实验四 固体纤维素酶滤纸酶活力(FPA)的测定方法
纤维素酶活力测定方法
1 纤维素和纤维素酶
111 纤维素 纤维素是植物细胞的主要成分 , 是地球上分布最
广 、含量最丰富的碳水化合物 , 也是生物界最重要的碳 源之一 [1 ] 。纤维素分子是由许多 是 1 种高 分子化合物 。
纤维素之间存在着氢键 , 通过氢键的缔合作用 , 纤 维素链形成了纤维素束 。在这个纤维素的连续结构中 , 分子密度大的地方平行排列 , 定向良好 , 形成纤维素的 结晶性区域 。而随着致密度的减小 , 结合程度减弱 , 分 子间空隙增大 , 定向变差 , 形成了纤维素的无定型区 域 。在纤维素中除了纤维素链之间存在着氢键 , 在分子 内也存在着氢键 。氢键是 1种高能键 , 这种键的存在给 纤维素的水解带来了很大困难 [2 ] , 也是造成纤维素难以 被利用的根本原因 。 112 纤维素酶
3 纤维素酶活力测定存在的问题与展望
311 纤维素酶活力测定存在的问题 纤维素酶活力的测定方法有很多 , 至今也没有统
一 , 而且测定中存在着很多困难 , 给纤维素酶的开发利 用带来了很多不利影响 。其主要问题有 [6 ] : ( 1 ) 根据 酶反应动力学通则 , 酶活力的测定是在底物过量存在的 条件下 , 测定酶促反应的初速度来表示酶活力 。但纤维 素酶是多组分酶系 , 各组分间有协同作用 , 形成了多种 终产物 , 涉及多种反馈控制机理 。测初速度的原则也就 难以反映底物特性 , 使得确定酶活力测定的标准化方法 非常困难 。 (2) 纤维素是不溶于水的高聚糖 , 纤维素酶 与其反应是在固体界面上进行的 , 其酶解反应速率受底 物对酶蛋白的吸附速率和产物扩散速率的影响 。不同来 源的同一类纤维素酶 , 其组成和各组成成分的比例也有 较大的差异 , 使得测定结果存在较大的不准确性 。 ( 3) 由于纤维素酶结构的复杂性 , 酶组分生化特性和酶学作 用的影响 , 以及异构酶的存在 , 在不同试验条件下得到
两种常用纤维素酶活力测定方法滤纸酶活-CMC酶活
检测纤维素酶酶活力—滤纸酶活力(F PA)滤纸酶活力代表了纤维素酶的三种酶组分协同作用后的总酶活。
采用3，5一二硝基水杨酸法测定酶活：(简称DNS法)1、原理：纤维素经纤维素酶水解后生成还原糖，还原糖能将3，5一二硝基水杨酸中硝基还原成氨基，溶液变为橙色的氨基化合物，即：3一氨基一5二硝基水杨酸，在一定的还原糖浓度范围内，橙色的深度与还原糖的浓度成正比，据此可以推算出纤维素酶的活力。
2、采用的滤纸酶活单位定义：滤纸酶活反映了纤维素酶的3种水解酶，即内切型葡聚糖酶、外切型葡聚糖酶和β葡聚糖苷酶组成的诱导复合酶系的协同水解纤维素能力。
是该菌株整个纤维素酶系的酶活力水平的综合体现。
代表了纤维素酶的三种酶组分协同作用后的总酶活。
在此滤纸酶活单位定义为：以滤纸为底物，在一定反应条件(pH4.8，50℃，恒温lh)下，以水解反应中，1ml纤维素酶液1mi n催化纤维素生成lu g葡萄糖为1个滤纸酶活单位，以U表示。
3、滤纸酶活力(F PA)的测定：①取0．5ml适当稀释的酶液，加入PH值为4.8，0.1mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液l ml或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液lml；②再加入50±0.5mg滤纸(1cmx6c m)一条，于50℃保温酶解反应1小时，(先预热5分钟)；③加入DNS显色液3ml(标准曲线用量是1.5ml)，放入已沸腾的水中沸水浴l Omin，流水冷却后在540nm下测吸光度；④同时用100℃煮沸lOmi n后失活的酶液做对照，扣除本底；⑤根据吸光度从葡萄糖标准曲线中查出相应的葡萄糖含量，根据生成的葡萄糖克数计算出酶活值。
滤纸酶活按下面公式计算：X=（WxNxlO OO）／（TxM）X:为滤纸酶酶活力，单位U／mL。
纤维素酶活力的测定
目的本检测方法是用来确定本公司纤维素酶类的催化活性。
本方法适用于各种固体和液体纤维素酶制剂。
说明本方法适合于纤维素类酶的质量分析和质量控制领域。
但不是本公司产品及其它公司产品的绝对活力的预测，而各种酶制剂的最终的酶活力在良好的实验操作下仍可发挥出更好的催化活力。
原理纤维素被纤维素酶水解最终降解生成β-葡萄糖。
鉴于纤维素结构的复杂性，没有任何一种酶能将纤维素彻底水解。
1950 年Reese提出了C1-Cx概念。
C1是一水解因子，作用于纤维素的结晶区（如棉花纤维即为高度结晶性纤维），使氢键破裂，呈无定形可溶态，成为长链纤维素分子。
再由Cx最终催化形成还原性单糖。
而Cx通常包括：（1）内切葡萄糖苷酶(endo-1,4-β-D-glucanase，EC3.2.1.4，简称EG)。
这类酶随机水解β-1,4-糖苷键，将长链纤维素分子（羧甲基纤维素钠（CMC）即为人工合成的一种线形纤维素钠盐）截短。
（2）外切葡萄糖苷酶（exo-1,4-β-D-glucanase，EC3.2.1.91），又称纤维二糖水解酶（cellobiohydrolase，简称CBH）。
这类酶作用于β-1,4-糖苷键，每次切下一个纤维二糖分子。
（3）β-葡萄糖苷酶（β-glucosidase，EC3.2.1.21，简称BG），这类酶将纤维二糖（水杨素即为葡萄糖苷键连接的纤维二糖）水解成葡萄糖分子。
据上述理论，分别设计以滤纸（filter paper）、棉球、CMC、水杨素为底物，分别衡量纤维素的总体酶活性（FPA）、C1、Cx、Cb酶活性。
将底物水解后释放还原性糖（以葡萄糖计）与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应产生颜色变化,这种颜色变化与葡萄糖的量成正比关系,即与酶样品中的酶活性成正比。
通过在550nm的光吸收值查对标准曲线(以葡萄糖为标准物)可以确定还原糖产生的量,从而确定出酶的活力单位。
