拉曼光谱测量中的荧光抑制方法综述
拉曼光谱法
拉曼光谱法0421拉曼光谱法1拉曼光谱法是研究化合物分子受光照射后所产生的散射，散射光与入射光能级差及化合物振动频率、转动频率间关系的分析方法。
与红外光谱类似，拉曼光谱是一种振动光谱技术。
所不同的是，前者与分子振动时偶极矩变化相关，而拉曼效应则是分子极化率改变的结果，被测量的是非弹性的散射辐射。
拉曼光谱采用激光作为单色光源，将样品分子激发到某一虚态，随后受激分子弛豫跃迁到一个与基态不同的振动能级，此时，散射辐射的频率将与入射频率不同。
这种“非弹性散射”光被称之为拉曼散射，频率之差即为拉曼位移（以cm-1 为单位），实际上等于激发光的波数减去散射辐射的波数，与基态和终态的振动能级差相当。
频率不变的散射称为弹性散射，即所谓瑞利散射。
如果产生的拉曼散射频率低于入射频率，则称之为斯托克散射。
反之，则称之为反斯托克散射。
实际上，几乎所有的拉曼分析都是测量斯托克散射。
用散射强度对拉曼位移作图得到拉曼光谱图。
由于功能团或化学键的拉曼位移与它们在红外光谱中的吸收波数相一致，所以谱图的解析也与红外吸收光谱相同。
然而，通常在拉曼光谱中出现的强谱带在红外光谱中却成为弱谱带甚至不出现，反之亦然。
所以，这两种光谱技术常互为补充。
拉曼光谱的优点在于它的快速，准确，测量时通常不破坏样品（固体，半固体，液体或气体），样品制备简单甚至不需样品制备。
谱带信号通常处在可见或近红外光范围，可以有效地和光纤联用；这也意味着谱带信号可以从包封在任何对激光透明的介质（如玻璃，塑料内）或将样品溶于水中获得。
现代拉曼光谱仪使用简单，分析速度快（几秒到几分钟），性能可靠。
因此，拉曼光谱与其他分析技术联用比其他光谱联用技术从某种意义上说更加简便（可以使用单变量和多变量方法以及校准）。
除常规的拉曼光谱外，还有一些较为特殊的拉曼技术。
它们是共振拉曼光谱，表面增强拉曼光谱，拉曼旋光，相关-反斯托克拉曼光谱，拉曼增益或减失光谱以及超拉曼光谱等。
其中，在药物分析应用相对较多的是共振拉曼和表面增强拉曼光谱法。
拉曼光谱的荧光波段-概述说明以及解释
拉曼光谱的荧光波段-概述说明以及解释1.引言1.1 概述拉曼光谱是一种非破坏性的分析技术，通过激发样品中的分子振动模式来获取样品的结构信息。
在拉曼光谱分析中，荧光信号的干扰一直是一个重要的问题。
荧光信号是由样品受到光激发后发出的强烈信号，通常会盖过拉曼信号，影响到拉曼光谱的准确性和灵敏度。
本文将重点关注拉曼光谱中的荧光波段，探讨荧光信号在拉曼光谱中的重要性，分析荧光信号的特征及其在拉曼光谱分析中的应用。
通过深入研究荧光波段对拉曼光谱的影响，旨在提高拉曼光谱分析的准确性和可靠性，推动该领域的发展和应用。
json"1.2 文章结构": {"本文将首先介绍拉曼光谱的基本原理，包括激发光源、散射过程和光谱特征等内容。
接着，重点探讨荧光波段在拉曼光谱中的重要性，分析荧光的来源、影响因素以及在拉曼光谱中的作用。
最后，将详细描述荧光波段的特征，包括光谱峰位、强度和形状等，同时探讨其在实际应用中的价值和局限性。
通过对以上内容的阐述，本文旨在深入探讨拉曼光谱中荧光波段的特性及其在科研领域和实际应用中的重要性。
"}1.3 目的：本文旨在探讨拉曼光谱中荧光波段的重要性及特征，并分析其在科研和实际应用中的意义。
通过深入研究荧光波段在拉曼光谱中的作用，我们希望能够更好地理解这一技术的原理和应用，并为相关领域的研究和发展提供新的思路和启示。
同时，通过对荧光波段的特征及其应用进行全面的总结和分析，我们也希望能够为相关研究人员提供一些实用的参考和指导，促进该领域的进一步发展和应用。
最终的目的是促进科学研究的进步，为解决现实问题提供更加有效的解决方案。
2.正文2.1 拉曼光谱的基本原理2.2 荧光波段在拉曼光谱中的重要性拉曼光谱是一种非常强大的分析技术，可以通过检测样品散射光谱中与分子振动模式相关的频移来提供有关样品的结构和化学成分信息。
在光谱分析中，荧光波段通常被认为是一种干扰信号，因为它会遮盖或淹没拉曼信号。
拉曼光谱原理及应用简介
拉曼光谱由于近几年来以下几项技术的集中发展而有了更广泛的应用;这些技术是：CCD系统在近红外区域的高灵敏性,体积小而功率大的二极管激光器,与激发激光及信号过滤整合的光纤探头;这些产品连同高口径短焦距的分光光度计,提供了低荧光本底而高质量的拉曼光谱以及体积小、容易使用的拉曼光谱仪;一含义光照射到物质上发生弹性散射和非弹性散射. 弹性散射的散射光是与激发光波长相同的成分.非弹性散射的散射光有比激发光波长长的和短的成分, 统称为拉曼效应当用波长比试样粒径小得多的单色光照射气体、液体或透明试样时,大部分的光会按原来的方向透射,而一小部分则按不同的角度散射开来,产生散射光;在垂直方向观察时,除了与原入射光有相同频率的瑞利散射外,还有一系列对称分布着若干条很弱的与入射光频率发生位移的拉曼谱线,这种现象称为拉曼效应;由于拉曼谱线的数目,位移的大小,谱线的长度直接与试样分子振动或转动能级有关;因此,与红外吸收光谱类似,对拉曼光谱的研究,也可以得到有关分子振动或转动的信息;目前拉曼光谱技术已广泛应用于物质的鉴定,分子结构的研究谱线特征二拉曼散射光谱具有以下明显的特征：a.拉曼散射谱线的波数虽然随入射光的波数而不同,但对同一样品,同一拉曼谱线的位移与入射光的波长无关,只和样品的振动转动能级有关；b. 在以波数为变量的拉曼光谱图上,斯托克斯线和反斯托克斯线对称地分布在瑞利散射线两侧, 这是由于在上述两种情况下分别相应于得到或失去了一个振动量子的能量;c. 