金黄色葡萄球菌 说明书
金黄色葡萄球菌实验标准操作程序
金黄色葡萄球菌实验标准操作程序岗位名称检验员执行人员检验员技能要求掌握实验技能监控人员检验员监控频率实验过程检验方法对照试验作业条件在无菌室内操作作业步骤1、超净工作台与无菌室紫外灯照射半小时，通风半小时后进入无菌室操作；2、样品用75%酒精喷洒后放入传递窗，在无菌室操作台按顺序摆放后再用75%酒精均匀喷洒；3、操作前手用75%酒精消毒，剪样前用酒精棉球擦拭样品表面；4、固体和半固体样品：称取25g样品，放入225ml生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1-2min，制成1:10的样品匀液。
5、液体样品：用微量移液器吸取25ml样品置盛有225ml生理盐水的无菌锥形瓶中（瓶内置适量的无菌玻璃珠），充分混匀，制成1:10的样品匀液。
6、用1mL微量移液器吸取1:10的样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入含有9ml 灭菌生理盐水试管内（吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振荡试管混匀或换用1支1mL无菌吸管反复吹打使混匀，做成1:100的稀释液。
7、按上述操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1ml灭菌枪头。
8、第一方法根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2-3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度分别吸取1mL样品匀液以0.3mL、0.3mL、0.4m接种量分别加入3块Baird-Parker琼脂平板，然后用无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。
使用前，如Baird-Parker平板表面有水珠，可放在25 ℃～50 ℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。
9、在通常情况下，涂布后，将平板静置10 min，如样液不易吸收，可将平板放在培养箱36 ℃±1℃培养1 h；等样品匀液吸收后翻转平皿，倒置于培养箱，36 ℃±1 ℃培养，45 h～48 h。
10、典型菌落计数和确认10.1 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径为2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌简介葡萄球菌葡萄球菌属（Staphylococcus）至少包括有20个种。
其中金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，引起许多严重感染。
典型的金黄色葡萄球菌为球形，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。
是一种不利于人体的细菌。
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%-15%NaCl肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
在干燥环境中存活数月；空气中存在，但不繁殖。
耐热性强，加热70℃1h，80℃30min不被杀死；耐低温，在冷冻食品中不易死亡；耐高渗，在含有50%-66%蔗糖或15%以上食盐食品中才可被抑制，能在15%NaCl和40%胆汁中生长。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
有金黄色葡萄球菌感染者，可选用：红霉素、新型青霉素、庆大霉素、万古霉素或先锋霉素Ⅵ治疗。
流行病学特点金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
因此，食品受其污染的机会很多。
美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，中国每年发生的此类中毒事件也非常多。
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。
此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。
金黄色葡萄球菌 说明书
保存条件： 室温（1℃〜30℃）
保质期限： 生产后12个月
包装规格： 4个×10袋∕盒 4个×60袋∕箱
产品编号： 06729
06730
生产厂家： 为本公司采用独自的专利技术而生产
010-84827828 | info@ |
200907XSA-CJ01
200907XSA-CJ02
明
接种
用说
3
培养
使
吸取1 mL样品匀液
确认培养基凝固后，将测试皿盖子 朝下置于培养箱内，36 ℃ ± 1 ℃ 下培养24 h ± 2 h
计数或钩菌
揭开测试皿盖子
使用照明及放大镜或菌落计数器等