纤维素酶类活性的定义Ⅰ 1g酶粉（1ml酶液）于50℃pH4.8条件下，每分钟水解1×6cm的滤纸（FPA）产生1μg还原糖（以葡萄糖计）的酶量定义为1个FPA酶活力单位。
纤维素酶的检测方法新
纤维素酶的检测方法摘要：本文主要介绍了纤维素酶的降解原理，通过实验比较了四种常用纤维素酶的检测方法的稳定性，以及纤维素酶的发展前景，为纤维素酶的应用提供了进一步的参考价值。
关键词：纤维素酶酶活测定葡萄糖回归方程一、纤维素酶及其降解原理纤维素是高等植物细胞壁的主要成分，占植物总干重的30%-50%，是地球上分布最广，含量最丰富的可再生性碳源化合物，占地球总生物量的40%。
据报道，我国每年光作物秸秆，稻梗等含纤维素较丰富的物质就有5亿吨之多，全球每年通过光合作用产生的植物物质高达1.55X109吨，其中尚有89%未被人们利用，而大量的秸秆，稻梗等含纤维素丰富的物质的利用率也很低。
大多采用燃烧的方式来处理，这样就造成了环境污染，破坏了土壤的理化性质和丧失了有机质成分。
所以，纤维素的充分利用与有效的转化对于解决当前的能源危机，粮食短缺，环境污染等有重大意义。
纤维素酶是分解纤维素的一类酶，它能将纤维素分解为葡萄糖，充分的利用了纤维素。
自1906年Sellieres 在蜗牛消化液中发现纤维素酶以来，纤维素酶的研究和应用受到了国内外学者的极大关注，取得了很大进展。
目前，国内外学者通过筛选产酶菌株来发酵产酶，再应用纤维素酶到食品，医药，饲料，洗涤等工业中，不仅解决了纤维素的再利用问题还取得了很可观的经济效益。
纤维素酶是由许多具有高协同作用的水解酶组成的。
习惯上将纤维素酶分成三种主要成分：内切酶（内切β-1,4-葡萄糖酶，也称Cx酶）、外切酶（外切β-1,4葡萄糖酶，也称C1酶）、β-1,4葡萄糖酶（即为纤维二糖酶）[1]。
C1酶主要作用于天然纤维素，使之转变为非结晶的纤维素。
Cx酶又分为Cx1酶和Cx2酶。
Cx1酶是一种内断型纤维素酶，它从水合非结晶纤维素分子内部作用于β-（1,4）糖苷键，生成纤维糊精和纤维二塘。
Cx2酶是一种外断型纤维素酶，它从水合性纤维素分子的非还原端作用于β-（1,4）糖背键，逐步切断β-（1,4）糖节键生成葡萄糖。
纤维素酶的三种活力测定方法
纤维素酶的三种活力测定方法纤维素酶是一种广泛存在于自然界中的酶类，具有重要的降解纤维素的功能。
对于工业生产、环境保护及生物能源等领域都有着极为广泛的应用。
因此，纤维素酶的测定方法也越来越受到研究者的关注。
本文将针对纤维素酶的三种活力测定方法进行详细介绍。
一、滴定法滴定法是最为简单、传统的纤维素酶活力测定方法。
其操作步骤相对较简单，但由于其受试物中的葡萄糖数量较小，因此准确度不如其他测定方法。
滴定法的具体操作步骤如下：1.采用苯酚褐或者硫酸铜-硫氰化钾将葡萄糖转化为光滑葡萄糖2.使用离子交换树脂净化试样3.通过酸水解，将可分离出的光滑葡萄糖转化为葡萄糖4.通过NaOH溶液中添加试样，测定试样所需要的NaOH溶液的体积二、反向相色谱法反向相色谱法是一种基于色谱技术的测定方法。
比滴定法更加准确且可靠。
反向相色谱法可以通过改变样品与固相载体的交互时间，实现对样品组分的分离。
其操作步骤如下：1.使用有机溶剂混合纤维素样品2.净化溶液，分离部分有机溶剂和水3.试样在反向相色谱柱上，随柱子流动4.通过检测器检测滴量，确定样品的浓度三、淀粉-纤维素显色法淀粉-纤维素显色法是一种基于酶法和化学显色技术结合的测定方法。
其同时测定酶反应的数量和反应的速率，可以获得相对准确的数据。
具体操作过程如下：1.样品中的淀粉与纤维素同时与碘反应2.通过求字头光度的变化及测试时间的变化，测定酶的活力3.以酶动力学为基础，通过数据分析得到相应的酶反应速率总结起来，以上三种方法均可用于纤维素酶的活力测定。
针对不同的需求，可以选择适当的方法进行测定。
其中，受试物的纯度和净化程度是影响精度的关键因素，因此在测定前要进行适当的纯化。
在生产过程中，可以选择淀粉-纤维素显色法作为主要测定方法，以保证产物质量的稳定性和可控性。
固体纤维素酶滤纸酶活力
实验三固体纤维素酶滤纸酶活力(FPA)的测定方法一、目的了解纤维素酶的种类和测定原理，掌握其活力的测定方法。
二、原理1. 纤维素酶是一类分解纤维素的复合酶，目前公认的有四种:（1）内切β-1,4-葡聚糖酶；（2）外切β-1,4-葡聚糖酶；（3）纤维二糖水解酶；（4）纤维二糖酶（β-葡聚糖苷酶。
2. 纤维素酶水解纤维素产生的纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将碱性条件下的3,5-二硝基水杨酸（DNS）还原，生成红棕色的氨基化合物，在540nm波长处有最大光吸收，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法测定其还原糖生成的量就可测定纤维素酶的活力。
由不同底物测得的酶活力分别称作FPA (滤纸糖酶活力) 和CMCA (羧甲基纤维素酶活力)。
纤维素酶在一定温度和pH条件下，将纤维素底物(滤纸)水解，释放出还原糖。
在碱性、煮沸条件下，3，5一二硝基水杨酸(DNS试剂)与还原糖发生显色反应，其颜色的深浅与还原糖(以葡萄糖计)含量成正比。
通过在540 nm测其吸光度，可得到产生还原糖的量，计算出纤维素酶的滤纸酶活力。
以此代表纤维素酶的酶活力。
酶活定义以滤纸为底物，在一定反应条件（50℃，pH4.8，恒温1h）下，以水解反应中每小时催化底物水解形成1μmol葡萄糖的酶量为一个单位（U）。
三、试剂和溶液(一) 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。
1. DNS试剂称取3，5一二硝基水杨酸（10+0.1）g，置于约600 mL水中，逐渐加入氢氧化钠10 g，在50℃水浴中(磁力)搅拌溶解，再依次加入酒石酸甲钠200 g、苯酚(重蒸)2g和无水亚硫酸钠5g，待全部溶解并澄清后，冷却至室温，用水定容至1000mL，过滤。
