饱和硫酸铵溶液的配制
硫酸铵分级沉淀原理及实验方案
一,基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。
用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离,是免疫球蛋白分离的常用方法。
高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子,从而破坏蛋白质表面的水化膜,降低其溶解度,使之从溶液中沉淀出来。
各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。
这种方法称之为盐析。
盐浓度通常用饱和度来表示。
硫酸铵因其溶解度大,温度系数小和不易使蛋白变性而应用最为广范。
二,试剂及仪器1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等2. 硫酸铵(NH 4 )SO 43. 饱和硫酸铵溶液(SAS )4. 蒸馏水5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠)6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器三,操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。
各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。
通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。
(一)配制饱和硫酸铵溶液(SAS )1.将767g (NH 4 )2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。
用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。
此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液(4.1 mol/L, 25 °C ).2.其它不同饱和度铵溶液的配制(二)沉淀1.样品(如腹水)20 000 ′g 离心30 min ,除去细胞碎片;2.保留上清液并测量体积;3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中,终浓度为1 :1 (4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜(4 °C ),使蛋白质充分沉淀。
(三)透析1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min (4 °C )。
弃上清保留沉淀;2.将沉淀溶于少量(10-20ml )PBS -0.2g /L 叠氮钠中。
沉淀溶解后放入透析袋对PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时(4 °C ),每隔3-6 小时换透析缓冲液一次,以彻底除去硫酸氨;3.透析液离心,测定上清液中蛋白质含量。
过硫酸铵溶液(AP,10%)
北京雷根生物技术有限公司
过硫酸铵溶液(AP ,10%)
简介:
过硫酸铵(Ammonium persulfate ,AP 或APS)分子式为(NH 4)2S 2O 8,分子量为228.20,纯度>98%,用于配制PAGE 胶等。
Leagene 过硫酸铵溶液(AP ,10%)在室温下不稳定,4℃可以保存1周,-20℃可以保存3个月。
组成:
操作步骤(仅供参考):
1、 按实验具体要求操作。
注意事项:
1、 配制好的过硫酸铵在室温下不稳定,-20℃可以保存3个月。
2、 注意避免反复冻融,可先分装成小分,使用一次即丢弃。
3、 另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节APS 的用量,控制在不同的环境下凝胶凝聚的速度。
4、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期: 6个月有效。
相关:
编号 名称 PE0155 PE0155 Storage 过硫酸铵溶液(AP ,10%) 5×1ml 10ml -20℃ 使用说明书
1份 编号 名称
DH0006 苏木素伊红(HE)染色液
PE0025 SDS-PAGE 蛋白加样缓冲液(5×)