进行计数
(选择菌落数在15〜150之间的稀释度，两个测试 皿菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克（或毫 升）样品中金黃色葡萄球菌数，以 CFU/g (CFU/mL)表示。)
明
准备测试皿
制备稀释液
使
用说
2
检样 制备10倍系列稀释样品匀液
剪开包装袋
以无菌操作称取 样品25 g(mL)
加入225 mL磷酸 盐缓冲液或生理 盐水
拍打1 min〜2 min制成1：10的 样品匀液 1：10样品匀液
取出4连测试皿 （或折取所需数的测试皿后封严包 装袋，将其存放于阴凉干燥处）
吸取1：10样品匀 液1 mL
（◇：其它葡萄球菌ຫໍສະໝຸດ 落数=2）例1例 为从背面照明的照片 例 为从正面照明的照片
例3
菌落总数超过300时，请利 用测试皿底面的1 cm2格子 内的平均菌落数乘以20得 出测试皿的估计菌落总数
例2
例2
例4
○：金黃色葡萄球菌菌落数=133
（◇：其它葡萄球菌菌落数=79）
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
生物学特性：
1.球菌，直径0.8-1.0μm左右，显微镜下排列成葡萄串状
2.无芽胞、鞭毛，无荚膜
3.革兰氏染色阳性
4.化能异养菌，呼吸代谢和发酵代谢
5.高度的耐盐性（10-15%NaCl肉汤中生长）
培养特性：
1.营养要求不高
2.需氧或兼性厌氧，在好氧环境下生长最好
3.最适生长温度37°C，干燥环境下可存活数周
4.最适生长pH 7.4
5.菌落光滑、低凸、闪光、奶油状、并且有完整的边缘。
6.血平板菌落周围形成透明的溶血环
生化特性：
（1）可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
（2）金黄色葡萄球菌在厌氧条件下分解甘露醇产酸（非致病性菌则无此现象）
（3）许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
（4）具有较强的抵抗力，磺胺类药物敏感性低，对青霉素、红霉素等高度敏感
贴膏剂预处理
1.取规定量供试品
2.去掉贴膏剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上
3.用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起
4.将其置于适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯80 或卵磷脂）的稀释剂中
5.用力振荡至少30 分钟，制成供试液
生化试验：
血浆凝固酶为阳性（应呈凝固状）阳性对照管液呈凝固状
阴性对照管血浆流动自如。
凝固为阳性反应，不凝固为阴性反应。
6.金黄色葡萄球菌GB 4789.10-2016
• 超级细菌：耐甲氧西林金葡（万古霉 素）
金黄色葡萄球菌生物特征
• 形态特征：革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。
无鞭毛、 无芽胞、有荚膜（体外培 养一般不产生）。 在陈旧培养物中，衰老的菌体常转 为革兰氏阴性。 • 培养特性：最宜温度：37℃（6.5-46 ℃） 最适宜pH:7.4(4.2-9.3） 耐盐性：可在10%-15% NaCl，40%胆汁中生长 • 能产生色素、血浆凝固酶、接触酶、肠毒素等
定性检测——选择性增菌
• 步骤：称取25g样品至盛有225ml 7.5%氯化 钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的容器 中，均质。液体样品量取25mL。 • 作用：1，复苏细菌； 2，选择性增菌 • 操作要点：1，准确称（量）取； 2，按标准要求时间温度培养
定性检测——平板划线分离
• 步骤：分别用接种环取培养液1环，划线接 种于一个Baird-Parker平板和一个血平板（， 于36±1℃分别培养18-24h（血平板）或4048h（ Baird-Parker平板） • 作用：以划线方式在琼脂平板上分离出单菌 落，通过单菌落的菌落形态判别出具有典型 形态的可疑菌落进行下一步生化及血清实验 确定。 • 操作要点：1，保持用于划线平板表面干燥 2，必须在平板中画出单菌落 3，用于划线平板需要现配现用
定性检测——平板划线分离
菌落形态：白色或者金黄色菌落 ，周围有透明溶血环（β-溶血）。 主要成分：蛋白胨，牛肉粉，脱 纤维羊血
注意点： 一，使用前观看平皿是否有干裂或染菌；
二，开封后未使用完的培养基要及时放于冰箱保存。
定性检测——血浆凝固酶鉴定试验
• 步骤：可疑菌落+5mLBHI→ 36 ℃±1 ℃培养18-24h； 0.5mL兔血浆+0.2-0.3mL BHI培养物→ 36 ℃±1 ℃ 培养6h； 每半小时观察； 同时设置阳性（如：ATCC 6538)、阴性（如：表葡 ATCC 12228) • 阳性现象：试管倾斜或倒置时，呈现凝块，即凝固 注意点： 现象， 1，必须每半小时观察； 或凝固 体积大于原体积的一半。 2，陈旧培养物（培养超过18-24h）或生长不良
金黄色葡萄球菌滤液制剂使用说明书
