人胶质瘤干细胞内在自我更新能力
MicroRNA在调控胶质瘤干细胞自我更新中作用
１９ －ｐ下调 Ｎ ｔ ９ ｂ５ ｏ ｈ信号通路 中转 录因子 ＨＥ １ ｃ Ｓ 的表达 ， 而 从 使 ｍ Ｒ １９ 一ｐ具有抑制肿瘤干细胞 自我更 新的能 力 ， 表 ｉ 一 ｂ５ ９ 过
许多病理过程 中例如肿瘤 发挥重要 作用 。ｍ Ｒ Ａ表达 的上 ｉＮ
调 或 下 调 可 能 起 到 抑 癌 或 促 癌 作 用 ， 基 因丢 失 或 扩 增 与 肿 其 瘤 的发 生 有 密 切 关 系 。 胶 质 瘤 是 最 常 见 的一 种 原 发 恶 性 脑 肿 瘤 ， 是 迄 今 为 止 也 中枢 神 经 系 统 治 疗 效 果 最 差 的 肿 瘤 之 一 ， 近 年 来 对 故
瘤瘤干细胞 的细胞周期 ， 亡数 目及 细胞增 殖分 化 ， 终影 凋 最 响胶质瘤形 成及 自我 更新 能力 。研 究证 实在 胶 质瘤 ， 乳 腺癌 ， 肝癌 等多种恶 性肿瘤 干细胞 中都有 ｍ Ｒ Ａ的上 ｉＮ
能 通 过 Ｎ ｔ 、 Ｔ、 ｅｇｈｇ Ｐ３ ／ Ｋ 等 信 号 通 路 和 ｏ ｈ ＷＮ Ｈ ｄｅｏ 、 ＩＫ Ａ Ｔ ｃ Ｂ ｉ 、Ｔ Ｎ、ｌ ２和 Ｃ ｍ ｃ 转 录 因 子 作 用 于 下 游 靶 基 因 ｍ 一 Ｐ Ｅ ｏｉ １ ｇ —ｙ等 或 靶 蛋 白 ， 控 癌基 因 或肿 瘤 抑 制 基 因 的表 达 从 而 影 响 胶 质 调
常 激 活 不 仅 能 导 致 正 常 细 胞 向肿 瘤 细 胞 转 化 ， 且 对 维 持 肿 并
瘤 干细胞 自我更新等特性起决定性作用 ， 通过调节 Ｈ Ｈ信 号
通 路 的基 因分 子 表 达 及 信 号 通 路 功 能 状 态 ， 响 肿 瘤 干 细胞 影 的 自我更 新 能 力 ， 而 抑 制 肿 瘤 生 长 。ＨＨ 在 脑 部 肿 瘤 特 别 从 是 胶 质 瘤 中 起 重 要作 用 ， 与 胶 质 瘤 的 发 生 ， 作 用 于 神 经 参 其
ADAM12基因表达沉默对CD133阳性胶质瘤细胞自我更新能力的影响
ADAM12基因表达沉默对CD133阳性胶质瘤细胞自我更新能力的影响刘波;王伟;程铖;杨亦寒;杨学军;张辰;于圣平;林雨;海龙;周星辰;李帅;李涛【摘要】Objective To investigate the inhibitory effect of a disintegrin and metalloprotease 12 silenced by shR⁃NA on self-renewal capacity of CD133 positive giloma cells. Methods The shRNA recombinant lentivirus aimed at si⁃lencing ADAM12 was prepared. Human glioma cells U87 were employed in this study and assigned into three groups:shRNA-ADAM12, shRNA-NCandshRNA-C. ADAM12 expression was detected at mRNA and protein level using Re⁃al-time quantitative-PCR and western bloting, respectively. U87 cells were cultured with stem cell culture medium, to obtain cell sphere formation in which CD133 positive glioma cells were enriched. Immunofluorescence was employed to detect the expression of ADAM12 and CD133 in cell spheres and U87 cells; Self-renewal was tested by using tumor sphere formation assay. Molecular markers for differentiated or undifferentiated cells (CD133,GFAP and Tuj1) were de⁃tected at protein using western blotting. Western blotting was employed to test protein expression of HES1. Results AD⁃AM12 shRNA significantly down-regulated the mRNA and protein expression levels of ADAM12. Compared with shRNA–C group, the relative expression levels of mRNA in shRNA-ADAM12 group and shRNA-NC group were 0.22 ± 0.03 and 0.98 ± 0.06 (F=425.37,P<0.01). The relative expression levels of protein in shRNA-ADAM12 group, shRNA-NC group and shRNA-C group were28.72%±2.36%, 69.21%±3.92%and 69.04%±3.57%, respectively(F=145.42,P<0.01). Immunofluorescence staining showed that expression levels of ADAM12 and CD133 in cell spheres were significantly higher than those in normal cells. The number of spheres in three groups were45.5±2.3、104.2±5.8 and 109.6±6.2, tumor sphere formation ability of shRNA-ADAM12 group was lower than that of shRNA-NC group and shRNA-C group (F=147.03,P<0.01). Compared with the shRNA-NC group and shRNA-C group, the protain expression of GFAP and Tuj1 were increased up to 166% and 146% (P<0.01) whereas the protein expression levels of CD133 and HES1 were down-regulated by 54% and 50% (P<0.01). Conclusion Knockdown of ADAM12 may suppress self-renewal ability of CD133 positive glioma cells by inhibiting the Notch pathway activity.%目的：研究解整合素-金属蛋白酶12(a disintegrin and metalloprotease 12,ADAM12)基因表达沉默抑制CD133阳性（CD133+）胶质瘤细胞的自我更新能力。
