北京六一WD-9413A型凝胶成像分析系统
凝胶成像分析系统介绍及使用注意事项
凝胶成像分析系统介绍及使用注意事项一、定义凝胶成像即对dna/rna/蛋白质等凝胶电泳不同染色(如eb、考马氏亮蓝、银染、sybr green)及微孔板、平皿等非化学发光成像检测分析。
凝胶成像系统可以应用于分子量计算,密度扫描,密度定量, PCR定量等生物工程常规研究。
二、分类1、普通凝胶成像分析系统可以对蛋白电泳凝胶，DNA凝胶样品进行图象采集并进行定性和定量分析，样品包括：EB、SYBRGreen、SYBRGold、TexasRed、GelStar、Fluoroscecin、RadiantRed等染色的核酸监测；以及CoomassieBlue、SYPROOrange、各种染色的蛋白质凝胶，如考染等（或UV,EB和有色及可见样品成像）。
2、化学发光成像分析系统凝胶成像系统范围涵盖UV，EB，化学发光、紫外-荧光、有色及可见样品成像。
3、多色荧光成像分析系统成像范围涵盖UV，EB，化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像。
多功能活体成像系统UV，EB，化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像和离体组织和小型动物，及大型动物。
三、原理样品在电泳凝胶或者其他载体上的迁移率不一样，以标准品或者其他的替代标准品相比较就会对未知样品作一个定性分析。
这个就是图像分析系统定性的基础。
根据未知样品在图谱中的位置可以对其作定性分析，就可以确定它的成份和性质。
样品对投射或者反射光有部分的吸收，从而照相所得到的图像上面的样品条带的光密度就会有差异。
光密度于样品的浓度或者质量成线性关系。
根据未知样品的光密度，通过于已知浓度的样品条带的光密度指相比较就可以得到未知样品的浓度或者质量。
这就是图像分析系统定量的基础。
采用最新技术的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均匀，最大限度的消除了光密度不均造成的对结果的影响。
四、应用范围总体上来说凝胶成像可应用于:凝胶成像系统可以用于:蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析。
丹酚酸B对创伤后应激障碍模型大鼠认知功能和GSK-3β
丹酚酸B对创伤后应激障碍模型大鼠认知功能和GSK-3β/β-Catenin信号通路的影响杨阳，何巧玉摘要：目的探讨丹酚酸B（Sal B）是否可通过调节糖原合成酶激酶-3β/β-连环蛋白（GSK-3β/β-Catenin）信号通路改善创伤后应激障碍（PTSD）模型大鼠认知功能。
方法60只大鼠随机分为正常组、PTSD组、Sal B低剂量组（10mg/kg）、Sal B高剂量组（20mg/kg）和GSK-3β抑制剂组（30mg/kg CHIR-99021），每组12只。
除正常组外，其余组大鼠采用单一延长应激法构建PTSD大鼠模型。
旷场实验、Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能；Nissl染色观察海马神经元病理学变化；TUNEL染色检测海马神经元凋亡；Western blot检测海马组织中裂解的胱天蛋白酶3（cleaved caspase-3）、B细胞淋巴瘤基因-2相关X蛋白（Bax）、原癌基因（c-Myc）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、总GSK-3β（t-GSK-3β）、磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）、总β-Catenin（t-β-Catenin）、磷酸化β-Catenin（p-β-Catenin）蛋白表达。
结果与PTSD组比较，Sal B低剂量组、Sal B高剂量组和GSK-3β抑制剂组大鼠爬行格数、站立次数、运动总距离、跨越原平台次数增多，逃避潜伏期、首次跨越原平台时间缩短，海马神经元凋亡率以及海马组织中Bax、cleaved caspase-3、t-GSK-3β、p-β-Catenin蛋白表达水平降低，Cyclin D1、c-Myc、p-GSK-3β、t-β-Catenin蛋白表达水平升高（P＜0.05）。
