细胞活体染色技术
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
盖上盖玻片进行镜检
18
⑵ 用动物细胞观察线粒体的活体染色
娶取鼠肝肝组织一小块，放入盛有 Ringer氏液表 面皿中洗去血液
↓ 于载玻片上的1/5000 Janus green B 染色30min
↓ 撕开组织块，这样溶液中会有一些细胞或细胞群
↓ 吸取溶液，放在载玻片的Ringer氏液中
↓ 垫上两根短头发，盖上盖玻片进行镜检
5
活体染色
6
较为常见的活体染色剂 ?詹纳斯绿B(Janus green
B) ?中性红 ?台盼蓝(trypan blue)
7Βιβλιοθήκη Baidu
詹纳斯绿B(Janus green B)
? 专一用于线粒体的染色。它可以和线 粒体中的细胞色素C氧化酶结合，保持 氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在 周围的细胞质中染料被还原,成为无色 状态。
思考 为什么要用油镜观察，植物细胞却不用？ 为什么要垫上两根短头发？ 19
3.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察
清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上 ↓
滴2滴1/5000 Janus green B 染液 ↓
用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞 ↓
刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中 ↓
染色10~l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液 ) ↓
取黄豆芽的根尖处的纵切面 ↓
于载玻片上的中性红染液中染色 5─10min
↓ 吸去染液，滴一滴Ringer液
↓ 盖上盖玻片进行镜检
17
2.线粒体的活体染色
⑴ 用植物细胞观察线粒体的活体染色
撕取洋葱鳞茎内表皮一小块 ↓
于载玻片上的1/5000 Janus green B 染色30min ↓
吸去染液，滴一滴 Ringer液 ↓
细胞活体染色技术
实验目的
? 学习细胞活体染色的方法。 ? 观察动、植物活细胞内线粒体
，液泡系的形态、数量与分布 。
2
细胞膜结构
3
实验原理
一般的生物材料不能穿透细胞膜， 只有当细胞被固定后，细胞膜被破 坏，染料才能进入细胞内部。但是 ，有一些染料（称“活体染料”） 却能进入活细胞，它们是一些无毒 或毒性很小的染色剂，能使细胞中 某些特定结构着色。活体染料基本 上不影响或很少影响细胞的生命活 动。
4
? 活染法弥补了活观察法不能显示细胞精细结构的不足，也避免了固定染色法 对细胞结构的破环和造成人为假象的弊病。遗憾的是，适宜活体染色的染料 较少，能显示出的结构和种类也不多。
? 活体染色分为体内活染和体外活染两种。前者是将染料注射于生物体内，染 色后再取材观察。后者是取材后，对离体的活细胞进行染色。为保持离体细 胞的正常存活，染色时需供给细胞以正常的温度，渗透压， PH等。
11
12
液泡系的中性红染色点经观察
13
台盼蓝(trypan blue)
? 台盼蓝：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞 内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成 蓝色。
? 通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。 因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是 组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼 蓝拒染现象。
? 试验中速度要快，以免组织细胞 死亡
22
思考题
? 所观察到的液泡大小是否有差别， 染色深度是否一样，并绘图加以说 明。
? 所观察到线粒体分布在细胞何处． 呈什么颜色，其形状如何，绘图加 以说明。
? 比较线粒体在动、植物中的分布、 颜色，其形状如何?
23
thanks
24
14
15
实验用品
? 材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。 ? 器械：显微镜、镊子、刀片、'剪刀、解剖针、
、吸管、收水纸等。 ? 试剂：
Ringer 氏液 1 ／3000中性红溶液 1 ／5000詹纳斯绿B 台盼蓝染色液 香柏油、二甲苯、蒸馏水等
表面皿、载玻片、盖玻片
16
实验方法
1. 液泡系的中性红活体染色
? 必须指出的是，只有具有活性的细胞 色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化 ，从而使它显出颜色
8
人口腔上皮细胞的线粒体分 布
?在实验过程中 务必保持所取的 材料的活性。通 常，需要把生物 材料置于０℃～ ４℃的冰水浴低 温中，并且操作 要迅速。
9
10
中性红
? 中性红是液泡系的特殊活体染色 剂，它可将不同发育时期的液泡 染成不同深度的 红色，在细胞处 于生活状态下细胞质和核不被染 色，该染料对液泡系具有一定 专 一性。
盖上盖玻片,显微镜下观察
20
4. 台盼蓝染色鉴定细胞死活
取小鼠腹腔水细胞于洁净载玻片上 ↓
滴加1% 台盼蓝1滴 ↓
盖上盖玻片于显微镜下进行镜检
21
注意事项
? 对口腔上皮细胞进行染色时不可 使染剂干燥，可适当补加染液。
? 在对植物进行观察时一定要让材 料尽量展开。