人胶质瘤干细胞内在自我更新能力
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２ｌ ０・
经外科疾病研究杂
（ Ｃ ｈ ｉ ｎ Ｊ Ｎ ｅ ｕ ｒ ｏ ｓ ｕ ｒ ｇ Ｄ ｉ ｓ Ｒ ｅ ｓ ） ２ ０ ０ ７ ； ６ （ ３
文章编号 ： １ ６ ７ １ — ２ ８ ９ ７ （ ２ ０ ０ ７ ） ０ ６— ２ １ ０— ０ ４
ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｗｉ ｔ ｃ ｈｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ Ｓ ＧＦＦ— Ｍ ． Ｇｌ ｉ ｏ ｂ ｌ ｓｔ ａ ｏ ｍａ ｓ ｐ ｈｅ ｒ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｆ ｏ ｒ ｍｅ ｄ． ａ ｎ ｄ ｔ ｈｅ ｅ ｘ ｐｒ ｅｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｄｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ
细胞球 细 胞可 在 单纯 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ ／ Ｆ Ｉ ２培 养 基 中增 殖 ， 并 能形 成 Ｃ Ｄ １ ３ ３阳性 的二 代 细 胞球 ， 可 分 化 为 Ｇ Ｆ Ａ Ｐ 、 ＭＡ Ｐ ２ 、 ＭＢ Ｐ阳性表达 的肿瘤 细胞 。裸 鼠成瘤实验显示其 成瘤能力 显著高 于原代 胶质瘤 细胞 。 结论 胶质瘤干细胞能在无血清 、 无外源性细胞 因子培养基 中形 成肿 瘤干细胞球 ， 胶质瘤 干细 胞的 自
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神经干细胞研究 ・
人 胶 质 瘤 干 细 胞 内在 自我 更 新 能 力
李光 辉 陈正 堂 尹 昌林 王 东林 吕胜 青 纪 华 （ 第三军医大学新桥医院： 全
军肿瘤研究所 ； 神 经 外科 ， 重庆 ４ ０ ０ ０ ３ ７ ； 同 济 大 学 同 济 医 院肿 瘤 科 ， 上海 ２ ０ ０ ０ ６ ５ ；）
ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ａ ｎ ｄ ｕ ｎ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ｌ ｉ ｏ ｂ ｌ ｓｔ ａ ｏ ｍａ ｓ ｐ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｅ ｘ ａ ｍｉ ｎ ｅ ｄ ．Ｔ ｈ ｅ ｃ ａ ｐ ａ ｃ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｓ ｅ ｌ ｆ － ｒ ｅ ｎ ｅ ｗａ ｌ ， ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗ ａ ｓ ａ ｎ ｌｙ ａ ｚ ｅ ｄ ｂ ｙ ｓ ｕ ｂ ｓ ｐ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｆ ｏ ｍ ｉ ｒ ｎ ｇ， ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ Ｓ ＧＦ Ｆ — Ｍ ａ ｎ ｄ
人脑胶质瘤干细胞的分离培养和超微结构观察的开题报告
人脑胶质瘤干细胞的分离培养和超微结构观察的开题报告一、研究背景人脑胶质瘤是一种具有高度恶性转移、快速生长和易复发的肿瘤。
其发病机制尚不完全清楚，但研究表明，肿瘤干细胞的存在是导致胶质瘤难治性和复发的重要原因之一。
因此，深入研究人脑胶质瘤干细胞的特性和生物学行为，有助于提高该类型肿瘤的治疗效果。
二、研究目的本研究旨在通过分离培养人脑胶质瘤干细胞并观察其超微结构，探究其生物学特性和治疗上的相关机制。
三、研究内容和方法1.分离和培养人脑胶质瘤干细胞通过手术获取人脑胶质瘤组织标本后，对其进行细胞分离和培养。
使用磁珠法或筛选法等方法分离出富含干细胞的细胞群，并进行单克隆形成的培养。
通过免疫细胞化学和分子生物学等技术鉴定识别干细胞的表型和分子标志物表达。
2.观察干细胞超微结构使用透射电镜、扫描电镜等技术，观察干细胞的超微结构和形态特征。
对干细胞的细胞器、核膜、质粒和核仁等细胞结构进行详细观察和描述，并与正常细胞对比分析。
四、论文提纲1. 前言1.1 研究背景及意义1.2 国内外研究现状1.3 研究目的2. 材料与方法2.1 脑胶质瘤组织标本获取方法2.2 细胞分离方法2.3 细胞培养和传代方法2.4 细胞表型和分子标志物的鉴定方法2.5 超微结构观察方法3. 结果3.1 细胞分离和培养结果3.2 干细胞表型和分子标志物的鉴定结果3.3 干细胞超微结构的观察结果4. 讨论4.1 干细胞的生物学特性和治疗上的相关机制4.2 干细胞超微结构观察的意义和启示5. 结论6. 参考文献7. 附录7.1 光镜下胶质瘤组织切片7.2 透射电镜照片7.3 扫描电镜照片光镜下胶质瘤组织切片和透射电镜、扫描电镜照片将作为本研究的附录。
细胞融合与肿瘤干细胞
细胞融合与肿瘤干细胞近年来，随着肿瘤起源的干细胞假说逐渐得到人们的认可，使人们开始从新的角度思考肿瘤的起源问题。
长期以来，人们发现肿瘤细胞具有非整倍体及染色体紊乱的特征，而细胞融合的实验也发现融合的细胞也具有这种特征。
因此，猜想肿瘤的这些特征是否与发生细胞融合有关？进一步推论，肿瘤细胞和巨噬细胞或其他迁移来的骨髓源细胞(BMDCs)发生融合是否可以解释这一现象呢？而BMDCs-肿瘤细胞融合在许多动物模型和人类肿瘤也已经检测到。
发育生物学的研究表明上皮-间质转换(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是发育过程中的一个极其重要的环节，而在肿瘤侵袭和转移过程被激活。
在诱导人乳腺上皮EMT过程中，乳腺上皮出现间质的特征并表达了干细胞的表面标记，具有干细胞样特性。
从乳腺上皮分离的干细胞样细胞也表达与经历EMT过程的乳腺上皮相似的标记。
因此，EMT过程与上皮干细胞样特性的获得具有某种联系。
本文将主要探讨肿瘤发生过程中肿瘤干细胞、细胞融合和EMT间的联系。
一、肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)CSCs在前面已有详细介绍。
在这里，仅简单提及。