结论Sal B能够减轻PTSD模型大鼠海马神经元凋亡、损伤并可改善其认知功能障碍，抑制GSK-3β/β-Catenin信号通路。
关键词：应激障碍，创伤后；丹参酸B；认知功能障碍；糖原合成酶激酶3；β连环素；神经元；细胞凋亡中图分类号：R285.5文献标志码：A DOI：10.11958/20230179Impact of salvianolic acid B on cognitive function and GSK-3β/β-Catenin signaling pathway inrats with post-traumatic stress disorderYANG Yang,HE QiaoyuDepartment of Basic Medicine,Henan Nursing Vocational College,Anyang455000,China Abstract:Objective To investigate whether salvianolic acid B(Sal B)can improve the cognitive function in rats with post-traumatic stress disorder(PTSD)by regulating GSK-3β/β-Catenin signal pathway.Methods Sixty rats were randomly grouped into the normal group,the PTSD group,the Sal B low-dose group(10mg/kg),the Sal B high-dose group (20mg/kg)and the GSK-3βinhibitor group(30mg/kg CHIR-99021),with12rats in each group.In addition to the normal group,rats in other groups were constructed PTSD rat models by using single prolonged stress(SPS)method.Open field test and Morris water maze test were applied to evaluate the cognitive function of rats.Nissl staining was applied to observe the pathological changes of hippocampal neurons.TUNEL staining was applied to detect the apoptosis of hippocampal neurons. Western blot assay was applied to detect the expression of cleared caspase-3,B-cell lymphoma gene-2-associated X protein(Bax),proto-oncogene(c-Myc),Cyclin D1,total GSK-3β(t-GSK-3β),phosphorylated GSK-3β(p-GSK-3β),total β-Catenin(t-β-Catenin)and phosphorylatedβ-catenin(p-β-Catenin)proteins in hippocampus.Results Compared with 基金项目：河南省高等学校重点科研项目（20B180004）作者单位：河南护理职业学院基础医学部（邮编455000）作者简介：杨阳（1988），女，讲师，主要从事生理学方面研究。
藁本内酯通过抑制铁自噬延缓小鼠听皮层组织衰老
