人脐静脉血管内皮细胞

人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定

本课题为安徽省自然科学基金安科医药专项资助项目(01043708)作者单位:230001 合肥安徽省立医院普外科安徽医科大学2001级硕士研究生(傅斌生)人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定余继海许戈良汪建荚卫东傅斌生[摘要] 目的探讨新生儿脐静脉内皮细胞的培养及鉴定方法,建立血管内皮细胞培养模型,为体外研究血管内皮细胞提供实验手段。

方法采用胶原酶灌流消化法培养人脐静脉内皮细胞,当原代培养细胞80%以上汇合后,用胰蛋白酶消化传代;根据细胞生长特点、形态特征、细胞表型和分泌蛋白流式细胞术(F M 术)免疫荧光检查对细胞进行鉴定。

结果种植在培养瓶中的内皮细胞12小时贴壁生长,48~72小时生长最快,7~10天汇合。

内皮细胞呈接触抑制生长、呈鹅卵石样外观,FM 术检测CD31和V -R-Ag 均为阳性表达。

结论消化酶灌注脐静脉消化内皮细胞是获取血管内皮细胞的一种好方法,可靠性大,成功率高,可以构建体外研究血管内皮细胞的模型。

[关键词] 内皮细胞;培养C ulture and identif ication of human endothelial cells derived f rom umbilical veins Y u Jihai ,Xu Geliang,W ang J ian,et al A nhui Prouincial H osp ital,H ef ei 230001[Abstract] Objective T o extablish the methods of culturing human endothelial cells (EC)and identifing the cells ac cording to t he antigens expressed and their morpholog ical aspect.Methods A fter digestion w ith t ype collagenase at 37!for 10minutes,the cells were centrifuged,and the cell pellet was resuspended in DEM E medium containing fetal bovine serum (10%vol/vol),seeded on gelatin(0.1%w t/vol)procoated dishes at aconcentr at ion of 10,000per square centimeter.T he medium was changed 1days later when the cells w er e attached and every 2days,until the cells reached confluence.Phase con trast microscopy and flow cy tometry with specific antisera against von willebrand factor and CD31were used to obser ve and i dentify the culturedcells.Results At confuluence (7~9days),the cultured cells had a cobbestone appear ance wit h a strict monolayer grow th and contact inhibition.T he mean fluorescence intensity of the cells was similar w ith both antibodies for the cultured cells vs controls.C onclusion T he cultured cells are endothelial cells,and the method of identification is practical and convenient.[Key words] Endot helial cells;Culture我们采用胶原酶灌流消化法成功培养人脐静脉内皮细胞,根据细胞生长特点、形态特征、细胞表型和分泌蛋白流式细胞术免疫荧光检查对细胞进行鉴定,从而构建体外研究血管内皮细胞的模型,现报告如下。