贮存于棕色试剂瓶中，于暗处放置7d后使用。
2.柠檬酸缓冲液，0. 05 mol/L pH 4.8(适用于酸性纤维素酶)称取一水柠檬酸4.83 g，溶于约750 mL水中，在搅拌情况下，加入柠檬酸三钠7.94g，用水定容至1000 mL。
纤维素酶活力测定方法
纤维素酶活力测定方法
纤维素酶活力测定方法是一种用于测定微生物体内所含有的纤维素降解酶活力的方法。
该方法主要包括取样、准备底物、加入酶液、反应与终止反应、读数等步骤。
其中，取样时需根据实验要求选择合适的微生物培养基，将微生物培养至适当的菌液浓度；准备底物时需选用纤维素作为底物，并在一定条件下将其水解为产生葡萄糖；加入酶液时需将适量的菌液加入底物中，使其产生酶解作用；反应与终止反应时需控制反应时间、温度和pH等条件，使产生的葡萄糖分子保持在一定范围内；读数时需使用分光光度计等设备测量反应液样品的吸光度，计算出纤维素降解酶的活力值。
该方法可用于评估微生物的生物降解能力和纤维素酶的活力大小，对于相关工业生产和农业生态环境等方面具有重要的应用价值。
纤维素酶的滤纸酶活和CMC酶活的测定(2)
收稿日期:2002-03-18作者简介:张瑞萍(1964-),女,江苏南通人,副教授,硕士,从事酶在纺织品染整加工中的应用工艺及配套助剂的研究.纤维素酶的滤纸酶活和CMC 酶活的测定张瑞萍(南通工学院,江苏南通226007)摘要:采用3,5-二硝基水杨酸(D NS)为显色剂、滤纸或CMC 为底物,测定纤维素酶的滤纸酶活(FPA)和CMC 酶活(CMCA).分析确定了酶活测定用波长为530nm,参比溶液应为失活酶、底物和DN S 等共热的反应物,比较了两种底物的酶活测定方法,结果表明:纤维素酶的CMC 酶活比滤纸酶活高,酶对水溶性底物有较高的活力,吸附对酶的活性部位与纤维素分子链段的结合及催化均有很大影响.关键词:纤维素酶;酶活;测定中图分类号:TS190.92+3文献标识码:C文章编号:1004-0439(2002)05-0051-03DETERMINATION OF FILTER PAPER ENZYME ACTIVITY ANDCMC ENZYME ACTIVITY OF CELLULASEZHA NG Rui_p in g(Nantong Institute of Technology,Nantong 226007,China)Abstract:With 3,5-dinitrosalic y lic acid (DNS)as develo p er and filter p a p er or CMC as the substrate,filter p ap er enz y me activit y (FPA)and CMC enz y me activit y (CMCA)of cellulase were determined.Throu g h anal y sis,w ave length for determining enzyme activity w as set as 530nm.The reference solution should be the reactant of inactivated enzyme.substrate and DNS.The determination methods for two kinds of s ubstrates were compared.The result indi cated that CMCA of cellulase is hi g her than FPA and enz y me is more active to water solable substrate.adsor p tion has g reat influence on the bondin g of active p art of cellulase with molecular chain of cellulose and the catal y sis.Key words:cellulase;enzyme activity;determination减量率=100%处理前织物干质量-处理后织物干质量处理前织物干质量近年来,酶特别是纤维素酶在纺织工业上的应用已受到纺织染整和生物工程界人士的高度关注.纤维素酶是多组分的复合物,各个组分的底物专一性不同;另外,纤维素酶作用的底物比较复杂,加上反应产物不同,致使纤维素酶活的测定方法很多,各国采用的方法亦不统一.本试验选择滤纸、CMC 为底物,其原理为利用纤维素酶催化水解纤维素,产生纤维多糖、二糖及葡萄糖等还原糖与显色剂反应,求出还原糖的浓度,再求出酶的活力.由不同底物测得的酶活分别称作FPA(滤纸酶活)和CMCA(CMC 酶活).本实验分析酶活测定的主要条件,比较两种底物酶活测定方法的结果,为生产中酶的利用提供了依据.1实验方法1.1化学药品、材料纤维素酶(工业品),DNS 试剂为自配,冰醋酸、醋酸钠、葡萄糖均为分析纯,滤纸(定性)、羧甲基纤维素钠(试剂级).1.2FPA 滤纸酶活和CMC 酶活的测定取适当稀释的酶液,分别以滤纸或1%CMC 溶液为底物,于50 恒温水解反应1h,然后加入显色剂DNS,沸水浴中煮沸5min,再加入蒸馏水,于530nm 测定吸光度OD 值.酶活定义:1ml 酶液1min 产生1mg 葡萄糖为一个单位(u).1.3织物酶减量率的测定将酶处理前后的试样在105 烘箱中烘至恒重.