网络出版时间：２０２４－０３－０９１８：２７：０７ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．Ｒ．２０２４０３０６．１７２５．０２０藁本内酯通过抑制铁自噬延缓小鼠听皮层组织衰老周颖东１，张梦娴１，王青玲１，康浩然２，张治成２，王庆林３，刘亚敏４，郭向东２（１．河南中医药大学第一临床医学院，河南郑州 ４５００４６；２．河南中医药大学第一附属医院耳鼻喉科，河南郑州 ４５００００；３．河南医学高等专科学校，河南郑州 ４５１１９１；４．河南中医药大学药学院，河南郑州 ４５００４６）收稿日期：２０２３－１０－１５，修回日期：２０２４－０１－２２基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１４０３４３９）；河南省科技攻关计划（Ｎｏ２２２１０２３１０６０４，２３２１０２３１０４３０）；河南省中医药科学研究专项重点课题（Ｎｏ２０－２１ＺＹ１０４５）；河南省高等学校重点科研项目（Ｎｏ２３Ａ３６００２８）作者简介：周颖东（１９９８－），硕士生，研究方向：内耳疾病，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｙｄ７８６７９４２４２＠１６３．ｃｏｍ；郭向东（１９８０－），硕士，副主任医师，硕士生导师，研究方向：内耳疾病，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｇｕｏｘｉａｎｇｄｏｎｇ０６１８＠１２６．ｃｏｍｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２３０９０４３文献标识码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２４）０３－０４５５－０７中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ２８４ １；Ｒ３２２ ８１；Ｒ３３９ ３８；Ｒ５９１ １；Ｒ７６４ ４３６摘要：目的 探究藁本内酯（ｌｉｇｕｓｔｉｌｉｄｅ，ＬＩＧ）延缓听皮层组织衰老，治疗中枢性老年性聋的机制。
方法 将４０只１３月龄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠随机分为ＬＩＧ低剂量组（Ｌ ＬＩＧ）、ＬＩＧ中剂量组（Ｍ ＬＩＧ）、ＬＩＧ高剂量组（Ｈ ＬＩＧ）和衰老组（Ａｇｅ），同品系２月龄小鼠１０只作为对照组（Ｃｔｒｌ）。
玉米赤霉烯酮完全抗原的制备及鉴定
http ：//hljnykx. haasep. cnDOI ：10 11942/j issn1002-2767 2021 06. 0087:黑龙江农业科学2021(6)：87-92Heilongjiang Agricultural Sciences张浩楠，高建伟•玉米赤霉烯酮完全抗原的制备及鉴定［J ］•黑龙江农业科学,021(6):87-92.玉米赤霉烯酮完全抗原的制备及鉴定张浩楠，高建伟(齐齐哈尔大学 食品与生物工程学院，黑龙江 齐齐哈尔161000)摘要：为了降低基层检测部门检测谷物中玉米赤霉烯酮(ZEN )的成本，研制国产化检测试剂盒非常必要，而试 剂盒的研制离不开完全抗原的支持。
本试验的主要内容是将ZEN 肟化，生成玉米赤霉烯酮肟(ZENO ),再用 DCC-NHS 活性酯法将ZENO 与牛血清白蛋白(BSA )、鸡卵白蛋白(OVA)偶联合成ZEN 完全抗原，最后透析 将未偶联的小分子ZEN 除去，得到的即为完全抗原。
包被原ZEN-BSA 浓度为1. 62 mg - mL 1，免疫原ZEN-OVA 浓度为1. 33 mg-mL 1。
采用UV 法、SDS-PAGE 法对完全抗原进行鉴定，同时建立间接ELISA 方 法验证包被原ZEN-BSA 。
结果表明：采用活性酯法合成的ZEN 完全抗原在319 nm 处出现新的吸收峰，且SDS-PAGE 图表明ZEN-BSA 分子量集中在60〜70 kDa,ZEN-OVA 分子量集中在40〜50 kDa,不同于BSA 和OVA 分子量，但相差不大。
根据紫外扫描图计算得到ZEN-BSA 结合比为7. 0 ： 1，ZEN-OVA 结合比为 6.1：1。
根据免疫学方法可知,OD 450 nm 值随着毒素浓度的增加而减小。
本试验利用3种方法对ZEN 完全抗原进行鉴定，证明ZEN 完全抗原偶联成功。
