凝血因子检查ppt课件

纤维蛋白
模块1 内源性凝血系统的检验
内源性凝血途径
定义：参与凝血的因子全部来自血液。 表面激活：血液与带负电荷的异物表面
接触而启动凝血的过程。 凝血使动因子为 Ⅻ
1、静脉采血
2、活化部分凝血活酶时间测定（APTT）
【实验原理】
在抗凝血中，加入足够量的活化接触因子激活剂（ 如白陶土）和部分凝血活酶（代替血小板的磷脂） ，再加入适量的钙离子即可满足内源凝血的全部条 件。从加入钙离子到血浆凝固所需的时间即称为活 化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time,APTT）。
既往史：平素体健，14岁以前无出血倾向或贫血史。从未输 注血浆或因子Ⅷ浓缩物。无肝病、肾病或消化性溃疡病史， 无结核、伤寒等传染病史，无手术或外伤史，无食物或药物 过敏史。
个人史：原籍出生，从事银行业务，无疫水接触史，不嗜烟 酒，无特殊爱好。
月经、婚育史：14岁月经初潮，月经不规则，月经周期2045天不等，经期3-10天，月经量时多时少，LMP1996-0615，白带不多，无痛经。未婚未育。
患者14岁时无明显诱因出现四肢皮疹，为散在暗红色丘疹，伴 瘙痒，无水疱或溃疡，疑过敏性皮炎，予苯海拉明、胶性钙等 对症治疗后好转。但2个月后右手臂发生血肿，以后右臂与右 腿反复发生血肿，以后每年发作2-4次，每次发作前或发作时均 有皮疹加剧，无发热畏寒，无关节肿痛、腹痛腹泻或黑便，无 腰酸腰痛或血尿，在当地医院检查血小板、凝血酶原时间及纤 维蛋白原均正常，未能明确诊断，但与糖皮质激素（泼尼松或 地塞米松）治疗病情可缓解，停药后则易反复。近1年来患者 不规则服用地塞米松及环磷酰胺，已自行停药1月余。6天前患 者又出现右腿肿胀疼痛并逐渐加剧，伴四肢皮疹增多，为进一 步诊治而入院。自起病以来，无发热畏寒、关节肿痛，无鼻出 血或牙龈出血，无口腔溃疡、全身骨痛，精神欠佳，食欲一般 ，体重下降约5千克。
实验室检查：红细胞（RBC）3.36×1012/L，血红蛋白（Hb）101g/L， 白细胞（WBC）3.24×109/L，分类正常，血小板（PLT）370×109/L， 大、小便常规正常。血清钠（Na）140mmol/L，钾（K）4.1 mmol/L， 氯（Cl）108 mmol/L，血糖（Glu）4.8 mmol/L，血尿素氮（BUN）7.3 mmol/L，血肌酐（Cr）89umol/L。肝功能：天冬氨酸转氨酶（AST） 32U/L,丙氨酸转氨酶（ALT）29 U/L,乳酸脱氢酶（LDH）122U/L,血总胆 红素（TBIL）19.8 umol/L，直接胆红素（DBIL）10.2 umol/L，间接胆 红素（IBIL）9.6 umol/L。白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）98.5秒（ 对照40秒），凝血酶原时间（PT）15秒（对照13秒），凝血酶时间（ TT）13秒（对照12秒），凝血时间（CT）10分25秒。纤维蛋白原（ FIB）3 g/ L（对照2－4 g/L）。凝血活酶生成不能被正常吸附血浆或血
血液离体， 血细胞下沉。 上层析出的 黄色清亮液 体是血清？ 还是血浆？
血浆：离开血管的全血经抗凝处理后，通过 离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体， 即血浆。
血清：离体的血液凝固之后，经血凝块聚缩 释出的液体，即血清。
血清与血浆的区别：
主要在于血清不含纤维蛋白原。
纤维蛋白原能转换成纤维蛋白，具有凝血作 用。
2. APTT缩短 见于DIC，血栓前状态及血栓 性疾病。
3. 肝素治疗的监护 APTT对血浆肝素的浓度 很为敏感，故是目前广泛应用的实验室监护 指标。此时，要注意APTT测定结果必须与肝 素治疗范围的血浆浓度呈线性关系，否则不 宜使用。一般在肝素治疗期间，APTT维持在 正常对照的1.5～3.0倍为宜。
2．采血后宜在1小时内完成，置冰箱保存 不能超过4h。
3．试验温度要恒定于37℃±1℃，否则影 响结果。
【临床意义】
凝血酶原时间延长（超过正常对照3s以上） 见于：
