饱和硫酸铵溶液的配制复习课程
饱和硫酸铵溶液(SAS)
北京雷根生物技术有限公司
饱和硫酸铵溶液(SAS)
简介：
硫酸铵(Ammonium sulfate)分子量为132.14，化学式为(NH 4)2·SO 4，CAS 号为7783-20-2，饱和硫酸铵溶液多用于硫酸铵盐析法沉淀蛋白质。
硫酸铵盐析法是分离蛋白质常用的方法之一，其原理是当高浓度的盐加入到蛋白溶液中，铵离子和硫酸根离子同蛋白质竞争与水结合，使蛋白质的溶解性降低而从水溶液中沉淀析出。
饱和硫酸铵溶液(SAS)pH 为7.0～7.2，操作简单，不易引起蛋白质变性失活，其缺点是所得抗体纯度不高，易受其他蛋白质污染。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作。
注意事项：
1、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：
编号 名称 PP0088 Storage 饱和硫酸铵溶液(SAS) 500ml RT 使用说明书 1份
编号 名称
CC0005 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁)
CS0001 ACK 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
DF0111 中性福尔马林固定液(10%)
DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液
PE0080 Tris-HCl 缓冲液(1mol/L,pH6.8)
PT0013 考马斯亮蓝快速染色液
PW0040 Western blot 一抗稀释液
TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 比色法)。
硫酸铁铵饱和溶液的配制
硫酸铁铵饱和溶液的配制
配制硫酸铁铵饱和溶液的步骤如下：
1. 准备所需材料：硫酸铁铵固体、蒸馏水。
2. 在一个干燥的容器中称取一定质量的硫酸铁铵固体。
3. 将所称取的硫酸铁铵固体逐渐加入到蒸馏水中，并用玻璃棒搅拌溶解。
4. 继续加入硫酸铁铵固体，并搅拌溶解，直到已加入的硫酸铁铵固体不再溶解，出现沉淀。
5. 当出现沉淀后，停止加入硫酸铁铵固体，继续搅拌溶液直到均匀。
6. 饱和溶液中的硫酸铁铵固体可以通过过滤分离沉淀。
7. 将得到的硫酸铁铵饱和溶液转移至干燥的容器中保存即可。
需要注意的是，硫酸铁铵是一种刺激性物质，操作时需戴好防护眼镜和手套，避免直接接触皮肤和眼睛。
另外，配制过程中应保持通风良好，避免吸入有害气体。
饱和硫酸铵溶液的配制
饱和硫酸铵溶液的配制
1. 配制硫酸铵溶液的需要准备的材料
(1)铵氯化钠：硫酸铵含有可溶性氯化钠，可以吸收和储存15％水分，不易氧化；
(2)硫酸：化学纯度高，无腐蚀性，无毒性，提高硫酸铵的溶解度；
(3)冷开水：用来调节溶液的浓度和酸碱性，溶液可以按照规定的比例
来调节。
2. 配制硫酸铵溶液的步骤
(1)将铵氯化钠放入容器中，用一定的量的冷开水混合，同时在攝氏30℃的温度下搅拌均匀；
(2)在攪拌的同时慢慢投入硫酸，投入量按照要求来控制；
(3)持续搅拌铵氯化钠和硫酸，直到完全溶解；
(4)注入更多的冷开水，把更多的硫酸溶解入溶液中，调节溶液的酸碱
和浓度。
3. 注意事项
(1)铵氯化钠和硫酸的投入量需要准确，不能有损余质；
(2)在搅拌溶液的过程中，必须保持温度在攝氏30-50℃之间，否则会引起氯化铵团聚，影响溶液质量；
(3)溶液攪拌完成后，需要看是否符合溶液的要求，如比重和PH等，
确保溶液质量。
硫酸铵分级纯化蛋白质原理操作
硫酸铵分级纯化蛋白质原理操作硫酸铵分级沉淀蛋白质原理与操作一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。
用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。
高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。
各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。
这种方法称之为盐析。
盐浓度通常用饱和度来表示。
硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。