金黄色葡萄球菌滤液制剂使用说明书
【药品名称】
通用名：金黄色葡萄球菌滤液制剂
曾用名：金葡液
英文名：Staphylococcus aureus Culture Filtrate
汉语拼音：Jinhuangse Putaoqiujun Lüye Zhiji
主要组成成分：蛋白质、多肽、十八种氨基酸、血浆蛋白凝固物
【性状】本品为微黄色澄明液体，无沉淀、无异物。
【药理毒理】金黄色葡萄球菌通过促进毛细血管生长、促进血肿吸收、机化和加速骨痂形成促进骨折愈合。
经动物急性毒性、长期毒性、异常毒性、过敏性试验及溶血试验证实，本品无毒副作用。
LD50>500ml/kg。
【适应症】用于治疗骨折，能促进骨痂生长，加速骨折愈合，适用于骨折延迟愈合或不愈合。
【用法用量】骨折断端局部肌内注射，5天注射1次，每次1～2.0ml，1个月为1个疗程，根据病情可适当延长或缩短。
【不良反应】可有局部肿胀疼痛，发热37.5～38.5℃之间，6～12小时左右自行消退，严重者或持续不退者予对症处理。
【禁忌】过敏体质，心、肾、肝功能严重不良，孕妇及局部皮肤条件不好的闭合骨折慎用。
【注意事项】
1.使用本品前应进行过敏试验。
2.对陈旧性骨折应用粗针头刺入骨折端或造成新创面后再注入药液。
3.严禁静脉注射。
4.本品应在有经验的专科医生指导下使用。
【孕妇及哺乳期妇女用药】尚不清楚，慎用。
【药物相互作用】尚不清楚。
【规格】凝固活性≥400μg/2ml/支【贮藏】2～8℃避光保存。
【有效期】2年。
科玛嘉金黄色葡萄球菌培养基使用说明
科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基使用说明书金黄色葡萄球菌是临床及食品工业中经常遇到的一种致病菌。
由金葡菌引起的院内感染正变得日益严重，因此，正确快速地检测金葡菌尤其是耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）就显得尤为重要。
科码嘉金葡菌显色培养基中添加了针对金葡菌的选择性色素，因而具有较高的特异性和灵敏度。
而且同常规培养基相比，能较好地消除假阳性提高金葡菌的检出率。
为筛选甲氧西林抗性菌株，可以在科码嘉金葡菌显色培养基中添加例如妥布霉素或甲氧西林等抗生素。
一、组分琼脂15.0g/L 蛋白胨及盐分65g/L 色素 2.5g/LpH6.9±0.2二、操作1．取瓶内干粉，溶于1000ml蒸馏水或纯水中，可以根据需要按照82.5 g/L 比例扩大、缩小。
2．将上述干粉缓慢倒入蒸馏水中，充分搅拌溶解。
3．加热至100℃，并按常规不断搅拌。
如果使用高压锅，无需加压，加热不能超过100℃。
混合物也可以在微波炉中加热，用此法加热，煮沸后混合物立即移出微波炉并轻轻搅拌，而后移入微波炉再加热，直至琼脂完全溶解（大量气泡代替泡沫产生，大约需要2分钟）。
4．使用倾注程序：将培养基水浴冷却至48℃，准备直径为90mm的已灭菌的带盖培养皿，每个培养皿接种1ml样品，然后倾注15±1ml上述溶解的培养基，混匀使其凝固，倒置，37℃培养24小时。
5．如果用表面接种程序：将培养基倾注于已灭菌的培养皿中，使其凝固，在室温可保存一天或在冰箱里贮存数天（避光，4℃）。
划线接种，37℃培养24小时。
三、贮存1.干粉需保存在15-30℃干燥环境中。
2.倾注好的培养剂在室温可保存一天，4℃冰箱中避光可以贮存两星期。
四、结果菌落色彩初筛微生物金黄色葡萄球菌其他紫红色、红色、粉红色蓝色、无色或奶油色注：最后的鉴定必须做补充实验。
★使用过的培养基需要在121℃灭菌至少20分钟才可以按照有关规定丢弃四、药敏实验为研究氧氟沙星和妥布霉素对金葡菌的抗菌性，培养基中加入抗生素，使其最终浓度为氧氟沙星2mg/l、妥布霉素8mg/l，孵育48小时。
金黄色葡萄球菌的检验
金黄色葡萄球菌的检验(定性检测)一．金黄色葡萄球菌的生物学特性金黄色葡萄球菌革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群；无芽孢，无鞭毛、无荚膜、不运动；兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好；大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄色葡萄球菌，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。
普通平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
主要存在于主要为淀粉类(如剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉、蛋类等。
二、培养基7.5%的氯化钠（三角瓶135mL）；BP平板培养基；血平板培养基；BHI肉浸液肉汤培养基（试管5个）。
三、金黄色葡萄球菌的定性检测主要包含四个步骤：样品处理；增殖培养；平板分离培养；鉴定（染色镜检和血浆凝固酶实验）。
1.样品的处理和增殖培养：样品为冷冻鱼丸，每组称量15g，放于研钵中，用研磨棒捣碎，放于135mL 7.5%的氯化钠肉汤中进行增菌培养，36℃±1℃培养18h～24h后，可观察到金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。