PE0080 Tris-HCl 缓冲液(1mol/L,pH6.8)
PE0092 Tris-甘氨酸电泳缓冲液(5×)
PE0103 Acr-Bis(30%,29:1)
PS0013 RIPA 裂解液(强)
PT0001 BCA 蛋白定量试剂盒
TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 比色法)。
饱和硫酸铵溶液的配制
饱和硫酸铵溶液的配制
1. 配制硫酸铵溶液的需要准备的材料
(1)铵氯化钠:硫酸铵含有可溶性氯化钠,可以吸收和储存15%水分,不易氧化;
(2)硫酸:化学纯度高,无腐蚀性,无毒性,提高硫酸铵的溶解度;
(3)冷开水:用来调节溶液的浓度和酸碱性,溶液可以按照规定的比例
来调节。
2. 配制硫酸铵溶液的步骤
(1)将铵氯化钠放入容器中,用一定的量的冷开水混合,同时在攝氏30℃的温度下搅拌均匀;
(2)在攪拌的同时慢慢投入硫酸,投入量按照要求来控制;
(3)持续搅拌铵氯化钠和硫酸,直到完全溶解;
(4)注入更多的冷开水,把更多的硫酸溶解入溶液中,调节溶液的酸碱
和浓度。
3. 注意事项
(1)铵氯化钠和硫酸的投入量需要准确,不能有损余质;
(2)在搅拌溶液的过程中,必须保持温度在攝氏30-50℃之间,否则会引起氯化铵团聚,影响溶液质量;
(3)溶液攪拌完成后,需要看是否符合溶液的要求,如比重和PH等,
确保溶液质量。
饱和器法生产硫酸铵的工艺
饱和器法生产硫酸铵的工艺介绍硫酸铵是一种重要的化肥,在农业生产中具有广泛应用。
饱和器法是生产硫酸铵的常用工艺之一。
本文将介绍饱和器法生产硫酸铵的工艺流程及其基本原理。
工艺流程饱和器法生产硫酸铵的工艺流程主要包括以下几个步骤:1.造浆:将硫酸与铵溶液混合,形成硫酸铵的原始浆料。
通常采用浓硫酸和浓氨水来制备溶液。
2.泵送:将原始浆料通过泵送至饱和器内。
饱和器通常是一个密封的容器,能够在一定的温度和压力下维持浆料的相对稳定状态。
3.饱和:在饱和器内,通过控制温度和压力等条件,使硫酸铵溶解度达到最大值,使溶液中含有尽可能多的硫酸铵。
4.结晶:将饱和溶液从饱和器中排出,并通过调节温度和压力等条件,使得硫酸铵的溶解度下降,从而促使溶液中的硫酸铵结晶出来。
5.分离:将硫酸铵晶体和剩余溶液进行分离。
通常采用过滤或离心等方法进行分离。
6.干燥:将分离出来的硫酸铵晶体进行干燥,以去除其中的水分。
7.包装:将干燥后的硫酸铵晶体进行包装,以便储存和销售。
基本原理饱和器法生产硫酸铵的基本原理是通过控制温度和压力等条件,使硫酸铵溶解度达到最大值,并利用溶解度的变化促使硫酸铵的结晶和分离。
在工艺流程中,首先将硫酸与铵溶液混合,形成硫酸铵的原始浆料。
通过泵送将浆料送入饱和器内,在饱和器内控制温度和压力,使硫酸铵达到饱和状态。
随后,降低温度和/或增加压力,使硫酸铵的溶解度下降,促使其结晶出来。
通过分离和干燥等步骤,最终得到干燥的硫酸铵晶体。
工艺优势饱和器法生产硫酸铵具有以下几个优势:1.工艺相对简单,易于实施和操作。
2.生产成本相对较低,能够降低硫酸铵的生产成本。
3.饱和器法能够高效地将硫酸铵溶解度提高至最大值,从而提高硫酸铵的产量。
4.硫酸铵晶体经过干燥后,能够方便地存储和运输。
工艺注意事项在饱和器法生产硫酸铵的过程中,需要注意以下几个问题:1.控制好饱和器内的温度和压力,以达到硫酸铵的最大溶解度。
2.应定期清洗饱和器,以防止结垢和堵塞等问题。
硫酸铵饱和度常用表
117附录五 硫酸铵饱和度的常用表 1.调整硫酸铵溶液饱和度计算表(25℃) 硫 酸 铵 终 浓 度 , % 饱 和 度10202530333540455055606570758090100每1升溶液加固体硫酸铵的克数①0 56 114 144 176 196 209 243 277 313 351 390 430 472 516 561 662 767 10 5786 118 137 150 183 216 251 288 326 365 406 449 494 592 694 20 2959 78 91 123 155 189 225 262 300 340 382 424 520 619 253049 61 93 125 158 193 230 267 307 348 390 485 583 30 1930 62 94 127 162 198 235 273 314 356 449 546 33 1243 74 107 142 177 214 252 292 333 426 522 35 3163 94 129 164 200 238 278 319 411 