二，试剂及仪器1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等2. 硫酸铵（ NH 4 ） SO 43. 饱和硫酸铵溶液（ SAS ）4. 蒸馏水5. PBS( 含 0.2g /L 叠氮钠 )6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。
各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。
通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为 33% — 50% 。
（一）配制饱和硫酸铵溶液（ SAS ）1.将 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 边搅拌边慢慢加到 1 升蒸馏水中。
用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。
此即饱和度为 100% 的硫酸铵溶液（ 4.1 mol/L, 25 ° C ）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水） 20 000 ′ g 离心 30 min ，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的 SAS 到上清液中，终浓度为 1 ： 1 （4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时或搅拌过夜（ 4 ° C ），使蛋白质充分沉淀。
（三）透析1.蛋白质溶液 10 000 ′ g 离心 30 min （ 4 ° C ）。
弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（ 10-20ml ） PBS -0.2g /L 叠氮钠中。
掌握常用溶液的配制方法教案
掌握常用溶液的配制方法教案导言在化学实验中，经常需要配制有关溶液，有效的配制溶液方法不仅可以保证实验的准确性，还可以提高实验室工作的效率。
因此，掌握常用溶液的配制方法对于学生学习化学实验技巧是非常重要的。
本教案将重点讲解如何配制常用的饱和溶液、浓溶液、稀溶液及溶液的稀释等。
一、饱和溶液的配制饱和溶液的定义是在一定温度下液中所能溶解的最大量的物质，当达到饱和时，在剩余物质不能再解离出固体。
因此，饱和溶液的配制方法应该有选择性的选择溶剂与溶质，合理掌握温度，时间等因素，以下是饱和溶液的配制方法:1.选择合适的溶剂：饱和溶解度与溶剂种类密切相关，选用不同种类的溶剂，其饱和度不同。
例如，氯化钠在水中的饱和度为36g/100ml，而在乙醇中则只有0.4g/100ml。
2.合理掌握温度和时间：饱和度与温度有很大的关系。
一般来说，随着温度的升高，溶解度也会随之增加。
因此要选择适当的温度和时间配制饱和溶液。
有些物质在室温下即可产生饱和溶液，有些则需要静置一段时间甚至煮沸才能完全溶解。
二、浓溶液的配制为了达到某些实验和工艺的要求，需要配制一定浓度的溶液或稀释已有的溶液。
这时，浓度即为若干重量或体积单位物质所包含的溶质的量。
因此，浓溶液的配制方法需要有准确的称量和计量技术。
以下是浓溶液的配制方法:1.计算所需用物质的质量或体积：需求的浓度和总量固定，即可通过计算所需的物质数量。
一般来说，质量单位的物质称量比体积单位的物质称量更准确，但是有些物质具有不稳定性、挥发性或毒性等特殊性质，此时就应该采用体积计量方法。
2.精确称量所需用物质：选用准确的天平或瓶口分配式装置从准确的药品容器中称量填充。
务必避免称量误差，以保证实验结果的准确性。
3.加入所需的溶解剂并充分搅拌：溶剂的选择应以溶质在该溶剂中的溶解度为依据；搅拌速度应均匀并且可以加快溶解的速度。
三、稀溶液的配制稀溶液的配制方法需要水或其他溶剂与浓溶液混合，有效的稀释方法可以快速稀释溶液并提高溶液的稳定性。
硫酸铵溶液饱和度 27页PPT文档
⑤ 其他：在进行盐析沉淀时，有时需在溶液中加入一定 量EDTA，以除去沉淀剂中带入的金属离子。再者是 加硫酸铵的时间要控制好，一般2h左右。
沉淀效果 25~35 35~45 45~55
112 6850 3020
55~65 27