一种改进的人脐静脉内皮细胞的培养方法

一种改进的人脐静脉内皮细胞的培养方法作者：李琴山冯赞杰刘洋徐海燕钱民章【关键词】 ,内皮细胞；脐静脉；细胞培养【Abstract】 AIM: To establish a stable method to isolate and culture human umbilical vein endothelial cells (hUVEC) in vitro. METHODS: Endothelial cells of vein from newborn umbilical cord were successfully isolated using a combination of collagenase and trypsin (1∶1). Cells were not digested with trypsin until the cells reached confluence over 80%. The composition of culture medium was simplified by not adding vascular endothelial cell growth factor and heparin. The cultured cells were verified as hUVEC by morphology and immunofluorescence staining. RESULTS: The endothelial cells initially spread on the bottom of the dishes in 4 h, then coalesced and grew to form confluent monolayers of polygonal cells within 7-10 d. The cultured cells had a cobblestone appearance with a strict monolayer growth and contact inhibition. The purity of endothelial cells was more than 95% identified by immunocytochemistry staining for Ⅷ:Ag and KDR. CONCLUSION: Method of injection with mixed Enzyme solution is an optimized protocol which is reliable and of high achievement ratio. Cellsharvested with this protocol can be used as models on research of vascular endothelial cells in vitro.【Keywords】 endothelial cell; umbilical vein; cell culture【摘要】目的：建立稳定的人脐静脉内皮细胞分离和培养的方法. 方法：采用胰蛋白酶/胶原酶（1∶1）混合酶液消化法培养人脐静脉内皮细胞，简化完全培养液组分（不添加血管内皮细胞生长因子、肝素等辅助因子），当原代培养细胞80％以上汇合后用胰蛋白酶消化传代；用形态学、免疫细胞化学法进行鉴定. 结果：种植在培养瓶中的内皮细胞4h贴壁生长，48~96 h生长最快，7~10 d汇合. 内皮细胞呈单层铺路石样外观，Ⅷ因子相关抗原（Ⅷ：Ag）和内皮细胞生长因子受体2（KDR）鉴定内皮细胞纯度达95％以上. 结论：用混合酶液灌注脐静脉消化内皮细胞是获取内皮细胞的一种好方法，可靠性大，成功率高，可以构建体外研究血管内皮细胞的模型.【关键词】内皮细胞；脐静脉；细胞培养0引言血管内皮细胞(vascular endothelial cell, VEC)在心血管疾病的发生中占有重要的地位［1］. 采用培养的VEC进行相关机制研究是一种普遍应用的实验方法. 由于人体组织取材限制，很难获取大量原代培养的人VEC.我们以健康胎儿脐静脉血管为材料，建立起一种改良的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, hUVEC）培养方法.1材料和方法1.1材料新生儿脐带由遵义医学院附属医院提供；胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、EDTA（Sigma公司）；M199、胎牛血清（Gibco公司）；台盼蓝(Amresco公司进口分装)；鼠抗人Ⅷ因子抗体、鼠抗人内皮细胞生长因子受体2（KDR）抗体（美国Dako公司）；超净台（苏州苏净集团安泰空气公司）、倒置相差显微镜（日本Nikon公司）, CO2孵箱（美国Thermo Formo公司）、酶标仪（德国Huma Reader公司）. 完全培养液为800 mL/L M199培养液、200 mL/L胎牛血清、2 mmol/L L谷氨酰胺、1×105 U/L青霉素、100 mg/L链霉素，使用前调节pH至7.0~7.4.1.2方法1.2.1hUVEC的分离和培养在无菌条件下，取健康产妇分娩后6 h内［2］的脐带，长约30 cm,剪去脐带两端钳夹处. 于脐静脉一端插入一针头，用生理盐水反复冲洗至无血迹后，将脐静脉另一端用止血钳夹紧，用空针封闭. 灌入1 g/L胶原酶和2.5 g/L胰蛋白酶（1∶1）（V/V） 15 mL，置37℃水浴箱中孵育8 min，将消化液收集入离心管，用PBS冲洗脐静脉2次，将冲洗液一同收集入离心管，1000 r/min 离心10 min，去上清液，加入完全培养液重悬细胞，取0.1 mL细胞悬液用4 g/L台盼蓝染色后作活细胞计数. 将1.5×107/L细胞接种到24孔板中，每孔加入完全培养液1 mL，置37℃，950 mL/L O2，50 mL/L CO2培养箱内静置培养，次日换培养液，以后每3 d换液1次，7~10 d 融合.1.2.2细胞计数采用台盼蓝排斥法. 取0.1 mL混匀的内皮细胞悬液与4 g/L台盼蓝0.9 mL混匀后，取1滴在显微镜下计数100个细胞. 当细胞悬液中细胞存活率大于95%时可用于进行原代细胞培养.1.2.3hUVEC的鉴定［3-5］用Ⅷ因子抗体（抗von Willebrand 因子抗体）以及KDR抗体免疫细胞化学法鉴定内皮细胞. 将酸化处理的普通盖玻片消毒后放入6孔培养板，将原代或传代的内皮细胞悬液接种于盖玻片上，当细胞生长至近融合状态时用PBS缓冲液冲洗细胞爬片，-20℃丙酮固定10 min；PBS缓冲液洗3次，5 min/次；用30 mL/L H2O2,室温孵育5 min，灭活内源性过氧化物酶；分别滴加适量鼠抗人Ⅷ因子一抗工作液（1∶100）； KDR（1∶200）一抗工作液，37℃作用60 min；PBS缓冲液洗3次，每次5 min；再分别滴加羊抗鼠的IgGFITC 和IgGTR的二抗工作液，37℃作用30 min后，PBS洗涤3次. 立即在荧光显微镜下观察、摄片. GAMFITC绿色荧光显示膜上KDR；GARTR红色荧光显示胞内的Ⅷ因子. 对于Ⅷ因子相关抗原还采用免疫细胞化学SABC法进行检测，显微镜下观察.1.2.4hUVEC的消化传代①取生长融合的细胞吸去培养液，PBS洗2次；②翻转培养瓶，加入1.25 g/L胰蛋白酶, 0.2 g/L EDTA 的细胞消化液；③倒置显微镜下观察细胞消化情况，待细胞与细胞分开、胞体变圆变亮时翻转培养瓶，吸去消化液；④加入完全培养液，小心吹散细胞，计数，接种到新的培养瓶或培养板, 置37℃, 50 mL/L CO2培养箱中培养.1.2.5细胞生长曲线的测定取待测生长状态良好细胞，增长至接近汇合时向培养瓶内加入1 mL 1.25 g/L胰蛋白酶液消化，待细胞接近脱离瓶壁前吸出消化液，加入完全培养液，轻轻吹打制成细胞悬液、计数. 向24孔板的每孔中接种等量细胞，置37℃，50 mL/L CO2培养箱中培养. 将细胞分成8组，每组3孔，培养8 d. 从接种次日起每24 h分别取3个孔计数，取平均值，以时间为横轴，细胞数为纵轴，绘制生长曲线.2结果2.1hUVEC的培养与鉴定在倒置显微镜下连续观察，培养的原代内皮细胞在接种4 h之后开始贴壁生长，细胞呈球形、小多角形，单个或小团块存在. 接种第2～3日，细胞即进入对数生长期，细胞生长迅速；第5～8日时铺满培养瓶瓶底，呈现典型的铺路石样形态特征(图1). Ⅷ因子mAb免疫细胞化学结果显示95%以上为阳性血管内皮细胞，细胞胞质为棕黄色，胞核为蓝色(图2). KDR(图3)和Ⅷ因子(图4)免疫荧光双标显示95%以上为阳性血管内皮细胞.图1培养6 d的原代脐静脉内皮细胞（略）图2脐静脉内皮细胞Ⅷ因子免疫组化检测（略）图3脐静脉内皮细胞内皮细胞生长因子受体2免疫荧光检测（略）2.2hUVEC生长曲线测定通过细胞计数,接种后第1日，细胞较接种时无明显变化，此时细胞仍处于滞留期，第2日则明显增加，第3~5日增长迅速,达到其生长高峰，此时细胞处于对数生长期，第6~8日细胞生长稳定,处于生长平台期(图5).图4脐静脉内皮细胞Ⅷ因子免疫荧光检测（略）图5原代人脐静脉内皮细胞生长曲线（略）3讨论我们以人脐静脉作为培养血管内皮细胞的来源，是因为它具有取材及操作方便，获得细胞数多，在某些方面尚具有与动脉生物学特征相似的优点.获取内皮细胞的方法有机械刮取［6］、组织块移植和酶消化法3种. 前两种易混杂其它血管壁细胞，近几年来已逐渐被酶消化法取代. 从分离细胞数量、保持细胞活性和结构完整性来看，胶原酶是理想的血管内皮细胞分离酶，自成功分离hUVEC以来，已得到广泛应用，但其价格昂贵. 用胰蛋白酶代替胶原酶分离血管内皮细胞已有文献报道. 我们比较了全胶原酶和胰蛋白酶加胶原酶混合两种酶液的消化能力，结果表明，采用胰蛋白酶加胶原酶混合消化的方法，hUVEC 收获量基本接近全胶原酶血管内皮细胞的收获量. 在混合酶液中，胶原酶仅占1/2，这种方法既经济，效果又好. 而且用胰蛋白酶处理可以降低非内皮细胞的贴壁能力，内皮细胞的贴壁能力比平滑肌细胞和成纤维细胞早，所以在接种后6 h可以去除未贴牢的细胞，这些非内皮细胞的污染如不去除，将抑制内皮细胞的增殖.hUVEC较动物内皮细胞的培养困难，只有在培养液中加入刺激细胞生长的物质，方能长期传代培养. 董玉兰等［7］和Relou等［8］报道，培养液中加入人血清、血管内皮细胞生长因子、肝素及培养瓶（皿）用明胶覆盖是hUVEC长期培养的重要条件. 但这些促进内皮细胞贴壁及生长的物质的加入可能成为影响实验结果的混杂因素，限制内皮细胞的实验应用范围. 有人［9-11］研究发现，血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子等有助于培养的胚胎干细胞分化为内皮细胞. 胚胎干细胞有望成为新的种子细胞来源. 我们在改进内皮细胞分离和传代方式的基础上选择M199培养基，补充200 mL/L胎牛血清和2 mmol/L L谷氨酰胺，在维持内皮细胞正常生长和形态结构的前提下尽可能减少完全培养液的组分，能将hUVEC传5～6代. 总之，我们改进的hUVEC培养方法可获取足够数量高纯度可传代的内皮细胞，对内皮细胞生物学特性和心脑血管相关疾病的研究有重要意义.【参考文献】［1］ Li XD, Lu kH, Guo SZ, et al. Culture of vascular endothelial cell ［J］. Chin J Aesthetic Med, 2001,10(3):18-20.［2］王建民，刘荫秋，赖西南. 正常脐静脉离体后不同时间内皮某些物质含量的变化［J］. 第三军医大学学报，1995，17（1）：86.［3］ Jonathan B. Rosenberg, Judith S, et al. Genetic induction of a releasable pool of factor Ⅷ in human endothelial cells ［J］. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2000, 20 (12)：2689-2695.［4］李孟彬，王为忠，张宏伟，等. 猪血管内皮细胞的培养与表型鉴定［J］. 第四军医大学学报，2004，25（24）：45.［5］ Mario P, Afazal J, Daniel P, et al. Expression of VEGFR2 and AC133 by circulating human CD34+ cells identifies a population of functional endothelial precursors ［J］. Blood, 2000,95（3）：952-958.［6］ Quattrone S, Chiappini L, Scapagnini G, et al. Relaxin potentiates the expression of inducible nitric oxide synthase by endothelial cells from human umbilical vein in in vitro culture ［J］. Mol Hum Reprod, 2004,10(5): 325-330.［7］董玉兰，陈铁镇，王铁吉,等. 人脐静脉内皮细胞的继代培养［J］. 中国医科大学学报，1989，18（2）：81-85.［8］ Relou IAM, Damen CA, Van der Schaft. Effect of culture conditions on endothelial cell growth and responsiveness ［J］. Tissue Cell, 1998,30(5):525-530.［9］ Evans GR, Brandt K, Klatz S, et al. Bioactive poly(Llactic acid) conduits seeded with Schwann cells for peripheral nerve regeneration［J］. Biomaterials, 2002,23(1):841.［10］ Liang PF, Zhang PH, Yang XH, et al. Experimental study on inductionof endothelial apoptosis by burn serum and subeschar tissue fluid ［J］.中华烧伤杂志,2004,20(5):275-277.［11］ Savore C, Zhang C, Muir C, et al. Perlecanknockdown in metastatic prostate cancer cells reduces heparinbinding growth factor responses in vitro and tumor growth in vivo ［J］. Clin Exp Metastasis,2005,22(5):377-390.。