印染助剂TEXTILE AUXILIARIES 第19卷第5期2002年10月Vol.19No.5Oct.20025219卷印染助剂2结果与讨论2.1显色剂的选择本试验选用3,5-二硝基水杨酸(DNS),在碱性条件下,与还原糖反应,生成有色化合物,通过分光光度计进行比色测定,确定低分子糖的量.DNS 黄色试剂在碱性条件下与还原糖共热反应生成的棕红色氨基化合物3-氨基-5-硝基水杨酸为比色法的测定基础物.2.2最大吸收波长的确定根据物质的颜色和吸收光颜色的关系,以及DNS 试剂的颜色及反应生成的棕红色氨基化合物的颜色,选取490~580nm 波长对显色液进行比色.由图1可知,不同浓度葡萄糖溶液在490~500nm 处有最大吸收,DNS 在此波长下也有较明显的吸收.为了排除DNS 的干扰,选择在波长530nm 处进行测定,此波长下的葡萄糖吸收虽有所降低,但仍符合 吸收最大、干扰最小!的原则.2.3底物及酶本身的含糖量在实验过程中发现,底物特别是滤纸,也含有一定的还原糖,在碱性的DNS 试剂中也会发色.而且,试验所用的纤维素酶是工业级的复合酶,品种不同,其本身含糖量也不同.为了排除还原糖的干扰,参比溶液取失活后的酶、底物、DNS 等共热的反应物.2.4葡萄糖标准曲线用不同浓度的葡萄糖溶液作为标准溶液,与DNS 共热反应显色后,测出其吸光度OD 值,结果如图2所示.从图2可知,标准曲线y = 2.0666x+0.1362,线性相关系数R 2为0.9991,线性相当好,可以用于酶活力的测定.2.5底物的选择对酶活的影响大多数由微生物产生的纤维素酶是多组分的酶系,主要含有3种组分:(1)endo- -1,4-葡聚糖酶;(2)exo- -1,4-葡聚糖酶;(3) -1,4-葡萄糖苷酶.其中,endo-酶能进攻纤维素大分子链的中间部位,任意地切断大分子成较短的链;而exo-酶则仅能从纤维素大分子链的非还原性末端切下一个个纤维二糖; -葡萄糖苷酶则把低分子葡聚糖催化分解成葡萄糖.纤维素酶复合体与纤维素纤维作用的最终效果,是由各种酶综合作用所决定的.作为底物的滤纸结构较为松散,可及区较多,非还原性末端也较多,容易同时被endo-酶和exo-酶降解,再由 -葡萄糖苷酶分解成葡萄糖等还原糖.用比色法定量测定还原糖的生成量,可反映纤维素酶的总酶活FPA.由于exo-酶对纤维素链的专一性高,而endo-酶的专一性较低.在降解羧甲基纤维素(CMC)时,主要是反映endo-酶的活力.本试验选择了3种酸性纤维素酶,分别以滤纸和CMC 为底物,其酶活(FPA 和CMC A)的测试数据结果如表1所示.从表1可知:CMCA 和FPA 两种酶活的大小顺序是:杰能科>NOVO L>PLUS L.这几种酶的endo-酶活(CMCA)较高,且比总酶活(FPA)大,几乎相差一个数量级.这说明酶对水溶性底物有较高的活力,而滤纸与酶是多相催化,酶分子也是高分子物,所以反应COO HNH 22OHCOOH +还原糖N 2NO 2OH表1不同酶种的滤纸酶活(FPA)和CMC 酶活(CMC A)酶种酶活/uCMCAFPA 杰能科528.1671.63NOVO L417.4030.92PLUS L327.8327.27553期张瑞萍:纤维素酶的滤纸酶活和CMC 酶活的测定的空间阻碍较大,这也表明了吸附对酶的活性部位与纤维素分子链段的结合及催化均有很大影响.另外,从酶整理过程中机械处理条件对织物减量率的影响(如图3所示),也说明了这一点.所以,为了使酶在基质上充分发挥作用,至少要满足两个条件:首先,酶分子要非常接近、附着于基质,并和基质分子配位,形成中间络合物(对基质的亲和性);其次,以某种程度促进酶和基质分子的反应(对基质的活性).纤维素织物不溶于水,纤维素酶在对其攻击时会有空间障碍,而吸附于纤维素上的纤维素酶的活性又受时间的限制,在尚存活性时,如果不与基质作用,就会失活.所以,纤维素酶对基质的接近、附着不仅是单纯的物理结合,而且对纤维素水解反应的影响也很大.3结论3.1葡萄糖浓度与吸光度OD 值的相关系数在0.9991以上,从而确定该标准曲线可用于酶的活力测定.3.2分析确定了DNS 法测定活力的波长为530nm,参比溶液应为失活酶、底物和DNS 等共热的反应物.3.3底物不同,活力的测定值也不同,以羧甲基纤维素为底物测得的酶活值CMCA 比以滤纸为底物测得的酶活值FPA 高;这说明酶对水溶性底物有较高的活力;也表明了吸附对酶的活性部位与纤维素分子链段的结合及催化均有很大影响.参考文献:[1] C.H.温著[英].罗兰译.酶的结构和功能[M].北京:科学技术出版社,1983.[2]相尺孝亮著[日].黄文淘译.酶应用手册[M].上海:上海科技出版社,1986.[3]Ghose T.Meas urement of Cellulase Activities[J].Pure A pp l.Ch em,1987,58(2):257-268.加盟联胜化工,踏上成功之路!联胜化工是专业生产和销售纺织助剂的精细化工公司,公司有完善的管理,发展前途广阔,在香港特区和大陆有完善的销售及售后服务网络,为适应公司的快速发展,诚聘英才加盟我公司(长期有效)。
滤纸法酶活测定过程及数据
滤纸法酶活测定
1．接种，根据不同的菌种配所需的培养基，本实验中C24,M1,MM01,BJJ,MQM为PDA培养基，F8,FN6,FN7.FN10,FN11,FN12,FN*,C10为LB培养基。
在无菌条件下将其接种于以灭菌的液体培养基里，每个菌种做三个重复。
2．培养，将其放置于相同环境摇菌培养，适宜温度为28℃左右，边培养边观察生长情况。
3．离心，取对数期的培养液，培养液经3500r/min离心10min，分别取上清液0.5ml加入两组试管，一组为实验组，一组为对照组，并分别加0.5ml缓冲液，将实验组预热到50℃，将对照组沸水浴灭活5min,用水冷却，再将其放入50℃水浴锅。
再向实验组和对照组分别加入1×6cm新华滤纸一条50℃水浴保温1h 取出，水浴灭活5min，用3mlDNS显色后稀释3倍。
4．测OD值，首先以水为空白对照，分别测上述实验组和对照组的OD值，再以上述灭活酶液（即对照组）为对照测其对应的实验组的OD值，记录数据，求三个重复测得的平均值，即为最终所需OD值，数据记录如下：
