TS-VD-542-01大山楂颗粒 微生物限度检查方法
药品微生物限度检查法
2019/2/17
30
注意事项
观察供试品MUG管时，可与阳性对照管、阴性对照 管同时在366nm紫外灯下观察。 在曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂平板上生长的可疑 菌落，务必挑选2-3个以上菌落分别做IMViC试验鉴 别。 在IMViC试验中，以灭菌接种环沾取菌苔，首先接 种于枸椽酸盐琼脂斜面上，然后再接种于蛋白胨水 等其它培养基上，切务将培养基带入枸椽酸盐琼脂 斜面上，以免产生假阳性结果。
2019/2/17
24
防止方法
加TTC：于倾注培养基前，在每1000ml营养琼 脂内加入灭菌1%TTC溶液1ml混匀后倾注平皿。 开盖干燥：将已凝固的琼脂平板开盖，倒置斜 放于净化工作台上，开机1-2h后合盖，再放培 养箱中
2019/2/17
25
异常菌数报告
在特殊情况下，营养琼脂培养基上生长的霉菌、
2019/2/17
18
操作要点
作供试品稀释时，每一稀释级都要更换吸管。 · 细菌培养48h，真菌培养72h，计数。如菌落极小，不 易辨认可适当延长培养时间。再点计菌落数。 含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培养基测定 霉菌数，用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基测定酵菌数， 并且合并计数。 若同一稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两 个平板的菌落数不能相差1 倍或以上。 使用灭菌吸管时，管尖不要接触可能污染的任何容器或 用具。 供试液稀释及注皿时应振摇后取均匀的供试液，以免造 成实验误差。
微生物限度检查法标准操作规程完整
目的建立微生物限度检查法标准操作规程，规范操作，保证结果的准确性。
范围成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。
责任微生物限度检验人员内容本检验操作规程依据中国药典2015年版四部《通则1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》和《通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法》进行检查。
微生物计数法一、计数方法1、微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
2、计数方法本法包括平皿法、薄膜过滤法。
3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。
4、菌种及菌液的制备4.1试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0袋），并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。
计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验。
4.2菌液制备按规定培养各试验菌株。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。
4.3阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
4.4培养基适用性检查按照表规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置规定的条件下培养。
微生物限度检查法操作规程
制药GMP管理文件一、引用标准：中华人民共和国S药典（2005年版）一部。
二、目的：本标准规定了微生物限度检查法标准操作规程。
三、适用范围：适用于微生物限度的检查。
四、责任者：质检人员。
正文：1、简述微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。
微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
供试品检查时，如果使用了表面活性、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响。
除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌培养温度为35～37℃。
检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10㎝2为单位报告。
检验量：检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml、㎝2）。
除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。
要求检查沙门氏菌的供试品，其检验量应增加10g或10ml。
检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品。
一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的3倍量供试品。
2、供试液的制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。
供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。
（1），液体供试品取供试品10ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液了。
油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。
水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