人脐静脉血管内皮细胞HUVEC

第三：铺板加样方法错误。
• 6孔、12孔、24孔、48孔与96孔的细胞接种铺板过程中，你的加样方式是哪种？你觉得加样方式对后期的接种均匀度影响大吗？例如你是否有过垂直加入96孔板的经历？是不是有的孔就比较均匀，而有的孔就聚集在了一起？六孔板怎么摇晃也不均匀？其实也许你离铺好板就差一种适合你的方法。
• 2、不是所有细胞消化后都会变成圆形
• 有些细胞(比如U87，U251)消化好了也不会变成圆形，只是呈半沙状。
• 3、有些细胞即使变圆，也有脱落的细胞，但还是没消化好 • 比如7860，要等到大部分细胞脱落培养皿底部才可以停
止消化，否则很难吹打下来，这种情况一般发生于难以消化的细胞。
• 4、对于一些特殊的细胞需要消化过一点 • 有些细胞吹成单个细胞反而对细胞的状态会好一点，一
6孔板、12孔板或24孔板
• 为防止表面张力导致的中间液面太低细胞聚集的现象。通常每孔首先滴加少量培基，轻轻晃动浸润整个孔底以保证板子的孔底都是湿润的，这样加液后细胞悬液会平铺在整个孔底，可以避免加在中间位置和加在周边晃匀后周边细胞局部太多的现象，细胞分散会较均匀。注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下（5-10分钟）。镜下观察细胞均匀度，如不均匀可采用以下8字法、十字法及震荡法等方法进行细胞均匀度处理
• HUVEC细胞培养难度较高，建议使用内皮细胞专用培养基，选用优质胎牛血清。细胞推荐传代比例为1:2-1:3，胰酶消化室温1-2分钟，传代周期通常为3-4天。需要注意的是，如 HUVEC出现聚团生长，可能由于培养板亲水性差或者血清中促贴壁因子不足，可考虑用人纤维粘连蛋白包被培养板，能有效预防细胞聚团。
第二：细胞吹打次数不够，细胞悬
液密度不均匀。