一般情况下,斯托克斯线比反斯托克斯线的强度大;这是由于Boltzmann分布,处于振动基态上的粒子数远大于处于振动激发态上的粒子数;三拉曼光谱技术的优越性提供快速、简单、可重复、且更重要的是无损伤的定性定量分析,它无需样品准备,样品可直接通过光纤探头或者通过玻璃、石英、和光纤测量;此外1 由于水的拉曼散射很微弱,拉曼光谱是研究水溶液中的生物样品和化学化合物的理想工具;2 拉曼一次可以同时覆盖50-4000波数的区间,可对有机物及无机物进行分析;相反,若让红外光谱覆盖相同的区间则必须改变光栅、光束分离器、滤波器和检测器3 拉曼光谱谱峰清晰尖锐,更适合定量研究、数据库搜索、以及运用差异分析进行定性研究;在化学结构分析中,独立的拉曼区间的强度可以和功能集团的数量相关;4 因为激光束的直径在它的聚焦部位通常只有毫米,常规拉曼光谱只需要少量的样品就可以得到;这是拉曼光谱相对常规红外光谱一个很大的优势;而且,拉曼显微镜物镜可将激光束进一步聚焦至20微米甚至更小,可分析更小面积的样品;5 共振拉曼效应可以用来有选择性地增强大生物分子特个发色基团的振动,这些发色基团的拉曼光强能被选择性地增强1000到10000倍;四几种重要的拉曼光谱分析技术1、单道检测的拉曼光谱分析技术2、以CCD为代表的多通道探测器用于拉曼光谱的检测仪的分析技术3、采用傅立叶变换技术的FT-Raman光谱分析技术4、共振拉曼光谱分析技术5、表面增强拉曼效应分析技术五拉曼频移,拉曼光谱与分子极化率的关系1、拉曼频移：散射光频与激发光频之差,取决于分子振动能级的改变,所以它是特征的,与入射光的波长无关,适应于分子结构的分析2、拉曼光谱与分子极化率的关系分子在静电场E中,极化感应偶极矩P为静电场E与极化率的乘积诱导偶极矩与外电场的强度之比为分子的极化率分子中两原子距离最大时,极化率也最大拉曼散射强度与极化率成正比例六应用激光光源的拉曼光谱法应用激光具有单色性好、方向性强、亮度高、相干性好等特性,与表面增强拉曼效应相结合,便产生了表面增强拉曼光谱;其灵敏度比常规拉曼光谱可提高104~107倍,加之活性载体表面选择吸附分子对荧光发射的抑制,使分析的信噪比大大提高;已应用于生物、药物及环境分析中痕量物质的检测;共振拉曼光谱是建立在共振拉曼效应基础上的另一种激光拉曼光谱法;共振拉曼效应产生于激发光频率与待测分子的某个电子吸收峰接近或重合时,这一分子的某个或几个特征拉曼谱带强度可达到正常拉曼谱带的104~106倍,有利于低浓度和微量样品的检测;已用于无机、有机、生物大分子、离子乃至活体组成的测定和研究;激光拉曼光谱与傅里叶变换红外光谱相配合,已成为分子结构研究的主要手段1、共振拉曼光谱的特点：1、基频的强度可以达到瑞利线的强度;2、泛频和合频的强度有时大于或等于基频的强度;3、通过改变激发频率,使之仅与样品中某一物质发生共振,从而选择性的研究某一物质;4、和普通拉曼相比,其散射时间短,一般为10-12~10-5S;2、共振拉曼光谱的缺点：需要连续可调的激光器,以满足不同样品在不同区域的吸收;七电化学原位拉曼光谱法电化学原位拉曼光谱法, 是利用物质分子对入射光所产生的频率发生较大变化的散射现象, 将单色入射光包括圆偏振光和线偏振光激发受电极电位调制的电极表面, 通过测定散射回来的拉曼光谱信号频率、强度和偏振性能的变化与电极电位或电流强度等的变化关系;一般物质分子的拉曼光谱很微弱, 为了获得增强的信号, 可采用电极表面粗化的办法, 可以得到强度高104-107倍的表面增强拉曼散射Surface Enahanced Raman Scattering, SERS 光谱, 当具有共振拉曼效应的分子吸附在粗化的电极表面时, 得到的是表面增强共振拉曼散射SERRS光谱, 其强度又能增强102-103;电化学原位拉曼光谱法的测量装置主要包括拉曼光谱仪和原位电化学拉曼池两个部分;拉曼光谱仪由激光源、收集系统、分光系统和检测系统构成, 光源一般采用能量集中、功率密度高的激光, 收集系统由透镜组构成, 分光系统采用光栅或陷波滤光片结合光栅以滤除瑞利散射和杂散光以及分光检测系统采用光电倍增管检测器、半导体阵检测器或多通道的电荷藕合器件;原位电化学拉曼池一般具有工作电极、辅助电极和参比电极以及通气装置;为了避免腐蚀性溶液和气体侵蚀仪器, 拉曼池必须配备光学窗口的密封体系;在实验条件允许的情况下, 为了尽量避免溶液信号的干扰, 应采用薄层溶液电极与窗口间距为～1mm , 这对于显微拉曼系统很重要, 光学窗片或溶液层太厚会导致显微系统的光路改变, 使表面拉曼信号的收集效率降低;电极表面粗化的最常用方法是电化学氧化- 还原循环Oxidation-Reduction Cycle,ORC法, 一般可进行原位或非原位ORC处理;目前采用电化学原位拉曼光谱法测定的研究进展主要有: 一是通过表面增强处理把测检体系拓宽到过渡金属和半导体电极;虽然电化学原位拉曼光谱是现场检测较灵敏的方法, 但仅能有银、铜、金三种电极在可见光区能给出较强的SERS;许多学者试图在具有重要应用背景的过渡金属电极和半导体电极上实现表面增强拉曼散射;二是通过分析研究电极表面吸附物种的结构、取向及对象的SERS 光谱与电化学参数的关系,对电化学吸附现象作分子水平上的描述;三是通过改变调制电位的频率, 可以得到在两个电位下变化的“时间分辨谱”, 以分析体系的SERS 谱峰与电位的关系, 解决了由于电极表面的SERS 