? 詹纳斯绿B(Janus green B) 溶液 现用现配，以保持它的充分氧化 能力。
18
⑵ 用动物细胞观察线粒体的活体染色
娶取鼠肝肝组织一小块，放入盛有 Ringer氏液表 面皿中洗去血液
↓ 于载玻片上的1/5000 Janus green B 染色30min
↓ 撕开组织块，这样溶液中会有一些细胞或细胞群
↓ 吸取溶液，放在载玻片的Ringer氏液中
↓ 垫上两根短头发，盖上盖玻片进行镜检
5
活体染色
6
较为常见的活体染色剂 ?詹纳斯绿B(Janus green
B) ?中性红 ?台盼蓝(trypan blue)
7Βιβλιοθήκη Baidu
詹纳斯绿B(Janus green B)
? 专一用于线粒体的染色。它可以和线 粒体中的细胞色素C氧化酶结合，保持 氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在 周围的细胞质中染料被还原,成为无色 状态。
思考 为什么要用油镜观察，植物细胞却不用？ 为什么要垫上两根短头发？ 19
3.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察
清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上 ↓
滴2滴1/5000 Janus green B 染液 ↓
用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞 ↓
刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中 ↓
染色10~l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液 ) ↓
取黄豆芽的根尖处的纵切面 ↓
于载玻片上的中性红染液中染色 5─10min
↓ 吸去染液，滴一滴Ringer液
↓ 盖上盖玻片进行镜检
17
2.线粒体的活体染色
⑴ 用植物细胞观察线粒体的活体染色
撕取洋葱鳞茎内表皮一小块 ↓
于载玻片上的1/5000 Janus green B 染色30min ↓
吸去染液，滴一滴 Ringer液 ↓
细胞活体染色技术
实验目的
? 学习细胞活体染色的方法。 ? 观察动、植物活细胞内线粒体
，液泡系的形态、数量与分布 。
2
细胞膜结构
3
实验原理
一般的生物材料不能穿透细胞膜， 只有当细胞被固定后，细胞膜被破 坏，染料才能进入细胞内部。但是 ，有一些染料（称“活体染料”） 却能进入活细胞，它们是一些无毒 或毒性很小的染色剂，能使细胞中 某些特定结构着色。活体染料基本 上不影响或很少影响细胞的生命活 动。
4
? 活染法弥补了活观察法不能显示细胞精细结构的不足，也避免了固定染色法 对细胞结构的破环和造成人为假象的弊病。遗憾的是，适宜活体染色的染料 较少，能显示出的结构和种类也不多。
? 活体染色分为体内活染和体外活染两种。前者是将染料注射于生物体内，染 色后再取材观察。后者是取材后，对离体的活细胞进行染色。为保持离体细 胞的正常存活，染色时需供给细胞以正常的温度，渗透压， PH等。
11
12
液泡系的中性红染色点经观察
13
台盼蓝(trypan blue)
? 台盼蓝：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞 内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成 蓝色。
? 通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。 因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是 组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼 蓝拒染现象。
? 试验中速度要快，以免组织细胞 死亡
22
思考题
? 所观察到的液泡大小是否有差别， 染色深度是否一样，并绘图加以说 明。
? 所观察到线粒体分布在细胞何处． 呈什么颜色，其形状如何，绘图加 以说明。
? 比较线粒体在动、植物中的分布、 颜色，其形状如何?
23
thanks
24
14
15
实验用品
? 材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。 ? 器械：显微镜、镊子、刀片、'剪刀、解剖针、
、吸管、收水纸等。 ? 试剂：
Ringer 氏液 1 ／3000中性红溶液 1 ／5000詹纳斯绿B 台盼蓝染色液 香柏油、二甲苯、蒸馏水等
表面皿、载玻片、盖玻片
16
实验方法
1. 液泡系的中性红活体染色
? 必须指出的是，只有具有活性的细胞 色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化 ，从而使它显出颜色
8
人口腔上皮细胞的线粒体分 布
?在实验过程中 务必保持所取的 材料的活性。通 常，需要把生物 材料置于０℃～ ４℃的冰水浴低 温中，并且操作 要迅速。
9
10
中性红
? 中性红是液泡系的特殊活体染色 剂，它可将不同发育时期的液泡 染成不同深度的 红色，在细胞处 于生活状态下细胞质和核不被染 色，该染料对液泡系具有一定 专 一性。
盖上盖玻片,显微镜下观察
20
4. 台盼蓝染色鉴定细胞死活
取小鼠腹腔水细胞于洁净载玻片上 ↓
滴加1% 台盼蓝1滴 ↓
盖上盖玻片于显微镜下进行镜检
21
注意事项
? 对口腔上皮细胞进行染色时不可 使染剂干燥，可适当补加染液。
? 在对植物进行观察时一定要让材 料尽量展开。
? 詹纳斯绿B(Janus green B) 溶液 现用现配，以保持它的充分氧化 能力。