CSCs指那些有自我更新能力的肿瘤细胞，能够产生不同表型，区别于其他细胞的恶性干细胞。
不同组织的干细胞具有不同的内在自我更新能力和分化成特定细胞的能力【1，2】。
大多数肿瘤具有一群异质性细胞，这群细胞的增殖潜能和移植成瘤能力与其他细胞不同。
CSCs在造血系恶性肿瘤第一次被阐明，这群细胞仅有一小部分即可成瘤【3-6】。
CSCs可以通过它们的表面标记来鉴定和富集【4，7-11】。
在移植实验中，这些细胞产生新的肿瘤，包含有新的CSCs和不成瘤的异质性群体。
迄今为止，CSCs已经在乳腺癌【1，2】和中枢神经系统肿瘤【13-16】等众多肿瘤中得到鉴定。
CSCs是否来源于正常的组织源干细胞、骨髓源干细胞或经历了分化和转分化的成熟细胞，仍然不清楚。
肿瘤干细胞的生物学特性
cell,TSC)的理论。这一理论为我们重新认识肿瘤
的起源和本质，以及临床肿瘤治疗提供了新的方
向和视觉角度。
2a
TSC是指肿瘤组织中少数具有自我更新和无限 增殖潜能的细胞，与肿瘤的形成和生长发育密 切相关。
目前已在白血病，乳腺癌，脑胶质瘤及恶性黑 色素瘤等肿瘤中得到证实。
3a
1 TSC具有正常干细胞的特性
在神经干细胞等非造血系统干细胞的表面也发 现表达有CD133分子。
12 a
TSC与正常干细胞的区别
TSC的增殖不受控制，而干细胞的增殖受到严 格的调控
TSC增殖后分化异常，而正常干细胞则可以分 化成正常的成熟细胞。
13 a
肿瘤，干细胞，TSC信号传导通路之间可能拥 有共同的途径 例如 Wnt Noth SHH PI3K等信号通路
11 a
6 TSC表达与正常干细胞相似 的分子标记
TSC和正常干细胞具有类似的细胞表面标志， 两者均出现相对幼稚化的特征。
例： CD133分子
部分造血系统肿瘤，尤其在急性白血病中存在 CD133表达异常。
1.1 均处于未分化状态
TSC具有相对无限的分裂增殖和多向分化潜能 细胞增殖的同时可诱导血管的生成
4a
1.2 端粒酶活性高
TSC具有扩增的端粒对称方式分裂
即一个子代细胞不可逆地分化成为功能专一的 终末分化细胞。
另一个子代细胞继续保持亲代的特征，作为干 细胞保留下来。
肿瘤组织内细胞并不完全相同，即肿瘤的异质 性
肿瘤的异质性是恶性肿瘤的特征之一，是指肿 瘤在生长过程中，经过多次分裂增殖，其子细 胞呈现出分子生物学或基因方面的改变，从而 使肿瘤的生长速度、侵袭能力、对药物的敏感 性、预后等各方面产生差异。
胶质瘤治疗的神经干细胞治疗宋鸿艳
赤 峰 学 院 学 报（ 自 然 科 学 版 ） Journal of Chifeng University（Natural Science Edition）
Vol. 28 No. 1 Jan. 2012
胶质瘤治疗的神经干细胞治疗
宋鸿艳，曹淑颖
（赤峰市松山医院，内蒙古 赤峰 024005）
不管怎样，神经干细胞的出现毕竟为胶质瘤的 治疗树立了一个新的里程碑，相信随着人们对神经 干细胞和胶质瘤了解的不断深入，最终一定会利用
神经干细胞达到控制并最终治愈胶质瘤的目的. —————— ———— —————— — —— 参考文献： 〔1〕Kamoshima Y, Terasaka S, Iwasaki Y. Photo-
脑胶质瘤高增殖和侵袭行为是当今的治疗难 点，以至于能有效地“逃避”外科手术、放疗、化疗及 免疫治疗等方案，导致病人最终的不可治和死亡. 目前显微手术只能做到肉眼切除，而不少呈“树根 状”生长的脑胶质瘤细胞浸润到正常脑组织内，成 为无法全切的根源；放疗副反应大，常引起骨髓抑 制[4,5]；化疗的毒性反应大、难以跨越血脑屏障及“多 药耐药”尚无法解决[6].脑胶质瘤的神经干细胞治疗 是近年最令人瞩目的研究领域.
理论上讲，任何一种中枢神经系统疾病都可归 结为神经干细胞功能的紊乱.脑和脊髓由于血脑屏 障的存在，使之在干细胞移植到中枢神经系统后不 会产生免疫排斥反应.神经干细胞在神经发育和修 复受损神经组织中发挥着重要的作用.
神经干细胞治疗胶质瘤有两大优势： 一是直接采用神经干细胞移植可以修复和代 替受损的脑组织，能够重建部分环路和功能. 二是利用神经干细胞作为基因治疗载体，用于 颅内肿瘤和其它神经疾病的基因治疗，可弥补病毒 载体的一些不足.
MDR1在人脑肿瘤干细胞中的表达及意义
MDR1在人脑肿瘤干细胞中的表达及意义曾飞跃;王延金;陈风华;杨转移;邓永文;方加胜【摘要】目的:探讨脑肿瘤干细胞(BTSCs)上多药耐药基因1(MDR1)及其编码蛋白P-gP的表达,为抗癌治疗寻找靶向分子.方法:取10例胶质母细胞瘤患者肿瘤组织标本,制成单细胞溶液,接种于含EGF、bFGF、B27的无血清培养基中培养.分离获取BTSCs,对其传代培养,期间用Dispase消化分离获取到肿瘤干单细胞.免疫荧光方法检测BTSCs特异性标志物CDl33,并用免疫组织化学和荧光的方法检测MDRl的表达.Wgstern-blotting检测MDR1编码蛋白P-gp的表达.结果:所有的标本均培养出BTSCs,可在体外增殖和扩增分化,表达特异性的标志物CDl33,通过免疫组织化学和免疫荧光结果提示,BTSCs上存在MDR1,MDR1在BTSCs的表达率为(45.3±5.4)%.Western blotting结果表明BTSCs上表达P-gp.结论:BTSCs表达MDR1,并且其上表达P-gp,这可能是使BTSCs更耐受化疗的原因之一.【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2009(035)005【总页数】5页(P769-773)【关键词】肿瘤干细胞;脑;多药耐药基因;P-糖蛋白【作者】曾飞跃;王延金;陈风华;杨转移;邓永文;方加胜【作者单位】中南大学湘雅医院神经外科,湖南,长沙,410008;中南大学湘雅医院神经外科,湖南,长沙,410008;中南大学湘雅医院神经外科,湖南,长沙,410008;中南大学湘雅医院神经外科,湖南,长沙,410008;中南大学湘雅医院神经外科,湖南,长沙,410008;中南大学湘雅医院神经外科,湖南,长沙,410008【正文语种】中文【中图分类】R739.4;R73-351胶质瘤是颅内最常见的肿瘤，占颅内肿瘤的50%～60%。
目前对于胶质瘤主要治疗方法是手术辅以术后的放疗及化疗，但是效果均不理想。
Sox2在胶质母细胞瘤中的研究进展
Sox2在胶质母细胞瘤中的研究进展郭金满;谭超;胡火军;谭园【摘要】胶质母细胞瘤（GBM）属于世界卫生组织（WHO）Ⅳ级恶性肿瘤，是除脑干胶质瘤外预后较差的中枢神经系统癌症，发病率占人原发性恶性脑肿瘤的80%，患者5年生存率仅有5%。
Sox2是一种多能性调节子，越来越多的证据表明，Sox2的突变及其功能异常与GBM的发生密切相关。
已有研究证实利用Sox2基因作为GBM治疗靶点具可行性。
本文在此将Sox2在GBM中的新研究进展进行综述。