活性位随电位而变化而带来的问题;八拉曼信号的选择入射激光的功率,样品池厚度和光学系统的参数也对拉曼信号强度有很大的影响,故多选用能产生较强拉曼信号并且其拉曼峰不与待测拉曼峰重叠的基质或外加物质的分子作内标加以校正;其内标的选择原则和定量分析方法与其他光谱分析方法基本相同;斯托克斯线能量减少,波长变长反斯托克斯线能量增加,波长变短九拉曼光谱的应用方向拉曼光谱分析技术是以拉曼效应为基础建立起来的分子结构表征技术,其信号来源与分子的振动和转动;拉曼光谱的分析方向有：定性分析：不同的物质具有不同的特征光谱,因此可以通过光谱进行定性分析;结构分析：对光谱谱带的分析,又是进行物质结构分析的基础;定量分析：根据物质对光谱的吸光度的特点,可以对物质的量有很好的分析能力;十拉曼光谱用于分析的优点和缺点1、拉曼光谱用于分析的优点拉曼光谱的分析方法不需要对样品进行前处理,也没有样品的制备过程,避免了一些误差的产生,并且在分析过程中操作简便,测定时间短,灵敏度高等优点2、拉曼光谱用于分析的不足1拉曼散射面积2不同振动峰重叠和拉曼散射强度容易受光学系统参数等因素的影响3荧光现象对傅立叶变换拉曼光谱分析的干扰4在进行傅立叶变换光谱分析时,常出现曲线的非线性的问题5任何一物质的引入都会对被测体体系带来某种程度的污染,这等于引入了一些误差的可能性,会对分析的结果产生一定的影响十一新进展及发展前景十多年来,虽然已经有一些关于在高真空体系、大气下、以及固/液体系电化学体系中研究单晶金属体系表面拉曼光谱的报道89～91,但直至近年光滑单晶电极体系的SERS研究才取得了重要进展.Bryant等记录了以单分子层吸附在光滑Pt 电极表面的噻吩拉曼谱89,Furtak等使用具有Kretchmann光学构型的ATR电解池并利用表面等离子体增强效应,获得了吸附物种在平滑的Ag111单晶面上的弱SERS信号90.由于拉曼光谱系统的检测灵敏度的限制,所获得的表面信号极弱,无法进行较为详细的研究.Otto小组和Futamata小组分别成功地采用Otto光学构造的ATR电解池,利用表面等离子激元增强方法获得了光滑单晶电极上相对较强的表面Raman信号92～94.前者发现不同的Cu单晶电极表面的增强因子有所不同,有较高指数或台阶的晶面的信号明显增强92.Futamata等甚至可在Pt和Ni 金属的单晶表面上观察到SERS信号, 计算表明其表面增强因子为1～2个数量级93.目前可用于单晶表面电极体系的SERS研究还局限于Raman散射截面很大的极少数分子,尚需进一步改进和寻找实验方法,以拓宽可研究的分子体系.若能成功地将各种单晶表面电极的SERS信号与经过不同粗糙方式处理的电极表面信号进行系统地比较和研究, 不但对定量研究SERS机理和区分不同增强机制的贡献大有益处, 而且将有利于提出正确和可靠的拉曼光谱的表面选择定律.随着科学技术的迅速发展, 各类制备不同纳米颗粒以及二维有序纳米图案的技术和方法将日益成熟, 人们可以比较方便地在理论的指导下,寻找在过渡金属上产生强SERS效应的最佳实验条件.这些突破无疑将为拉曼光谱技术广泛应用于各种过渡金属电极和单晶电极体系的研究开创新局面.总之,通过摸索合适的表面处理方法并采用新一代高灵敏度的拉曼谱仪, 可将拉曼光谱研究拓展至一系列重要的过渡金属和半导体体系, 进而将该技术发展成为一个适用性广、研究能力强的表面界面谱学工具,同时推动有关表面界面谱学理论的发展.各种相关的检测和研究方法也很可能得到较迅速的发展和提高.在提高检测灵敏度的基础上,人们已不满足于仅仅检测电极表面物种, 而是注重通过提高其检测分辨率包括谱带分辨、时间分辨和空间分辨来研究电化学界面结构和表面分子的细节和动态过程.今后的主要研究内容可能从稳态的界面结构和表面吸附逐渐扩展至其反应的动态过程,并深入至分子内部的各基团, 揭示分子水平上的化学反应吸附动力学规律, 研究表面物种间以及同电解质离子或溶剂分子间的弱相互作用等.例如将电化学暂态技术时间-电流法、超高速循环伏安法同时间分辨光谱技术结合, 开展时间分辨为ms或μs级的研究95.采用SERS同电化学暂态技术结合进行的时间分辨实验可检测鉴别电化学反应的产物及中间物96, 新一代的增强型电荷耦合列阵检测器ICCD和新一代的拉曼谱仪如:富立叶变换拉曼仪和哈德玛变换仪的推出, 都将为时间分辨拉曼光谱在电化学的研究提供新手段.最近, 我们利用电化学本身的优势, 提出的电位平均表面增强拉曼散射hePotential Averaged SERS, PASERS新方法17, 通过在Ag和Pt微电极上采集在不同调制电位频率下的PASERS谱, 并进行解谱, 可在不具备从事时间分辨研究条件的仪器上进行时间分辨为μs级的电化学时间分辨拉曼光谱研究.拉曼光谱研究的另一发展方向是采用激光拉曼光谱微区显微技术97开展空间分辨研究并进而开展电极表面微区结构与行为的研究.Fujishima等人利用共焦显微拉曼系统和SERS技术发展了表面增强拉曼成像技术,并研究了SERS活性银表面吸附物以及自组装膜的SERI图象98,99.该技术和具有三维空间分辨的共焦显光谱方法在研究导电高聚物、L-B膜和自组装膜电极以及电极钝化膜和微区腐蚀等方面将发挥其重要作用98～100.突破光学衍射极限的、空间分辨值达数十纳米的近场光学Raman 显微技术则很可能异军突起101.为多方位获得详细信息,达到取长补短的目的,开展Raman光谱与其他先进技术联用的研究势在必行.光导纤维技术可在联用耦合方面发挥关键作用102,103,如将表面Raman光谱技术与扫描探针显微技术进行实时联用104.针对性的联用技术可望较全面地研究复杂体系并准确地解释疑难的实验现象,为各种理论模型和表面选则定律提供实验数据, 促进谱学电化学的有关理论和表面量子化学理论的发展.可以预见, 在不久的将来,随着表面检测技术的快速发展,SERS及其应用于电化学的研究将进入一个新的阶段.。
一种拉曼光谱测试中使用的荧光消除剂及其使用方法
一种拉曼光谱测试中使用的荧光消除剂及其使用方法
拉曼光谱测试是一种分析材料的分子结构的一种有效的技术，它存在着荧光等
外部因素的影响，因此，开发荧光消除剂是激发光学分析中重要的技术能力。
荧光消除剂是一种具有吸收荧光和旋转抑制作用的化学物质，它可以消除多种
类型的荧光，处理体系中的荧光可以活性分子和受到影响的分子溶液。