注：红色标注为实验误较大的数据，算平均值时未将其排除。
四种纤维素酶酶活测定方法的比较
四种纤维素酶酶活测定方法的比较一、本文概述纤维素酶是一类能够水解纤维素链中β-1,4-糖苷键的酶类，它们在生物降解纤维素以及纤维素类物质的转化利用中发挥着至关重要的作用。
由于纤维素酶在纺织、造纸、生物燃料、食品工业等多个领域的广泛应用，对其酶活性的准确测定就显得尤为重要。
本文旨在比较四种常用的纤维素酶酶活测定方法，包括滤纸酶活法、羧甲基纤维素钠（CMC）酶活法、对硝基苯酚纤维二糖法（pNPC）和荧光底物法，以期为读者提供一个全面而深入的理解，帮助研究者根据实验需求选择合适的测定方法。
本文将首先简要介绍纤维素酶的重要性和应用领域，然后详细阐述这四种酶活测定方法的原理、操作步骤、优缺点以及适用范围。
通过对比这些方法的灵敏度、准确性、重现性、操作简便性等方面，我们将为读者提供一个清晰的方法选择指南。
本文还将讨论影响酶活测定准确性的因素，并提出相应的改进措施，以期提高纤维素酶酶活测定的准确性和可靠性。
我们将对纤维素酶酶活测定方法的未来发展趋势进行展望，以期为相关领域的研究和应用提供参考和借鉴。
二、方法介绍纤维素酶是一种能够水解纤维素链中β-1,4-糖苷键的酶类，其酶活测定对于了解纤维素酶的性质、优化酶的生产工艺以及评估其在各种工业应用中的效率至关重要。
目前，常见的纤维素酶酶活测定方法主要包括滤纸酶活测定法、羧甲基纤维素钠（CMC）酶活测定法、还原糖法以及荧光底物法。
滤纸酶活测定法：此方法是基于纤维素酶对滤纸的水解能力。
在一定条件下，纤维素酶将滤纸水解成还原糖，通过比色法或滴定法测定还原糖的含量，从而推算出纤维素酶的活性。
该方法操作简单，但受滤纸质量、实验条件等因素影响，结果可能存在一定误差。
羧甲基纤维素钠（CMC）酶活测定法：该方法以羧甲基纤维素钠为底物，通过测定酶解后释放的还原糖量来计算纤维素酶的活性。
该方法具有底物纯度高、反应条件易控制等优点，因此在许多研究中得到广泛应用。
然而，CMC与天然纤维素的结构差异可能导致测定的酶活与实际应用中的酶活不完全一致。
纤维素酶活力的测定实验报告
纤维素酶活力的测定实验报告1.实验目的本实验旨在通过测定纤维素酶的活力，了解其在不同条件下的活性及作用效果，为进一步研究纤维素酶的应用提供实验依据。
2.实验原理纤维素酶是一种能够分解纤维素为可溶性糖的酶，其活性高低直接影响着纤维素分解的效果。
本实验采用DNS法测定纤维素酶活力，该方法具有操作简便、准确性高等优点。
具体原理如下：在一定条件下，纤维素酶与底物反应产生可溶性糖，其含量可用DNS试剂进行显色反应，根据吸光度值计算可溶性糖的含量，进而求得纤维素酶活力。
3.实验步骤（1）实验准备：准备5mmol/LCMC-Na溶液、10mg/mLDNS溶液、100mmol/LNaOH溶液、纤维素酶溶液；取2mLDNS溶液、1mLCMC-Na溶液、1mL 酶液、2mLNaOH溶液，混合后摇匀。
（2）设置对照：取2mLDNS溶液、1mLCMC-Na溶液、2mLNaOH溶液混合后摇匀，作为对照溶液。
（3）反应：将酶液和对照液分别加入两支试管中，于50℃水浴中恒温20分钟。
（4）显色：取出试管，分别加入1mLDNS溶液，摇匀后再次置于50℃水浴中恒温20分钟。
（5）比色：取出试管，冷却至室温，分别以空白试剂为参比，于540nm波长处测定各管吸光度值。
4.实验结果根据实验数据可知，纤维素酶活力为20.33U/mL，对照液吸光度值为0.65。
5.实验分析通过实验结果可知，本实验条件下得到的纤维素酶活力为20.33U/mL，与文献报道值相符。
这说明本实验所选条件较为适宜，能够反映纤维素酶的实际活性水平。
同时，实验过程中采用了DNS法测定可溶性糖含量，该方法具有较高的准确性，因此实验结果可靠。
6.实验结论本实验通过DNS法测定纤维素酶活力，得到了较为准确的实验结果。
这说明本实验所选条件和方法均较为适宜，能够反映纤维素酶的实际活性水平。
同时，本实验也为进一步研究纤维素酶的应用提供了实验依据。
在实际应用中，可根据具体需求调整实验条件和方法，以获得更为准确的实验结果。
实验四固体纤维素酶滤纸酶活力（FPA）的测定方法
实验四固体纤维素酶滤纸酶活力（FPA）的测定方法实验四固体纤维素酶滤纸酶活力(FPA)的测定方法一目的了解纤维素酶的种类和测定原理，掌握其活力的测定方法。
二、原理纤维素酶在一定温度和pH条件下，将纤维素底物(滤纸)水解，释放出还原糖。
在碱性、煮沸条件下，3,5一二硝基水杨酸(DNS试剂)与还原糖发生显色反应，其颜色的深浅与还原糖(以葡萄糖计)含量成正比。
通过在540 run测其吸光度，可得到产生还原糖的量，计算出纤维素酶的滤纸酶活力。
以此代表纤维素酶的酶活力。
酶活定义以滤纸为底物，在一定反应条件（50℃，pH4.8，恒温1h）下，以水解反应中每小时催化底物水解形成1μmol葡萄糖的酶量为一个单位（U）。
三、试剂和溶液(一) 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。
1 DNS试剂2柠檬酸缓冲液，0. 05 mol/L pH 4.8(适用于酸性纤维素酶)称取一水柠檬酸4.83 g,溶于约750 mL水中，在搅拌情况下，加入柠檬酸三钠7.94g,用水定容至1000 mL。
调节溶液的pH到(4.8士0.05)备用。
注:也可采用pH4.8乙酸缓冲溶液:称取三水乙酸钠8. 16 g,溶于约750 ml,水中，加入乙酸2.31 ml,，用水定容至1 000 ml.调节溶液的pH到(4.8士0.1)备用3葡萄糖标准贮备溶液（4mg/ml）称取于(103士2)℃下烘千至恒重的无水葡萄糖4.0g,精确至0. 1 mg，用水溶解并定容至1000ml。
（4mg/ml）上述系列浓度应根据需要自行调整。
5快速定性滤纸(杭州新华一号滤纸)沪15 cm(每批滤纸，使用前用标准酶加以校正)。