人脐静脉内皮细胞分离培养及鉴定技术

中国实验诊断学
２１４月００年
第１４卷
第４期
一
５ｌ一Ｉ
文章编号：０７— ２７２１）４５１３１０４８（０００ —０１ —０
人脐静脉内皮细胞分离培养及鉴定技术
吴金义张，蕾，张秀英曲丽梅，
（．１吉林大学中日联谊医院心内科，吉林长春１０３；．３０３２一医院病理科）摘要：目的探讨人脐静脉内皮细胞（ＶＣ体外分离原代培养的方法，￣ＪＥ）并总结对培养的细胞鉴定方法。方法
通过胰酶灌注法从人脐带获取内皮细胞进行分离培养，并采用免疫组化法及光镜和透射电镜观察超微结构鉴定所获
得的细胞系。结果
分离的ＨＶＣ在体外７０天左右可长成单层，ＵＥ —１光镜下胞体为单层铺路石状排列。第ＶＩ因子ＩＩ
用胰酶灌注法是获
相关抗原的检测为阳性。透射电镜下观察培养的内皮细胞胞浆内可见Ｗｅｅ—ａｄ小体。结论ｉｌｌｅｂＰａ得脐静脉内皮细胞的有效方法。本方法为血管内皮细胞的研究提供了实验模型。
（ ’ ＬｂＤａｎ２１，４０１）ＣＪａ／，０１：１ｇ０５
ｃｅａｎｔｅｃｉｐａｍｕｄｒｅｅｔｎ—ｍｃｏｃｐｈｃｅｅｉｅｔｅＣ．ｎｌｓｎＴｅｄｇｓｏｆａｃｅｔｅ＿ｌｓｗｓｉｅｌｌｅｌｃｒｈｓｎｏｉｒｓｏｙｗｉｈｗｒｄｎｉｄａＥｓＣｏｃｉｈｉｔｎｏｎｒａｉｐｄ — ｉｆｓｕｏｅｉｐｎｕｓｎｉａｆｃｖｔｏｏｇｉＣ，ｄｔｉｍｅｏｒｖｄｓｅｐｒｎａｄｌｆｒＶＣｌＣｅｅｒｈｉｅｅｔｅｍｅｈｄｔａｎＥｓａｈｓｔｄｐｏｉｅｘｅｉｔｍｏｅｏａｌａＥｓｒｓａｃ．ｏｓｎｉｎｈｍｅｌｓｌｒＫｅｒｓｈｍａａｃｌｒｎｏｈｌｅｌｉｍｂｌａｖｉｃｌｃｔｒ；ｄｎｉｃｔｎｙｗｏｄ：ｕｎｖｓｕａｄｔｅｉｃｌｎｕｉｃｅｎ；ｅｕｕｅｉｅｔａｉｅｌａｉｌｌｉｆｏ

人脐静脉内皮细胞的分离培养及鉴定

两种易混杂其它血管壁细胞，年已逐渐被酶消化法取近
代＿。蛋白酶、原酶均可用于消化血管内皮细胞，２胰Ｉ胶但胰蛋白酶对内皮细胞的损伤较大；原酶作用较温和，胶但价格昂贵，制了其在大规模实验研究中的应用。限本
用ＳＰ系列试剂盒、ＤＡＢ显色试剂盒为中杉金桥生物技术
２结果
２１形态学观察原代细胞呈单层生长，界清楚，．边形态为卵圆形。养３ｄ合，典型的铺路石状镶嵌排培 —４融呈
列。代细胞的形态和生长特点与原代细胞类似。传
公司；净化工作台，上海新苗医疗器械制造有限公司。
１２方法．
人脐静脉作为内皮细胞的材料来源，有取材容具
易、作方便的特点，与各种实验动物相比，实验条操且其件更符合人体情况，果更具有意义。培养细胞的获结在取方法上，机械刮取、织块移植和酶消化法三种。有组前
洗脐静脉，将冲洗液一并收集在锥形瓶中，离心ｌｍｉｎ；０
固定１ｍｉ，％Ｈ，浸泡３ｍｉ，０ｎ３Ｏ，０ｎ山羊血清封闭，加入兔抗人Ⅷ 因子ＩＧ抗体（ｇ一抗） ℃过夜，ＡＢ显色，４Ｄ苏木精复染，水透明封片后显微镜下观察。脱以胞质内出现棕黄

人脐静脉内皮细胞特异基因

人脐静脉内皮细胞特异基因
（最新版）
目录
1.人脐静脉内皮细胞的来源及意义
2.人脐静脉内皮细胞的特性
3.人脐静脉内皮细胞在科研中的应用
4.人脐静脉内皮细胞的优势与局限性
正文
人脐静脉内皮细胞是一种来源于脐带组织的干细胞，是脐静脉的重要结构组成细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。

脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构，脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉，卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。

在子宫中，子宫动脉在胎盘的母体部，为胎儿提供氧气和营养物质，而脐静脉则将胎儿的二氧化碳和代谢废物运回胎盘，由母体排出。

人脐静脉内皮细胞具有干细胞的特性，即具有无限次传代的能力。

在血管内皮的研究中，脐静脉内皮细胞常被选用，因为它们容易获取且来源充足。

这使得脐静脉内皮细胞成为血管内皮实验的理想模型。

在科研领域，人脐静脉内皮细胞被广泛应用于研究血管内皮细胞的生物学特性、疾病发生机制及药物筛选等领域。

例如，科学家们可以利用脐静脉内皮细胞研究糖尿病、高血压等心血管疾病，以及肿瘤的生长和转移等。

尽管人脐静脉内皮细胞在科研中具有很大的潜力，但它们的应用也存在一些局限性。

首先，由于脐静脉内皮细胞来源于人体，实验过程中可能存在免疫排斥的问题。

此外，在实验过程中，脐静脉内皮细胞可能会发生异型，导致实验结果的偏差。

因此，科学家们在使用脐静脉内皮细胞时需要谨慎考虑这些因素。

总之，人脐静脉内皮细胞作为一种具有干细胞特性的细胞模型，在科研领域具有广泛的应用前景。

两种人脐静脉内皮细胞培养方法的比较

两种人脐静脉内皮细胞培养方法的比较目的：用两种不同的方法培养人脐静脉内皮细胞，比较两种方法的优缺点。

方法：（1）方法1，用0.125%胰酶加0.02%的EDTA消化液消化、方离脐静脉内皮细胞，用含20%的胎牛血清的DMEM完全培养液，于37 ℃、5% CO2条件下培养。