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调整硫酸溶液饱和度计算表
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第二节 蛋白沉淀法
1. 盐析法 盐析的影响因子：
① 蛋白质浓度对盐析的影响：蛋白质浓度过大，盐析时 发生共沉现象，分离效果不好；蛋白质浓度太稀，耗 盐量过大，蛋白质回收率也低。一般控制样品液蛋白 浓度在0.2%-2%为宜。
生物化学技术原理及应用
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第二章 沉淀法
沉淀法是纯化生物大分子常用的一种经典方法。该 法操作简单，成本低廉，一般包括盐析沉淀、有机 溶剂沉淀和选择性沉淀等类型。
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第二章 沉淀法
1 基本原理 2 蛋白沉淀法 3 核酸沉淀法
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第二节 蛋白沉淀法1. 盐 Nhomakorabea法 盐的选择
一般蛋白沉淀时选用硫酸铵，原因：
溶解度大，对温度不敏感 分级效果好 有稳定蛋白质结构的作用 价格低廉，废液可以肥田
硫酸铵饱和溶液的配制
硫酸铵饱和溶液的配制《硫酸铵饱和溶液的配制》硫酸铵饱和溶液的配制啊，这听起来有点专业，但其实就像咱们做饭调个合适的酱汁一样，有它的小窍门。
咱先说说硫酸铵这东西。
它是一种白色的晶体，看起来就像白糖似的，可千万不能弄错了，这白糖是甜的能吃，硫酸铵可不能吃啊。
这硫酸铵在化学里可是个“小明星”，经常在实验室里出现，尤其是在配制饱和溶液的时候。
要配制硫酸铵饱和溶液，得先准备好材料。
就像咱包饺子得先准备好面粉、馅一样。
得有硫酸铵，这是主角，还得有干净的水，这水就像舞台，硫酸铵就在这个舞台上展现它的溶解性。
容器也不能马虎，最好是干净的烧杯或者瓶子之类的。
我就有一次，没注意容器干净不干净，结果配出来的溶液老是有点怪怪的，就像炒菜锅没洗干净炒出来的菜有怪味一样。
然后就是量的问题了。
这硫酸铵放多少合适呢？这就像是给菜放盐，少了没味道，多了就咸得没法吃了。
一般来说，我们要知道硫酸铵在不同温度下的溶解度。
温度就像个调皮的小娃娃，它一变，硫酸铵能溶解的量也跟着变。
比如说在室温下，我们就可以慢慢往水里加硫酸铵，一边加一边搅拌。
搅拌就像是给硫酸铵做按摩，让它在水里更好地溶解。
我记得我第一次配制的时候，就特别着急，一股脑地往水里倒硫酸铵。
结果呢，底下就有好多硫酸铵沉淀在那儿，就像沙子沉在水底一样。
这就说明加太多了，溶液已经饱和了，多余的硫酸铵就没法再溶解了。
这时候就得把溶液过滤一下，把那些没溶解的硫酸铵固体去掉，就像把菜里的残渣捞出来一样。
在加硫酸铵的时候，一定要有耐心。
一点点地加，看着它慢慢溶解。
这就像看着孩子一点点长大，是个需要细心的过程。
如果一下子加太多，就容易出问题。
有时候你可能觉得差不多了，但是你再搅拌一会儿，还能再溶解一些呢。
这就像挖宝藏，你以为挖完了，再仔细找找，还能找到更多的宝贝。
配好的硫酸铵饱和溶液看起来是澄清透明的，要是有浑浊，那就可能是有杂质或者是硫酸铵没有完全溶解好。
这就像我们看人，要是看起来不清不楚的，那肯定是有问题的。
硫酸铵饱和溶液_计算
（四）抗原的分离与纯化从细胞中提取出来的生物大分子是不纯净的，必须进一步分离纯化才能获得纯品。
在生物大分子制备工作中，分离纯化是比较复杂和重要的一个环节。
对于异类的物质，如提纯蛋白质和酶时混杂着核酸，提纯核酸时混杂着蛋白质或多糖，一般可用专一性酶水解、有机溶剂抽提、选择性分部沉淀等方法处理，小分子物质常在整个制备过程多次液相与固相互相转化被分离或最后用透析方法除去。
而对同类物质，如酶和杂蛋白，RNA和DNA以及不同结构的蛋白质、酶、核酸之间的分离，情况则复杂得多，主要应用的方法有盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、吸附法、结晶法、电泳法、超速离心法、柱层析法等。
其中盐析法、等电点法、结晶法用于蛋白、酶的提纯较多；有机溶剂抽提和沉淀用于核酸提纯较多；柱层析法、梯度离心法在蛋白质和核酸的提纯工作中应用均十分广泛。
本节侧重对蛋白质、酶和核酸分离纯化中与溶解度有关的一些方法作一简要叙述。