%Glioblastoma (GBM) is one of the WHO gradeⅣmalignancies, which is an acentral nervous system cancer with poor prognosis unless the lesion is in the brain stem. The incidence of GBM accounts for 80%of human primary malignant tumors in brain. Only 5%GBM can survive up to 5-years. Many researches showed that Sox2 is a pluripotent regulator, and muta⁃tion or abnormal function of Sox2 are closely related to the development of GBM. There are studies demonstrated the possibil⁃ity of using Sox2 gene as apotential target for GBM therapy. This paper reviewed recent progress in GBM.【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2015(000)012【总页数】3页(P1467-1469)【关键词】胶质母细胞瘤;中枢神经系统肿瘤;基因疗法;综述;Sox2【作者】郭金满;谭超;胡火军;谭园【作者单位】湖北宜昌，三峡大学第一临床医学院邮编443002;湖北宜昌，三峡大学第一临床医学院邮编443002;湖北宜昌，三峡大学第一临床医学院邮编443002;湖北宜昌，三峡大学第一临床医学院邮编443002【正文语种】中文【中图分类】R730.264Sox基因家族是一类SRY（Sex determination region of Y chromosome）相关基因构成的基因家族，编码一系列SOX（SRY-related high-mobility-group box）家族的转录因子，其产物都具有一个HMB（high-mobility-group box）集序保守结构域，目前研究者已从不同进化程度的生物中鉴定出了30多个成员［1］。
干细胞生物学智慧树知到答案章节测试2023年同济大学
第一章测试1.干细胞可以分为多潜能干细胞和组织干细胞两种类型，组织干细胞根据来源又可以分为胚胎组织干细胞和成体组织干细胞。
（）A:对B:错答案:A2.多潜能干细胞可以根据其分化潜能分为Naïve态和Primed态，也就是原始态多能性和激发态多能性。
最初建立的小鼠胚胎干细胞和人胚胎干细胞都是处于Primed状态的。
（）A:对B:错答案:B3.胚胎的发育起始于精卵结合后形成的具有全能性的受精卵，全能性胚胎经历6-7次细胞分裂后会形成着床前的囊胚，此时胚胎由滋养层细胞和内细胞团细胞组成，胚胎干细胞就是从具有多潜能性的滋养层细胞建系获得的。
（）A:错B:对答案:A4.体细胞核移植和诱导多能干细胞技术是现在最可靠的将体细胞重编程为全能性胚胎或多能性干细胞的两种方法。
（）A:对B:错答案:A5.全能性是指细胞具有发育为整个个体和支持个体发育的胚外组织的能力，只有受精卵和早期胚胎的卵裂球具备全能性；多能性是指细胞具有发育为整个个体所有细胞类型的能力。
（）A:错B:对答案:B6.最早的体细胞核移植实验是在哺乳动物中完成的。
（）A:错B:对答案:A7.通过显微操作构建的只两个雄原核的孤雄胚胎会在发育至一定阶段死亡，但含有两个雌原核的孤雌胚胎不会。
（）A:错B:对答案:A8.印记基因是指仅一方亲本来源的同源基因表达,而来自另一亲本的不表达。
（）A:对B:错答案:A9.显微操作仪的构成比较简单，主要由一台倒置显微镜和左右两个显微操作臂组成。
（）A:对B:错答案:A10.体细胞核移植的具体操作由去核和注核两步组成，一般受体是受精卵。
（）A:错B:对答案:A第二章测试1.人的胚胎干细胞形态与小鼠不同，相比而言人胚胎干细胞的克隆形态更加饱满致密。
（）A:错B:对答案:A2.虽然同样来源于植入前囊胚内细胞团，但人类和小鼠胚胎干细胞在形态、培养条件和信号通路上均有很大的差异。
（）A:错B:对答案:B3.胚胎干细胞可分为原态（naïve state）和始发态（primed state）两种类型，原态干细胞的经典代表是灵长类胚胎干细胞，而始发态干细胞的经典代表是啮齿类胚胎干细胞。
胶质母细胞瘤的新兴治疗（综述）
胶质母细胞瘤的新兴治疗（综述）近期，JAMA Neurology杂志发表综述，回顾了胶质母细胞瘤的基因组、表观遗传、转录、蛋白质组特征以及脑内微环境和免疫系统交互影响，阐述了以肿瘤生长因子受体及下游信号通路、血管新生、干细胞样癌细胞、细胞周期的调节为靶点以及溶瘤病毒、新颖放射技术和免疫治疗等新兴的治疗策略。
胶质母细胞瘤是最常见的原发性脑肿瘤，在美国的年发病率为3.19/10万人，目前标准治疗为手术切除后放疗，辅助替莫唑胺的联合方案。
尽管采用此种多模式的治疗方法，但胶质母细胞瘤的平均生存时间为16~ 19个月，约25%~ 30%的患者在诊断2年后仍存活。
表现出DNA修复酶O-甲基鸟嘌呤甲基转移酶表观沉默的患者，结局更佳。
最近一项3期临床试验调查了替莫唑胺的疗效，表达O-甲基鸟嘌呤甲基转移酶启动子的肿瘤患者接受了21个月的治疗，而无甲基化的肿瘤患者治疗时间为14个月。
但结果表明，全部患者的病情均有进展，在进展期，传统的、具有细胞毒性的化疗（卡莫司汀、洛莫司汀或卡铂）效果不佳。
通过调控血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ，VEGF）通路，抑制血管生成的贝伐珠单抗，最近得到美国FDA批准，可用于治疗胶质母细胞瘤。
两项2期试验表明，该药具有高反应率（28.3% 和37.8%），可延长无进展生存期（16周）。
近期，两项2期研究采用贝伐珠单抗联合标准放化疗治疗新诊断的患者，发现可改善无进展生存期，但总生存期无改善。
考虑到现行治疗的低生存率，迫切需要治疗胶质母细胞瘤的新方法。
本综述关注于临床试验中根据胶质母细胞瘤肿瘤基因学进展转化而来的新颖治疗。
胶质母细胞瘤分子分型的进展胶质母细胞瘤在组织学和基因上为异质性肿瘤，根据有无低级别的胶质瘤而在组织学上分为原发性和继发性两类。
近期基因组分析进一步支持了该假说：原发性和继发性反映着不同的肿瘤成因。
原发性胶质母细胞瘤是该病最常见的类型，而原发性胶质母细胞瘤最常见的基因突变位点为端粒酶逆转录酶基因（TERT; OMIM 187270）的启动子区，该突变见于54%~ 83%的肿瘤。
简述干细胞的特征
简述干细胞的特征干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞, 其具有以下几个重要特征:1.自我更新能力: 干细胞具有持续自我更新的能力, 能够不断分裂产生新的干细胞, 从而维持其自身的数量。
这种自我更新能力使得干细胞能够长期存在, 并具备持续分化为各种细胞类型的潜能。
2.多向分化潜能: 干细胞具有多向分化潜能, 即能够分化为不同类型的细胞。
干细胞可以通过特定的诱导信号, 转变为各种不同的细胞类型, 如神经细胞、肌肉细胞、心脏细胞等。