关键词：玉米赤霉烯酮；抗原合成；酶联免疫吸附试验；毒素检测玉米赤霉烯酮(ZEN,也称为F2霉菌毒素) 是由某些镰刀菌产生的次级代谢产物，是饲料和谷物中最常见的污染物之一［1］。
止汗灵冲剂的定性定量方法优化研究
基 金 项 目 ：江 苏 省高 校 优 势 学 科 项 目 （中 西 医 结 合 ）（2014)
# 2 0 1 6 年总第 48 卷第 11 期
治法方药
胶 G 板 上 ，按 2丄 1.1项下的薄
层 鉴 别 条 件 ，分别在温度
萄糖苷对照品（批 号 111920-201304，中国药品生物 制品检定所），止汗灵冲剂（批 号 1208001、1308001、 1408001，江 苏 省 中 医 院 制 剂 部 ）。水 为 超 纯 水 ，甲醇 为 色 谱 纯 ，其 余 化 学 试 剂 为 分 析 纯 。 2 方法与结果 2.1 定性鉴别 2 . 1 . 1 白芍的薄层鉴别 2丄1 . 1 方 法 的 建 立 供试品溶液的制备：取止汗 灵 冲 剂 10g ，研 细 ，加 乙 醇 40m L ，超 声 提 取 10m in ， 滤 过 ，滤 液 蒸 干 ，残 渣 加 水 10m L 溶 解 ，用水饱和正 丁 醇 提 取 2 次 ，每 次 10m L ，合 并 提 取 液 ，水 洗 2 次 ， 弃 去 水 液 ，正 丁 醇 液 蒸 干 ，残 渣 加 乙 醇 1m L 溶 解 ， 作 为 供 试 品 溶 液 。同 法 制 备 阴 性 样 品 溶 液 。芍药苷 对 照 品 的 制 备 ：取 芍 药 苷 对 照 品 ，加乙醇制成每 1m L 含 2m g 的溶 液 作 为 对 照 品 溶 液 。薄层色谱法 鉴 别 白 芍 ：吸取上述三种试液各4|x L ，分别点于同一 含 C M C -N A 的 硅 胶 G 薄 层 板 上 ，以三氯甲烷-醋酸 乙 酯 -甲 醇 -甲 酸 （40:5:10:0.2)为 展 开 剂 ，展 开 ，取 出 ，晾干。喷 以 1 0 % 硫酸 乙 醇 溶 液 ，105丈加热至斑 点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相 应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性未见干扰。见 图 1。 2丄1 . 2 方法的耐用性考察[2]观察温湿度对分离度 的影响。分 别 取 3 批 制 剂 各 10g ，按上述供试品溶液 制备方法制成供试品溶液。取 3 批次供试品溶液、 芍药苷对照品溶液各4|x L ，分别点于两相同来源硅
211061048_丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板生理特性和功能的影响机制
省博士后基金资助项目（No.LBH-Z20195）；黑龙江省中医药科研项目
（No. ZHY2020-084）；国 家 中 医 药 考 试 2022 年 度 科 研 课 题（No.
TC2022021）
＊第一作者 高级实验师。研究方向：方剂药理学与药学研究。Email：
中图分类号
DOI
摘
R965
文献标志码
A
文章编号 1001-0408（2023）07-0790-06
10.6039/j.issn.1001-0408.2023.07.05
要 目的 基于血小板膜糖蛋白 4（CD36）/磷脂酰肌醇 3-激酶（PI3K）/蛋白激酶 B（Akt）信号通路探讨丹参饮对高脂血症模型
physiological characteristics and function-related factors [von
Willebrand factor（vWF），fibronectin（Fn），phospholipase A2
中国药房
China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 7
（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）]含量，全血黏度、血浆黏度和血浆中纤维蛋白原（FIB）含量，血小板相关参数[血小板计
数（PLT）、血小板分布宽度（PDW）和血小板平均体积（MPV）]，血小板生理特性和功能相关因子[血管性血友病因子（vWF）、纤维