（2）固体、半固体或黏稠性供试品取供试品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液对至100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1：10的供试液，必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
微生物限度检查操作流程
微生物限度检查工作流程实验前：1.对实验器皿的准备：对玻璃器皿进行清洗，将洗净干燥的平皿、乳钵、刻度吸管等用牛皮纸包裹，放入鼓风干燥箱中于160℃干热灭菌2小时或放入高压蒸汽灭菌柜于121℃湿热灭菌30分钟，备用。
2.对实验用培养基及稀释液的准备：按规定比例配制实验所需的各种培养基及稀释液，包好，放入高压蒸汽灭菌柜于121℃湿热灭菌30分钟，备用。
3.洁净服的准备：将当天实验所用洁净服放入高压蒸汽灭菌柜于121℃湿热灭菌30分钟，备用。
实验中：1.将实验所需器皿、培养基、洁净服、样品、稀释液放入相应的传递窗中，打开紫外灯，照射30分钟。
2.打开洁净室的通风设备1小时以上，观察洁净室各个规定区域的压差是否符合相应规定范围，若不符合，则因通知设备部门及时进行调整。
3.进入洁净室，换上工作鞋，用洗手液洗手，烘干，换上洁净服，戴上口罩、手套，并与喷手器下用75%乙醇或0.1%新洁尔灭对双手进行消毒。
4.进入万级洁净走廊，观察各个规定房间的温度、湿度、压差是否符合规定，并与传递窗中将经紫外灯照射后的样品、器皿稀释液及培养基，放入相应的实验室（如微生物限度检查室或无菌检查室）。
并将培养基的温度控制在45℃以下（若培养基出现凝固现象时，因微波炉加热融化；若温度太高时，则因用纯化水降温至不烫手背宜。
5.打开超净工作台的紫外灯，照射30分钟，然后再打开超净工作台的通风设备。
用75%乙醇或0.1%新洁尔灭对实验所用工作台面进行擦拭消毒（消毒时应遵循由里到外，由上到下，由洁净要求高到洁净要求低的原则）。
6.按照适宜的次序于超净工作台内摆放好稀释液、天平、消毒液、集菌仪、剪刀、镊子等物品，用75%酒精棉球进行消毒，将样品内包装表面用碘酒棉球以及75%酒精棉球依次进行消毒。
将营养琼脂平板与超净工作台的做、中、右各置一个（平板需经下预培养48小时且无菌生长），开盖暴露30min，测定的沉降菌每平板不得超过1cfu，则符合百级超净工作台的沉降菌标准（注：在洁净工作台进行操作时，为防止污染，应用酒精棉球对双手反复消毒）。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程一、引言。
微生物限度检查是指在制药生产过程中，对原料药、辅料、中间体、制剂等药品进行微生物检查的一项重要工作。
微生物限度检查的目的是为了保证药品的质量和安全，防止因微生物污染而引起的药品变质和危害患者健康的风险。
本操作规程的目的是规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果准确可靠。
二、适用范围。
本操作规程适用于制药企业进行微生物限度检查的操作人员，包括检验员、操作人员等。
三、术语和定义。
1. 微生物限度，指药品中允许存在的微生物的最大数量，通常以菌落形成单位（CFU）或细菌总数来表示。
2. 微生物限度试验，是指对药品中的微生物进行检查的一种实验方法，包括细菌总数、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、霉菌和酵母菌等指标。
3. 标准菌株，指已经鉴定并保存在实验室中的具有代表性的微生物菌株。
四、操作流程。
1. 样品准备。
（1）取样品，按照规定的取样方法，从所检查的药品中取得代表性样品。
（2）样品处理，根据检测要求，对样品进行必要的处理，如稀释、均质等。
2. 培养基制备。
（1）准备培养基，根据检测要求，准备所需的培养基，包括琼脂培养基、液体培养基等。
（2）灭菌处理，对培养基进行高压蒸汽灭菌处理，确保培养基的无菌状态。
3. 菌种接种。
（1）接种方法，根据检测要求，选择适当的接种方法，包括平板法、涂布法等。
（2）接种数量，根据微生物限度试验的要求，按照规定的接种数量接种标准菌株。
4. 培养条件。
（1）温度控制，根据不同的微生物菌种，控制培养的温度，通常为30-35摄氏度。
（2）培养时间，根据微生物限度试验的要求，培养一定的时间，通常为24-48小时。
5. 菌落计数。
（1）观察菌落，根据培养基上的菌落形成情况，进行菌落计数。
（2）结果判定，根据菌落计数的结果，判定样品中微生物的数量是否符合规定的限度要求。
五、质量控制。
1. 内部质量控制，每批次微生物限度试验前，进行内部质量控制，确保实验条件的稳定性和可靠性。
药品微生物限度检查方法验证步骤及示教
药品微生物限度检查方法验证一般步骤1.样品及确定验证项目样品要求：不含菌或少量菌验证项目：根据药品用药途径、处方、制法确定。
细菌、霉菌及酵母菌计数验证（一般必作）；控制菌检查如为中药制剂必须查标准，根据用药途径、处方、制法确定控制菌检查项目。
特殊的如滴眼剂、用于烧伤、严重创伤等应根据制剂通则项下要求及微生物限度标准来确定。
2. 确定供试液制备方法3. 方法选择预试验（1）目的：确定样品对试验菌有无抑菌活性及计数验证各试验菌的回收试验方法。
（2）查资料，根据样品的功能、主治及所含成分等确定方法选择预试验方案。
（3）根据预试验结果确定各试验菌计数验证方法控制菌验证方法4. 验证试验：选择3个批号样品进行3次独立实验，证明方法的有效性；5. 据验证结果优化试验条件，建立微生物限度检查方法SOP。
6. 写出验证资料。
示教内容11.5.上午：菌液制备方法：一. 新鲜浓菌液制备（要求学员练习操作的内容）新鲜浓菌液接种：细菌大肠埃希菌[CMCC（B）44102]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]生孢梭菌[CMCC（B）64941]（厌氧梭菌）铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]培养基：营养肉汤3-5ml、硫乙醇酸盐流体培养基3-5ml接种及培养：1.分别取各试验菌半个--1个菌落分别接种营养肉汤（充分研匀、摇匀），36±1℃培养16-18小时。
2.生孢梭菌新鲜培养物取0.1ml接种硫乙醇酸盐流体培养基（临用前排氧）36±1℃培养18-24小时。