2.血平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于血平板上，36℃±1℃培养18h～24h。
（每组2个血平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个血平板）。
金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特征：菌落较大，圆形，光滑突起，湿润，金黄色（有时为白色），菌落周围为完全透明溶血圈。
3.BP平板划线培养：将样品增菌培养物，用接种环取一环划线接种于BP平板上，36℃±1℃培养18h～24h。
（每组2个BP平板接种增殖样品，1个平板划线接种金黄色葡萄球菌，每组共3个BP平板）。
金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落特征：菌落直径2-3mm，颜色从灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一浑浊带，其外层有一透明圈，用接种针触碰有奶油树脂的硬度。
金黄色葡萄球菌护理
患者康复情况
感染控制：金黄色 葡萄球菌感染的控 制情况
症状缓解：患者症 状的缓解程度
康复时间：患者康 复所需的时间
并发症发生率：患 者康复过程中并发 症的发生情况
1
2
3
4
护理质量评价
护理效果评估：评估护
01
理措施对金黄色葡萄球
菌感染的治疗效果
护理质量指标：包括感
04
加强营养支持： 保证患者摄入足 够的营养和水分， 增强抵抗力
03
合理使用抗生素： 根据病情和药敏 试验结果选择合
适的抗生素
护理效果评估
感染控制情况
感染率降低：金黄 色葡萄球菌感染的 发生率降低
患者康复速度加快： 患者康复速度加快， 缩短住院时间
抗生素使用减少： 抗生素使用量减少， 降低耐药性风险
金黄色葡萄球菌护理
刀客特万
目录
01. 金 黄 色 葡 萄 球 菌 简 介
02. 护 理 策 略 与 方 法
03. 护 理 效 果 评 估
金黄色葡萄球菌简介
微生物分类
属于革 兰氏阳
性菌
属于葡 萄球菌
属
常见于皮 肤、呼吸 道、消化 道等部位
具有较强 的耐药性， 容易引起
感染
生长环境
02
适宜生长温度： 37℃
治疗方案
抗生素治疗：选择敏感抗生 素，如青霉素、头孢类等
A
营养支持：补充营养，提高 免疫力
C
B
局部护理：保持伤口清洁， 避免感染扩散
D
观察病情：密切观察病情变 化，及时调整治疗方案
护理操作要点
保持清洁卫生： 勤洗手、勤换衣、 勤消毒
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌生物学性状1、形态与染色革兰阳性，球形，呈葡萄串状排列。
无芽孢、无鞭毛，体外培养时一般不形成荚膜，少数菌株的细胞壁外层可见有荚膜样黏液物质。
在某些化学物质（如青霉素）作用下，可裂解或变成L型。
2、培养特性需氧或兼性厌氧。
营养要求不高，在普通培养基中，37℃生长良好。
属内不同菌种可产生金黄色、白色或柠檬色等不同颜色的脂溶性色素并使菌落着色。
致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，于血琼脂平板上生长后，在菌落周围还可见完全透明溶血环（β溶血环）。
3、生化反应多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。
致病性菌株能分解甘露醇，产酸。
触酶阳性，可与链球菌相区分。
4、抗原种类多，结构复杂，以葡萄球菌A蛋白较为重要。
（1）葡萄球菌A蛋白（SPA）：90%以上金黄色葡萄球菌细胞壁表面存在SPA 蛋白。
在体内，SPA与IgG结合后所形成的复合物还具有抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等多种生物活性。
（2）荚膜多糖：利于细菌黏附道细胞或生物合成材料表面（如生物性瓣膜、导管、人工关节等）。
（3）多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁。
金黄色葡萄球菌中可提出A 群的多种抗原，其化学组成为磷壁酸中的N-乙酰葡糖胺核糖醇残基。
5、分类（1）按色素、生化反应等表型分类，分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌三类。
（2）根据有无凝固酶分型：可分为凝固酶阳性菌株和凝固酶阴性菌株。
6、抵抗力葡萄球菌对外界理化因素的抵抗力较强。
在干燥的脓汁或痰液中科存活2～3个月；加热60℃1小时或80℃30分钟才能将其杀死；耐盐，于100～150g/LNaCl 培养基中仍能繁殖。
对青霉素、金霉素、红霉素和庆大霉素高度敏感，对链霉素中度敏感，对磺胺、氯霉素敏感性差。
该菌易产生耐药性，对青霉素G的耐药菌株已达90%以上，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），已成为医院感染最常见的致病菌。