506 40 3163 97 132 168 205 245 285 375 469 45 3265 99 134 171 210 250 339 431 50 3366 101 137 176 214 302 392 55 3367 103 141 179 264 353 603469 105 143 227 314 65 3470 107 190 275 70 3572 153 237 75 36115 198 80 77157 硫酸 铵 初 浓 度 , % 饱 和 度9079○1在25℃下硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时,每升溶液所加固体硫酸铵的克数。
1182.硫酸铵溶液饱和度计算表(0℃);硫 酸 铵 终 浓 度 , % 饱 和 度20253035404550556065707580859095100每100毫升溶液加固体硫酸铵的克数①0 10.6 13.4 16.4 19.4 22.6 25.8 29.1 32.6 36.1 39.8 43.6 47.6 51.6 55.9 60.3 65.0 69.7 5 7.9 10.8 13.7 16.6 19.7 22.9 26.2 29.6 33.1 36.8 40.5 44.4 48.4 52.6 57.0 61.5 66.2 10 5.3 8.1 10.9 13.9 16.9 20.0 23.3 26.6 30.1 33.7 37.4 41.2 45.2 49.3 53.6 58.1 62.7 15 2.6 5.4 8.2 11.1 14.1 17.2 20.4 23.7 27.1 30.6 34.3 38.1 42.0 46.0 50.3 54.7 59.2 20 02.7 5.5 8.3 11.3 14.3 17.5 20.7 24.1 27.6 31.2 34.9 38.7 42.7 46.9 51.2 55.7 25 02.7 5.6 8.4 11.5 14.6 17.9 21.1 24.5 28.0 31.7 35.5 39.5 43.6 47.8 52.2 30 02.8 5.6 8.6 11.7 14.8 18.1 21.4 24.9 28.5 32.3 36.2 10.2 44.5 48.8 35 02.8 5.7 8.7 11.8 15.1 18.4 21.8 25.4 29.1 32.9 36.9 41.0 45.3 40 02.9 5.8 8.9 12.0 15.3 18.7 22.2 25.8 29.6 33.5 37.6 41.8 45 02.9 5.9 9.0 12.3 15.6 19.0 22.6 26.3 30.2 34.2 38.3 50 03.0 6.0 9.2 12.5 15.9 19.4 23.0 26.3 30.8 34.8 55 03.0 6.1 9.3 12.7 16.1 19.7 23.5 27.3 31.3 60 0 3.1 6.2 9.5 12.9 16.4 20.1 23.1 27.9 653.1 6.3 9.7 13.2 16.8 20.5 24.4 70 03.2 6.5 9.9 13.4 17.1 20.9 75 03.2 6.6 10.1 13.7 17.4 80 03.36.7 10.3 13.9 85 03.46.8 10.5 90 03.47.0 95 03.5 硫 酸 铵 初 浓 度 , % 饱 和 度100○1在0℃下硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时,每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。
(完整版)硫酸铵分级沉淀原理及实验方案
一,基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。
用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离,是免疫球蛋白分离的常用方法。
高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子,从而破坏蛋白质表面的水化膜,降低其溶解度,使之从溶液中沉淀出来。
各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。
这种方法称之为盐析。
盐浓度通常用饱和度来表示。
硫酸铵因其溶解度大,温度系数小和不易使蛋白变性而应用最为广范。