1．先天性凝血因子异常，如Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ 因子之一或两种以上异常时。但单一凝血因子异常 时，其活性要减少到一定水平，PT才延长。如因子 I要<1000mg/L，Ⅶ<5%，Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ要<10%。
12种)。
因子
凝血因子的特点 ① 除Ca2+和磷脂外，其余凝血因子均为蛋白质
② 除F III（组织因子）外，其他凝血因子均存 在于新鲜血浆中，F Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ在肝脏合成， 需维生素K参与。
③ 凝血因子以无活性酶原形式存在血液中，经 其他酶水解后暴露或形成活性中心，才有活性， 这一过程称凝血因子的激活。激活后，在该因 子右下角标上“a”
2．4%白陶土-脑磷脂悬液（同ACT）。 3．0.025mol/L氯化钙溶液。
【操作方法】
1．受检血浆、白陶土-脑磷脂悬液各0.1ml， 混匀，37οC水浴3min，其间轻轻振摇数次。
2．加入0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml，立即 启动秒表，不停振摇并观察出现纤维蛋白丝 的时间。重复2次，取平均值，同时作正常对 照。
【临床意义】
基本与凝血时间意义相同，但敏感性高。目前所用 的大多数APTT测定方法，凡当血浆凝血因子低于 正常水平的15%～30%即可异常。
1．APTT延长 （超过正常对照10s以上）主要用于 发现轻型的血友病。虽可检出因子Ⅷ：C水平低于 25%甲型血友病，但对亚临床血友病（因子Ⅷ大于 25%）和血友病携带者敏感性欠佳。结果延长也见 于因子Ⅸ（血友病乙）、Ⅺ和Ⅻ缺乏症；血中抗凝 物如凝血因子抑制物或肝素水平增高时；当凝血酶 原、纤维蛋白原及因子Ⅴ、Ⅹ缺乏时也可延长，但 敏感性略差；其他尚有肝病、DIC、大量输入库存 血等。
血液凝固
定义：血液由流动的液体状态变成不能流动的 凝胶状态的过程。
方式：激活凝血系统，使血浆中 纤维蛋白原 纤维蛋白，
形成纤维蛋白网加固血小板血栓（有效止血） 。
（一） 凝血因子(blood clotting factor) 定义：血浆与组织中直接参与血液凝
固的物质。 种类：13种（其中F VI是F Va，实为
2．取小试管1支，加入血浆和兔脑粉浸出液 各0.1ml，37℃预温，再加入0.1mlCaCl2溶液 37℃预温，立即开动秒表，不断倾斜试管， 至液体流动停止所需时间，即为凝血酶原时 间。重复操作2～3次，取平均值，并作正常 对照。
【参考区间】 12～14s（一期法）
【质量控制】
1．抽血要顺利，抗凝要充分，否则PT延 长。
清纠正。交叉复钙也不能纠正患者血浆的凝固缺陷，正常血浆与稀释至 1/512的患者血浆温浴时，凝固时间仍长达9分20秒（正常对照3分18秒 ）。因子Ⅷ活性为2.9％（对照133％±35％）。抗Sm抗体（＋）、抗 核抗体（ANA）（＋）、抗双链DNA抗体（＋）。血沉（ESR） 38mm/h。IgG16.84g/L、IgA2.69g/L、IgM1.12g/L、补体C3 0.44 g/L、 、补体C4 0.32 g/L。患者抗磷脂抗体与类风湿胶乳试剂均为阴性，血液 中未找到LE细胞。皮肤活检的病理诊断为亚急性皮炎，不排除红斑狼疮 。心电图、胸片及腹部B超均无明显异常。
2．后天性凝血因子异常，如严重肝病、维生素K缺 乏（慢性胃肠疾患、阻塞性黄疸）、纤溶亢进、 DIC后期、血液中抗凝物质增多及使用抗凝药物， 如双香豆素类等。
凝血酶原时间缩短 见于DIC早期及血栓性疾 病，如心肌梗塞、脑血栓形成、急性血栓性 静脉炎等
模块3 血友病
病例
李某，女，23岁，干部。因反复血肿9年，右下肢肿胀疼痛6日 入院。
④ 在凝血中起酶促作用的因子有F Ⅱ、 Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、 Ⅺ、Ⅻ、XIII、前激肽 释放酶。
⑤ 在凝血中被消耗的因子是Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ 、XIII；最不稳定的是Ⅴ、Ⅷ。