耐药性的产生机制与细菌的质粒或与细菌细胞壁成分改变和合成的量有关。
拜发金黄色葡萄球菌外毒素检测中文说明书
RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E酶联免疫法检测食品和细菌培养液中的金黄色葡萄球菌肠毒素（SET）A，B，C，D，E订货号：R4101体外检测试剂储存温度 2 - 8 °C拜发分析系统销售（北京）有限公司电话：+86 10 8458 3218 传真：+86 10 8458 0691地址：拜发分析系统销售（北京）有限公司北京市朝阳区霄云路26号鹏润大厦B2908邮编：100016欢迎随时联系德国拜发中国区：电话：客服中心：+86 10 8458 3218传真/邮箱：销售部：+86 10 - 84 58 32 18 - 223info@市场部：+86 10 - 84 58 32 18 - 217info@RIDA®和 RIDASCREEN®均为R-Biopharm 德国拜发公司的注册品牌标志制造商：R-Biopharm AG, Darmstadt, 德国R-Biopharm AG 拥有 ISO 9001 认证。
⎯⎯⎯⎯⎯RIDA® and RIDASCREEN®are registered trademarks of R-Biopharm AGManufacturer: R-Biopharm AG, Darmstadt, GermanyR-Biopharm AG is ISO 9001 certified.RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E 11-03-29产品简介RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E（订货号：R4101）金黄色葡萄球菌肠毒素分型检测试剂盒，采用三明治（夹心）酶联免疫反应法检测固态和液态食品及细菌培养物中的金黄色葡萄球菌肠毒素（SET）A，B，C，D，E。
试剂盒中含有酶联免疫检测所需的所有试剂。
试剂盒足够进行12次检测。
定量分析需要使用微孔板酶标仪。
样品处理：均质和离心检测时间：样品制备（以10个样品为例）..................约1小时检测过程（孵育时间）........................2小时45分钟检测限：液态样品 .................................. 0.25 ng 毒素/ml 样品固态样品................................. 0.625 ng 毒素/g 样品细菌培养液上层清夜................ 0.25 ng 毒素/ml 样品1. 用途RIDASCREEN® SET A,B,C,D,E金黄色葡萄球菌肠毒素分型检测试剂盒，采用三明治（夹心）酶联免疫反应法检测固态和液态食品及细菌培养物中的金黄色葡萄球菌肠毒素（SET）A，B，C，D，E。
金黄色葡萄球菌
葡萄球菌感染创口的革兰氏染色涂片
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和 侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小 板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使 血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核 酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎 的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F五种血清型。
比如：美国3M公司生产的金黄色葡萄球菌快速检测试片， 可以直接计数产生耐热核酸酶的金黄色葡萄球菌，操作简单， 缩短了时间。
金黄色葡萄球菌污染的控制
防止金黄色葡萄球菌污染食品 防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进 行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上 呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要 暂时停止其工作或调换岗位。 防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染：如牛奶厂要定 期检查奶牛的乳房，不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出 后，要迅速冷至-10℃以下，以防毒素生成、细菌繁殖。奶制品 要以消毒牛奶为原料，注意低温保存。 对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病 变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。
金黄色葡萄球菌的抗原构造及分型简介