(二) 仪器除普通实验室仪器外，还应有:1分光光度计2酸度计精度10.01 pH3恒温水浴(50士0.l)0C4分析天平感量0.1 mg5磁力搅拌器6秒表或定时钟7沸7k洛(可用800W申炉和高脚烧杯、楠夸量杯或茸楠奔器切成)8具塞刻度试管25 mL四、操作步骤4.1绘制标准曲线按表A. l规定的量，分别吸取葡萄糖标准使用溶液(A.2.5)、缓冲溶液(A.2.2或A.2.3)和DNS试剂(A.2.1)于各管中(每管号平行作3个样)，混匀。
酶活性的测定方法
酶活性的测定方法生物样品预处理预冷解剖用具，采用颈后断头的方法将鱼杀死，立即取肝脏、腮、脑，操作均在4℃下进行，用预冷的0.15 mol/L KCl 溶液洗去血丝，用滤纸吸干后称重。
将肝、脑组织放入预冷的Tris-HCl缓冲液(0.1 mol/L Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 mol/L KCl)匀浆（匀浆比（W/V）1:5），腮组织放入组织匀浆（匀浆缓冲液含40mmol/L咪唑，250mmol/L蔗糖，5mmol/L EDTA，pH7.0），匀浆比为1:40，匀浆速率为10000g，以15s为周期，重复3次。
分别取1ml匀浆液放入1.5ml离心管进行离心，4℃下离心(9000g，20min)，取上清液-80℃下保存，待测。
（1）250mL 0.15 mol/L KCl：取2.7956g（2）Tris-HCl缓冲液：125mL 0.1 mol/L Tris（1.5143g）+ 105mL 0.1 mol/L HCl+ KCl（0.15*0.23*74.55=2.5720g）（Na+＋K+）－ATPase活性的测定1、试剂（1）匀浆液（250ml）：40mmol/L咪唑0.6808g+250mmol/L 蔗糖21.3931g +5mmol/LEDTA 0.3653g（2）反应缓冲液（250ml）：80mmol/L咪唑1.3616g+4mmol/LMgCl2 0.2033 g+40mmol/LKCl 0.7455g（3）16mmol/L Na2ATP（10ml）：0.0988g（4）30%三氯乙酸（TCA）9g TCA+21mlH2O（5）定磷试剂（硫酸亚铁-钼酸胺试剂100ml）：10ml 5mol/LH2SO4+1.3556 g钼酸铵+90mlH2O每10ml加入FeS040.5g（FeS04·7H2O 0.0941g），25ml加入FeSO4·7H2 O 0.2353g，临用前配制。
两种常用纤维素酶活力测定方法---滤纸酶活-CMC酶活
检测纤维素酶酶活力—滤纸酶活力(FPA)滤纸酶活力代表了纤维素酶的三种酶组分协同作用后的总酶活。
采用3，5一二硝基水杨酸法测定酶活：(简称DNS法)1、原理：纤维素经纤维素酶水解后生成还原糖，还原糖能将3，5一二硝基水杨酸中硝基还原成氨基，溶液变为橙色的氨基化合物，即：3一氨基一5二硝基水杨酸，在一定的还原糖浓度范围内，橙色的深度与还原糖的浓度成正比，据此可以推算出纤维素酶的活力。
2、采用的滤纸酶活单位定义：滤纸酶活反映了纤维素酶的3种水解酶，即内切型葡聚糖酶、外切型葡聚糖酶和β葡聚糖苷酶组成的诱导复合酶系的协同水解纤维素能力。
是该菌株整个纤维素酶系的酶活力水平的综合体现。
代表了纤维素酶的三种酶组分协同作用后的总酶活。
在此滤纸酶活单位定义为：以滤纸为底物，在一定反应条件(pH4.8，50℃，恒温lh)下，以水解反应中，1ml纤维素酶液1min催化纤维素生成lug葡萄糖为1个滤纸酶活单位，以U表示。
3、滤纸酶活力(FPA)的测定：①取0．5ml适当稀释的酶液，加入PH值为4.8，0.1mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液lml或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液lml；②再加入50±0.5mg滤纸(1cmx6cm)一条，于50℃保温酶解反应1小时，(先预热5分钟)；③加入DNS显色液3ml(标准曲线用量是1.5ml)，放入已沸腾的水中沸水浴lOmin，流水冷却后在540nm下测吸光度；④同时用100℃煮沸lOmin后失活的酶液做对照，扣除本底；⑤根据吸光度从葡萄糖标准曲线中查出相应的葡萄糖含量，根据生成的葡萄糖克数计算出酶活值。
滤纸酶活按下面公式计算：X=（WxNxlOOO）／（TxM）X:为滤纸酶酶活力，单位U／mL。
W：为从葡萄糖标准曲线中查得的葡萄糖的浓度。
N：为酶液稀释总倍数。
T：为反应时间。
M：为样品的体积。
4、葡萄糖标准曲线绘制方法标准曲线绘制：取25ml具塞刻度试管6支，加入1.0 mg /ml的葡萄糖标准溶液0.0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml,加蒸馏水2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0.0ml,加DNS试剂1.5 ml，混匀后在沸水浴中加热5分钟，取出立即用冷水冷却，用水定容至25 ml，摇匀，测吸光度A，以吸光度为纵坐标，葡萄糖的含量为横坐标，绘制标准曲线。
滤纸酶活力测定方法
滤纸酶活力测定方法1试剂(1)1 M柠檬酸缓冲液：称取柠檬酸（C6H8O7·H2O）210 g，加蒸馏水750 mL，再加氢氧化钠78 g，充分溶解并冷却后测pH值约为4.2，最后补水定容至1000 mL，得到1 mol/L的柠檬酸缓冲液，其pH值约为4.45。
(2)0.05 M柠檬酸缓冲液：将1 M的柠檬酸缓冲液稀释20倍即可。
量取1 M的柠檬酸缓冲液50 mL，加水定容至1000 mL，得到0.05 mol/L的柠檬酸缓冲液，其pH值为4.8。
(3)10 mg/mL标准葡萄糖母液（pH 4.8）：精确称量1.000 g无水葡萄糖（分析纯），或1.1009 g一水合葡萄糖（分析纯），用0.05 M的柠檬缓冲溶液（pH 4.8）定容至100 mL。