二,试剂及仪器1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等2. 硫酸铵(NH 4 )SO 43. 饱和硫酸铵溶液(SAS )4. 蒸馏水5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠)6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器三,操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。
各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。
通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。
(一)配制饱和硫酸铵溶液(SAS )1.将767g (NH 4 )2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。
用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。
此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液(4.1 mol/L, 25 °C ).2.其它不同饱和度铵溶液的配制(二)沉淀1.样品(如腹水)20 000 ′g 离心30 min ,除去细胞碎片;2.保留上清液并测量体积;3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中,终浓度为1 :1 (4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜(4 °C ),使蛋白质充分沉淀。
(三)透析1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min (4 °C )。
弃上清保留沉淀;2.将沉淀溶于少量(10-20ml )PBS -0.2g /L 叠氮钠中。
沉淀溶解后放入透析袋对PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时(4 °C ),每隔3-6 小时换透析缓冲液一次,以彻底除去硫酸氨;3.透析液离心,测定上清液中蛋白质含量。
硫酸铵饱和度常用表
硫酸铵初浓度,饱和度/%
0
10.6
13.4
16.4
19.4
22.6
25.8
29.1
32.6
36.1
39.8
43.6
47.6
51.6
55.9
60.3
65.0
69.7
5
7.9
10.8
13.7
16.6
19.7
22.9
26.2
29.6
33.1
36.8
40.5
44.4
48.4
288
326
365
406
449
494
592
694
20
29
59
78
81
123
155
189
225
262
300
340
382
424
520
619
25
30
49
61
93
125
158
193
230
267
307
348
390
485
583
30
19
30
62
94
127
162
198
235
273
314
356
449
546
33
12
43
74
107
142
177
214
252
292
333
426
522
35
31
63
94
129
164
200
238
278
饱和硫酸铵检测方法
饱和硫酸铵检测方法一、饱和硫酸铵溶液配制:1、按630mL水加入500g硫酸铵的比例;2、加热溶解,使其达到饱和;3、冷却到室温(不同温度的溶解度不同,温度降低后有结晶析出);4、单层滤纸过滤,备用。
注意:不同的室温溶液的溶解度也会有差异,所以试剂存于温度较恒定的仪器室。
二、操作步骤:1、500mL三角瓶粗量250~300mL样酒;2、超声波除气5min以上;3、用量筒量取200mL除气后的酒样,倒入浊度杯;4、放20℃水浴静置10min~15min;5、放入浊度计,读取初始浊度值;6、加入转子,放磁力搅拌器上,准备滴定;三、滴定过程:1、30mL饱和硫酸铵溶液一次性滴入,搅拌30sec;2、测浊度,浊度小于等于初始浊度时,继续以5mL/次,搅拌20sec;3、测浊度,浊度大于初始浊度0.05EBC时,继续以2mL/次,搅拌20sec;4、测浊度,浊度到达1.5EBC时,继续以0.5mL/次,搅拌20sec;5、滴定终点,浊度值为2EBC;6、读数,并记录整个过程消耗的饱和硫酸铵溶液的量即为饱和硫酸铵值。