荧光消除剂常用于不同的激发光源，比如可见光到紫外及超级宽带光。
尤其是紫外线激发光谱，消除剂的选择受到激发波长的限制，它是80nm以下的典型的荧光抑制剂，在400nm以下拥有良好的效果。
拉曼光谱测试中，使用荧光消除剂的具体操作是:先在激发源下调节荧光强度，然后添加荧光消除剂，控制荧光清楚，当能量降低到噪音附近时，以达到锁定拉曼特征的目的。
同时，为了防止荧光消除剂过多，从而影响拉曼光谱的准确性，必须对消除剂
进行精确的精密控制、曲线拟合和准确控制，实现准确的拉曼光谱评估。
总而言之，荧光消除剂是在拉曼光谱测试中，吸取多余荧光波来抑制干扰，实
现拉曼分析的精准准确性，是一种非常重要的后处理技术。
燃油拉曼光谱荧光干扰成因及处理方法
第33卷第1期2017年1月后勤工程学院学报JOURNAL OF LOGISTICAL ENGINEERING UNIVERSITY Vol.33No.1 Jan.2017文章编号：1672-7843（2017）01-0028-10doi：10.3969/j.issn.1672-7843.2017.01.006燃油拉曼光谱荧光干扰成因及处理方法喻星辰1，管亮1，叶飞2，龚应忠1（1.后勤工程学院军事油料应用与管理工程系，重庆401331；2.原兰州军区联勤部油料监督处，兰州730010）摘要根据燃油的组成结构及其拉曼光谱特征，提出了一种采用石墨化炭黑对油样进行前处理以去除燃油拉曼荧光背景干扰的方法。
通过对过滤吸附处理前后油样的拉曼光谱和GC⁃MS试验结果进行对比分析，验证了该方法的有效性，并得出燃油中产生荧光的物质主要是菲、蒽、芘衍生物等多环（三环及以上）芳烃类和含硫、氮杂原子芳香烃类物质，且均能够被有效过滤吸附，对燃油的拉曼光谱特征影响较小。
关键词燃油；拉曼光谱；荧光背景；石墨化炭黑中图分类号：TK428.9文献标志码：AThe Cause and Treatment Method for Raman Spectroscopy Fluorescence Interference of FuelYu Xing⁃chen1，Guan Liang1，Ye Fei2，Gong Ying⁃zhong1（1.Dept.of Oil Application&Management Engineering，LEU，Chongqing401331，China；2.Oil Supervision of Joint Logistics Department，Lanzhou Military Region，Lanzhou730010，China）Abstract According to the structural features and the Raman spectroscopy characteristics of fuel,a treatment method for fuel toremove Raman fluorescence background by means of the graphitized carbon black(GCB)was put forward in this paring the Raman spectroscopy and GC⁃MS analysis results of both untreated samples and the corresponding filtering adsorption processed fuel samples by GCB,the proposed novel pretreatment method was proved effective.The conclusion is reached that the main substances in the fuel resulting in fluorescence are the derivants of phenanthrene,anthracene,pyrene and other polycyclic aromatic hydrocarbon (tricyclic and above)and sulfur,nitrogen hetero atoms aromatic hydrocarbon compounds,which can be effectively dealt with by GCB as well as little influence on Raman spectroscopy characteristics of fuel.Keywords fuel;Raman spectroscopy;fluorescence background;graphitized carbon black属于分子光谱范畴的拉曼光谱是一种散射光谱，一般将拉曼光谱看做红外光谱的互补分析方法，两者都能获得物质特别是有机物化合物的结构和官能团信息，区别在于物质的红外活性来源于其化学键振动过程中偶极矩的变化，拉曼活性来源于其化学键振动过程中极化率的变化。
拉曼光谱测量中的荧光抑制方法综述
拉曼光谱测量中的荧光抑制方法综述
邹文龙;蔡志坚;吴建宏
【期刊名称】《光学仪器》
【年(卷),期】2010(032)005
【摘要】拉曼光谱是物质的特征结构谱,但是在许多情况下,除了激发出拉曼散射光之外,还会激发出强度远大于拉曼散射的荧光,从而限制了拉曼光谱的应用.因此在拉曼检测中对荧光采取抑制措施是十分必要的.在过去的几十年里发展了多种荧光抑制方法,包括荧光淬灭剂法、光漂白法、红外/紫外激发法、偏振调制法、移频激发法、高频调制法、门控法、数值处理法、非线性效应法等.文中概括性地介绍了上述各种技术方法的原理,并扼要地分析比较了各自的性能特点.