霉菌及酵母菌白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]培养基：改良马丁培养基3-5ml；改良马丁琼脂培养基斜面1.取白色念珠菌的菌落接种改良马丁培养基23-28℃培养24小时（可用36±1℃培养18-24）。
2.黑曲霉孢子悬液的制备：沾取黑曲霉孢子接种改良马丁琼脂培养（红字为示教内容基，培养5-7天待培养物黑色孢子生长（全部变黑，已制备好斜面培养物示教）加入5-10ml0.9%氯化钠溶液，小心振挡洗脱表面的黑色孢子1-2次，吸出洗脱液（注意不要触到菌丝体）即为孢子悬液。
大山楂丸质量分析实验报告
大山楂丸质量分析实验报告标题：大山楂丸质量分析实验报告一、引言大山楂丸是一种常见的传统中药饮片，具有健胃消食、舒缓肠胃不适等功效，深受广大消费者的喜爱。
然而，随着市场的扩大和行业竞争的加剧，大山楂丸的质量问题也日益突显。
因此，对大山楂丸质量进行分析具有重要的意义。
本实验旨在通过对大山楂丸的重金属、微生物和有效成分进行分析，并评估其质量。
二、实验方法1. 样品准备从市场上购买不同品牌的大山楂丸样品。
2. 重金属分析采用电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）对大山楂丸样品中的重金属（铅、汞、镉、砷）进行分析。
3. 微生物分析按中国药典2015版第二部进行微生物限度测试，采用菌落计数法和涂布平板法对大山楂丸样品中的总菌落数、霉菌和大肠杆菌进行测试。
4. 有效成分分析采用高效液相色谱法（HPLC）对大山楂丸样品中的主要有效成分（山楂酸、异山楂酮、山楂总皂苷）进行分析。
三、实验结果与讨论1. 重金属分析结果表明，所购买的大山楂丸样品中重金属含量均低于国家标准限定的允许值，满足质量要求，不存在重金属超标问题。
2. 微生物分析结果表明，大山楂丸样品中的总菌落数、霉菌和大肠杆菌数量均低于国家药典规定的限度要求，符合卫生要求。
3. 有效成分分析结果表明，不同品牌的大山楂丸样品中的山楂酸、异山楂酮和山楂总皂苷含量存在差异。
品牌A的山楂酸含量最高，品牌B的异山楂酮含量最高，品牌C的山楂总皂苷含量最高。
四、结论通过分析不同品牌的大山楂丸样品，发现其重金属含量均低于国家标准限定的允许值，满足质量要求。
微生物分析结果也表明大山楂丸样品符合卫生要求。
然而，不同品牌的大山楂丸中的有效成分含量存在差异，消费者在购买时可以根据自身需求选择合适的品牌。
五、建议建议生产企业在生产过程中加强对重金属的监测和控制，确保大山楂丸的质量。
同时，也应加强产品的有效成分分析和监测，提高产品的质量稳定性。
消费者在购买大山楂丸时应选择有信誉的品牌，并仔细查看产品的有效成分含量。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查操作规程微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠1.目的微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠建立一个微生物限度检查（包括细菌、霉菌、酵母菌）标准工作程序，规范QC微生物限度检查人员的微生物限度检查操作。
微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠2.范围微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠适用于本公司的细菌、霉菌、酵母菌的限度检测。
微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠3.责任者微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠QC微生物限度检查人员；质量管理部微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠4.内容微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠4.1检测准备微生物限度检查操作规程第2页/共6页文件类型操作规程（SOP）文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期馋架丘墨症纫青嘴葫碟弱嫉亦幽两膳苍灾四绒才煌赠阎股能陵副谦熙之诉康楼稳凋较佣蕊鉴丫怠稀只兼渍肉琐腾斥玛许卉圾誉歧叙厕班夷翰挞琳狠4.1.1 QC人员接到微生物限度检查的《工作进程计划单》后，核对《取样指令》，确定微生物限度检查所需的容器具、试液、培养基等的项目和数量，执行微生物检查准备工作操作程序和培养基配制操作规程，进行微生物限度检查前的准备工作。
大山楂颗粒稳定性试验方案(模板)
20XX年大山楂颗粒持续稳定性考察方案为了进一步确认销售的大山楂颗粒能够在标示的贮存条件下，产品有效期内符合质量标准的各项要求，按照有关规定进行在温度25℃±2℃、相对湿度60%±5%条件下24个月的长期稳定性考察。
1产品的包装、规格、生产批量、考察批次数：(1)包装：复合膜包装(BOPP/镀铝CPP)(2)规格：每袋装15g、每袋装150g(3)生产批量：100万袋(4)考察批次：①包装规格为15g∕袋X10袋/盒的每年考察一批次。
②包装规格为158/袋乂20袋/包的每年考察一批次。
③规格为150g∕袋的每年考察一批次。
2.产品介绍：大山楂颗粒执行标准为《部颁药品标准》中药成方制剂第五册；批准文号为国药准字Z45020755；包装形式为复合膜包装，规格：15g∕袋、I50g∕袋；贮存条件为密封；有效期为24个月。
3.相关的稳定性检验方法：包装容器的密封性一目测、感观；性状一目测；水分一水分测定法；溶化性一溶化性检查法；粒度一粒度检查法。
4.检验方法依据：(1)《部颁药品标准》中药成方制剂第五册11页大山楂颗粒(2)《中国药典》(2023版)四部“颗粒剂”通则。
5.合格标准：根据《部颁药品标准》中药成方制剂第五册大山楂颗粒项下质量标准进行包装容器的密封性、性状、粒度、溶化性、水分的检查，结果符合内控标准规定。
6.容器密封系统的描述：大山楂颗粒所用包装为药用包装复合膜（BOPP/镀铝CPP）,包装严密防潮，能保证产品质量。
