7.2，定容至20ml后，室温保存

【保存条件】

室温保存

【注意事项】

对人体有害，请注意防护。

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

膜转移缓冲液(Transfer Buffer)配方一：takara

称取2.9g甘氨酸（glycine），5.8gTris碱，0.37g SDS溶于约600mL的去离子水，充分搅拌溶解，定容至800mL后，并加入200ml甲醇，摇晃混匀，室温保存。

【保存条件】

室温保存

【注意事项】

1 SDS妨碍蛋白与膜的结合，特别是对小蛋白更是如此，因此，对于小分子的蛋白，电转移缓冲液中可

以不加SDS。

2保持20%的甲醇浓度

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

膜转移缓冲液(Transfer Buffer)(pH8.5)配方二：cell signal

先配制1M Tris base (MW:121.1) 100ml: 12.1g Tris base + ddH2O至100ml,PH约11

1M 12.5ml Tris base + 7.5g glycine(MW:75.05) +100ml methanol+ ddH2O 至400ml,调好PH值8.5, 再加ddH2O至500ml. 先置于4℃保存备用。

【保存条件】

4℃保存

【注意事项】

1 SDS妨碍蛋白与膜的结合，特别是对小蛋白更是如此，因此，对于小分子的蛋白，电转移缓冲液中可

以不加SDS。

2保持20%的甲醇浓度

摘自Cell signal Technology Protocol

/support/protocols/Western.html

1MTris-HCL（pH6.8）配制10mL

【组分浓度】1MTris-HCL

【配制方法】

称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH

值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

【保存条件】

室温保存。

【注意事项】

对人体有刺激性，请注意适当防护。

摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

1.5MTris-HCL（pH8.8）配制20mL

【组分浓度】1.5MTris-HCL

【配制方法】1L

称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。（1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL 混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40C保存。）

【保存条件】

室温保存

【注意事项】

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法

5×SDS-PAGE加样缓冲液----- 5×SDS-PAGE Loading Buffer 需要3ml

【组分浓度】0.25MTris-HCL(pH6.8)；

10%(W/V)SDS；

0.5%(W/V) BPB(溴酚蓝)；

50%(V/V) 甘油；

5%(W/V)β-巯基乙醇(2-ME)

量取1.25mL 1MTris-HCL（pH6.8），0.5g SDS，25mg BPB，2.5mL甘油，置于10mL塑料离心管中，加去离子水溶解后，定容至5mL，小份（0.5mL/份）分装，于室温保存。使用前将25μL的2-ME加入到每小份中。加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。

【保存条件】

-20℃保存，至少一年有效。

【注意事项】

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT和巯基乙醇，有轻微刺激性气味，必须完全溶解后再使用。摘自Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法