【总页数】6页(P89-94)
【作者】邹文龙;蔡志坚;吴建宏
【作者单位】苏州大学,信息光学工程研究所,江苏,苏州,215006;苏州大学,信息光学工程研究所,江苏,苏州,215006;苏州大学,信息光学工程研究所,江苏,苏州,215006【正文语种】中文
【中图分类】TH744.1
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拉曼光谱简介
Raman spectra
拉曼光谱基本原理
拉曼效应是光与物质分子之间发生能量交 换的结果，光照射到物体上会发生弹性散射 和非弹性散射。 弹性碰撞：光子和分子之间没有能量交换， 仅改变了光子的运动方向，其散射频率等于 入射频率，这种类型的散射在光谱上称为瑞 利散射。 非弹性碰撞：光子和分子之间在碰撞时发生 了能量交换，即改变了光子的运动方向，也 改变了能量。使散射频率和入射频率有所不 同。此类散射在光谱上被称为拉曼散射。
(2)水是极性很强的分子，因而其红外吸收非常强烈。但水的拉曼散射却极微弱，因 而水溶液样品可直接进行测量，这对生物大分子的研究非常有利。此外，玻璃的拉 曼散射也较弱，因而玻璃可作为理想的窗口材料，例如液体或粉末固体样品可放于 玻璃毛细管中测量。
(3)对于聚合物及其他分子，拉曼散射的选择定则的限制较小，因而可得到更为丰富 的谱带。S-S，C-C，C=C，N=N等红外较弱的官能团，在拉曼光谱中信号较为强烈。
拉曼光谱基本原理
characteristic Raman frequencies
拉曼频率的确认
composition of material
物质的组成
e.g. MoS2, MoO3
changes in frequency of Raman peak
拉曼峰位的变化
stress/strain State 张力 / 应力 crystal symmetry and orientation
晶体对称性和取向
e.g. Si 10 cm-1 shift per பைடு நூலகம் strain e.g. orientation of CVD diamond grains e.g. amount of plastic deformation e.g. thickness of transparent coating
拉曼光谱(1)资料讲解
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1.2 拉曼频移（Raman shift）
斯托克斯线或反斯托克斯线与入射光频率之差 称为拉曼位移 拉曼位移取决于分子振动能级的改变，所以它是特 征的。 拉曼位移的大小与入射光的频率无关，只与分子 的能级结构有关，其范围为25～4000cm-1。
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1.3 拉曼光谱与分子极化率的关系
分子在静电场E中，分子产生诱导偶极距μi
Rayleigh scattering Stocks lines
anti-Stockes lines
CCl4的拉曼光谱 9
温度升高，反斯托克斯线增加
Anti-Stocks线
Stocks线
e
e
e
e
温度升高 概率大！
1230振动能级
电 子 基 态
e e
Rayleigh 散射
Raman 散射
温度升高，处于振动激发态的分子数增多
1940~1960年，拉曼光谱的地位一落千丈的主要原因。
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三 拉曼光谱仪仪器简介
(1) 色散型拉曼光谱仪 (2) 傅立叶变换拉曼光谱仪
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(1) 色散型拉曼光谱仪
色散型拉 曼光谱仪
光源
样品装置
单色器
信号处 理系统
拉曼光谱仪主要由五个基本部件组成：
1、用于激发被测样品的激发光源（激光）。 2、收集散射光光学系统。 3、把散射光中不同频率的光分开的分光光度计（单色器）。 4、测量各种不同散射光频率的检测器。 5、用于单色器扫描控制、数据采集/处理和数据分析的操作软件。
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2.1拉曼光谱与红外光谱分析方法比较
项目 光谱类型 光谱范围 分子结构与光 谱活性 样品池 水溶液测试
样品制备 定量分析 谱库
15拉曼光谱实验讲义
拉曼光谱实验1 引言拉曼散射效应是以此现象的发现者——印度物理学家C．V．Raman的名字命名的。
拉曼于1928年首先在液体中观察到这种现象，并记录了散射光谱。
拉曼光谱和红外光谱同属分子振动光谱，但它们的机理却不同：红外光谱是分子对红外光的特征吸收，而拉曼光谱则是分子对光的散射。
由于拉曼散射光的频率位移对应于分子的能级跃迁，因此拉曼光谱技术便成为人们研究分子结构的新的手段之一。
20世纪40年代，由于当时的仪器技术水平所限，也由于红外光谱技术的迅速发展，拉曼光谱一度处于低潮阶段。
60年代初，激光器的出现为拉曼光谱提供了理想的光源，再加上计算机的发展，使激光拉曼光谱逐步成为分子光谱学中一个活跃的分支。
拉曼光谱技术以其信息丰富，制样简单，水的干扰小等独特的优点，广泛应用于生物分子、高聚物、半导体、陶瓷、药物、禁违毒品、爆炸物以及化学化工产品的分析中。
2 方法原理2．1 拉曼散射效应当激发光的光子与作为散射中心的分子相互作用时，大部分光子只是改变方向发生散射，而光的频率仍与激发光的频率相同，这种散射称为瑞利散射；约占总散射光强度的10-6～10-10的散射，不仅改变了光的传播方向，而且散射光的频率也改变了，不同于激发光的频率，称为拉曼散射。
产生拉曼散射的原因是光子与分子之间发生了能量交换，见图1。
受激虚态El激发态E。
基态图1 拉曼散射效应能级图对于斯托克斯(Stokes)拉曼散射来说，分子由处于振动基态E0被激发至激发态E1，分子得到的能量为⊿E，恰好等于光子失去的能量：⊿E=E1一E0(1)与之相对应的光子频率改变⊿ν，为⊿ν＝⊿E／h式中h为普郎克常数。
此时，Stokes散射的频率为ν，νs =ν0-⊿E／h，⊿ν=ν0-νs斯托克斯散射光的频率低于激发光频率ν0。
同理，仅斯托克斯(Anti—Stokes)散射光的频率νas为νas =ν0+⊿E／h，⊿ν=νas-ν0反斯托克斯散射光的频率高于激发光频率。
拉曼光谱 荧光免疫层析
拉曼光谱荧光免疫层析拉曼光谱荧光免疫层析（Raman spectral fluorescent immunoassay）是一种新型的生物分析技术，结合了拉曼光谱和荧光免疫层析技术的优势，能够通过对样品中特定目标分子的荧光信号和拉曼光谱进行同时检测，实现对目标分子的高灵敏度和高特异性检测。