这种多向分化潜能使得干细胞在组织修复和再生中具有广泛的应用前景。
3.长寿命: 干细胞具有相对较长的寿命, 能够在体内存在较长时间。
这种长寿命使得干细胞能够持续进行自我更新和分化, 从而为组织维持和再生提供持久的动力。
4.低分化状态: 干细胞处于相对低分化状态, 与其他成熟细胞相比, 其细胞形态和功能相对较原始。
干细胞的低分化状态使其具备更大的潜能, 可以根据周围环境的需求选择性地分化为特定类型的细胞。
5.能源自给自足: 干细胞具有能源自给自足的能力, 能够通过自身代谢产生足够的能量维持其生存和功能。
这种能源自给自足的特性使得干细胞在体内能够独立存在, 并为组织维持和再生提供能量支持。
6.低免疫原性: 干细胞具有相对较低的免疫原性, 不易被免疫系统识别和攻击。
这种低免疫原性使得干细胞在移植和治疗方面具有较好的应用前景, 可以避免免疫排斥等问题。
7.能够与邻近细胞相互作用: 干细胞能够与周围的细胞相互作用, 通过细胞间的信号传递和相互影响, 调控其自身的生理状态和功能。
这种与邻近细胞的相互作用使得干细胞能够感知和响应周围环境的变化, 并做出相应的反应。
干细胞具有自我更新和多向分化潜能、长寿命、低分化状态、能源自给自足、低免疫原性以及与邻近细胞的相互作用等特征。
这些特征使得干细胞在组织修复、再生医学和疾病治疗等领域具有广泛的应用前景, 为人类健康和疾病治疗带来了希望。
MicroRNA.218通过靶向多梳家族Bmil基因抑制胶质瘤的侵袭、迁移、增殖和肿瘤干细胞样细胞的自我更新
Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ｉ ａ Ｊ ｉ ａ ｏ Ｔ ｏ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｓｉ ｒ ｔ ｙ ，Ｓ ｈ ｎｇ ａ ｈ ａ ｉ ２ ０ ０ ２ ４ ０，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ
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Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ＲＮＡ－ ２ １ ８ ｉ ｎ ｈｉ ｂｉ ｔ ｓ ｇ ｌ ｉ ｏ ｍａ ｉ ｎｖ ａ ｓ ｉ ｏ ｎ．ｍ ｉ －
ｉ ０ ｍａ ｍｉ ｒａ ｇ ｔ ｉ ｏ ｎ，ｐ ｒ ｏ ｌ ｆ ｉ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ，ａ ｎ ｄ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｓ ｔ ｅ ｍ－ ｌ ｉ ｋ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｅ ｆ ｌ － ｒ ｅ —
ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｅ ｌ ｆ － ｒ ｅ ｎ ｅ ｗａ ｌ ｂ ｙ ｔ ａ ｒ ｇ ｅ ｉｎｇ ｔ ｔ ｈ ｅ ｐｏ ｌ ｙ ｃ ｏ ｍｂ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｇ ｅ ｎｅ Ｂｍｉ ｌ
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ｐ ｏｌ ｒ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｉ ｔ ｏ ｎ，ａ ｎｄ ｓ ｔ ｅ ｍｌ ｉ ｋ ｅ ｕａ ｑ ｌｉ ｔ ｉ ｅ ｓ ｉ ｎ ｇ ｌ ｉ ｏ ｍａ ｃ ｅ ｓ 】 ｍ ｉ ｅ ｒ ｏ Ｒ Ｎ Ａ － ２ １ ８ ； Ｂ ｉｌ ｏ ｒ ； ｇ ｌ ｉ ｏ ｍ ａ ； ｉｇ ｍ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ； ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ —
涂艳 阳 ， 高兴春 ， 李 刚 ， 付华林 ， 崔大祥 ， 刘 辉 ， 金卫林 ， 张永生
人脑胶质瘤中CD133的表达及其意义的开题报告
人脑胶质瘤中CD133的表达及其意义的开题报告一、选题背景及意义人脑胶质瘤是一种高度恶性的肿瘤，常常出现于成年人中，极具侵袭性和致命性。
其治疗难度较大，复发率和死亡率较高，仍是目前治疗疾病中的难点之一。
目前，针对人脑胶质瘤的治疗策略依然是各种治疗手段综合应用的方案，而其中，放疗和化疗是最为常用和重要的治疗手段。
但是这些方法不能很好地达到治愈肿瘤的目的，主要原因是难以有效杀灭肿瘤干细胞。
CD133是一种标记脑肿瘤干细胞的表面标志物，具有干细胞的特性。
研究表明，CD133阳性的脑肿瘤干细胞有着更高的耐药性和更强的自我复制和再生能力。
因此，针对CD133阳性的肿瘤细胞，探寻其表达的变化及其生成的机制，有助于揭示肿瘤发生和发展的机制，并为寻找治疗肿瘤干细胞的新方法提供参考。
二、研究目的本研究旨在探究人脑胶质瘤中CD133的表达及其意义，更好地认识CD133的生物学意义，为探索肿瘤干细胞治疗的新途径提供参考。
三、研究内容和方法本研究拟采用文献调查和细胞实验相结合的方法来探究人脑胶质瘤中CD133的表达及其意义。
具体包括以下几个方面：1.文献调查。
通过文献综述分析CD133在肿瘤中的功能，并结合CD133在人脑胶质瘤的表达及其意义的研究现状。
2.细胞实验。
在脑胶质瘤细胞中，通过定量PCR、Western blot等技术，检测CD133的表达情况。
同时，对CD133高表达细胞与CD133低表达细胞的生长、增殖、凋亡等生物学表征进行比较分析。
四、预期研究结果通过对人脑胶质瘤中CD133的表达进行分析，可以更好地阐明CD133在肿瘤中的功能及其在肿瘤发生和发展中的作用，为寻找治疗肿瘤干细胞的新方法提供参考。
同时，研究结果也可以为肿瘤中CD133以及其他相关标志物的检测提供参考，丰富肿瘤标志物的检测体系，为临床提供更为精准的诊断方法。
癌干细胞的可塑性和异质性
癌干细胞的可塑性和异质性摘要：异质性是哺乳动物细胞在体外和体内无所不在的特征。
即使在最佳的培养条件下的人类胚胎干细胞是异质性。
在成体器官体干细胞也是，含有具有不同再生能力的自我更新细胞的许多亚群。
成体干细胞的分化的后代也保留显著发育可塑性。
像正常干细胞，癌干细胞（CSCs）显示出类似的显著表型和功能异质性，并且子代表现多样可塑性。
在这里，将讨论CSCs在肿瘤发生和发展的背景下异质性和可塑性。
通过了解肿瘤干细胞和分化后代之间的相互关系，希望能开发更好的治疗方案，防止肿瘤细胞的变异体能产生新的肿瘤和远处转移。
关键词：肿瘤干细胞；异质性；可塑性癌干细胞（CSCs）大多数肿瘤是多种亚型和功能不同的细胞组成的异质体。
其异质性可能来源于由不稳定的基因驱动克隆演变，或/和来源于分化的类干细胞，常被称为癌干细胞或肿瘤起始细胞 [1]。
