谷氨酰胺酶(glutaminase, GLS)活性测定试剂盒使用说明

谷氨酰胺酶(glutaminase,GLS)活性测定试剂盒使用说明

产品简介：

GLS存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。

试验中所需的仪器和试剂：

台式离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。

产品内容：

试剂一×1瓶，60mL，4℃保存；

试剂二×1瓶，50mL，4℃保存；

试剂三×1瓶，60mL，常温保存；

试剂四×1瓶，12mL，常温保存；

试剂五×1瓶，6mL，常温保存；

试剂六×1瓶，6mL，常温避光保存。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

称取约0.1g组织，加入0.9ml试剂一研钵中研磨均匀，于48000rpm℃离心10min，取上清，作为待测液（粗酶液）。

二、测定步骤：

1、空白管：

（1）蒸馏水0.05mL，加试剂一0.2mL，加试剂二0.8mL，混匀后37℃水浴1h；

（2）加入试剂三1.05mL，混匀后8000rpm离心10min；取上清液1.0mL到新离心管中，加入试剂四0.23mL，混匀；

（3）取0.8mL到新离心管中，依次加入试剂五0.1mL和试剂六0.1mL，混匀后等待10min，即可用于调零。

2、样品管：仅需要把蒸馏水0.05mL换成粗酶液0.05mL即可，其余同空白管。

3、实际测定只要做一个空白管，用于调零，于420nm处比色，记录吸光值，记为A。

GLS活性计算：

1、酶活性单位定义：37℃下每mg蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成1μmol氨。

2、计算公式：

GAA（U/mg prot）＝363.1×(A－0.1301)÷蛋白质浓度（mg/mL）。