对分型进行简单的了解 １、血清学分型： 金葡水解，获得两种抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。 蛋白抗原是凝集抗原，无特异性。 多糖抗原有特异性。 绝大多数金葡含有A型抗原，B型抗原主要存在于凝固酶阴 性菌株，C型抗原在致病性和非致病性菌株中都存在。 ２、噬菌体分型： ３、根据肠毒素分型： ４、根据血浆凝固酶分型：
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
1.形态与染色
形态：呈球形或椭圆形
大小：较大
染色性：革兰染色通常是G+
排列：典型的葡萄球菌排列呈葡萄串状
特殊结构:无鞭毛，无芽胞，少数有荚膜
2.培养特性
营养要求不高
菌落可出现金黄色、白色或柠檬色等色素。
致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，血琼脂平板上，菌落周围形成明显的全透明溶血环（ 溶血）。
在肉汤培养基中，呈现均匀混浊生长。
3.生化反应
能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。
触酶阳性。
(触酶实验。
触酶又称为过氧化氢酶，催化H2O2分解为H2O与O2。
)
致病菌株能分解甘露醇。
4.抗原
葡萄球菌A蛋白
荚膜多糖
多糖抗原
5.三种葡萄球菌的主要性状比较
6.抵抗力
葡萄球菌对外界理化因素的抵抗力较强，耐盐性强。
对龙胆紫、青霉素敏感。
由于广泛应用抗生素，耐药菌株增多，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)成为医院内感染最常见的致病菌。
致病物质
酶：凝固酶、纤维蛋白溶酶、耐热核酸酶、透明质酸酶、脂酶等
毒素：细胞溶素（α、β、γ、δ)、杀白细胞素、表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素-1、肠毒素等
其他：粘附素、荚膜、胞壁肽聚糖、SPA等
（1）凝固酶（coagulase）
使加有抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的耐热酶，可作为鉴定致病性葡萄球菌的重要指标。
凝固酶的作用：
保护作用：抵抗吞噬细胞的吞噬。
保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏。
使感染病灶具有局限化、脓汁粘稠和形成血栓等病理特性。
具有免疫原性。
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），为葡萄球菌属中的一种，广泛分存于自然界，空气、土壤、水及物品上，人和动物皮肤及与外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。
本菌可产生多种毒素及酶，这些毒性物质能引起局部及全身化脓性炎症，严重时可发展成为败血症和脓毒血症，是人类化脓性感染中重要的病原菌。
本菌抵抗力较强，干燥情况下能生存数月，80℃30min的条件下尚能存活，5%石碳酸或0.1%升汞溶液10~15min才会杀死。
金黄色葡萄球菌检查分别按增菌、分离、纯培养、革兰染色、镜检和血浆凝固酶试验等步骤进行。
2．仪器、设备及用具（参见大肠埃希菌2）。
3. 试液、指示液3.1 0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2无菌磷酸盐缓冲液3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液3.3革兰染色液。
3.4无菌枸橼酸氯化钠溶液3.5 血浆的制备以无菌注射器吸取灭菌的5%枸橼酸钠的0.9%的氯化钠溶液1ml，用无菌操作采取家兔（或羊、人）血9ml，轻轻混匀数分钟。
待血液不凝固时，徐徐放入灭菌离心管中，及时离心（500r/min 离心5min），分离血浆，用灭菌吸管将血浆转移至灭菌试管中，置冰箱备用。
临用前必须用已知血浆凝固酶试验阳性的金黄色葡萄球菌（如金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]测试，证明血浆合格后，方可用于试验。
3.6 1%酚磺酞指示液。
4.培养基4.1营养肉汤培养基。
4.2营养琼脂培养基。
4.3亚碲酸盐肉汤培养基。
4.4卵黄氯化钠琼脂培养基。
4.5甘露醇氯化钠琼脂培养基。
5.对照用菌液取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基内，36℃±1℃培养18~24h后，用0.9%无菌氯化钠溶液按10倍递增稀释至1:106，，加入含10~100cfu的对照菌菌液（一般用量为1:106，/0.1ml），作阳性对照用菌液。
其菌液浓度可用平板菌落计数法测得。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)
期与CA-MRSA感染或寄植者有接触； (4)属于CA-MRSA寄植率增加的相关人群； (5)流感并发或流感后肺炎； (6)以前有反复发生的疖或皮肤脓肿病史或家族史（在