现在研究展示克隆演变及癌干细胞引起肿瘤的发展不是独立的，而是两者的机制共同创造肿瘤异质性 [2]。
关于癌干细胞存在性没有争议，混淆的CSCs概念存在困惑。
首先，CSCs是功能性概念，具有正常干细胞样功能。
第二，癌干细胞也许不是起源于正常干细胞。
因为祖细胞有很强的增殖力，理论上可以成为转化目标。
已经转化的祖细胞获得自我更新能力，变成CSCs形成肿瘤。
BRCA1基因突变的在基底干细胞显著减少，但在管腔祖细胞的显着增加。
这些观测结果以及随后基因表达谱和功能研究，表明了异常管腔祖可能代表BRCA1相关基底乳腺肿瘤的转型目标[3]。
来自BRCAmut/ +患者乳腺上皮细胞产生的肿瘤相对于BRCA+ / +增加基底分化[4]。
这表明在肿瘤发展过程中特定的遗传突变决定祖细胞的表型。
第三，对于临床肿瘤，最初转化的细胞可能不是细胞的起源地。
最近对少突胶质前体细胞的研究支持该观点，少突胶质前体细胞为恶性胶质瘤的细胞起源地，虽然在神经元和神经胶质祖细胞中都有初始转化 [5]。
第四，癌干细胞在不同的癌症患者中是不同的，随着疾病的进展也是不断变化的。
肿瘤干细胞的研究进展
第２１卷第６期肝胆胰外科杂志Ｖ０１．２１Ｎｏ．６２００９年１１月ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｐａｔｏＰａｎｃｒｅａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙＮｏｖ．２００９肿瘤干细胞的研究进展林彦综述，马保金审校（复旦大学附属华山医院普外科，上海２０００４０）・文献综述・［摘要】肿瘤干细胞具有强大的自我更新能力和致瘤性，能够抵抗放化疗的攻击，它在肿瘤的发生、发展中起到了关键作用。
研究肿瘤干细胞的生物学特性及其内在机制为肿瘤的治疗提供了新的途径。
［关键词］肿瘤；干细胞；综述文献［中图分类号】Ｒ７３５．７［文献标识码］Ｃ［文章编号］１００７—１９５４１２００９）０６—０４９５—０４２００１年．Ｒｅｙａ等ＩｌＩ提出了“肿瘤干细胞理论”．他们认为肿瘤的生长与正常器官的生长存在着许多共性，如果把肿瘤看作是一个异常的器官，那么就可以应用正常组织干细胞的生物学原理来解释和研究肿瘤是如何发生、发展的，肿瘤干细胞则是其中的关键因素【…。
“肿瘤干细胞理论”为肿瘤的诊断、治疗提供了新的思路．本文在此作简单介绍。
ｌ肿瘤干细胞理论的发展史早在２０世纪五、六十年代就有研究者发现白血病、骨髓瘤细胞中只有－／ｊ，，部分细胞可以形成体内外克隆ｉ３－．４１。
这一小部分细胞被认为是肿瘤干细胞。
Ｓｅｌｂｙ等１５１在２０多年前就应用乳腺癌干细胞模型的假设提出激素联合化学治疗的新观点。
尽管如此．在“肿瘤干细胞学说”的发展过程中，许多学者将注意力集中于利用肿瘤细胞的体外克隆实验来研究肿瘤干细胞对化疗药物的敏感性．却未能更深入地研究肿瘤干细胞本身的生物学特性．这可能与肿瘤十细胞长期未能得到分离有关。
１９９７年Ｂｏｎｎｅｔ等［６１分离出了急性粒细胞白血病的肿瘤干细胞，首次证实了血液系统肿瘤干细胞的存在性。
此后，２００３年，Ａ１．Ｈａｊ＿ｉ等』７】成功分离出了乳腺癌肿瘤干细胞，这是世界上首次实体肿瘤十细胞分离的报道。
自此以后，许多实体肿瘤包括神经系统肿瘤１８Ｊ、肠道肿瘤［９１、前列腺癌【１０ｌ等的肿瘤干细胞都得到成功分离，使得肿瘤干细胞的研究也得以进一步展开。
癌症与癌症干细胞
癌症与癌症干细胞作者：杨欣来源：《百科知识》2013年第15期胚胎干细胞是能够分化生长成各种器官组织的干细胞，一个生命的诞生就是从胚胎干细胞产生的。
所以，也可以说，人体是由干细胞分化而来的高度复杂有序的整体。
既如此，癌症会不会也是由少数干细胞分化而来的呢？这就是癌症产生于癌症干细胞的假说。
癌症干细胞是癌症之母癌症干细胞（Cancer Stem Cell， CSC）假说是研究人员于2001年提出的。
癌症防治的实践表明，许多癌症的产生和转移大都由一些基因突变的病变细胞产生，它们会诱发更多的细胞病变，就像滚雪球一样，让肿瘤越来越大。
尽管对多数癌症可以采用手术、化疗、放射疗法及生物免疫疗法等方法来杀死大部分肿瘤细胞，但是却无法从根本上治愈癌症，原因就在于，可能存在没有被斩尽杀绝的癌症干细胞，它们起到了火种的作用，并能转移。
于是，研究人员认为，尽管不同组织和器官有不同的癌症发生，但癌症最初的产生和后来的转移都可能依赖于一类起决定作用的癌变细胞，这就是癌症干细胞。
当然，刚开始时，癌症干细胞只是一种假说，但是10多年来越来越多的研究已经追踪和找到了各种不同的癌症干细胞，因此癌症干细胞假说已经成为一种被证实的理论。
现在，研究人员在乳腺癌、脑肿瘤、前列腺癌、肺癌、肝癌、结直肠癌、皮肤癌等多种癌症中都成功分离出了癌症干细胞，并且发现了癌症干细胞有几种明显的特征。
第一，癌症干细胞有自我更新的能力。
自我更新能力是指癌症干细胞保持分化为前体细胞的能力。
第二，癌症干细胞具有多分化潜能。
多分化潜能可以使癌症干细胞产生不同分化程度的子代癌症细胞，在体内形成新的癌症。
同一癌症组织中，分化成熟的癌症细胞恶性程度较低，但分化差的癌症细胞恶性程度较高。
第三，癌症干细胞具有高增值能力。
所谓高增值能力是指，癌症干细胞比一般的癌细胞更容易生长，并且生长速度极快。
第四，癌症干细胞具有更强的耐药性。
癌症的多药耐药是导致癌症治疗失败的主要原因之一。
肿瘤干细胞及其特征
肿瘤干细胞及其特征随着医学研究的不断深入，我们已经能够认识到肿瘤干细胞的存在。
这类细胞是肿瘤生长和发展的关键因素，也是肿瘤治疗的难点。
本文将重点介绍肿瘤干细胞及其特征。
一、肿瘤干细胞的定义肿瘤干细胞是指一些具有自我更新、分化和肿瘤形成能力的细胞。
这些细胞能够自主或配合其他细胞进行修复和再生，从而支持肿瘤的生长和扩散。
肿瘤干细胞的产生过程并非一蹴而就，它们往往是由正常细胞演变而来。
在适当的刺激下，正常细胞的DNA发生异常，导致细胞发生改变。
二、肿瘤干细胞的特征1. 自我更新和自我复制能力肿瘤干细胞的自我更新和自我复制能力是其最为重要的特征之一。
这就意味着其可以一直维持肿瘤的生长和扩散。
此外，这些细胞可以不断地大量增殖，避开免疫系统和激素治疗。
2. 稳定性和长期存在性与普通细胞不同，肿瘤干细胞具有非常稳定的遗传特征。
不仅如此，它们还可以在体内存在数年之久，不会受到免疫系统的杀伤。
3. 耐药性肿瘤干细胞的耐药性是导致肿瘤难以治愈的主要原因之一。
这些细胞可以利用多种机制来抵抗治疗，比如改变细胞表面蛋白的表达，增强DNA修复能力等。
4. 高度分化肿瘤干细胞的分化能力非常高。
这就意味着它们可以成为多种类型的肿瘤细胞，包括癌细胞和转移性癌细胞。
这种特征使得肿瘤的治疗变得更加复杂。
5. 低代谢率和依赖性肿瘤干细胞具有相对较低的代谢率，这就意味着它们可以在没有外部营养供应的条件下存活。
此外，这些细胞也可以在缺氧情况下存活，比如在肿瘤中心区域。
三、肿瘤干细胞的治疗策略目前，针对肿瘤干细胞的治疗策略主要包括以下几种：1. 靶向可干扰肿瘤干细胞的信号通路这是最常见的一种治疗策略。
通过选择靶向可干扰肿瘤干细胞信号通路的药物，可以有效地减少肿瘤干细胞数量，从而达到治疗的目的。