（2）方法2，用胶原酶Ⅱ消化脐静脉内皮细胞，用含20%胎牛血清+细胞生长因子+明胶铺板，于37 ℃、5% CO2条件下培养。

比较两种方法对细胞活力、培养细胞数量等方面的影响。

结果：以改良方法培养的内皮细胞4 h贴壁生长，细胞数量达到整瓶的80%～90%，48～72 h生长最快，细胞融合，内皮细胞呈单层铺路石样外观。

传统方法培养的内皮细胞24 h后细胞数量只达到整瓶的20%～30%，细胞融合较慢。

结论：用0.125%胰酶加0.02%的EDTA灌注脐静脉消化内皮细胞是获取内皮细胞的一种好方法，更加简便、经济，是建立稳定的人脐静脉内皮细胞分离和培养的好方法。

标签：人脐静脉内皮细胞；消化液；培养方法人脐静脉内皮细胞为位于血管内壁与血液直接接触的单层细胞。

内皮功能失常可破坏血管壁凝血和循环功能障碍，与多种疾病发生密切相关，血管细胞的研究因此成为动脉粥样硬化以及其他血管疾病研究的重要方向[1-2]。

人们常用脐静脉作为获取血管内皮细胞的来源。

本研究利用健康婴儿脐带，分别采用改良方法和传统方法来获取内皮细胞，结果发现细胞数量和细胞活力都出现不同的效果。

1 材料与方法1.1 实验材料及主要试剂、仪器1.1.1 材料足月健康出生的新生儿脐带由太和医院妇产科提供，产妇及其家属签署知情同意书。

1.1.2 主要试剂M199培养基，胎牛血清（Hyclone公司），胰蛋白酶，EDTA （国产，武汉天源生物技术有限公司），胶原酶Ⅱ（Amresco公司）1.1.3 仪器倒置显微镜（Olympus公司，日本），恒温恒湿培养箱（Thermo 公司，美国）1.2 实验方法HUVECs的原代培养：无菌条件下取新生儿脐带两根（离体时间6 h以内），长度至少15～20 cm，在超净工作台内剪去脐带两端易污染及血肿部分，找到脐静脉后，净尖端已磨平的50 ml注射器针头插入脐静脉一端的管腔中，用止血钳夹闭固定针头，用37 ℃预热的PBS冲洗脐静脉管腔2遍，将脐静脉内的血液冲洗至无色。

原代人脐静脉内皮细胞培养方法经验总结

原代人脐静脉内皮细胞培养方法经验总结刘文;陈瑞云;王志伟【摘要】目的建立分离培养原代人脐静脉内皮细胞的方法.方法采用0.125％胰酶+0.01％乙二胺四乙酸(EDTA)消化液灌注法,获得原代人脐静脉内皮细胞,用免疫组织化学方法进行细胞鉴定.结果原代培养的脐静脉内皮细胞呈典型的铺路石样排列;细胞鉴定可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应.结论 0.125％胰酶+0.01％EDTA消化法能够获取大量且纯度高的原代人脐静脉内皮细胞,为体外实验提供可靠的细胞模型.【期刊名称】《中国医学工程》【年(卷),期】2016(024)008【总页数】3页(P11-13)【关键词】原代人脐静脉内皮细胞;分离;细胞培养【作者】刘文;陈瑞云;王志伟【作者单位】山东省青岛科技大学校医院内科,山东青岛266044;山东省青岛大学第二附属医院胃肠外科,山东青岛266042;山东省青岛大学第二附属医院肛肠外科,山东青岛266042【正文语种】中文【中图分类】Q813.11血管内皮细胞（endothelial cell, EC）是血管内表面的单层扁平上皮，构成了血管壁与血液之间的机械屏障，EC能吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织，能分泌很多生物活性物质以调节血管通透性、参与凝血和动脉粥样硬化过程，还能通过调节血管的收缩和舒张以调节血压等。

为研究人体大血管内皮功能需要体外建立人血管内皮细胞模型，而内皮细胞株ECV304,在形态学、基因学等生物特性上与内皮细胞存在明显差异[1]，因此，体外分离培养原代人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）是获取内皮细胞的重要途径。

本实验总结了体外培养HUVECs的方法，应用消化酶灌注法,成功分离了人脐静脉内皮细胞，获取了大量的HUVECs，创建了研究内皮细胞的模型。

1 材料与方法1.1 标本来源脐带均来自于剖宫产的新生儿脐带，于无菌条件下获取，迅速转移至细胞室超净台中，进行分离培养。

低氧抑制人脐静脉血管内皮细胞miR-26a的表达

低氧抑制人脐静脉血管内皮细胞miR-26a的表达俞楠泽;龙飞;贾毅弘;王晓军;龙笑【摘要】目的观察低氧对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC) miR-26a及PTEN/AKT/VEGF通路相关因子表达的影响.方法分常氧组和低氧组培养48h.荧光定量RT-PCR和Western blot法检测miR-26a及PTEN/AKT/VEGF通路相关因子的表达.结果 RT-PCR结果显示低氧组HUVEC中miR-26a和PTEN的相对表达量为0.42±0.02和0.62±0.03,显著低于常氧组的1.00±0.34和1.00±0.35(P ＜0.05).Western blot法检测结果显示,与常氧组相比,乏氧组HIF-1、VEGF和AKT 蛋白表达明显升高,PTEN蛋白明显降低(P＜0.05).结论低氧抑制HUVEC miR-26a 的表达并继发下游PTEN/AKT/VEGF因子的序贯反应,可作为创面改善缺血状态治疗的新靶点.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2016(045)008【总页数】4页(P55-58)【关键词】低氧;人脐静脉血管内皮细胞;miR-26a;PTEN【作者】俞楠泽;龙飞;贾毅弘;王晓军;龙笑【作者单位】100073 中国医学科学院/北京协和医学院北京协和医院整形外科;100073 中国医学科学院/北京协和医学院北京协和医院整形外科;100073 中国医学科学院/北京协和医学院北京协和医院整形外科;100073 中国医学科学院/北京协和医学院北京协和医院整形外科;100073 中国医学科学院/北京协和医学院北京协和医院整形外科【正文语种】中文【中图分类】R318.0创面愈合的过程中涉及多种细胞、因子、介质和基质等，是一个动态、复杂的生物学过程。

发生急性损伤后不久，由于创伤后组织血供减少，更重要的是修复细胞增殖时造成的高代谢的高氧耗，使创面微环境处于低氧状态。

人脐静脉血管内皮细胞

HUVEC 人脐静脉血管内皮细胞General Information:
Culture Method:
具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，
时和我们联系武汉普诺赛生命科技有限公司
全国免费服务电话：400-650-3656 邮箱：techsupport@ sales@
注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象
发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需
细胞因子等，确保细胞培养条件一致。