连接蛋白（Fn）、磷脂酶 A2（PLA2）、血栓素 B2（TXB2）、6-酮-前列腺素 F1α（6-keto-PGF1α）、血栓素 A2（TXA2）、前列腺素（PGI2）、
蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）；HDL-C 含量和 6-keto-PGF1α、PGI2、t-PA 水平均显著降低（P＜0.05）。经丹参饮干预后，上述
低盐固态发酵酱油生产过程中大豆DNA
姚 芹，于亮亮，张素琴，等．低盐固态发酵酱油生产过程中大豆ＤＮＡ降解变化［Ｊ］．江苏农业科学，２０２２，５０（２４）：１４７－１５０．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２２．２４．０２２低盐固态发酵酱油生产过程中大豆ＤＮＡ降解变化姚 芹１，于亮亮１，张素琴１，宋 浩２（１．苏州农业职业技术学院／江苏省食品安全快速检测工程技术研究开发中心／江苏省高等职业教育产教深度融合实训平台，江苏苏州２１５００８；２．苏州市农业农村局，江苏苏州２１５２００） 摘要：为研究酱油生产过程中大豆ＤＮＡ降解情况，为酱油生产不同阶段大豆转基因成分检测提供引物序列和检测方法，用十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）法提取大豆和蒸煮后大豆ＤＮＡ，针对内源大豆凝集素基因和外源抗草甘膦基因设计引物进行ＰＣＲ扩增；用试剂盒提取成熟酱醅、生酱油和酱油中的ＤＮＡ，进行ＰＣＲ扩增或巢式ＰＣＲ扩增。
结果表明，高温高压蒸料后大豆ＤＮＡ片段长度降解到１５００ｂｐ以下，发酵后的酱醅中检测不到５００ｂｐ左右大豆ＤＮＡ片段。
生酱油和成品酱油经大豆ＤＮＡ提取和ＰＣＲ扩增未见条带，用巢式ＰＣＲ扩增可以检测到２００ｂｐ以下的内源基因、外源基因ＤＮＡ片段。
低盐固态发酵酱油生产过程中造成ＤＮＡ片段长度降解的２个主要工艺是蒸煮和发酵，淋油过程去除了大量大豆ＤＮＡ，成品酱油可用巢式ＰＣＲ进行转基因成分检测。
关键词：低盐固态发酵酱油；ＤＮＡ降解；不同生产工艺；外源基因检测；巢式ＰＣＲ 中图分类号：ＴＳ２６４．２＋１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０２２）２４－０１４７－０４收稿日期：２０２２－０３－０２基因项目：苏州市农业农村局农村智库研究项目；江苏省高等学校大学生创新创业训练项目（编号：２０２２１２８０８０１２ｙ）；苏州农业职业技术学院青年教师科研能力提升计划（编号：１９ＱＮ１００２）。
作者简介：姚 芹（１９８１—），女，江苏如皋人，硕士，副教授，主要从事食品生物化学研究。
高产糖化酶根霉菌株的筛选、鉴定及其在孝感米酒中的应用
高产糖化酶根霉菌株的筛选、鉴定及其在孝感米酒中的应用南小华;李牧;陈福生【摘要】以孝感米酒酒曲中分离的14株根霉(Rhizopus spp.)为试材,以糯米饭为培养基,筛选一株高产糖化酶的菌株进行形态学和分子生物学鉴定.同时,按照孝感米酒的酿造工艺,以其为菌种酿造米酒,测定米酒的理化指标、挥发性风味成分,并进行感官评定.结果表明,筛选得到l株高产糖化酶的根霉菌株Q1,经形态观察和分子生物学鉴定,鉴定其为米根霉(Rhizopus oryzae).按照孝感米酒的酿造工艺,以Q1为菌种酿造米酒.30℃发酵36h后,米酒中总糖含量(407.40 mg/g)、还原糖含量(221.74 mg/g)和γ-氨基丁酸(GABA)含量(73.75 mg/kg)高、酸度适宜(6.09 mg/g)、酒精度低(1.14％vol),感官品评(80分)结果较好且挥发性风味成分比较丰富,符合孝感米酒的特点.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2018(037)009【总页数】6页(P88-93)【关键词】根霉菌;糖化酶;鉴定;孝感米酒;风味成分;γ-氨基丁酸【作者】南小华;李牧;陈福生【作者单位】华中农业大学食品科技学院,湖北武汉430070;华中农业大学食品科技学院,湖北武汉430070;华中农业大学食品科技学院,湖北武汉430070【正文语种】中文【中图分类】Q939.9(B)米酒是以大米(籼米、粳米、糯米等)为原料经酒曲中的微生物酿造而成的,是我国传统的发酵酒精饮料,世界古代三大酒精饮料之一[1]。