1．蛋白质分离纯化的一些方法（1）盐析法①原理：盐析法对于许多非电解质的分离纯化都是适合的，也是蛋白质和酶提纯工作应用最早，至今仍广泛使用的方法。
其原理是蛋白质、酶在低盐浓度下的溶解质随着盐液浓度升高而增加（此时称为盐溶）；当盐浓度不断上升时，蛋白质和酶的溶解度又以不同程度下降并先后析出，称为蛋白质的盐析。
这一现象是由于蛋白质分子内及分子间电荷的极性基团有着静电引力，当水中加入少量盐类时，由于盐类离子与水分子对蛋白质分子上的极性基团的影响，使蛋白质在水中溶解度增大。
但盐浓度增加到一定程度时，蛋白质表面的电荷大量被中和，水化膜被破坏，于是蛋白质就相互聚集而沉淀析出。
盐析法就根据不同蛋白质和酶在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度的不同而达到彼此分离的方法。
②盐的选择：蛋白质盐析常用中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。
其中应用最广的是硫酸铵，其优点是温度系数小而溶解度大（25℃时饱和溶解度为4.1mol/L,即767g/L;0℃时饱和溶解度为3.9mol/L，即676g/L），在这一溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以盐析出来，而且硫酸铵价廉易得，分段效果比其他盐好，不容易引起蛋白质变性。
硫酸铵溶液饱和度.ppt
透析法。将盛蛋白质溶液的透析袋放入一定浓度的大 体积盐溶液中，通过透析作用改变蛋白质溶液中的盐 浓度。该法盐浓度以连续状态变化，避免局部盐浓度 过高的不良影响，分级效果好。但受透析袋容积、盐 析速度、及硫酸铵耗费大的制约，仅用于精确、样品 体积小的试验中。
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第二节 蛋白沉淀法
3. 蛋白质沉淀法
针对某一类或某一种蛋白的沉淀法，常见沉淀剂有： 碱性蛋白质：多价阳离子的碱性蛋白质，如鱼精蛋白 ，除能有效沉淀核酸外，还能沉淀某些蛋白质。 凝集素：凝集素是一种特殊的蛋白质，对糖蛋白中糖 链末端序列具有明显、特异的凝聚力。该法反应条件 温和，特异性高。 重金属：重金属盐（如铅盐、汞盐）作为蛋白质沉淀 剂，也能将蛋白质或酶沉淀。但应控制条件，并尽快 透析除去重金属，防止变性。
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第一节 沉淀的基本原理
蛋白沉淀法：
盐析法 有机溶剂沉淀法 蛋白质沉淀法
聚乙二醇沉淀法 选择性沉淀法 结晶沉淀法
核酸沉淀：
有机溶剂沉淀法 等电点沉淀法 其它沉淀剂沉淀法：聚乙二醇（PEG），十六烷
基三甲基溴化铵（CTAB），LiCl，精胺，钙盐。
盐析的缺点：样品继续纯化时须脱盐。
硫酸铵的缺点是铵离子干扰双缩脲反应，为蛋白 质的定性分析造成一定困难。
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第二节 蛋白沉淀法
1. 盐析法
硫酸铵盐析
固体法。在大体积粗制品溶液中逐步加入固体硫酸铵 ，当达到一定饱和度时，蛋白质便可沉淀下来。
饱和硫酸铵法
饱和硫酸铵法测定啤酒保质期
标准操作规程
一．饱和硫酸铵溶液配制：
①按630ml水中加入500g硫酸铵；
②加热溶解，使其达到饱和状态；
③冷却到室温（不同温度中溶解度不同，温度降低后由结晶析出）
④冷却后用单层滤纸过滤，备用。
注意：试剂的保存要尽量恒温。
二．操作步骤：
①用500ml三角瓶预取250-300ml酒样；
②除气（必须保证气体除尽）；
③用量筒量取200ml除气后的酒样，倒入浊度杯；
④在20℃水浴中放置10-15分钟；
⑤放入浊度计，读取初始浊度值；
⑥加入转子，放磁力搅拌器上，准备滴定；
三．滴定过程：
①30ml饱和硫酸铵溶液一次性滴入，搅拌30秒，
②测浊度，浊度小于等于初始浊度时，继续以5ml/次加入，搅拌
20秒；
③测浊度，浊度大于初始浊度0.05EBC时，继续以2ml/次加入，
搅拌20秒；
④测浊度，浊度到达1.5EBC时，继续以0.5ml/次加入，搅拌20
秒；
⑤滴定终点，浊度值为2.0EBC；
⑥读数，并记录整个过程中消耗的饱和硫酸铵溶液量，即为饱和
硫酸铵值。
饱和硫酸铵纯化
饱和硫酸铵纯化血清中抗体1实验原理此方法可以将主要的免疫球蛋白从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。