7.试验间隔时间（测试时间点）：每批样品自贮存开始时（0月）检测一次，随后每3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月分别检测一次。
8.贮存条件：密封，在温度25C±2C,相对湿度60%±5%的条件下放置。
（XXXTOO型恒温恒湿箱）9.检查项目：根据《中国药典》2023年版四部9001原料药与药物制剂稳定性试验指导原则项下中稳定性重点考察项目参考表制定该品种检查项目为：包装容器的密封性、性状、溶化性、粒度、水分。
微生物限度检查
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌检查、白 色念珠菌检查； （5）将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 白色念珠菌检查用培养基分别划线于相应 的选择性平板上；
27
（6）观察上述划线平板上的菌落是否为疑 似菌，如果无菌生长或无疑似菌报告未检 出，如果有疑似菌则要经过下一步的确证 实验，经实验确认的控制菌，则报告检出；
进行限度检查时，操作人员的无菌观 念应贯穿全过程，即在检查过程中的每一 空间、每一动作、任一器具未经灭菌处理 都是带菌的，供检样品或接种物与之接触 都会造成污染，即使在洁净室内操作，仍 须严格按照无菌程序操作，避免操作不当 的污染造成检验结果错误。
16
三、微生物检查的内容和检验方法
制定不同药品微生物限度标准须按其 使用要求、制剂类型、原料性质以及生产 条件等综合考虑，对各种繁多的药品，各 国药典均规定了相应的微生物限度标准， 这些标准的要求基本相同，但不一致。 我 国药典，境复杂
由于药品的种类繁多，剂型多样，使 染菌的生境多样而复杂，在某些药品中大 量繁殖，而在另一些药品中不能生长。
药物的pH、渗透压、含水量以及污染 菌的检查常会出现不同的结果，如一些非 水溶性油剂、软膏剂，由于其疏水性致使 菌细胞与培养基成分隔离或因缺氧而难以 生长。
9
2、药品微生物限度检查的基本条件
对一些已确立检验方法的品种，采用 可行的供试液制备方法和固定的培养基， 在进行常规法时可免去验证实验的繁琐步 骤，制作一些必要的对照实验。通常的对 照实验有二种，一种是阴性对照，另一种 是阳性对照。
15
6）严格无菌环境及操作
实验操作应在环境洁净度10000级和局 部洁净100级的单向流空气区域内或隔离系 统中进行。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查操作规程1.目的建立一个微生物限度检查（包括细菌、霉菌、酵母菌）标准工作程序，规范QC微生物限度检查人员的微生物限度检查操作。
2.范围适用于本公司的细菌、霉菌、酵母菌的限度检测。
3.责任者QC微生物限度检查人员；质量管理部4.内容4.1检测准备4.1.1 QC人员接到微生物限度检查的《工作进程计划单》后，核对《取样指令》，确定微生物限度检查所需的容器具、试液、培养基等的项目和数量，执行微生物检查准备工作操作程序和培养基配制操作规程，进行微生物限度检查前的准备工作。
4.1.2 为了保证被检品在取样后规定的时间内完成检验，取样前应准备好检验需要的各种器皿（清洗→干燥→包裹）、培养基和稀释剂等（配制→分装→包裹），并灭菌备用。
4.2 供试液的制备4.2.1 供试液供试液是指按照供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法将供试品制成供试验用的均匀液体。
4.2.2 供试液的制备根据供试品的理化特性与生物需特性，采取适宜的方法制备供试液。
如果使用了乳化剂、分散剂、中和剂和灭活剂，其用量应证明是有效的，并对微生物的生长和存活无影响性。
4.2.2.1 可溶性液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。
可溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。
4.2.2.2 非水溶性液体供试品油剂可先加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀，然后再加0.9%无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100m，混匀，作为供试液。
4.2.2.3 水溶性固体、半固体或黏稠性供试品称取供试品10g，置PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml中，用匀浆仪或其他适宜方法，混匀，作为1：10供试液。
必要时可加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
4.2.2.4 非水溶性供试品取供试品5g(5m1)，加入含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使其充分乳化，作为1:20供试液。
微生物限度检查法简介
微生物限度检查法简介目录•1拼音•2注解1拼音wēi shēng wù xiàn dù jiǎn chá fǎ2注解微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查 *** 。
包括染菌量及控制菌的检查。
供试品应随机抽样。
如遇有异常或可疑的样品，须选取有疑义的样品。
一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。
供试品在检验前不得开启，在检查前及检查中应防止供试品污染菌受损、致死或繁殖。
凡能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出发霉、变质的药品，可直接判为不合格，无需再抽样检查。
检查的全部过程均应严格遵守无菌操作，严防再污染。
除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25℃～28℃，控制菌培养温度为36±1℃ 。
细菌、霉菌（酵母菌）计数和控制菌检查，均应作对照试验。