过去6个月内发生≥2次）
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肺炎诊治与预防专家共识
• 不均一耐药性 • 广谱耐药性 • 生长特殊性 • 固有耐药 • 获得性耐药
CHENLI
8
1 不均一耐药性
• MRSA菌落内细菌存在敏感和耐药 两个亚群，即一株MRSA中只有一小部 分对甲氧西林高度耐药，在50 μg/ml甲 氧西林条件下尚能生存，而菌落中大多
数细菌对甲氧西林敏感，在使用抗生素
后的几小时内大量敏感菌被杀死，但少
• 医院获得性肺炎 (hospital-acquired pneunlonia，HAP)，指 患者入院时不存在、也 不处于感染潜伏期，而 于入院≧48h在医院内 发生的肺炎，包括在医 院内获得感染而于出院 后48h内发病的肺炎。
• 耐甲氧西林金黄色葡萄 球菌肺炎诊治与预防专 家共识
CHENLI
13
• 社区相关性MRSA肺炎 （CA-MRSA肺炎）：又称 为社区获得性MRSA肺炎 （CommunityAcquired MRSA Pneumon ia），是指肺炎患者在 门诊或入院48 h内分离 出MRSA菌株，并且在1年 内无住院或与医疗机构 接触史，无MRSA感染或 定植史，无留置导管和 其他经皮医用装置使用 史
疗药物）及伤口处理者； （4）在医院或血液透析 门诊接受透析治疗者
化疗或伤口护理者；（4） 到医院或透析门诊定期 接受血液透析者。
• 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肺炎 诊治与预防专家共识
金黄色葡萄球菌（牛肉膏蛋白胨培养基）
⾦黄⾊葡萄球菌（⽜⾁膏蛋⽩胨培养基）⾦黄⾊葡萄球菌（⽜⾁膏蛋⽩胨培养基）⼀、⽣物学特性典型的⾦黄⾊葡萄球菌为球型，直径0.8 ^m左右，显微镜下排列成葡萄串状。
⾦黄⾊葡萄球菌⽆芽胞、鞭⽑，⼤多数⽆荚膜，⾰兰⽒染⾊阳性。
⾦黄⾊葡萄球菌营养要求不⾼，在普通培养基上⽣长良好，需氧或兼性厌氧，最适⽣长温度37。
C，最适⽣长pH7.4。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。
⾎平板菌落周围形成透明的溶⾎环。
⾦黄⾊葡萄球菌有⾼度的耐盐性，可在10-15% NaCI⾁汤中⽣长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产⽓。
甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，⽔解尿素, 还原硝酸盐，液化明胶。
⾦黄⾊葡萄球菌具有较强的抵抗⼒，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等⾼度敏感。
⼆?流⾏病学⾦黄⾊葡萄球菌在⾃然界中⽆处不在，空⽓、⽔、灰尘及⼈和动物的排泄物中都可找到。
因⽽，⾷品受其污染的机会很多。
近年来，美国疾病控制中⼼报告，由⾦黄⾊葡萄球菌引起的感染占第⼆位，仅次于⼤肠杆菌。
⾦黄⾊葡萄球菌肠毒素是个世界性卫⽣问题，在美国由⾦黄⾊葡萄球菌肠毒素引起的⾷物中毒占整个细菌性⾷物中毒的33%，加拿⼤则更多，占4 5% ,我国每年发⽣的此类中毒事件也⾮常多。
⾦黄⾊葡萄球菌的流⾏病学⼀般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒⾷品种类多，如奶、⾁、蛋、鱼及其制品。
此外，剩饭、油煎蛋、糯⽶糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。
上呼吸道感染患者⿐腔带菌率83% ,所以⼈畜化脓性感染部位常成为污染源。
⼀般说，⾦黄⾊葡萄球菌可通过以下途径污染⾷品：⾷品加⼯⼈员、炊事员或销售⼈员带菌，造成⾷品污染；⾷品在加⼯前本⾝带菌，或在加⼯过程中受到了污染，产⽣了肠毒素，引起⾷物中毒；熟⾷制品包装不严，运输过程受到污染；奶⽜患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对⾁体其他部位的污染。
肠毒素形成条件：存放温度，在37°C内，温度越⾼，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；⾷物种类，含蛋⽩质丰富，⽔分多，同时含⼀定量淀粉的⾷物，肠毒素易⽣成。
6.金黄色葡萄球菌GB 4789.10-2016
金黄色葡萄球菌的检测方法
• • • • • • GB 4789.10-2016 ISO 6888 FDA(BAM) online chapter 12 化妆品卫生规范 USP/BP/EP ……
GB4789.10-2016的主要变化
• 1.删除了英文名称 • 2.修改操作程序，删除了分离培养基血平板 • 3.删除了增菌液10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 （跟国际接轨，FDA，ISO等均无定性方法， 且都使用7.5%氯化钠肉汤） • 4.修改葡萄球菌肠毒素检验为可选项
的，可能导致假阴性； 3，不能使用甘露醇氯化钠琼脂上的菌落，高盐 可能导致假阴性。