标准混浊液一、仪器容量瓶,100、50ml具塞三角瓶,100ml移液管,5、25ml二、试剂1、1%硫酸肼溶液称取1.000g分析纯硫酸肼,溶于无混浊的蒸馏水,移入100ml 容量瓶中定容,放置4小时,使其充分溶解。
2、10%六次甲基四胺溶液称取10.000g分析纯六次甲基四胺,溶于无混浊的蒸馏水,移入100ml容量瓶中定容。
三、配制1、制备浓富尔马进混浊液吸取25ml1%硫酸肼溶液,缓慢加到盛有25ml10%六次甲基四胺溶液的三角瓶中,边加边摇动,然后盖塞。
放置24小时后备用,该溶液在两个月内有效。
2、制备100EBC富尔马进单位混浊液摇匀浓富尔马进混浊液混浊液,立刻吸取1体积,在容量瓶中用蒸馏水稀释成10体积(简称100EBC 单位混浊液)。
该溶液一周内有效。
3.制备工作标准浑浊液:吸取摇匀后的100EBC 单位混浊液0.00;0.25,0.50,0.75,1.00,1.25,1.50ml分别于7支50ml 比色管中,用添加0.2%硅藻土新过滤的透明啤酒稀释到刻度,摇匀后,即制得0.0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 EBC 单位混浊液。
硫酸铵溶液饱和度计算表
硫酸铵溶液饱和度计算表
注:本表为室温(25℃)下数据,该温度下饱和硫酸铵的浓度为L,即将761g硫酸铵溶于1L 水中。
同时鉴于4-25℃之间数据没有明显变化,所以表中数据也可用于4℃。
饱和溶液加入法是指将预先调好PH的饱和硫酸铵溶液逐步加至相应的蛋白质溶液中,使其达到一定的硫酸铵浓度(或饱和度),令蛋白质沉淀下来。
不同饱和度所需要加入的饱和硫酸铵的量可以用如下公式计算:V=V0 (S2—S1)/(100—S2) 其中v为应加入饱和硫酸铵溶液的体积,V0 是蛋白质溶液的原始体积,S2是所要达到的硫酸铵饱和度,S1 原来溶液的硫酸铵饱和度。
硫酸铵饱和溶液计算
硫酸铵饱和溶液-计算作者:日期:(四)抗原的分离与纯化从细胞中提取出来的生物大分子是不纯净的,必须进一步分离纯化才能获得纯品。
在生物大分子制备工作中,分离纯化是比较复杂和重要的一个环节。
对于异类的物质,如提纯蛋白质和酶时混杂着核酸,提纯核酸时混杂着蛋白质或多糖,一般可用专一性酶水解、有机溶剂抽提、选择性分部沉淀等方法处理,小分子物质常在整个制备过程中多次液相与固相互相转化被分离或最后用透析方法除去。
而对同类物质,如酶和杂蛋白,RNA和D NA以及不同结构的蛋白质、酶、核酸之间的分离,情况则复杂得多,主要应用的方法有盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、吸附法、结晶法、电泳法、超速离心法、柱层析法等。
其中盐析法、等电点法、结晶法用于蛋白、酶的提纯较多;有机溶剂抽提和沉淀用于核酸提纯较多;柱层析法、梯度离心法在蛋白质和核酸的提纯工作中应用均十分广泛。
本节侧重对蛋白质、酶和核酸分离纯化中与溶解度有关的一些方法作一简要叙述。
1.蛋白质分离纯化的一些方法(1)盐析法①原理:盐析法对于许多非电解质的分离纯化都是适合的,也是蛋白质和酶提纯工作应用最早,至今仍广泛使用的方法。
其原理是蛋白质、酶在低盐浓度下的溶解质随着盐液浓度升高而增加(此时称为盐溶);当盐浓度不断上升时,蛋白质和酶的溶解度又以不同程度下降并先后析出,称为蛋白质的盐析。
这一现象是由于蛋白质分子内及分子间电荷的极性基团有着静电引力,当水中加入少量盐类时,由于盐类离子与水分子对蛋白质分子上的极性基团的影响,使蛋白质在水中溶解度增大。
但盐浓度增加到一定程度时,蛋白质表面的电荷大量被中和,水化膜被破坏,于是蛋白质就相互聚集而沉淀析出。
盐析法就根据不同蛋白质和酶在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度的不同而达到彼此分离的方法。
②盐的选择:蛋白质盐析常用中性盐,主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。
其中应用最广的是硫酸铵,其优点是温度系数小而溶解度大(25 C 时饱和溶解度为4 .1mol/L,即767g/L;0 C时饱和溶解度为3 .9mo 1/ L,即676 g/L),在这一溶解度范围内,许多蛋白质和酶都可以盐析出来,而且硫酸铵价廉易得,分段效果比其他盐好,不容易引起蛋白质变性。
最新饱和硫酸铵溶液的配制
饱和硫酸铵溶液的配制------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxx饱和硫酸铵溶液的配制①在25℃下,硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时,每升溶液所加固体硫酸铵的克数。