检验结果的报告以1g、1ml或10cm<2>为单位。
培养基及其制备 *** ：1 、营养琼脂培养基与营养肉汤培养基见无菌检查法（附录ⅩⅢ Ｂ）2 、虎红琼脂培养基胨5g虎红（四氯四碘荧光素）0.0133g葡萄糖10g（或0.133％虎红溶液10ml）磷酸二氢钾(KH2PO4)1g琼脂15～20g*** 镁(MgSO4.7H2O)0.5g水1000ml除葡萄糖、虎红外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、虎红，分装，115℃灭菌30分钟。
3 、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)胨10g琼脂15～20g酵母浸出粉5g水1000ml葡萄糖20g除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热融化后，滤过，加入葡萄糖，分装，115℃ 灭菌15分钟。
4 、胆盐乳糖培养基(BL)胨20g牛胆盐1.3g乳糖（或去氧胆酸钠0.25g）氯化钠5g水100ml磷酸氢二钾(K2HPO4)4.0g磷酸二氢钾(KH2PO4)1.3g除乳糖、牛胆盐外，取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，115℃灭菌30分钟。
大山楂颗粒质量检查实验报告
大山楂颗粒质量检查实验报告实验目的：1.了解大山楂颗粒的基本性质及其质量检查方法；2.掌握大山楂颗粒的质量检查步骤和操作技巧。
实验原理：实验步骤：1.取一定量的大山楂颗粒样品；2.检查样品外观，包括颜色、形状和大小等方面；3.定量测定样品的含水率；4.定量测定样品的含酸量；5.利用显微镜观察样品颗粒的均匀度。
实验仪器和试剂：1.大山楂颗粒样品；2.精密电子天平；3.酸度计；4.显微镜。
实验结果与分析：1.样品外观检查：样品颜色为红色、形状为圆形或不规则形状、大小差异较小，符合产品的基本要求。
2.含水率测定：测得样品的含水率为15%，说明样品含水量适中，保证了产品的风味和保存性。
3.含酸量测定：测得样品的含酸量为0.8%，属于中等酸度，可以满足消费者对口感的要求。
4.颗粒均匀度观察：通过显微镜观察，样品中的颗粒大小和形状较为均匀，没有明显的颗粒杂质，符合产品的质量标准。
实验结论：通过对大山楂颗粒样品的外观、含水率、含酸量和颗粒均匀度的检查，可以确定样品的质量状况。
本次实验结果表明，该批大山楂颗粒的质量良好，符合产品的质量要求。
存在的不足和改进方向：1.实验中使用的仪器有限，检测指标较为简单，还可以引入更多的仪器和方法，提高检测精度。
总结：大山楂颗粒质量的检查是保证产品质量的重要环节，通过实验可以准确判断大山楂颗粒的外观、含水率、含酸量和颗粒均匀度等重要指标，为产品质量控制提供了科学依据。
掌握质量检查方法和操作技巧，对于食品行业和相关领域的从业人员具有重要意义。
微生物限度检查标准程序
微生物限度检查标准程序1.目的：建立个微生物限度检查标准程序。
2.范围：适用于各种原辅料、部分成品及验证的微生物限度检查的操作。
3.职责：检验人员对本规程的实施负责。
4.程序:4．1 总则:4．1．1 本法是指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。
4．1．2 供试品应随机抽样。
一般抽样量为检验用量(2个以上最小包装单位）的3倍量。
4．1．3检查全过程应严格遵守无菌操作，严防再污染。
4．1．4除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌培养温度为25~28℃，控制菌培养温度为36±1℃。
4．1．5检验结果的报告以1g、1ml或10cm2为单位.4．2供试品的检验量每批供试品检验量一般为10g或10ml。
供试品须取自2个以上的包装单位。
4．3供试液的制备按供试品的理化特性与生物学特性可采取适宜的方法制成供试液。
4．3．1 液体供试品取供试品10ml，加入稀释剂90ml中，混匀，作为供试液。
4．3．2 固体供试品称取供试品10g，置0。
9％无菌氯化钠100ml中，用匀浆仪或其它适宜办法，混匀后，作为供试液。
在制备过程中，必要时可加适量聚山梨酯80，并适当加温,但不应超过45℃。
4．3．3 含抑菌成份供试品供试品如干扰控制菌检验,可用下列方法处理后，依法检查. 4．3．3．1 稀释法将供试液种入较大量的培养基中，使该供试液稀释至不具抑菌作用的浓度。
4．3．3．2 离心沉淀集菌法取规定量的供试液，离心（每分钟3000转）30min，弃去上清液，留底部集菌液约2ml,再稀释成原规定量的供试液。
如有不溶性药渣，可将离心（每分钟500转）5min，取全部上层液，再行集菌处理。
4．3．3．3 薄膜过滤法取规定量的供试液，置稀释剂100ml中,摇匀，以无菌操作加入装有直径约50mm，孔径不大于0.45um±0。
2um微孔滤膜的薄膜过滤器内,减压抽干后，用稀释剂冲洗滤膜3次，每次50～100ml,取出滤膜备检.4．3．3．4 中和法凡含磺胺、汞、砷类或防腐剂的供试品,可用相应的试剂钝化活性因子，中和毒性后制成供试液。
微生物限度检查法操作规程
1.目的建立微生物限度检查法操作规程。
2.适用范围本规程适用于原辅料、包装材料、制剂（非规定灭菌）、药妆、空气洁净℃等各类微生物限度检查。
3.编制依据《中国药品检验标准操作规范》2010年版《中华人民共和药典》2010年版二部药品微生物学检验手册4.责任4.1 QC质检员对本规程的实施负责。
4.2 QC主管对本规程的有效执行承担监督检查责任。
5.正文5.1微生物限度检查系指非规定灭菌制微生物污染限度的一种检查方法，包括活菌数及控制菌的检查。
5.2药品生产洁净室（区）的空气洁净℃划分为四个级别，不同级别间微生物最大允许数、尘粒最大允许数不同。
5.3微生物限度检查室和操作人员的一般原则5.3.1检查的全部过程均应严格遵循无菌操作，防止再污染。
5.3.2进入微生物限度检查室的操作人员，面部暴露部位不得化妆；患传染病及体表有伤口人员禁止入内。
5.3.3操作人员进微生物限度检查室前应在缓冲间用规定的消毒液进行手部消毒，更衣，戴帽，戴口罩及换鞋，进入微生物限度检查室后，再用75%酒精消毒手部。