（二） 凝血的过程
a.凝血酶原激活物生成阶段； b.凝血酶原的激活； c.纤维蛋白的生成
Ⅹ 凝血酶原
Ⅹa Va、Ca2+ 凝wk.baidu.com酶
纤维蛋白原
【试剂】
1．兔脑粉浸出液 取150mg干燥兔脑粉，置 于试管中，加生理盐水2.5ml，放入37℃水浴 ，充分搅拌10min，并置其水浴中备用。
2．0.025mol/L CaCl2溶液。
【操作方法】
1．在试管中加入109mmol/L枸橼酸钠或 0.1mol/L草酸钠溶液0.2ml，然后加受检血 1.8ml混匀，低速离心，分离血浆。
4．若正常对照延长，应重新配制试剂。
5．APTT测定因所用的激活剂不同，以及部分凝血活酶来源 及制备的不同，均可影响测定结果。
6．用自动血液凝固仪测定APTT，可提高检测速度和结果精 确性，但仪器本身也会产生一定误差， 1995年国际血栓与 止血委员会（International Committee of Thrombosis and Haemostasis,ICTH）和ICSH已开始合作研究应用APTT监 测肝素治疗时的标准化问题。
家族史：患者父母为姨表兄妹，但无出血现象。患者的妹妹 及家族中其他成员也无出血倾向，否认有家族性或遗传性疾 病。
体格检查：体温36℃，脉搏96次/分，呼吸22次/分，血压 13/8kPa。神清，发育正常，营养中等，轻度贫血貌。四肢 皮肤均见有较大面积的暗红色丘疹，伴脱屑与结痂，未见出 血点或淤斑。浅表淋巴结无肿大，头颅五官无畸形，巩膜无 黄染。颈软，颈静脉无怒张，甲状腺不大，气管居中。胸廓 无畸形，胸骨无压痛，双肺呼吸音清，未闻及干湿性啰音， 心率96次/分，心律齐，心尖部可闻及Ⅱ/6级收缩期杂音。腹 平软，全腹无压痛，未扪及包块，肝脾不大，肠鸣音正常。 右大腿明显肿胀并见有大片淤斑。右大腿下1/4处周径为 44cm（左侧39cm），右腓肠肌周径为33cm（左侧27cm） ，触痛明显。四肢关节无肿胀畸形，生理反射存在，未引起 病理反射，脑膜刺激征阴性。
模块2 外源性凝血系统的检验
外源性凝血途径
定义：指始动凝血的组织因子来自 组织，不是血液。
凝血使动因子为 Ⅲ/组织因子/TF
1、静脉采血（同前） 2、血浆凝血酶原时间（PT）测定
【实验原理】
在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶和适 量的钙离子后，测其凝固时间为PT。是反映 血浆中凝血酶原、因子V、Ⅶ、X及纤维蛋白 原的试验，也是外源性凝血系统常用的筛选 试验之一。
APTT的长短反映了血浆中内源凝血系统凝血 因子（Ⅻ、Ⅺ、Ⅸ、Ⅷ）、共同途径中凝血 酶原、纤维蛋白原和因子Ⅴ、Ⅹ的水平。
本试验是目前最常用的检查内源凝血系统敏 感的筛选试验。
【试剂】
1．受检血浆 以0.109mol/L枸橼酸钠溶液1:9 抗凝，3000r/min，离心5～10min，获贫血小 板血浆。
项目14 凝血因子检查
模块1 内源性凝血系统的检验
基础理论
血液离开血管数分钟后，血液就由流动的溶 胶状态变成不能流动的胶冻状凝块，这一过 程称为血液凝固（blood coagulation）或血 凝。
在凝血过程中，血浆中的纤维蛋白源转变为 不溶的血纤维。
血纤维交织成网，将很多血细胞网罗在内， 形成血凝块。血液凝固后1-2小时，血凝块又 发生回缩，并释出淡黄色的液体，称为血清 。
PT测定通常用于以下三种情况：
（1）出血性疾病的病情观察和出血及手术时 应补何种凝血因子的检查；
（2）用于检查肝合成维生素K依赖因子（因 子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ）是否减少，是维生素K缺乏、 肝脏病的一项检查指标；
（3）用于缺血性心脏病（如心肌梗塞）和人 工瓣膜使用者，在应用双香豆素等口服抗凝 剂进行抗凝治疗时的监控项目。
【参考值】
男性：37±3.3(31.5～43.5)s。 女性：37.5±2.8(32～43)s。 受检者的测定值较正常对照延长超过10s以上
才有病理意义。
【质量控制】
1．抗凝剂与血液的比例要准确。
2．标本放置不宜超过3h，温育时间不宜少于3min。
3．分离血浆时，离心速度和时间要够，务必除去血小板， 特别是用于肝素治疗监测时。