1. 2.调整硫酸铵溶液饱和度计算表(0℃)①在0℃下,硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时,每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。
25℃下100%硫酸铵是1L水中约加780g硫酸铵。
可以在加进去之后,用微波炉加热到溶解为止,然后放置在过夜,第二天就会有晶体析出,这就可以了。
双蒸水中加入过量硫酸铵,热至50-60度保温数分钟,趁热滤出沉淀,在0度或25度平衡1-2天,有固体析出时即达100%饱和度,以氨水调节PH值至7.0。
硫酸铵在水中的溶解度,100度时为1.034g/ml,0度时为0.706g/ml 。
因此,每100ml蒸馏水加90gAR级结晶硫酸铵,80度溶解,趁热过滤,降至室温后即有结晶析出,应任其留存瓶中,使用前吸出所需的量,用28%的氨水调PH至7.2即可。
结晶()最方便的就是500ml水加半瓶250g硫酸铵剧烈搅拌,上层澄清的就是饱和的了。
另外较快达到饱和状态的方法是,将过量的硫酸铵(参考不同温度下的溶解大多数,或干脆多加点)放在水浴箱内高温溶解,取出致室温放置至其平衡(会有硫酸铵重新析出),上清即为室温下的饱和硫酸铵先将硫酸氨80克溶解到100水中,加热到80左右,溶解部分过滤,其余的再溶,仍有一部分结晶,过滤的溶液当降到室温的时候就会有结晶,平衡一两天,取上清用同时氨水调节PH值用。
硫酸铵沉淀主要分为两种形式:1.将事先配好的饱和硫酸铵溶液加入目标溶液中,这种方法精确度高,硫酸铵是弱酸性的,事先调好pH后,再补入溶液中pH变化小,适合于对pH敏感的蛋白(酶类)或要求比较高的实验。
2.直接将固体硫酸铵补入目标溶液中,这种方法比较快速,但是加入后溶液pH值会有一定程度的降低,适合于对pH不敏感的蛋白,这种操作应该能满足一般实验的要求。
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饱和硫酸铵溶液的配制
①在25℃下,硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时,每升溶液所加固体硫酸铵的克数。
1.?2.?调整硫酸铵溶液饱和度计算表(0℃)
①在0℃下,硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时,每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。
25℃下100%硫酸铵是1L水中约加780g硫酸铵。
可以在加进去之后,用微波炉加热到溶解为止,然后放置在过夜,第二天就会有晶体析出,这就可以了。
双蒸水中加入过量硫酸铵,热至50-60度保温数分钟,趁热滤出沉淀,在0度或25度平衡1-2天,有固体析出时即达100%饱和度,以氨水调节PH值至7.0。
硫酸铵在水中的溶解度,100度时为1.034g/ml,0度时为0.706g/ml 。
因此,每100ml 蒸馏水加90gAR级结晶硫酸铵,80度溶解,趁热过滤,降至室温后即有结晶析出,应任其留存瓶中,使用前吸出所需的量,用28%的氨水调PH至7.2即可。
结晶(要留着,随着温度变化,溶解度也会变化,你总要保证溶液中是饱和的,所以结晶留在瓶底,不需要再过滤,使用时取上面的溶液即可。
pH7.0或7.2影响不大,也有调到7.4的,因为最后沉淀的蛋白一般都是用PBS稀释的。
)
最方便的就是500ml水加半瓶250g硫酸铵剧烈搅拌,上层澄清的就是饱和的了。
另外较快达到饱和状态的方法是,将过量的硫酸铵(参考不同温度下的溶解大多数,或干脆多加点)放在水浴箱内高温溶解,取出致室温放置至其平衡(会有硫酸铵重新析出),上清即为室温下的饱和硫酸铵
先将硫酸氨80克溶解到100水中,加热到80左右,溶解部分过滤,其余的再溶,仍有一部分结晶,过滤的溶液当降到室温的时候就会有结晶,平衡一两天,取上清用同时氨水调节PH值用。
硫酸铵沉淀主要分为两种形式:
1.将事先配好的饱和硫酸铵溶液加入目标溶液中,这种方法精确度高,硫酸铵是弱酸性的,事先调好pH后,再补入溶液中pH变化小,适合于对pH敏感的蛋白(酶类)或要求比较高的实验。
2.直接将固体硫酸铵补入目标溶液中,这种方法比较快速,但是加入后溶液pH值会有一定程度的降低,适合于对pH不敏感的蛋白,这种操作应该能满足一般实验的要求。