生物化学 常用试剂配制

常用试剂配制-生物、化学．常规试剂配制和测定方法

一、溶液的配制1000 mL）1. Mandels营养盐溶液（g）称重

量（名

14 ）)硫酸铵（(NHSO42420 ）磷酸二氢钾（KHPO423 尿素）HNCONH （223 ）MgSO·7HO硫酸镁（244

O）氯化钙（CaCl·2H22注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。

微量元素溶液（1000 mL）2. Mandels）量（g称重名

3.7 氯化钴（CoCl·O）6H221.4 ）·ZnSO7HO硫酸锌（241.6 O）MnSO硫酸锰（·H245.0

）硫酸亚铁（FeSO·7HO24后的蒸馏水配制。注：用煮沸10 min

3. DNS试剂的配制（1000 mL）

（1）取：3,5-二硝基水杨酸（CHNO）7.5 g

7472氢氧化钠（NaOH ）14.0 g

充分溶解于1000 mL 水中（水预先煮沸10 min）

（2）加入：酒石酸钾钠（CHOKNa·4HO）216.0 g 24465.5 mL

℃水浴中融化）50 苯酚（在

6.0 g

偏重亚硫酸钠（NaSO）522使5天后便可使用，平时盛一小瓶(250 mL)（3）充分溶解后盛于棕色瓶中，放置

用，要放在冰箱中冷藏。此溶液每月配制一次。注意：倒入瓶中时要尽量装满！！

的配制（1000 mL）4. 考马斯亮蓝G-250mL 乙醇中，加入100 mL 即0.1g溶于50 95%称考马斯亮蓝G-250 100 mg）（w/v85 %磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL ，滤纸过滤。最终试剂中含0.01 % w/v）磷酸。（w/v）乙醇，8.5 %（，考马斯亮蓝G-2504.7 %

1000 mL）5. 1.0 M柠檬酸缓冲溶液的配制（(g) 量量Mn

重分名称子

210 210 O）H柠檬酸（CHO·2678 74.5 40

NaOH

准确称取柠檬酸210 g，溶于约750 mL煮沸（10 min）蒸馏水中，待柠檬酸充分溶解后加入氢氧化钠74.5 g，完全溶解后将上述溶液转移到1000 mL容量瓶中，冷却后将容量瓶定容到1000 mL（原始pH4.45）。（检验方法：取1.0 M柠檬酸缓冲溶液稀释20倍，测定稀释液的pH值，pH值应为4.8）

6. 标准糖溶液的配制和标准方程的测定

（1）标准糖溶液的配制

准确称取2.000 g葡萄糖/木糖（葡萄糖/木糖需105 ℃烘干3 h），蒸馏水溶解，全部转移至1 L容量瓶内，摇匀，配制成2 g/L葡萄糖/木糖溶液。

取9个100 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖/木糖溶液10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL、70 mL、80 mL、90 mL依次加入容量瓶，蒸馏水定容，摇匀。即为0.2 g/L、0.4 g/L、0.6 g/L、0.8 g/L、1.0 g/L、

1.2 g/L、1.4 g/L、1.6 g/L、1.8 g/L、

2.0 g/L葡萄糖/ 木糖标准溶液。

取6个30 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖溶液10 mL、12 mL、14 mL、16 mL、18 mL、20 mL依次加入容量瓶，每瓶再加入1.5 mL柠

檬酸缓冲液，蒸馏水定容，摇匀。即为1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g 酶解葡萄糖。

（2）标准方程的测定：

①葡萄糖/木糖标准方程的测定

取10支25mL刻度管，10支1mL刻度吸管，分别加入0.2 g/L、0.4 g/L、0.6 g/L、0.8 g/L、1.0 g/L、1.2 g/L、1.4 g/L、1.6 g/L、1.8 g/L、2.0 g/L葡萄糖/木糖标准溶液1 mL，DNS溶液3 mL。100 ℃煮沸5 min，水浴冷却后定容至25 mL，摇匀。以蒸馏水作为空白对照，550 nm测定吸光度A。以A为纵坐标，C为横坐标，

制定标准曲线。（7230型分光光度计输出方程为：A = MC + N，723型分光光度计输出方程为：C = KA + B）

②酶解木糖标准方程测定（测定木聚糖酶活力）

取6支25 mL刻度管，6支2 mL刻度吸管，分别加入1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g酶解木糖标准溶液1.5 mL，DNS溶液3 mL，100 ℃煮沸5 min，水浴冷却后定容至25 mL，摇匀。以蒸馏水作为空白对照，550 nm测定吸光度A。以A为纵坐标，C为横坐标，制定标准曲线。（7230型分光光度计输出方程为：A =

MC + N，723型分光光度计输出方程为：C = KA + B）

③酶解葡萄糖标准方程测定（测定滤纸酶活力、CMC酶活力）

取6支小试管，6支2 mL刻度吸管，分别加入1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g酶解葡萄糖标准溶液1.5 mL，DNS溶液3 mL，100 ℃煮沸5 min，水浴冷却后，量筒定容至50 mL（定容至25 mL，测定CMC酶活力），摇匀。以蒸馏水作为空白对照，550 nm测定吸光度A。以A为纵坐标，C为横坐标，制定标准曲线。（7230型分光光度计输出方程为：A = MC + N，723型分光光度计输出方程为：C = KA + B）

7. 柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液的配制

0.1 mol/L0.2 mol/L磷酸氢二/mL

柠檬/mL10.729.28

11.158.8511.608.4012.097.91

12.637.37

13.226.7813.856.1514.555.45

15.454.5516.473.5317.392.61

18.171.8318.731.2719.150.8519.450.55

注：NaHPO，Mr =141.98；0.2 mol/L溶液为28.40 g/L

42NaHPO·2HO，Mr =178.05；0.2 mol/L溶液为35.61 g/L 224CHO·HO，Mr =210.14；