拉曼光谱是一种基于拉曼散射原理的光谱分析技术，可以提供与分子振动的特征有关的信息。
当样品中的分子受到激发光的照射时，其中一部分光子会被散射，并且在散射过程中发生拉曼散射，产生新的频率和能量的光子。
通过测量散射光的强度和频率偏移，就可以得到样品中分子的拉曼光谱信息，从而实现对分子结构和组成的分析。
而荧光免疫层析是一种常用的生物分析技术，利用特定抗体与目标分子的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
这种复合物通常会标记有荧光标记物，当样品中存在目标分子时，荧光标记物会发光，从而实现对目标分子的检测和定量分析。
将拉曼光谱和荧光免疫层析两种技术相结合，可以充分利用两者各自的优势来提高检测灵敏度和特异性。
首先，荧光免疫层析可以提供高度特异性的目标分子检测，通过对抗原-抗体复合物的特异性结合来确认目标分子的存在。
其次，拉曼光谱可以提供高灵敏度的分子结构信息，通过测量样品中特定拉曼散射光的强度和频率偏移来分析目标分子的结构和组成。
通过同时获得目标分子的荧光信号和拉曼光谱信息，可以实现对目标分子的高灵敏度和高特异性的检测和定量分析。
在实际应用中，拉曼光谱荧光免疫层析技术可以广泛应用于生物医学、食品安全、环境监测等领域。
例如，在生物医学领域，可以利用该技术进行快速、灵敏的肿瘤标志物的检测和定量分析，从而帮助早期诊断肿瘤。
在食品安全领域，可以利用该技术对食品中的毒素、农药残留等有害物质进行高灵敏度、高特异性的检测，保障食品的质量和安全性。
在环境监测领域，可以利用该技术对水质中的重金属、有机污染物等进行快速、准确的检测，实现对环境的监测和保护。
拉曼散射抑制技术
拉曼散射抑制技术
拉曼散射抑制技术是一种利用光学方法来抑制拉曼散射的技术。
在激
光光谱分析中，拉曼散射是一种常见的散射现象，会对目标的荧光信
号产生干扰，因此需要采用适当的抑制技术来提高分析的准确性和灵
敏度。
拉曼散射抑制技术主要包括以下几种方法：
1. 自适应光学方法：通过调节光学元件（如透镜、反射镜等）的参数，来控制光束的形状、方向和强度，从而抑制拉曼散射的影响。
这种方
法需要使用精密的光学元件和控制系统，适用于对激光光束质量要求
较高的应用场景。
2. 光学滤波方法：通过在激光光路中加入光学滤波器，如干涉滤光片、衍射滤光片或光纤滤波器等，来滤除拉曼散射光的分量，保留目标荧
光信号。
这种方法简单易行，适用于对成本和便携性有较高要求的场合。
3. 光学相干方法：利用光学相干原理，通过控制光场的相干叠加和干涉，来抑制拉曼散射的影响。
这种方法需要使用高精度的光学元件和
数字信号处理技术，适用于对激光光束形状和方向有较高要求的应用
场景。
总之，拉曼散射抑制技术是激光光谱分析中非常重要的一个领域，通
过采用适当的抑制方法，可以提高分析的准确性和灵敏度，为科学研究、工业检测、医疗诊断等领域的应用提供更好的支持。
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拉曼光谱测量中的荧光抑制方法综述第3z卷笫5期2010年1O月光学仪器OPTICALINSTRUMENTSV o1.32,No.5October,2010文章编号:1005—5630(2010)05—0089—06拉曼光谱测量中的荧光抑制方法综述邹文龙,蔡志坚,吴建宏(苏州大学信息光学工程研究所,江苏苏州215006)*摘要:拉曼光谱是物质的特征结构谱,但是在许多情况下,除了激发出拉曼散射光之外,还会激发出强度远大于拉曼散射的荧光,从而限制了拉曼光谱的应用.因此在拉曼检测中对荧光采取抑制措施是十分必要的.在过去的几十年里发展了多种荧光抑制方法,包括荧光淬灭剂法,光漂白法,红外/紫外激发法,偏振调制法,移频激发法,高频调制法,门控法,数值处理法,非线性效应法等.文中概括性地介绍了上述各种技术方法的原理,并扼要地分析比较了各自的性能特点.关键词:拉曼光谱;荧光抑制;信噪比中图分类号:TH744.1文献标识码:Adoi:10.3969/j.issru1005—5630.2010.05.019 ReviewoffluorescencerejectioninRamanspectroscopymeasurement ZOUWenlong,CAIZhijian,WUJianhong(InformationOpticalEngineeringInstitute,SoochowUniversity,Suzhou215006,China) Abstract:Ramanspectroscopyprovidesafingerprintofthemolecules.However,inmany casesthefluorescencewillalsobestimulatedapartfromtheRamanscattering.The fluorescenceintensityisoftenseveralmagnitudesstrongerthanthatoftheRamansignal, whichseverelyobstructsthenormalapplicationofRamanspectroscopy.ItSnecessarytotake someproperfluorescencerejectionmeasuresinRamandetection.Manymethodsand techniqueshadbeenproposedanddevelopedtosuppressthefluorescencedisturbanceinthe pastdecades,includingfluorescencequenching,photo-bleaching,IR/UVexcitation, polarizationmodulation,shiftedexcitationRamanspectroscopy,high-frequencymodulati on,time-gateddetection,numericalprocessingandnonlinearspectroscopictechniques.Thispa per brieflyintroducedthesetechniquesandmadesomeanalysisontheircharacteristicsand performances.Keywords:Ramanspectroscopy;fluorescencerejection;signaltonoiseratio引言拉曼散射现象是印度科学家拉曼在1928年发现的,从那以后拉曼光谱受到科学家的广泛重视,是上世纪6O年代激光器的诞生,给拉曼光谱的应用带来了新的发展空间.