若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。

因运输问题贴壁细胞会有少量
从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。

此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及
4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞
汇合度90%左右时正常传代。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传
代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部
沟通交流
告知细胞的。

实验室常用实验方法-人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养

实验室常用实验方法-人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养1.将15-20cm长的新生儿脐带放入无菌的PBS溶液中储存。

注：4℃下最多贮存24小时，室温下不超过6小时，否则废弃）2.用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中，用无菌的PBS溶液冲洗3-5次，将污血冲洗干净为止。

3.用手术钳夹紧脐带下端，加入15ml的胶原酶（1mg/ml）室温下消化15-20分钟，并不时上下摇动脐带。

4.消化完后，将下端手术钳松开，消化液流入一个50ml 无菌离心管中，用无菌的PBS溶液冲洗脐带2-3次。

5.将收集液离心（2000转/分）3分钟。

6.倒去上清，加入10mlM199培养基（加入10U/ml的bFGF），用弯管吹散细胞，将所有液体转入一个用明胶包被好的培养瓶中，37℃培养。

注：每个培养瓶中加入3-4ml无菌的1%的明胶溶液，摇匀使得明胶溶液完全铺满瓶底，放入37℃孵育，最少2小时，用前将明胶溶液倒了即可，明胶包被有利于细胞贴壁。

）7.培养24小时后，倒掉培养基，并用无菌的PBS溶液清洗2-3次，洗掉红细胞和死细胞，加入10ml新鲜的M199培养基。

9.一般培养5-7天，细胞可长满至80-90%单层，这时可以传代。

10.倒掉造就基，用无菌的PBS溶液清洗2-3次，插手2-3ml消化液（0.25%胰酶0.1%EDTA）消化细胞，在显微镜下窥察，一旦细胞变圆，即插手2-3倍的有血清的DMEM培养基终止反应。

11.用弯管将细胞吹打下来，并将所消化的细胞转移到一个50ml无菌离心管中。

2000转/分，离心3分钟。

12.倒掉上清,加入10ml新鲜培基,一般一瓶细胞可传代3-4瓶.以后照此传代培养.13.一般传代2-3代（培养了20天左右）用于做各种实验效果最好。

huvec细胞鉴定方法-概述说明以及解释

huvec细胞鉴定方法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述HUVEC（人脐静脉内皮细胞）是一种常用的细胞模型，在很多生物医学研究中被广泛应用。

正确认识和鉴定HUVEC细胞的方法对于确保实验结果的准确性和可靠性至关重要。

然而，由于其细胞特性的多样性和相似性，准确地鉴定HUVEC细胞一直是一个具有挑战性的课题。

目前，主要的HUVEC细胞鉴定方法包括形态学观察、免疫细胞化学染色和遗传学分析等。

形态学观察是最直观的方法，通过观察细胞的形态、大小、颜色等特征来初步鉴定。

然而，形态学观察仅仅是最初的鉴定步骤，无法提供确凿的证据。

免疫细胞化学染色是一种常用的鉴定方法，通过使用特异性的抗体标记HUVEC细胞所表达的特定蛋白，如血管内皮细胞相关抗原（CD31）、血管内皮细胞黏附分子（VCAM-1）等。

这种方法能够在细胞水平上确定细胞的身份，并且具有较高的特异性和敏感性。

另外，遗传学分析也是一种重要的HUVEC细胞鉴定方法。

通过检测HUVEC细胞中特定基因的表达情况或突变情况，如内皮细胞特异性基因（von Willebrand因子、血管内皮生长因子等）的表达，或特定突变基因（如朊病毒受体Eynoltin-2的突变）等，可以进一步确定细胞的身份。

综上所述，准确鉴定HUVEC细胞的方法包括形态学观察、免疫细胞化学染色和遗传学分析等多种方法的综合应用。

在进行HUVEC细胞相关研究时，应充分考虑综合运用这些方法来确保实验结果的准确性和可靠性。

未来的研究可以进一步改进和发展更加精确、高效的HUVEC细胞鉴定方法，以满足不断深入的实验需求。

1.2 文章结构文章结构部分的内容如下：文章结构部分旨在向读者介绍本篇文章的整体结构，以帮助读者更好地理解和阅读文章。

本文分为引言、正文和结论三个部分。

引言部分包括概述、文章结构和目的三个方面。

在概述中，将简要介绍HUVEC细胞的重要性和研究价值。

文章结构部分将向读者展示本文的整体框架，以便读者在阅读过程中能够有条不紊地理解文章内容。

人脐静脉内皮细胞的分离及原代培养体会

人脐静脉内皮细胞的分离及原代培养体会杜利君;蒋兴亮【摘要】目的:建立一种操作简便、且能够获得数量较多及活力良好的人脐静脉内皮细胞的分离、培养方法.方法:采用0.1％ IV型胶原酶灌注消化分离人脐静脉内皮细胞,将其置于含有20％胎牛血清、内皮细胞生长因子及肝素的M199培养基内培养,倒置显微镜观察内皮细胞生长情况,免疫荧光方法鉴定内皮细胞的Ⅷ因子相关抗原.结果:细胞呈梭形或椭圆形生长,单层铺路石状排列或呈漩涡状排列.免疫荧光检测结果显示细胞的胞浆内有大量绿色荧光颗粒,Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应.结论:实验建立的人脐静脉内皮细胞分离和培养方法简单、可靠,且能获得足够数量和高纯度的血管内皮细胞,为进一步研究人体大血管内皮细胞的功能奠定了较好的基础.【期刊名称】《川北医学院学报》【年(卷),期】2013(028)001【总页数】4页(P48-51)【关键词】内皮细胞;脐静脉;细胞培养【作者】杜利君;蒋兴亮【作者单位】川北医学院附属医院,四川南充637000【正文语种】中文【中图分类】R329.2体外建立人血管内皮细胞模型是研究人体大血管内皮功能的主要手段之一。

由于内皮细胞株ECV304在形态学、基因学等生物特性上与内皮细胞比较存在明显差异［1］，因此，体外分离和原代培养人脐静脉血管内皮细胞(human umbilicalvein endothelial cells，HUVECs)已成为国内外学者获取内皮细胞的重要途径。