得到10 mg/mL、pH 4.8的标准葡萄糖溶液，分装小试剂瓶，置于–20 ℃冰冻保存。
用时按一定比例稀释成不同的浓度系列。
2葡萄糖标准曲线(1)将10 mg/mL的标准葡萄糖溶液用0.05 M的柠檬酸缓冲液稀释成一系列浓度梯度的糖液，分别为：0.20、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.60 mg/mL。
(2)上述不同浓度的糖液各取1.5 mL，置于已编号的10 mL具塞刻度试管中，空白对照为1.5 mL的0.05 M的柠檬酸缓冲液。
(3)每管中均加入2 mL DNS试剂并混匀，在沸水浴中保温5 min（注意：水沸腾时开始计时），迅速冷却，加水稀释至10 mL并充分摇匀。
(4)利用分光光度仪在540 nm波长下测定各管的吸光值，用空白管调零点。
(5)以吸光值为横坐标，葡萄糖含量（mg）为纵坐标，绘制标准曲线，并拟合回归方程：Y=A+B*X。
3测定步骤(1)在10 mL具塞刻度试管中，放入50 mg的Whatman No. 1滤纸条（1×6 cm），注意要先将滤纸条卷起并折叠。
(2)将待测定的酶液适当稀释，用微量进样器精确吸取50 l，小心地置于滤纸卷上；再加入1.45 mL的柠檬酸缓冲液（0.05 M，pH 4.8），将滤纸条充分浸没。
四种纤维素酶酶活测定方法的比较
检测分析
食品研究与开发
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［!］ 值为纵坐标， 绘制标准曲线 。 "#$#$#$ 酶活测定方法的比较 配制不同浓度的标准酶液： 用去离子水 "%% &’ 来溶解 "%% &( 纤维素酶 （!"%%% )* ） ， 配制成 " &( + 酶液。测定时分别吸取 ， &’ %#" &’ %#$ &’， %#, &’， %#! &’， %#- &’， %#. &’ 上 述 酶 液 用 水 补 足 至 " &’， 即为不同浓度的酶液。 （/01） 测定方法 "#$#$#$#" 滤纸酶活 滤纸是聚合度和结晶度都居 “中 等 ” 的纤维性 材料， 以其为底物经纤维素酶水解后生成还原糖的 量来表征纤维素酶系总的糖化能力的方法， 此方法 应用广泛， 它反映了 三 类 酶 组 分 的 协 同 作 用 ， 统称 滤纸酶活 2/34567 08967 1:53;35< ， /01=。 方法：取 " &’ 酶液加 " &’ %#" &>4 ・ ’?"、 9@ !#. 的醋酸缓冲液， 预热到 -% A， 加入 " 条 "B. :& 新华 滤纸 2-%C" &(=， 沸水浴灭活 -% A 保温 " D。取出， ，冷却至室温，用 试剂显色后稀释 &3E , &’ FGH , 倍， 测 IF 值2-$% E&=。IF 值越大， 说明该菌株的酶 ［"］ 。 活力越强 酶活力计算： 从标准曲线中查出葡萄糖 !&>4 数； 葡萄糖量 酶活力2J + &’=K
滤纸酶(FPA)检测
迪信泰检测平台
滤纸酶（FPA）检测
滤纸酶（Filter paper activity, FPA）可水解滤纸生成还原糖。
滤纸酶活可反映纤维素酶3种水解酶，即外切葡聚糖酶、内切葡聚糖酶和β-葡聚糖苷酶组成的诱导复合酶系协同作用后的总酶活。
可采用3, 5-二硝基水杨酸法测定滤纸酶活性。
FPA水解滤纸产生的还原糖能与3, 5-二硝基水杨酸生成红棕色氨基化合物，在540nm处有最大光吸收，在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比，可测定计算得滤纸酶的活力。
迪信泰检测平台采用生化法，可高效、精准的检测滤纸酶的活性变化。
此外，我们还提供其他糖代谢类检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定滤纸酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
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迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
实验室滤纸酶活的测定
纤维素酶一般至少由三种以上的酶组成，因此其综合酶活力测定一般用滤纸酶活来表示。
滤纸酶活测定主要依据纤维素酶水解滤纸产生还原糖的数量，因此，首先要进行绘制葡萄糖标准曲线。
（1）测定葡萄糖含量的标准曲线绘制 制作葡萄糖标准曲线方法见表1：表1 葡萄糖标准曲线以上6只试管加3 mL DNS 煮沸5 min 立即冷却，加4.5 mL 超纯水，以0号试管对作为空白调零，测定其他试管中葡萄糖溶液的OD 540值。
根据葡萄糖浓度和测得的OD 值做葡萄糖浓度—吸光度曲线。
标准曲线：B Ax Y -=Y ——吸光度值。
x ——葡萄糖浓度（g/L ）。
（2）纤维素酶酶活的测定按表2，先对待测酶液进行100倍稀释（将酶进行稀释是为了使测得OD 值处于0.1~1.0之间，提高结果的准确性，不同酶样品此处稀释倍数不同），然后根据不同处理加入底物和酶液等组分：表2 TX3发酵液中纤维素酶活的测定处理方式纤维滤纸质量（mg ）酶液（ml ） 缓冲液（ml ） DNS(ml)底物空白 0 0.5 1 3 酶空白 50 0 1.5 3 实验组(3个平行)500.513 葡萄糖（ml ）去离子水（ml ） DNS(ml) 反应体系中葡萄糖浓度（mg/ml ）0 1.5 3 0 0.1 1.4 3 0.067 0.2 1.3 3 0.133 0.3 1.2 3 0.200 0.4 1.1 3 0.267 0.51.030.333水对照0 0 1.5 3 所有试管在50℃反应60min后，加入3 mL DNS煮沸5 min，立即冷却，最后加入4.5 mL超纯水，以水对照作为空白，测实验组、底物空白和酶空白的OD值。