5.3.4使用净化工作台前，应先用规定的消毒液（3月轮换一次）擦工作台与各操作开关，然后开紫外灯及空气过滤器30分钟后，方可使用。
物品通过传递窗进入。
5.4培养基及供试液的制备5.4.1培养基的制备方法5.4.1.1细菌培养基：称取营养琼脂培养基34g，加1L纯化水溶解，115℃灭菌，40分钟后，备用。
5.4.1.2霉菌培养基：称取虎红琼脂培养基30g，加1L纯化水溶解，115℃灭菌，40分钟后，备用。
5.4.1.3控制菌的培养（详见中华人民共和国药典2010版二部）。
5.4.2器皿的准备：直径90ml的平皿，10ml、1ml的刻℃吸管，200ml的三角烧瓶及胶塞等，均应包扎好后，再经121℃高压蒸气灭菌30分钟。
5.4.3供试液的制备方法：5.4.3.1液体供试品：取供试品10ml，加入90ml的稀释剂中，混匀，作为供试液；5.4.3.2固体、半固体或粘稠液供试品：称取供试品10g，置pH7.0蛋白胨-氯化钠无菌缓冲溶液100ml中，混匀后，作为供试液。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查标准操作规程正文：一、目的：规范微生物限度检查的标准操作，确保所采用的微生物限度检验方法准确，试验结果可靠。
二、范围：适用于本公司各种样品的微生物限度检查。
三、职责：质量中心化验员负责本规程的执行。
质量中心管理人员负责本规程执行情况的监督检查。
四、内容：1.试验条件1.1试验环境检验必须在环境洁净度C级下的局部A级的单向流空气区域内进行。
1.2试验仪器、用具、培养基按照3.1.1 与3.2.1项下准备。
2.供试液的制备供试液若需加热时，应均匀加热，且温度不应超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
常用供试液制备方法如下：2.1.液体供试品取供试品10ml，加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。
水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液，例如：纯化水、注射用水、饮用水、药液类、各验证项下微生物样品。
2.2.固体、半固体或黏稠性供试品取供试品10g，加入PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀(例如无水葡萄糖、氯化钠、乳酸钠溶液等)。
2.3内包材供试品供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
2.3.1内包膜、塑料输液袋取单层膜50cm2，剪碎，置于无菌锥形瓶内，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，即得供试液。
2.3.2 软管取软管26cm（表面积100cm2），剪碎，置于无菌锥形瓶内，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，即得供试液。
2.3.3加药塞、输液塞、口管、口盖、聚异戊二烯塞芯取供试品按表面积100cm2（加药塞9个、输液塞4个、口管4个、口盖9个、聚异戊二烯塞芯17个），置于无菌锥形瓶内，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，即得供试液。
成品检验操作规程：大山楂丸
1.目的建立大山楂丸检验操作规程。
2．范围本规程适用于大山楂丸的全项检验。
3．责任QC检验员、QC主管、QA主管。
4．标准《大山楂丸质量标准》5．内容：5.1性状本品为棕红色或褐色的大蜜丸；味酸、甜。
5.2鉴别5.2.1取本品，置显微镜下观察：果皮石细胞淡紫红色、红色或黄棕色，类圆形或多角形，直径125µm(山楂)。
表皮细胞纵列，由1个长细胞与2个短细胞相间连接，长细胞壁厚，波状弯曲，木化（炒麦芽）。
5.2.2取本品9g，剪碎，加乙醇40ml，加热回流10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，加热使溶解，用正丁醇15ml振摇提取，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，滤过。
取滤液1ml，加少量镁粉与盐酸2～3滴，加热4～5分钟后，即显橙红色。
5.2.3取〔鉴别〕（2）项下的滤液，作为供试品溶液。
另取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各2µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮（9∶1）为展开剂，展开，取出，凉干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。
5.3含量测定取重量差异项下的本品，剪碎，混匀，取约3g，精密称定，加水30ml，60℃水浴温热使充分溶散，加硅藻土±2g，搅匀，滤过，残渣用水30ml洗涤，100℃烘干，连同滤纸一并置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂至干，残渣用石油醚（30～60℃）浸泡2次（每次约2分钟），每次5ml，倾去石油醚液，残渣加无水乙醇-三氯甲烷（3：2）的混合溶液适量，微热使溶解，转移至5ml量瓶中，用上述混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
另取熊果酸对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，分别精密吸取供试品溶液5µl，对照品溶液4µl与8µl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（20：5：8：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法（附录ⅥB薄层色谱扫描法）进行扫描，波长：λs=535nm, λR=650nm,测量供试品吸光度积分值，计算，即得。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