2. 细胞免疫疗法这种治疗策略是通过使用肿瘤干细胞特异性T细胞对患者进行治疗的。
这些T细胞具有特异性捕获和杀伤肿瘤干细胞的功能。
3. 激活免疫系统通过使用免疫治疗来激活患者的免疫系统，从而杀伤肿瘤干细胞。
胶质瘤干细胞的概念
胶质瘤干细胞的概念胶质瘤是一种起源于中枢神经系统（大脑和脊髓）的恶性肿瘤，是成年人最常见的原发性脑肿瘤之一。
它可以发生在任何年龄，但以中老年人群体中更为常见。
与其他神经系统肿瘤不同，胶质瘤由胶质细胞发展而来。
而胶质细胞是中枢神经系统中的主要支持性细胞，具有维持神经元功能、稳定神经环境等重要作用。
胶质细胞包括星形胶质细胞（astrocytes）、少突胶质细胞（oligodendrocytes）和微胶质细胞（microglia）等。
胶质瘤干细胞是指在胶质瘤组织中具有干细胞特性的一类细胞。
干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞，它们可以通过分裂生成相同类型的干细胞（自我更新）或分化为不同类型的细胞（多向分化），可以修复和替代受损组织。
胶质瘤干细胞具有类似的功能，它们能够不断自我更新并产生胶质瘤组织中的其他细胞类型。
胶质瘤干细胞的发现对胶质瘤的治疗和研究有重要意义。
传统的胶质瘤治疗方法主要是通过手术、放疗和化疗来消灭胶质瘤细胞，但由于胶质瘤干细胞的存在，这些治疗方法常常无法完全根除胶质瘤，导致肿瘤复发和进展。
研究发现，胶质瘤干细胞具有耐药性，能够抵抗放疗和化疗药物的作用，从而保持肿瘤的生长和存活能力。
因此，解决胶质瘤干细胞的问题成为提高胶质瘤治疗效果的关键。
胶质瘤干细胞具有许多特点，例如：自我更新能力、多向分化潜能、浸润性生长、耐药性等。
自我更新能力是指胶质瘤干细胞可以无限期地通过分裂生成相同类型的干细胞，从而维持肿瘤的增殖和存活。
多向分化潜能是指胶质瘤干细胞可以分化为多种胶质瘤组织中的细胞类型，如胶质细胞和神经元，进一步增加肿瘤的多样性和恶性程度。
浸润性生长是指胶质瘤干细胞可以穿过血脑屏障，深入周围正常组织，扩散和侵袭脑部其他区域。
耐药性是指胶质瘤干细胞对放疗和化疗等常规治疗手段表现出一定的抵抗力，从而导致治疗效果不佳。
目前，关于胶质瘤干细胞的研究主要集中在以下几个方面：干细胞标记物的鉴定和筛选、干细胞分化过程的研究、干细胞与肿瘤微环境的相互作用、干细胞信号传导途径的调控等。
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作者简介 : 李 光 辉 , 主 治 医 师 、讲 师 , 电 话 : ( 023 ) 68774626, E2 mail: liguangh@mail. tmmu. com. cn
3. 增殖分析 : 在 SGFF2M 中培养的胶质瘤细胞 球细胞以 1 000个 /孔接种于 96 孔板 ,加 SGFF2M 至 0. 1 m l,检测 450 nm 波长吸光度以测定细胞增殖情 况 ,绘制细胞生长曲线 。
4. CD133 + 胶质瘤细胞流式细胞分析 : SGFF2M 中形 成 的 原 代 胶 质 瘤 细 胞 球 制 成 单 细 胞 悬 液 , CD1332PE抗体标记 ,流式细胞分析 CD133 + 胶质瘤 细胞比例 。
Abstract O bjective To observe the self2renewal and p roliferation of glioblastoma stem cells cultured in serum 2free medium w ithout exogenous grow th factor ( SGFF2M ). M ethods Human p rimary glioblastoma cells were sw itched into SGFF2M. Glioblastoma spheres were formed, and the exp ression of differentiated antigen and undifferentiated antigen in glioblastoma spheres were exam ined. The capacity of self2renewal, p roliferation and differentiation was analyzed by subspheres form ing, p roliferation in SGFF2M and differentiation assay in medium w ith 10% FBS ( fetal bovine serum ). Glioblastoma sphere cells and p rimarily cultured glioma cells were imp lanted into nude m ice and made a comparison of the capability of tumor initiation. Results Glioblastoma spheres formed in SGFF2M exp ressed CD133, but not exp ressing GFAP ( glial fibrillary acidic p rotein) and MAP2 (m itogen2activated p rotein 2). A few glioblastoma sphere cells exp ressed MBP (myelin basic p rotein). The glioblastoma sphere cells were able to p roliferate in SGFF2 M and generated free2floating subspheres exp ressing CD133. Most cells which p roduced from glioblastoma spheres and cultured in SGFF2M exp ressed GFAP, while a few exp ressed MAP2 and MBP. The glioblastoma sphere cells had stronger capability of tumor initiation in nude m ice than p rimary cultured glioma cells. Conclusion The glioblastoma spheres formed in SGFF2M are glioblastoma stem cell spheres. The self2 renewal and p roliferation of glioblastoma stem cells are independent of exogenous growth factor. Genes or signal pathway in itself may regulate the self2renewal of glioblastoma stem cells.