拉曼光谱反映分子内部特别各种简正振动频率及有关振动能级的情况,利用这些信息可以鉴定分子中存在的官能团以及相关的化学结收稿日期:2010-01—20基金项目:江苏省高技术研究计划资助项目(BF2009047)作者简介:邹文龙(1984一),男,江苏苏州人,硕士研究生,主要从事拉曼光谱仪器方面的研究.?9O?光学仪器第32卷构.目前,拉曼光谱在化学,生物医学,材料,环保等领域有着非常广泛的应用.在化工生产领域,拉曼检测可以实时监控高分子聚合过程,Bauer等人利用拉曼光谱测定了苯乙烯单体在乳液聚合反应中的浓度变化情况¨,Wenz等人用拉曼光谱分析技术来监测ABS塑料生产的接枝共聚过程【l2].在生物医学领域,拉曼光谱可以对癌症进行早期诊断,Mahadevan-Jansen和Nicholas等人在利用拉曼光谱对脑癌,乳腺癌,结肠癌,皮肤癌进行早期诊断的试验中取得了很好的效果_3].环境保护方面,拉曼检测可用于水质分析,而且可以检测的物质范围非常广,现有的研究成果中包括氰化物,铁氰化物,硝酸盐和亚硝酸盐,硫酸盐等各种无机物以及苯类,酚类,醛类,喹啉,吡啶,含氮芳香化合物等各种有机物的检测,可以用来获取水环境的污染信息].随着激光技术和信号检测技术的发展,拉曼光谱技术在当代工农业生产和科学研究中必将得到越来越广泛的应用.在拉曼检测中,用激光照射样品时除了激发出拉曼散射光外同时还经常会激发出荧光.样品分子的特征振动频率与激光频率相同并且荧光效率较高时,它就会吸收激发光子而发射出荧光6].另外样品不纯(含有染料分子,生物分子等一些强荧光分子)也容易导致荧光的发射.通常情况下,荧光的强度远大于拉曼光,使得拉曼信号完全淹没在荧光背景噪声中,导致得到的光谱数据难以正常利用.特别是当被测样品中含有生物蛋白分子,有机染料分子的时候,荧光效应更加突出.因此,在拉曼光谱检测中对荧光采取一定的抑制措施是十分必要的.在过去的几十年内,各国学者提出并实现了多种荧光抑制方法和技术.这些方法利用了拉曼散射光和荧光在诸多方面的特性差异,如偏振特性,时间/寿命特性,对激发波长的依赖性等.不仅有通过软件算法实现消除荧光干扰的方法,而且也有通过改变拉曼光谱测试系统的硬件结构来实现荧光抑制的方法.文中在以下章节中介绍其中一些典型方法的原理,并分析各自的特点和性能,然后对这些方法进行比较和总结.1荧光抑制方法及其原理在拉曼光谱检测中,常用的荧光抑制方法主要有荧光淬灭剂法,光漂白法,红外/紫外激发法,偏振调制法,移频激发法,高频调制法,门控法,数值处理法以及非线性效应法等,下面分别介绍它们的原理和特点:1.1荧光淬灭剂法荧光淬灭剂法是最传统的一种方法,该方法需要向样品中添加一定的荧光淬灭剂,利用淬灭剂分子与样品分子之间发生物理化学反应来降低样品分子的荧光发射强度,达到抑制荧光的目的.Friedman和Hochstasser在检测荧光黄时发现,没有添加荧光淬灭剂(碘化钾)时观察不到拉曼峰,添加淬灭剂后可以清楚地观察到拉曼特征谱].该方法成本低,操作简便,但是加入淬灭剂可能影响待测样品的拉曼谱,因而应用范围受到较大的限制.1.2光漂白法光漂白法也是一种常用的方法,它需要用激光对样品预先照射一段时间,使荧光分子发生光化学变化,从而降低荧光发射强度,然后再对感兴趣的分子结构进行拉曼检测.MacDonald 和Wyeth等人采用这种方法对红丹颜料进行检测时发现荧光背景噪声与预先照射的时间近似成指数衰减关系,光漂白后可以清楚地观察到一些小的拉曼峰[8].Dennis等人对油墨进行检测时发现光漂白前得到的谱线中拉曼主峰很弱,光漂白后荧光背景噪声明显下降,一些弱的拉曼峰也可以清楚观察到l_g].该方法不需要添加任何设备,但是检测时间相对较长,长时间照射样品还有可能破坏感兴趣的样品的分子结构.1.3红外/紫外光激发法由于近红外波段的光子很少能被样品分子吸收,基态电子很难被激发,因此产生荧光的可能性较小.但是由于拉曼散射光的强度与波长的四次方成反比,所以这种方法得到的拉曼散射强度很弱_1...为了增加散射强度,Hirschfeld和Chase等人采用傅里叶变换拉曼光谱仪(1064nm激光激发)检测聚对二甲苯酰粉末时几乎没有荧光背景噪声干扰,信噪比非常高,若采用532nm激光激发同样的样品则会有很强的荧第5期邹文龙,等:拉曼光谱测量中的荧光抑制方法综述?91?光口.然而,傅里叶变换光谱仪扫描时间长,实时性相对较差,使其应用受到一定的限制.785nm激光也能有效避免荧光的产生,且该波段CCD量子效率比较高,因而用785nm作为拉曼激发光源越来越受到研究人员的青睐.紫外光激发方法是用波长小于250nm的激光激发样品,由于荧光的斯托克斯位移比拉曼位移大得多,因此即使有荧光物质存在,也可以充分区别荧光与拉曼光[].紫外激发方法的一个较大的局限性在于紫外光能量太高,可能导致样品分解.1.4偏振调制法偏振调制法是基于拉曼光与荧光的偏振特性不同提出的,荧光大多是非偏振光,而拉曼光是部分偏振光,采用偏振斩波器,将光分成两路,一路进入单色仪作为输入信号,另外一路作为参考信号,利用锁定放大器进行检测,可以充分区分开荧光与拉曼光,如图1所示.Arguello和Mendes等人采用偏振调制方法成功检测出乙醇溶液中浓度为lnM/L的罗丹明的拉曼谱[1引.该方法采用锁相放大器进行检测,检测灵敏度高,但是较难实现多通道检测;另外并不是所有的荧偏振斩波器光都是非偏振光,因此应用范围也受到一定的限制.Fig11.5移频激发法图1偏振调制原理框图Schematicdiagramofpolarizationrr~ulation移频激发法是基于拉曼光谱与荧光光谱对激发光波长的依赖程度不同而提出的.在一定的范围内,荧光光谱几乎不会随着激发波长的变化而变化,相反拉曼光谱却会紧密跟随激发波长的变化而发生移动.若采用两个波长相近的激光分别激发样品,得到两组散射谱,如图2所示;再利用差分方法,得到两个散射谱的差值谱,如图3所示,则在该差值谱中荧光的光谱信号几乎被完全消除,而拉曼信号却能够保留下来.Shreve等人利用该方法对掺杂高浓度染料的三氯甲烷溶液进行了检测,即使荧光强度是拉曼光的1O.倍,拉曼谱仍然有很高的分辨力[1.Stellman和Bucholtz等人利用声光调制器实现双波长拉曼激发,对含有100pM/L的荧光染料的乙醇溶液进行拉曼检测,比采用单个激光激发的荧光背景噪声显着下降,拉曼特征谱线可以清楚辨认[1.McCain和Willett等人使用了8个波长的激光激发样品,十分成功地抑制了荧光,并且得出激发光波长个数越多,抑制效果越好的结论[1引.移频激发法适用于各种样品,荧光抑制的效果很好,但是需要更复杂的激发光源.Mosier-Boss等人提出了一种相对简单的方法,即先固定拉曼光谱仪中的色散光栅,得到一幅拉曼光谱,然后将光栅转动一个微小的角度,再测得第二幅拉曼光谱,然后将两个光谱相减,同样可以得到具有微分特征的差值谱_1.