本实验在借鉴其他学者体外分离、培养HUVECs技术的基础上，通过大量的实验并对此加以改良，旨在建立一种操作简便、且能够获得数量较多及活力良好的HUVECs的分离、培养方法，为进一步研究血管内皮细胞的功能及阐明相关疾病的生理和病理机制奠定基础。

1 材料与方法1.1 材料M199培养液和胎牛血清分别为Invitrogen公司和Hyclone公司产品，IV型胶原酶、内皮细胞生长因子(ECGS)、肝素钠均为Sigma公司产品，胰蛋白酶为Amresco公司产品，PBS、兔抗人Ⅷ因子抗体及FITC标记的羊抗兔IgG抗体为北京中杉金桥公司产品，青霉素和链霉素为华北制药股份有限公司产品。

血管内皮细胞原代培养(人脐带静脉灌流消化法)

血管内皮细胞原代培养（人脐带静脉灌流消化法）
内皮细胞易于从大血管分离培养成单层细胞，对于研究内皮细胞再生、肿瘤促血管生长因子（tumor angiogenesis factor,TAF）等有很大价值。

研究人内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法最为简便，其法如下：
1、产后新鲜脐带，无菌剪取10—15厘米长一段，如不能立即培养，可
于12小时内保存于4℃。

2、用三通注射器吸取温PBS液注入脐静脉中洗去残血，在入口处用线
绳扎紧，以防液体返流。

3、用血管钳夹紧脐带一端，从另一端向脐静脉中徐徐注入终浓度为0. 1%的粗制胶原酶，充满血管，消化3—10分钟；注入口用线绳扎，以防
液体返流。

4、吸出含有内皮细胞的消化液，于离心管中，注入温PBS轻轻反复冲
洗后，一并注入离心管中（此步骤可重复）。

5、离心去上清，加入RPMI1640培养液制成细胞悬液，接种入培养器皿中，置温箱培养。

两至三天可见细胞长成单层。

•。

人脐静脉内皮细胞特异基因

人脐静脉内皮细胞特异基因
人脐静脉内皮细胞特异基因指的是在人脐静脉内皮细胞中表达高水平的基因。

内皮细胞是血管壁的主要组成部分，具有多种功能，包括调节血管平衡，参与炎症反应等。

人脐静脉内皮细胞特异基因的研究可以揭示脐静脉内皮细胞的特殊特性和功能。

一些已知的人脐静脉内皮细胞特异基因包括：1. 血管内皮生长因子（VEGF）：促进血管生成和维持血管稳态的重要因子。

2. 血小板衍生生长因子（PDGF）：参与血小板功能和创伤修复。

3. 血管紧张素转换酶（ACE）：参与血管紧张素的合成和代谢，调节血压和血容量。

4. 内皮一氧化氮合酶（eNOS）：产生一氧化氮，调节血管张力和血流。

5. 内皮细胞黏附分子（CAM）：介导内皮细胞与其他细胞的粘附。

这些基因的特异表达有助于人们了解脐静脉内皮细胞的功能和生理过程，为相关疾病的研究和治疗提供重要的参考。

人脐静脉内皮细胞的原代传代冻存复苏及鉴定

人脐静脉内皮细胞的原代传代冻存复苏及鉴定人脐静脉内皮细胞的原代培养和传代、冻存、复苏及鉴定1人脐静脉内皮细胞的分离及培养1.1 原代血管内皮细胞的获取与培养在细胞的获取方法上，有机械刮取、组织块移植和酶消化法3种。

前两种易混杂其他血管壁细胞,近年已逐渐被酶消化法取代。

其中胰蛋白酶灌注法及胶原酶消化法获取原代人脐静脉血管内皮细胞的方法。

1.1.1胰蛋白酶消化法在无菌条件下取新生儿脐带，剪去钳痕和凝血块阻塞部分，找到脐静脉。

一端插上带有胶管的玻璃管后结扎固定，经胶管接注射器，用生理盐水灌洗。

待脐静脉内的残血除净后，用37℃磷酸盐缓冲液(浓度0.01 mol/L，pH=7.6)冲洗2次，将另一端用铁夹夹闭，向脐静脉内灌注0.25%胰蛋白酶8~10 mL，夹闭胶管放入已灭菌的大平皿中。

37℃孵育12 min，在此期间经常翻动脐带，使酶溶液在血管内流动，促使内皮细胞与酶均匀接触。

取出脐带轻轻挤压管壁，将含有内皮细胞的胰蛋白酶注入50 mL锥形离心管中，加入小牛血清2 mL终止酶反应，再以30 mL磷酸盐缓冲液冲洗管腔，流出液一并入离心管，1000 r/min离心10 min，弃上清(小牛血清及磷酸盐缓冲液)，加入含有10%小牛血清的IMDM培养液，充分混合制成细胞悬液。

取0.1mL 细胞悬液在血细胞计数板计数。

最后调细胞数，以1×105mL接种至24孔培养板中，每孔1mL。

置于5% CO2，37℃静止培养24 h更换培养液，以除去未贴壁的细胞。

以后每隔2天换液1次，维持细胞的营养和内环境稳定。

1.1.2胶原酶消化法在无菌条件下取新生儿脐带，剪去钳痕和凝血块阻塞部分，用磷酸盐缓冲液初步清洗，找到脐静脉后，用50 mL注射器吸取磷酸盐缓冲液反复灌注冲洗，洗净残留的血液后用止血钳封住一端，用注射器从另一端灌入15mLⅡ型胶原酶。

超净台内温度一般高于室温，此条件下胶原酶作用15min，期间可不时晃动。

消化完毕打开止血钳，将消化液流入事先准备好的离心管中，用注射器吸取1倍于消化液体积的内皮细胞培养基灌洗消化后的血管，收集并与消化液合并，900 r/min离心10min，弃去上清，加入事先孵育至37℃的细胞培养液，吹打均匀。

人脐静脉内皮细胞特异基因

人脐静脉内皮细胞特异基因摘要：1.人脐静脉内皮细胞简介2.人脐静脉内皮细胞的功能与应用3.人脐静脉内皮细胞特异基因的研究进展4.人脐静脉内皮细胞特异基因的应用前景正文：【人脐静脉内皮细胞简介】人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，简称HUVECs）是一种来源于脐带组织的干细胞。