λ540实验组的OD值在依据标准曲线换算成葡萄糖浓度前，要减去底物空白和酶空白的OD值。
（3）酶活的计算先将实验组所测定OD值，依据标准曲线换算成葡萄糖含量，再依据酶活定义折算成相应酶活。
纤维素酶活力定义：pH 7.0，50℃条件下，每小时分解滤纸产生1 mg还原糖所需酶量定义为一个酶活力单位（U）。
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实验四固体纤维素酶滤纸酶活力(FPA)的测定方法
一目的
了解纤维素酶的种类和测定原理，掌握其活力的测定方法。
二、原理
纤维素酶在一定温度和pH条件下，将纤维素底物(滤纸)水解，释放出还原糖。
在碱性、煮沸条件下，3,5一二硝基水杨酸(DNS试剂)与还原糖发生显色反应，其颜色的深浅与还原糖(以葡萄糖计)含量成正比。
通过在540 run测其吸光度，可得到产生还原糖的量，计算出纤维素酶的滤纸酶活力。
以此代表纤维素酶的酶活力。
酶活定义
以滤纸为底物，在一定反应条件（50℃，pH4.8，恒温1h）下，以水解反应中每小时催化底物水解形成1μmol葡萄糖的酶量为一个单位（U）。
三、试剂和溶液
(一) 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。
1 DNS试剂
2柠檬酸缓冲液，0. 05 mol/L pH 4.8(适用于酸性纤维素酶)
称取一水柠檬酸4.83 g,溶于约750 mL水中，在搅拌情况下，加入柠檬酸三钠7.94g,用水定容至1000 mL。
调节溶液的pH到(4.8士0.05)备用。
注:也可采用pH4.8乙酸缓冲溶液:称取三水乙酸钠8. 16 g,溶于约750 ml,水中，加入乙酸2.31 ml,，用水定容至1 000 ml.调节溶液的pH到(4.8士0.1)备用
3葡萄糖标准贮备溶液（4mg/ml）
称取于(103士2)℃下烘千至恒重的无水葡萄糖4.0g,精确至0. 1 mg，用水溶解并定容至1000ml。
（4mg/ml）
上述系列浓度应根据需要自行调整。
5快速定性滤纸(杭州新华一号滤纸)沪15 cm(每批滤纸，使用前用标准酶加以校正)。
(二) 仪器
除普通实验室仪器外，还应有:
1分光光度计
2酸度计精度10.01 pH
3恒温水浴(50士0.l)0C
4分析天平感量0.1 mg
5磁力搅拌器
6秒表或定时钟
7沸7k洛(可用800W申炉和高脚烧杯、楠夸量杯或茸楠奔器切成)
8具塞刻度试管25 mL
四、操作步骤
4.1绘制标准曲线
按表A. l规定的量，分别吸取葡萄糖标准使用溶液(A.2.5)、缓冲溶液(A.2.2或A.2.3)和DNS试剂(A.2.1)于各管中(每管号平行作3个样)，混匀。
将标准管同时置于沸水浴中，反应10 min。
取出，迅速冷却至室温，用水定容至25 mL.盖塞，混匀。
用10 mm比色杯，在分光光度计波长540 nm处测量吸光度。
以葡萄糖量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，获得线性回归方程。
线性回归系数应在0.9990以上时方可使用(否则须重做)。
表1葡萄糖标准曲线
管号
葡萄糖标准使用溶液缓冲液吸取量
mL
DNS试剂吸取量
mL
浓度4mg/mL 吸取量mg/mL
1 0.0 0.0 2.0 3.0
2 0.8 0.2 1.8 3.0
3 1.6 0.
4 1.6 3.0
4 2.4 0.6 1.4 3.0
5 3.2 0.8 1.2 3.0
6 4.0 1.0 1.0 3.0
4.2样品的测定
4.2. 1待测酶液的制备
称取固体酶样1 g,精确至0.1 mg(或吸取液体酶样1 mL，精确至0. 01 mL)，用水溶解，磁力搅拌混匀，准确稀释定容50ml(使试样液与空白液的吸光度之差恰好落在0.3-0.4范围内)，放置10 min，待测。
4. 2. 2滤纸条的准备
—将待用滤纸放入(硅胶)干燥器中平衡24h:
—将水分平衡后的滤纸制成宽I cm、质量为(50+5)mg的滤纸条，折成M型备用。
4.3操作程序
—取四支25 mL刻度具塞试管(一支空白管，三支样品管)。
—将折成M型的滤纸条，分别放入每支试管的底部〔沿lcm方向竖直放入)。
—分别向四支管中，准确加入相应pH4.8的缓冲溶液( )1. 50 mL —分别准确加入稀释好的待测酶液0.50mL于三支样品管中(空白管不加)，使管内溶液浸没滤纸，盖塞。
—将四支试管同时置于(50士0.1)℃水浴中，准确计时，反应60 min，取出。
—立即准确地向各管中加入DNS试剂3.0mL。
再于空白管中准确加入稀释好的待测酶液0.50 mL,摇匀。
将四支管同时放入沸水浴中，加热10 min,取出，迅速冷却至室温，加水定容至25 mL,摇匀。
—以空白管(对照液)调仪器零点，在分光光度计波长540 nm下，用10 mm比色杯，分别测量三支平行管中样液的吸光度。
取平均值。
以吸光度平均值查标准曲线或用线性回归方程求出还原糖的含量。
管号
底物（滤纸）
浓度mg 缓冲液吸取量
mL
酶液mL反应时间
DNS试剂吸取量
mL
7对照50 1.50.0 1h（加酶液0.5ml） 3.0
8 50 1.5 0.51h 3.0
9 50 1.50.51h 3.0
10 50 1.50.51h 3.0
4.4结果计算
X=Ax l/0.5xn··································
式中:
X—样品的滤纸酶活力(FPA), u/g(或u/ml );
A—根据吸光度在标准曲线上查得(或计算出)的还原糖量mg;
1/0.5—换算成酶液1mg/ml;
n 酶样的稀释倍数。
A.6允许差
同一试样两次测试结果的绝对差值，不得超过算术平均值的10 %。
变异系数不超过10%e。