非无菌产品微生物限度检查方法适用性试验文件文件名称大山楂颗粒微生物限度检查方法适用性试验（2015版）文件编号TS-VD-542-01重庆天致药业股份有限公司2018年大山楂颗粒微生物限度检查方法适用性试验方案试验方案的起草：日期：试验方案的审核：日期：试验方案的审核：日期：试验方案的批准：日期：1.概述通过试验以确认所采用的方法适合于该药品的需氧菌、霉菌和酵母菌的测定，确认所采用的方法适合于该药品的控制菌的检查，根据样品的特性制定检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据试验结果判断是否符合试验标准。
若符合，按试验的方法和条件进行药品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行试验，直至试验结果符合设立的试验标准。
2.目的：确认所采用的方法适合该药品的需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌的测定。
照此检查法和检验条件进行供试品需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌检查能保证检验结果的准确、可靠。
3.职责3.1.QC：负责起草试验方案和报告，并负责本方案的实施。
3.2.QC主管、质量部长：负责试验方案、试验报告的审核。
3.3.质量授权人：负责方案、偏差和报告的最后批准。
4.适用范围：适用于本公司生产的大山楂颗粒微生物限度检查：微生物计数法和控制菌检查法。
5.培训：在本方案实施前，已对方案实施过程中涉及人员进行培训，以保证方案顺利实施，并做好培训记录，培训记录见附表1。
6.试验条件6.1.供试品：规格：批号：6.2.培养基及试剂培养基名称培养基批号生产厂家6.3.试验用菌株菌种名称菌种编号菌种来源6.4.检验仪器及相关设备仪器名称仪器型号仪器厂家7.计数方法适用性试验7.1.需氧菌总数及霉菌和酵母菌计数方法适用性试验7.1.1菌液制备7.1.1.1接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的新鲜培养物至100ml 胰酪大豆胨液体培养基中，置30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，制成适宜浓度的菌悬液，备用。
7.1.1.2.接种白色念珠菌的新鲜培养物至100ml沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，制成适宜浓度的菌悬液，备用。
7.1.1.3.接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20～25℃培养5～7天，加3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，取1ml菌液加0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，制成适宜浓度的菌悬液，备用。
7.1.2.试验操作方法试验分3组，进行3次独立的平行试验。
7.1.2.1.供试液的制备取供试品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，振摇使溶解，作为1:10供试液。
7.1.2.2.试验组：取上述制备好的供试液，加入铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉试验菌悬液，混匀，使每1ml供试液中含菌量不大于100cfu。
取1ml分别注入平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平板，待凝固后，30～35℃培养三天，白色念珠菌、黑曲霉30～35℃培养五天，计数；取上述制备好的供试液，加入白色念珠菌、黑曲霉菌悬液，混匀，使每1ml供试液中含菌量不大于100cfu，取1ml分别倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平板，待凝固后，20～25℃培养五天，计数。
7.1.2.3.供试品对照组：取供试液100ml，加入PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，混匀。
7.1.2.4.菌液对照组取各试验菌液1ml，分别加入PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，混匀，使每1ml供试液中菌落数不大于100cfu，每株试验菌平行制备2个平板，置规定温度培养。
7.1.2.5. 试验组试验可接受标准：试验组菌落数减去供试品对照组菌落的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5-2.0范围内。
7.1.2.6测定结果：阳性菌次数活菌组菌数（cfu/ml) 试验组菌数（cfu/ml)供试液对照菌数（cfu/ml)比值1号皿2号皿均值1号皿2号皿均值细菌数霉菌数金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌黑曲霉白色念珠菌黑曲霉白色念珠菌结论:检查人/日期：复核人/日期：8.控制菌检查法的试验8.1大肠埃希菌方法适用性试验8.1.1.供试品的处理取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，振摇使溶解，混匀，作为1：10的供试液。
8.1.2.增菌培养8.1.2.1.试验组：取供试液10ml和不大于100cfu/ml大肠埃希菌液1ml加入胰酪大豆胨液体培养基100ml中，于30～35℃中培养18～24小时。
8.1.2.2.阳性对照组：取试验稀释液10ml和不大于100cfu/ml大肠埃希菌液1ml加入胰酪大豆胨液体培养基100ml中，于30～35℃中培养18～24小时。