材料与方法
一 、材料 本研究 3例病例均为 2005 年 8 月至 2006 年 3
月期间在我院接受手术治疗的患者 。术后病理诊断 均由我院病理科依据 WHO 诊断标准作出 ,分别为恶 性胶质母细胞瘤 Ⅳ级 ,恶性胶质瘤 Ⅲ级 、局部区域伴 胶质母细胞瘤样改变 ,恶性胶质瘤 Ⅲ～Ⅳ级 。
抗人 CD133 / PE 抗体购自 M iltenyi B iotec 公司 , 抗人 CD133抗体购自 Santa C ruz公司 ,抗人髓磷脂碱 性蛋白 (myelin basic p rotein, MB P)抗体 、抗人微管相 关蛋白 (m itogen2activated p rotein 2, MAP2 ) 抗体 、抗 人胶质纤维酸性蛋白 ( glial fibrillary acidic p rotein, GFAP)抗体均购自北京中杉公司 ,人表皮生长因子 ( ep idermal grow th factor, EGF) 、人碱性成纤维细胞生 长因子 ( basic fibroblast grow th factor, bFGF) 、人白血 病抑制因子 ( leukem ia inhibitory factor, L IF) 均购自 Pep roTech公司 , CCK28细胞计数试剂盒购自 Dojindo 公司 。
The endogenous regula tion of self2renewa l in human gliobla stoma stem cells L I Guanghu i1 , CHEN Z heng tang1 , Y IN Chang lin2 , WAN G D ong lin3 , LV S hengqing2 , J I Hua1 1 Cancer R esea rch Institu te of PLA, 2D epa rtm en t of N eu rosu rgery, X inqiao Hospita l, Th ird M ilita ry M ed ica l U n iversity, Chongqing 400037; 3D epa rtm en t of O ncology, Tong ji Hospita l, Tong ji U n iversity, S hangha i 200065, China
·210· 文章编号 : 1671 - 2897 (2007)Chin J Neurosurg D is Res) 2007; 6 (3)
·神经干细胞研究 ·
人胶质瘤干细胞内在自我更新能力
李光辉 1 陈正堂 1 尹昌林 2 王东林 3 3 吕胜青 2 纪华 1 (第三军医大学新桥医院 : 1全
6 w龄 Balb /C 裸鼠购自上海实验动物中心 ,在 无特殊病原体动物饲养室喂养 。
二 、方法 1. SGFF2M 中胶质瘤细胞球的形成 : 以含 10% 胎牛血清 ( fetal bovine serum , FBS) 的改 良 Eagle / F12 (Dulbeco’s modified Eagle’s m edium / F12, DM EM / F12)培养液将原代胶质瘤细胞制成单细胞悬液 ,离 心后磷酸盐缓冲液洗涤一次 ,转入 SGFF2M 中培养 , 隔天换液 ,观察胶质瘤细胞球形成 。 2. 二代胶质瘤细胞球形成分析 : SGFF2M 培养条 件下形成的原代胶质瘤细胞球制备单细胞悬液 ,以 100个 /孔接种至 96孔板中 ,每孔加无血清的神经干 细胞 培 养 液 ( neural stem cell medium , NSC2M ) (含 bFGF、EGF、L IF各 20 ng /m l的 DMEM / F12培养液 ) [3] 至 0. 2 m l,每 3 d加入 0. 025 m l新鲜 NSC2M。观察 10 d,计数每孔形成悬浮生长的二代细胞球个数 。
7. 裸鼠成瘤实验 : 6 w 龄裸鼠 5 只 ,接种前 7 d 腹腔内注射 30 mg / kg足叶乙甙 ,每只裸鼠近左前肢 皮下接种 1 ×106个原代胶质瘤细胞 ,近右前肢皮下 接种 SGFF2M 培养条件下的胶质瘤球细胞 1 ×104个 , 接种后观察成瘤情况 。
5. 胶质瘤细胞球细胞的分化 : SGFF2M 中培养的 胶质瘤细胞球转入含 10% FB S的 DM EM / F12 培养 液 ,培养 7 d后接种至多聚赖氨酸包被的载玻片上 , 继续培养 5 h, 4%多聚甲醛固定 ,免疫细胞化学检测 。
6. 免疫细胞化学检测 : 胶质瘤细胞球接种至无 菌多聚赖氨酸包被的载玻片上 ,培养 5 h, 4%多聚甲 醛固定 ; SP法检测细胞 CD133、MBP、MAP2、GFAP表 达。
军肿瘤研究所 ; 2神经外科 , 重庆 400037; 3同济大学同济医院肿瘤科 , 上海 200065; )
摘要 目的 了解胶质瘤干细胞内在的自我更新和增殖能力 。方法 观察原代胶质瘤细胞在单 纯改良 Eagle / F12培养液 (DM EM / F12)中胶质瘤干细胞球的形成 ,并检测其 CD133、胶质纤维酸性蛋 白 ( GFAP) 、微管相关蛋白 (MAP2) 、髓磷脂碱性蛋白 (MBP)的表达 。通过二代球体形成 、细胞增殖测 定 、分化实验分析其自我更新 、增殖 、多能分化能力 。通过裸鼠移植瘤实验观察所分离细胞球细胞与 原代培养胶质瘤细胞成瘤能力的差异 。结果 在单纯 DM EM / F12培养液中形成的胶质瘤细胞球细 胞表达神经干细胞标记 CD133,不表达分化标志 GFAP、MAP2,少数细胞表达 MBP。分离出的胶质瘤 细胞球细胞可在单纯 DM EM / F12 培养基中增殖 , 并能形成 CD133 阳性的二代细胞球 , 可分化为 GFAP、MAP2、MBP阳性表达的肿瘤细胞 。裸鼠成瘤实验显示其成瘤能力显著高于原代胶质瘤细胞 。 结论 胶质瘤干细胞能在无血清 、无外源性细胞因子培养基中形成肿瘤干细胞球 ,胶质瘤干细胞的自 我更新和增殖不依赖于外源性生长因子 ,它可能拥有自我更新的自身活化机制 。 关键词 胶质瘤 ; 干细胞 ; 自我更新 ; 生长因子 ; 分化 中国图书资料分类号 R 739. 41 文献标识码 A