GB 4789.10-2010
第一法：定性检测
第二法：平板计数法
第三法：MPN计数法
平 板 计 数 法
平板计数法——平板接种
• 步骤： • 10倍系列梯度稀释，并选取2-3个适宜梯度； • 每个梯度吸取1mL,以0.3，0.3,0.4mL分别接种3 个BP平板； • 涂布，完全吸收样液后，倒置培养； • 选取3个平板菌落数合计20-200cfu的梯度平板， 计数典型菌落数 注意点： • 挑去5个典型菌落（不够5个全挑）做血浆凝 1，用于涂布平板必须干燥； 固酶实验。
• 如果金葡目标菌数量多，表明食品加工或 卫生欠佳，但并不足以证明该食品一定是 食品中毒的病原。除非已经证明其菌株的 产肠毒素能力。相反，未检出目标菌的食 品，仍有可能导致肠毒素中毒。
d-----稀释因子
平板计数法——计算
• e)两个连续稀释度平板菌落数均在20 CFU200 CFU之间，按以下公式计算：
T=
式中：
A1B1/C1＋A2B2/C2
1.1d
T --------样品中金黄色葡萄球菌二稀释度（高稀释倍数）典型菌落总数
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
日水 Compact Dry
用说
使
金黃色葡萄球菌测试皿X
1
S.aureus
S.epidermidis
◆ 金黃色葡萄球菌菌落显蓝色 其它葡萄球菌菌落显白色且形状小
◆ 36 ℃ ± 1 ℃培养24 h ± 2 h后计数
英文名称： Compact Dry X-SA
取得认证： (AOAC认证；MicroVal认证审查中）
保存条件： 室温（1℃〜30℃）
保质期限： 生产后12个月
包装规格： 4个×10袋∕盒 4个×60袋∕箱
产品编号： 06729
06730
生产厂家： 为本公司采用独自的专利技术而生产
010-84827828 | info@ |
200907XSA-CJ01
注于盛有9 mL稀 释液的无菌试管 中
标记所需事项
混合均匀，制成 1：100的样品匀 液 1：100样品匀液
(按上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液，根据对样品污 染状况的估计，选择2〜3个适宜稀释度的样品匀液)
1：---样品匀液 × （2〜3）
010-84827828 | info@ |
200907XSA-CJ02
明
接种
用说
3
培养
使
吸取1 mL样品匀液
确认培养基凝固后，将测试皿盖子 朝下置于培养箱内，36 ℃ ± 1 ℃ 下培养24 h ± 2 h
计数或钩菌
揭开测试皿盖子
使用照明及放大镜或菌落计数器等
进行计数
(选择菌落数在15〜150之间的稀释度，两个测试 皿菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克（或毫 升）样品中金黃色葡萄球菌数，以 CFU/g (CFU/mL)表示。)
（◇：其它葡萄球菌菌落数=2）
例1
例 为从背面照明的照片 例 为从正面照明的照片
例3
菌落总数超过300时，请利 用测试皿底面的1 cm2格子 内的平均菌落数乘以20得 出测试皿的估计菌落总数
例2
例2
例4
萄球菌菌落数=79）
例2 例 为从背面照明的照片
例 为从正面照明的照片
向测试皿的中心注入样品匀液 盖严测试皿盖子(每个稀释度做两个测试皿)
敬请注意 本使用说明 2〜3 是为了方便各位 工作人员来使用本测试皿而参照了 中华人民共和国国家标准《食品卫 生微生物学检验 金黃色葡萄球菌 计数》（GB/T 4789.37―2008）的 内容所作成的。 若有所需请各位任意依据其它标准 的记载内容来使用本测试皿。
北京博欧实德生物技术有限公司 丨 地址：北京市朝阳区北苑路奥运媒体村天畅园C1-2006 邮编: 100107 电话: 010-84827828 传真: 010-84827868
200907XSA-CJ04
010-84827828 | info@ |
200907XSA-CJ03
使
明
计数例及使用注意事项 用4说 本页用A4纸（210 × 297 mm）无余白打印时，测试皿图片的大小约等于实际产品的大小（77 × 58 × 7 mm）
例1
例1
○：金黃色葡萄球菌菌落数=12
菌落总数多不可计(TNTC) 时，请重新制备适当倍数 的稀释液
●请尽快使用开封后的测试皿，请不要使用已经变色的测试皿 ●请将使用完的测试皿进行灭菌后再废弃 ●当样品中有大量的测试皿含有显色基质反应酶时 ，会出现测试皿整体显色的现象 ●当超出本培养基的抑制范围时葡萄球菌以外的菌会形成红〜紫色的菌落 ●本说明中计数例的菌种为S.aureus和 S.epidermidis，当菌种不同时菌落形态会有差异 ●本说明计数例的照片颜色因为照明的方式不同会与实际肉眼直接观察到的颜色多少有些差异
明
准备测试皿
制备稀释液
使
用说
2
检样 制备10倍系列稀释样品匀液
剪开包装袋
以无菌操作称取 样品25 g(mL)
加入225 mL磷酸 盐缓冲液或生理 盐水
拍打1 min〜2 min制成1：10的 样品匀液 1：10样品匀液
取出4连测试皿 （或折取所需数的测试皿后封严包 装袋，将其存放于阴凉干燥处）
吸取1：10样品匀 液1 mL