8.1.2.3.阴性对照组：取试验稀释液10ml加入胰酪大豆胨液体培养基100ml中，于30～35℃中培养18～24小时，8.1.3.选择和分离培养取上述增菌培养的培养物各1ml，分别接种至麦康凯液体培养基100ml中，于42～44℃中培养24～名称检测结果试验组阳性对照阴性对照48小时，取各麦康凯液体培养物分别划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，于30～35℃中培养18～72小时后观察菌落形态。
8.1.4.试验可接受标准：阴性对照组应无菌落生长，试验组和阳性对照组应有菌落生长，且试验组的菌落形态应与阳性对照的相同。
8.1.5.大肠埃希菌测定结果结论:检查人/日期：复核人/日期：附表1：微生物限度检查方法试验培训签名表方案名称大山楂颗粒微生物限度检查方法适用性试验培训培训时间年月日序号姓名序号姓名序号姓名1 11 212 12 223 13 234 14 245 15 256 16 267 17 278 18 289 19 2910 20 30大山楂颗粒微生物限度检查方法适用性试验报告试验报告的起草：日期：试验报告的审核：日期：试验报告的审核：日期：试验报告的批准：日期：1.概述通过试验以确认所采用的方法适合于该药品的需氧菌、霉菌和酵母菌的测定，确认所采用的方法适合于该药品的控制菌的检查，根据样品的特性制定检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据试验结果判断是否符合试验标准。
若符合，按试验的方法和条件进行药品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行试验，直至试验结果符合设立的试验标准。
2.目的：确认所采用的方法适合该药品的需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌的测定。
照此检查法和检验条件进行供试品需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌检查能保证检验结果的准确、可靠。
3.职责3.1.QC：负责起草试验方案和报告，并负责本方案的实施。
3.2.QC主管、质量部长：负责试验方案、试验报告的审核。
3.3.质量授权人：负责方案、偏差和报告的最后批准。
4.适用范围：适用于本公司生产的大山楂颗粒微生物限度检查：微生物计数法和控制菌检查法。
5.培训：在本方案实施前，已对方案实施过程中涉及人员进行培训，以保证方案顺利实施，并做好培训记录，培训记录见附表1。
6.试验条件6.1.供试品：规格: 批号：6.2.培养基及试剂培养基名称培养基批号生产厂家PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液20161108 北京奥博星生物科技有限公司胰酪大豆胨液体培养基20171020 北京奥博星生物科技有限公司胰酪大豆胨琼脂培养基20160830 北京奥博星生物科技有限公司沙氏葡萄糖琼脂培养基20161102 北京奥博星生物科技有限公司麦康凯琼脂培养基20151105 北京奥博星生物科技有限公司麦康凯液体培养基20161102 北京奥博星生物科技有限公司6.3.试验用菌株菌种名称菌种编号菌种来源大肠埃希菌CMCC（B）44102 中国食品药品检定研究院乙型副伤寒沙门菌CMCC（B）50094 中国食品药品检定研究院铜绿假单胞菌CMCC（B）10104 中国食品药品检定研究院金黄色葡萄糖菌CMCC（B）26003 中国食品药品检定研究院白色念珠菌CMCC（F）98001 中国食品药品检定研究院枯草芽胞杆菌CMCC（B）63501 中国食品药品检定研究院黑曲霉CMCC（F）98003 中国食品药品检定研究院6.4.检验仪器及相关设备仪器名称仪器型号仪器厂家电子天平YB2002 上海力能电子仪器公司超净工作台SW-CJ-2FD 苏州净化设备有限公司生物安全柜BSC-B00IIA 上海搏讯实业有限医疗设备厂生化培养箱LRH-250-II 广东省医疗器械厂霉菌培养箱MJ-160B 上海悦丰仪器仪表有限公司7.计数方法适用性试验7.1.需氧菌总数及霉菌和酵母菌计数方法适用性试验7.1.1菌液制备7.1.1.1接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的新鲜培养物至100ml 胰酪大豆胨液体培养基中，置30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，制成适宜浓度的菌悬液，备用。
7.1.1.2.接种白色念珠菌的新鲜培养物至100ml沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，制成适宜浓度的菌悬液，备用。
7.1.1.3.接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20～25℃培养5～7天，加3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，取1ml菌液加0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，制成适宜浓度的菌悬液，备用。
7.1.2.试验操作方法试验分3组，进行3次独立的平行试验。
7.1.2.1.供试液的制备取供试品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，振摇使溶解，作为1:10供试液。
7.1.2.2.试验组：取上述制备好的供试液，加入铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉试验菌悬液，混匀，使每1ml供试液中含菌量不大于100cfu。
取1ml分别注入平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平板，待凝固后，30～35℃培养三天，白色念珠菌、黑曲霉30～35℃培养五天，计数；取上述制备好的供试液，加入白色念珠菌、黑曲霉菌悬液，混匀，使每1ml供试液中含菌量不大于100cfu，取1ml分别倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平板，待凝固后，20～25℃培养五天，计数。