[精选]动物细胞培养和核移植技术--资料

原代培养
稀分 释装
传代培养
培养过程：
动物胚胎或幼龄动
培养过程：
物的组织、器官
胰蛋白酶
动物组织细胞间隙中
（分解弹性纤维）
含有一定量的弹性纤 单个细胞
维等蛋白质，将细胞
加培养液
网络起来形成具有一 细胞悬浮液
定弹性和韧性的组织
原代培养
和器官。
10代细胞
遗传物质 未改变
细胞株
动物细遗已胞传改培物变养质不细能胞系 最终培养成生物体
动物细胞生长特性：
细胞贴壁：
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。
要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、 易于贴附。
细胞的接触抑制：
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞 的接触抑制。
动物机体组织
胶 原 蛋 白
酶胰 蛋 白
酶
单个细胞
原代培养
不能，因为两者的最适pH不同，而正常 组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适 pH较接近 １０、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组 织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？
胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、 增殖旺盛
思考题
11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、 无毒？易于培养细胞贴壁，进行生长增殖
12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不 再分裂、增殖？ 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象 叫接触抑制。 13、如此时细胞数量并未达到人们的需求， 应该怎样办？ 将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然 后继续增殖。 这样的过程叫做传代培养
器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛， 分化程度低，容易培养。 分散成单个细胞 在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶
或胶原蛋白酶分散细胞，说明细胞间的
物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜 的pH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶 （2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4) 的活性较高。
一、动物细胞培养
50代细胞 无限传代
传代培养
思考题
1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞 的吗？ 没有 ２、动物细胞培养过程将组织分散成单个细 胞的吗？ 是
３、为何动物细胞培养过程将组织分散成单 个细胞的呢？ 成块的组织细胞靠在一起,彼此
限制了细胞的生长和增殖 ４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？
先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理。
思考题
14、如何理解原代培养和传代培养？ 上述过程中，在第一培养瓶中培养就是 原代培养，之后转移到其它培养瓶中培 养就是传代培养
15、传代培养的细胞能一直传代下去吗？ 不都能
16、有些为何能一直传下去？ 发生突变，朝着癌细胞方向发展
17、动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？
不全是
思考题
18、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？ 保存10代以内的细胞，因为10－50部分 细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分 还发生突变向癌细胞方向发展
19、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养 那样最终培养成新个体？
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多， 不能发育成新的动物个体
讨论
多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境 中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论 以下问题：
1.体外培养细胞时需要提供哪些物质 充足的营养供给、适宜的温度、适宜的 pH和气体环境
思考题
５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明 细胞间的物质是什么成份？
胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质 ６、细胞膜的主要成份是什么？蛋白质和磷脂 ７、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 能
８、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动 物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？
注意时间的控制
思考题
９、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？ 为什么？
2.2 动物细胞工程
提问：
植物细胞工程常用的技术手段有哪些？
植物组织培养技术、 植物体细胞杂交技术
动物细胞工程常用的技术手段：
动物细胞培养技术、 动物细胞核移植技术、 动物细胞融合技术、 生产单克隆抗体技术
动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
一、动物细胞培养
动物体细胞大都生 活在液体的环境
与植物培养基相比 （1）液体培养基
其特点是：
（2）含有血清、血浆
培养条件：
1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养（葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、
微量元素、维生素、血清、血浆等。合成培养基）
3、温度和pH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4
质，判断某种物质的毒性 为治疗和预防癌症及其他疾病提供理
论依据
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物
概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一 个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组 并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终 发育成动物个体。
4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
思考题
动物细胞培养液的主要成分是什么？
较植物组培培养基有何独特之处？ 主要成分：
葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、 微量元素、维生素、血清、血浆等。
独特之处有： 1、液体培养基 2、成分中有血清、血浆等
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目
2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 无菌、无毒的环境。
培养条件：
1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养（葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、
微量元素、维生素、血清、血浆等。合成培养基）
保证细Байду номын сангаас顺利的 生长增殖
培养条件：
动物细胞培养液的主要成分：
葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、 微量元素、维生素、血清、血浆等。
植物组织培养 动物细胞培养
原理
细胞的全能性
细胞增殖
培养基性质
固体培养基
液体培养基
培养基特有成分 蔗糖、植物激素
葡萄糖、血清、 血浆
培养结果
植物体
细胞株、细胞系
培养目的
快速繁殖、培育 获得细胞或
无病毒植株等
细胞产物
应用：
大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、 干扰素、单克隆抗体）
作为基因工程中的受体细胞 培养的动物细胞可以用于检测有毒物
概念:就是从动物机体中取出相关的组织, 将它分散成单个细胞，然后,放在适宜的 培养基中,让这些细胞生长和增殖。
植物组织培养 在无菌和人工控制的条件下,将离体的植
物器官、组织、细胞，培养在人工控制的培 养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生 愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。
一、动物细胞培养
选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、