实验十人类染色体G显带技术及G带核型分析.docx

实验目的

1、初步掌握染色体G带标本的制备技术。

2、了解人类染色体的G显带的带型特征。

实验用品

1、材料：常规方法制备的中期人类染色体标本（标本片龄不超过30 天为宜）。

2、器材：显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴箱、冰箱、染色缸、小镊子、玻片架、

香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。

3、试剂：％胰蛋白酶溶液、％EDTA溶液、胰蛋白酶一EDTA混合液、％生理盐水、蒸

馏水、 Giemsa 原液、 Giemsa 稀释液、 1／ 15mol ／ L 磷酸缓冲液。

实验原理

人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出

现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。本世纪 70 年

代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（ Q带、G带、C 带、R 带、T

带），

G带是目前被广泛应用的一种带型。因为它主要是被Giemsa 染料染色后而显带，故称之为

G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。

研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、 Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用 Giemsa 染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的 G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以 G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。关于G显带的机理目前有多种说法，例如，Lee 等（ 1973）认为染色体上与 DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和 DNA结合牢固的区段可被染成深

带。有人认为，染色体显带现象是染色体本身存在着带的

结构。比如用相差显微镜观察未染色的染色体时，就能直接观察到带的存在。用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带特点也不一样，说明带

的出现又与染料特异结合有关。一般认为，易着色的阳性带为含有AT 多的染色体节段，相反，含 GC多的染色体段则不易着色。总的来说，G显带的机理还未搞清。

内容与方法

一、人类染色体G显带标本制备

1、胰蛋白酶法

①将常规制备的人染色体玻片标本（未染色的白片）置70℃烤箱中处理 2 小时，然后转入37℃培养箱中备用，一般在第3～7 天进行显带。

②取％的胰蛋白酶原液加生理盐水至50ml ，配成％的工作液并用NaHCO3

调

pH 值至7 左右。

③将配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预热。

④将玻片标本浸入胰蛋白酶中，不断摆动使胰蛋白酶的作用均匀，处理 1～ 2 分钟（精确的时

间自行摸索）。

⑤立即取出玻片，放入生理盐水中漂洗两次。

⑥染色。将标本浸入37℃预温的Giemsa 染液（ 1:10 的 Giemsa 原液和的磷酸缓冲液）

中染色 10 分钟左右。

⑦自来水冲洗（用细水小心冲洗）、晾干。

⑧镜检显带效果。在低倍镜下选择分散良好的长度适中的分裂相转换油镜观察，若染色体未出现带纹，则为显带不足；若染色体边缘发毛为显带过头，此时应根据具体情况增减胰

蛋白酶处理时间重新处理一张标本。

2、 EDTA一胰蛋白酶法

①取 25ml 生理盐水和％的EDTA溶液倒入立式染色缸中混匀。

pH 值至7 左右。置

②取％的胰蛋白酶原液1ml加入到上液中混匀，并用5％ NaHCO3

调

水浴箱预温至37℃。

③将染色体标本片浸入胰蛋白酶一EDTA溶液中处理5～20 秒，同时轻轻摇动玻片。

④取出标本立即浸入生理盐水中洗两次。

⑤浸入 37℃的 Giemsa 染液中染色5～ 10 分钟。

⑥细水冲洗后晾干、镜检。

二、正常人各染色体的G带特征

A 组： 1～ 3 号染色体。

1 号染色体。

短臂：近侧段有 2条深带，第 2 深带稍宽，在处理较好的标本上，远侧段可显出3～ 4条淡染的深带。此臂分为 3 个区，近侧的第 1 深带为 lp 21 ；第 2 深带为 1p31。

长臂：副缢痕紧贴着丝粒，染色浓。其远侧为一宽的浅带，近中段与远侧段各有两条深

带，此中段第 2 深带染色较浓，中段两条深带稍靠近，此臂

分为 4 个区，副缢痕远侧的浅带为lp21 号带、中段第 2 深带为 lp31 号带，远侧段第 1 深带为lp41号带。

2 号染色体。

短臂：可见 4 条深带，中段的 2 条深带稍靠近，此臂分为 2 个区，中段两条深带之间的

浅带为2p21。

长臂：可见7 条深带，第 3 和第 4 深带有时融合。此臂分为 3 个区，第 2 和第 3 深带之间的浅带为2p21带，第 4 和第5 深带之间的浅带为2p31 号带。

3 号染色体。在长臂与短臂的近中段各具有 1 条明显的宽的浅带。

短臂：一般在近侧段可见 1 条较宽的深带，远侧段可见 2 条深带，其中远侧 1 条较窄，且着色淡，这是区别 3 号染色体短臂的显着特征。在处理较好的标本上，近侧段的深带可分

为 2 条深带，此臂分 2 个区，中段浅带为 2 区 1 带。

长臂：一般在近侧段和远侧段各有 1 条较宽的深带，在处理好的标本上，近侧段的深带可分为 2 条深带，远侧段的深带可分为 3 条深带，此臂分为 2 个区，中段浅带为 2 区 1 带。该染色体的G带图有点象蝴蝶结。

B 组： 4~5 号染色体。

4 号染色体

短臂：可见 2 条深带，近侧深带染色较浅，短臂只有 1 个区。

长臂：可见均匀分布的 4 条深带，在处理较好的标本上，远侧段的 2 条深带可各自分为

2 条较宽的深带。此臂分为

3 区，近侧段第 1 和第 2 深带之间的浅带为 2 区 1 带，远侧段两