高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。
硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。
2实验试剂与器材2.1实验试剂：硫酸铵、氨水、盐酸、1XPBS溶液（PH7.4）、2% NaHCO3 、1mmol/LEDTA(PH8.0)、1mol/LNaOH、氯化钡、蒸馏水2.2实验器材：磁力搅拌器、低温离心机、4℃冰箱、PH计、离心管、锥形瓶、搅拌棒、量筒、烧杯、漏斗、移液器、电磁炉、铝锅、剪刀、试剂瓶、透析袋夹子2.3样品抗血清3实验步骤3.1配制溶液3.1.1 配制饱和硫酸铵溶液，25℃时饱和溶解度是767g/L，0℃时为676g/L(见附表)。
配制1000ml饱和硫酸铵，将800g左右的硫酸铵加入到1L水中，加热搅拌到大部分固体溶解，趁热过滤并室温冷却，仍会有晶体析出，再用氨水调节PH 至8.5，4℃保存备用（可以根据所需量按比例调整所配溶液量）。
3.1.2 配制1XPBS溶液（PH7.4）取1.44gNa2HPO4（或3.63gNaHPO4.12H2O），0.24gKH2PO4，8gNaCl，0.2gKCl，加入800ml水中，用盐酸调PH至7.4，补蒸馏水至1000ml，高压蒸汽灭菌。
4℃保存。
3.1.3 配制2% NaHCO3，2g NaHCO3加入到100ml蒸馏水中。
3.1.4 配制1mol/LNaOH，4gNaOH慢慢加入80ml蒸馏水中，边加入边搅拌，完全溶解后定容至100ml，室温保存，无需除菌。
注意放热反应，塑料烧杯储存。
3.1.5 配制1mmol/LEDTA(PH8.0)，先配储存液：EDTA(0.5mol/L)：Na2·EDTA·2HO 37.2g +20g NaOH 配成大约80ml2溶液（注：液体+粉末混合体积会增加），再用NaOH溶液调节PH为8.0，定容至100ml，可以在水浴50℃中溶解。
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饱和硫酸铵溶液的配制
①在25℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。
1． 2．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）
①在0℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。
25℃下100%硫酸铵是1L水中约加780g硫酸铵。
可以在加进去之后，用微波炉加热到溶解为止，然后放置在过夜，第二天就会有晶体析出，这就可以了。
双蒸水中加入过量硫酸铵，热至50－60度保温数分钟，趁热滤出沉淀，在0度或25度平衡1－2天，有固体析出时即达100％饱和度，以氨水调节PH值至7.0。
硫酸铵在水中的溶解度，100度时为1.034g/ml，0度时为0.706g/ml 。
因此，每100ml 蒸馏水加90gAR级结晶硫酸铵，80度溶解，趁热过滤，降至室温后即有结晶析出，应任其留存瓶中，使用前吸出所需的量，用28%的氨水调PH至7.2即可。
结晶（要留着，随着温度变化，溶解度也会变化，你总要保证溶液中是饱和的，所以结晶留在瓶底，不需要再过滤，使用时取上面的溶液即可。
pH7.0或7.2影响不大，也有调到7.4的，因为最后沉淀的蛋白一般都是用PBS稀释的。
）
最方便的就是500ml水加半瓶250g硫酸铵剧烈搅拌，上层澄清的就是饱和的了。
另外较快达到饱和状态的方法是，将过量的硫酸铵（参考不同温度下的溶解大多数，或干脆多加点）放在水浴箱内高温溶解，取出致室温放置至其平衡（会有硫酸铵重新析出），上清即为室温下的饱和硫酸铵
先将硫酸氨80克溶解到100水中，加热到80左右，溶解部分过滤，其余的再溶，仍有一部分结晶，过滤的溶液当降到室温的时候就会有结晶，平衡一两天，取上清用同时氨水调节PH值用。
硫酸铵沉淀主要分为两种形式：
1.将事先配好的饱和硫酸铵溶液加入目标溶液中，这种方法精确度高，硫酸铵是弱酸性的，事先调好pH后，再补入溶液中pH变化小，适合于对pH敏感的蛋白（酶类）或要求比较高的实验。
2.直接将固体硫酸铵补入目标溶液中，这种方法比较快速，但是加入后溶液pH值会有一定程度的降低，适合于对pH不敏感的蛋白，这种操作应该能满足一般实验的要求。