脐带是哺乳动物连接胎儿和胎盘的管状结构，其中包含脐动脉、脐静脉、卵黄囊血管等。

脐静脉内皮细胞是脐静脉的重要结构组成细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。

【人脐静脉内皮细胞的功能与应用】脐静脉内皮细胞具有分化为血管内皮细胞的潜能，因此在血管内皮研究领域被广泛应用。

脐静脉内皮细胞具有以下特点：1.取材容易，来源充足：脐静脉内皮细胞的取材较为容易，来源也比较充足，有包括产品、服务在内的厂家提供。

2.具有干细胞特性：脐静脉内皮细胞是一种干细胞，理论上可以进行无限次传代。

3.实验应用广泛：在血管内皮实验中，通常选用脐静脉内皮细胞作为细胞模型。

【人脐静脉内皮细胞特异基因的研究进展】人脐静脉内皮细胞特异基因是指在脐静脉内皮细胞中特异性表达的基因。

研究这些特异基因有助于深入了解脐静脉内皮细胞的生物学特性、功能及在疾病发生发展中的作用。

近年来，随着基因测序技术的发展，许多研究都聚焦于人脐静脉内皮细胞特异基因的鉴定和功能研究。

【人脐静脉内皮细胞特异基因的应用前景】人脐静脉内皮细胞特异基因的研究进展为相关领域的研究提供了新的思路和方向，有望在以下方面取得应用：1.疾病诊断：某些脐静脉内皮细胞特异基因的表达异常可能与某些疾病的发生发展密切相关，因此研究这些基因可能有助于疾病的早期诊断和预后评估。

2.干细胞治疗：脐静脉内皮细胞具有分化为血管内皮细胞的潜能，未来可能通过引入脐静脉内皮细胞特异基因，调控干细胞分化，以实现更有效的干细胞治疗。

3.药物研发：针对脐静脉内皮细胞特异基因的药物研发，可能有助于治疗与这些基因相关的疾病，如心血管疾病等。

细胞说明书（huvec）

细胞说明书（HUVEC）
细胞名称：HUVEC（中文名称：人脐静脉内皮细胞）
细胞简介：HUVEC细胞为人脐静脉内皮细胞，来源于人脐静脉，中文名为人脐静脉内皮细胞，正常的细胞形态为上皮样，贴壁生长。

培养方法：
冻存方法：
For research use only
T25瓶细胞处理方法
收到细胞后，检查外包装是否完整，细胞培养瓶是否完好。

如有破损漏液等问题，请即时联系
我们。

1.75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。

2.肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（40
×,100×,200×各一张）。

3.将细胞放入37度培养箱中预温1-2小时后再做处理，以稳定细胞状态。

4.预热培养基（含10%胎牛血清，1%双抗）。

5.若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。

每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。

放
到37度培养箱培养。

待细胞密度达到80%以上，进行传代。

6.若细胞密度较大，达到80%以上，将细胞传到10cm培养皿培养。

7.传代时，T25瓶里保留部分细胞，同步培养，直到能确保10cm培养皿中的细胞状态良
好。

人脐静脉内皮细胞的分离及原代培养体会

一
步研究人体大血管内皮细胞的功能奠定了较好的基础。
【关键词】内皮细胞；脐静脉；细胞培养【文。章编号】１００５ — ３６９７（２０１３）０１ — ００４８ — ０４【中图分类号】Ｒ３２９．２【文献标识码】Ａ
Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＡｉｌｆｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｆｏＮｏｒｔｈＳｉｃｈｕａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｎａｎｃｈｏｎｇ６３７０００，Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｃｈｉｎａ）
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｍｅｔｈｏｄｓｏｆｉｓｏｌａｔｉｎｇａｎｄｃｕｌｔｕｒｉｎｇｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ（ＨＵＶＥＣｓ）ｉｎｖｉｔｒｏ．
ＤＵＬｉ．ｊｕｎ。ＪＩＡＮＧＸｉｎｇ．１ｉａｎｇ
（１．ＮａｎｃｈｏｎｇＣｅｎｔｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ＆ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＮｏｒｔｈＳｉｃｈｕａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｆｏＭｅｄｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ

人脐静脉内皮细胞的研究和应用. 看过的综述pdf

约，绝大部分对于人血管内皮的研究不能直接通过角形，有一个卵圆形的核位于细胞中央，相差显微镜真看
在体实验来进行，更多情况下，都是建立在体外培养下，细胞边界清晰，细胞之间可见交错结合。而且经
的工具细胞的基础上来实施的。长期以来，对于人自体血管内皮细胞的各项研究决大多数是基于人脐
92 h。在培养 3 个月的时候，经过光镜、电镜、免疫组啊但是可
信吗
化的重新检测，细胞与取材初期相比没有变化。Jaffe
医学综述 2011 年 4 月第 17 卷第 7 期 Medical Recapitulate，Apr 2011，Vol． 17，No． 7
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等［3］的这种方法由于其令人满意的细胞获得量和纯度得到了后人的纷纷效仿，此后关于获取原代 HUVEC 的方法绝大多数是沿用该办法或略加改进而成［5，6］。
免疫组化提示培养的内皮细胞具有平滑肌表型的肌球蛋白；并且具备红细胞表面抗原（ ABH 抗原系统），其中 H 型抗原高表达，A 和 B 型抗原也存在，但是表达较弱。通过这些结果，一方面与在体的脐静脉内皮细胞进行了呼应，另一方面也与同时培养的平滑肌细胞或成纤维细胞进行了区分。
内皮细胞所有在体功能都可以通过体外培养来得以实现，这也使研究内皮细胞在不同的刺激和培养条件下的反应成为一种可能［7］。如内皮在血管收缩中发挥的作用，应力、缺氧条件下的细胞反应，血管重塑和血管形成，凝血和纤溶，与其他细胞（平滑肌细胞、血细胞、肿瘤细胞等）的相互作用。原代内皮细胞由于最接近本体细胞，因此，在这些研究领域具有重大意义。