虽然在该实验中荧光谱与拉曼谱都会发生移动,但是考虑到荧光的谱线相对较平缓,微小的移动对其影响不大,所以在差值谱中荧光谱信号大部分被消除,而拉曼谱会保留下来.该方法不需要复杂的激发光源,得到的结果与前述频移激发法的结果比较接近,有一定的荧光抑制作用.图2两组散射谱线Fig.2Twoscatteringspectrum图3谱线A与B的差值谱线Fig.3DifferencecurveofcurveAandB1.6高频调制法高频调制法是基于荧光和拉曼光对高频信号响应的快慢不同而提出的.拉曼散射光几乎在激发光照射到样品的同时产生,因而可以进行很高频率的调制;而荧光是在激发光照射样品一段时间之后发出,?92?光学仪器第32卷并且激发光熄灭后还能够维持一段时间(纳秒量级)才逐渐衰减熄灭,因此荧光跟不上高频信号的调制.Bright和Heiftje等人对激发光进行328MHz的高频调制,并把散射光和调制信号送入微波分析仪进行选频放大,对浓度为10pM/L的罗丹明水溶液进行检测,拉曼光谱信噪比明显得到提高,并且得出调制频率越高越容易区分拉曼光与荧光的结论m].由于更高频率的调制和检测技术难度较大,因此该方法适用于荧光寿命较长的情况.1.7门控法门控法是基于拉曼光与荧光的寿命不同提出的.拉曼光的寿命一般为10～10s,而荧光寿命一般在纳秒量级.原理如图4所示:利用了一个时间很短的门开关(白色矩形),只在门开关打开瞬问探测拉曼光(灰色矩形),由于荧光寿命相对很长,因此几乎所有的荧光强度都被挡在门开关之外(弧线).Yaney提出利用Nd:YAG脉冲激光器和门控计数器的方案,对单晶氟化锶进行检测,几乎没有荧光干扰,并且得出激光脉冲越窄,荧光抑制效果越好的结论m;Tahara等人则提出一种采用皮秒脉冲激光器和扫描摄影机的方案,成功检测出苯中的微量罗丹明染料分子[2.Matousek等人提出使用皮秒级克尔开关来抑制荧光的方法],克尔开关门宽度3ps,在克尔开关通光瞬问拉曼光完全通过,而由于荧光寿命比较长,因此大部分荧光被阻挡,该方法对于液体样品的测量具有良好的效果.对含有乙腈与激光染料DCM溶液检测,发现使用克尔开关后几乎没有荧光干扰,谱线分辨力大幅提高.Martyshkin等人采用钛宝石皮秒激光器和增强型CCD(专为超快门控设计,门宽200ps)的方案.对芘/甲苯溶液进行检测,采用门控法后得到了高质量的拉曼谱,一些很弱的倍频峰与和频峰也能分辨lI2.快速门控法的适用范围很广,随着超快激光,探测器的进一步发展,信噪比还有提升的空间,但是这类方法需要先进的设备支持,成本颇高.1.8数值处理法图4门控法拉曼检测原理图Fig.4Operationalprincipleoftime-gatedRamandetection数值拟合是常用的光谱数据处理方法,包括频域滤波,小波变换,曲线拟合等.频域滤波法是对拉曼光谱测量数据进行傅里叶变换,然后在频域中设计合适的滤波器进行滤波处理的方法.由于荧光光谱与拉曼光谱的谱线宽度不同,有着不同的傅里叶频谱特征,所以可以在频域中进行适当的滤波来区分拉曼谱与荧光谱.Mosier—Boss等人利用快速傅里叶变换(FFT)和频域滤波方法对一种止痛药的拉曼光谱进行处理],原始拉曼谱在小于1500cm一的谱线根本无法辨认,但是通过FFT和高通滤波后却可以清楚地分辨出来,同时他们还采用了频域切趾算法来进一步提高信噪比.尽管频域滤波有一定的效果,但是这种方法可能造成拉曼谱的人为扭曲.当存在荧光干扰时,拉曼信号叠加在平缓的荧光谱上形成一些小的突出峰,利用小波分析的方法能够检测出这种小突起.Cai等人对萘普生样品进行拉曼检测后利用小波变换进行处理得到了较好的结果,一些被荧光背景噪声与随机噪声所淹没的弱拉曼峰可以分辨引.小波变换法快捷实用,但是选择不同的小波多层分解方法和不同的阈值参数,得到的结果存在不一致的问题.此外,由于荧光谱表现为较平缓的形状,因此可以采用曲线拟合的方法来逼近然后进行消除,得到剩下的拉曼信号.这方面有许多学者提出了各种算法,如平方拟合,高斯拟合,高次多项式拟合,自校正拟合甚至更复杂的算法设计[z4,z5J.曲线拟合法最大的优点是快捷与简便,而且能够很好地保持拉曼谱线的轮廓,缺点是会引起谱线误差.虽然有些方法可以做到自校正,但是大部分数值方法只能使原本就较强的拉曼峰变得更清晰,而原来微弱的拉曼峰没有很大的改观.1.9非线性效应法当激发光的功率很大时会在样品中产生一些非线性效应,如反转拉曼效应,反斯托克斯散射增强效应,受激拉曼散射效应,拉曼感生克尔效应等.利用这些非线性效应可以大幅增大拉曼光强度,使得拉曼光的强度比荧光更大,拉曼信号就容易探测了.但是非线性效应法的激发光功率很大,可能会对样品产第5期邹文龙,等:拉曼光谱测量中的荧光抑制方法综述?93?生破坏作用.2荧光抑制方法比较综上所述,对于拉曼光谱测量中的荧光抑制问题人们提出了许多方法,这些方法各有特点,利用了拉曼散射光与荧光的各种特性差异,具体性能比较如表1所示.可以根据软硬件配置情况将这些方法大致分为三类:(1)无需对拉曼光谱仪软硬件进行任何改变的方法:如荧光淬灭剂法,光漂白法等;(2)需要改变拉曼光谱仪硬件结构的方法:如移频激发法,门控法,非线性效应法等,这些方法均需要增加一定的硬件设备,使整个拉曼光谱检测系统变得更复杂,成本相应也增加;(3)需要进行特殊软件处理的方法:如频域滤波法,小波变换法和曲线拟合法等,这些方法会引入一定的人为误差.此外,也有学者提出采用两种或者两种以上的方法结合起来实现荧光抑制的思路,比如Matousek等人提出克尔门控法与移频激发法结合,可以比克尔门控法或者移频激发法单独使用得到更高的信噪比[2,PerkinElmer公司提出采用785nm激光,经过12min光漂白,然后采用自校正的曲线拟合滤除荧光背景噪声,将红外激发法,光漂白法和数值法联合使用,发挥各自的优点.表1几种主要的荧光抑制方法的比较Tab.1Comparisonofseveralmajorfluorescencerejectionmethods3结束语总而言之,拉曼光谱应用范围越来越广泛,但是想要得到高质量的拉曼光谱信号,必须对荧光采取一定的抑制措施.在生物,环保等应用领域荧光抑制技术已经成为拉曼光谱检测中的一项关键技术.对现有的几种方法进行了归纳和分析,随着光电技术的不断进步,拉曼光谱检测中的荧光干扰问题必将得到更好更方便的解决.参考文献:[1]BAUERC,AMRAMB,AGNELY眦On-linemonitoringofalatexemulsionpolymerizationbyfiber-opticFT-ramanspectroscop 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