因其酒精含量较低,口味独特,口感醇厚,香气浓郁,酸甜适中且富含多种氨基酸、维生素以及葡萄糖、麦芽糖、低聚糖等,深受人们的喜爱[2]。
糖化是米酒发酵的重要阶段,主要由酒曲中微生物分泌的淀粉酶将大米淀粉转化为单糖、麦芽糖、糊精等[3]。
糖化力的高低直接影响米酒的出酒率,也会影响米酒的口感和风味[4]。
根霉(Rhizopus spp.)作为糖化酶的产生菌种之一,目前国内外对根霉产糖化酶条件的优化较多[5-7],在米酒酿造方面也有研究[8-9],但对于孝感米酒的研究较少。
丹参多酚酸盐改善扩张性心肌病心肌功能的作用机制
丹参多酚酸盐改善扩张性心肌病心肌功能的作用机制王曦烨;单晓彤;王伊林;李丹;赵明;许良【摘要】将代谢组学与分子生物学方法相结合,研究了丹参多酚酸盐治疗扩张性心肌病的作用机制.采用主成分分析(PCA)法,分析了健康组、模型组及丹参多酚酸盐给药组大鼠血清代谢轮廓,采用正交校正的偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)法寻找潜在的生物标记物,共鉴定得到磷酯酰丝氨酸[16∶0/18∶1(9Z)]、溶血磷脂(16∶0)、溶血磷脂[20∶4(5Z,8Z,11Z,14Z)]、溶血磷脂[22∶6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)]、胆固醇硫酸酯、胆汁酸、γ-亚麻酸、二十二碳五烯酸和9'-羧基-γ-生育酚9种潜在的生物标记物.其中,γ-亚麻酸、二十二碳五烯酸和9'-羧基-γ-生育酚的含量在模型组中下降,经丹参多酚酸盐治疗后含量上升.通过Westernbloting法和酶联免疫吸附法证实丹参多酚酸盐通过影响体内与γ-亚麻酸和9'-羧基-γ-生育酚相关的超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及其下游Bcl-2和Bax蛋白分子表达量,从而减少氧化应激所致的心肌细胞凋亡数量,达到治疗阿霉素所致扩张型心肌病的目的.【期刊名称】《高等学校化学学报》【年(卷),期】2016(037)005【总页数】8页(P844-851)【关键词】扩张型心肌病;丹参多酚酸盐;代谢组学;质谱;氧化应激【作者】王曦烨;单晓彤;王伊林;李丹;赵明;许良【作者单位】内蒙古民族大学化学化工学院,通辽028042;天然产物化学及功能分子合成自治区重点实验室,通辽028042;内蒙古民族大学附属医院,通辽028042;内蒙古民族大学附属医院,通辽028042;内蒙古民族大学化学化工学院,通辽028042;天然产物化学及功能分子合成自治区重点实验室,通辽028042;内蒙古民族大学附属医院,通辽028042;内蒙古民族大学化学化工学院,通辽028042;天然产物化学及功能分子合成自治区重点实验室,通辽028042【正文语种】中文【中图分类】O657阿霉素(ADR)属蒽环类抗癌药物, 其独特的嗜心肌作用可引起心腔扩大及室壁变薄等扩张型心肌病样改变[1], 发病机制并不完全明确, 目前没有特效药物能阻止阿霉素所致扩张性心肌病的发生.丹参是唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根和根茎, 在《本草纲目》中早有记载, 且评价颇高. 丹参具有“祛瘀止痛, 补血生血, 逐血生新”等功效. 药理学研究发现, 丹参具有改善血液循环、降低心肌耗氧量及减少心律失常等药理作用[2,3]. 丹参多酚酸盐(Salvianolate miltiorrhiza)是中药丹参的有效提取物. 陈成等[4]研究发现, 丹参多酚酸盐可通过影响心肌肌球蛋白重链, 从而提高心衰大鼠心脏功能. 方凌燕等[5]报道了丹参多酚酸盐可上调心肌组织中micRNA表达水平, 促进心肌梗死大鼠的血管重生. 张殿福等[6]报道了丹参多酚酸盐可通过抗炎和抗氧化等途径治疗心血管方面疾病. 迄今, 有关丹参多酚酸盐的药理作用研究多是基于分子生物学、细胞生物学及药代动力学等方面, 而丹参多酚酸盐治疗扩张性心肌病的代谢组学研究鲜见报道.代谢组学是一门关于生物体内源性代谢物整体及其变化规律的科学, 当正常机体受到毒性物质、代谢障碍或生理因素的影响时, 代谢物的种类和浓度会发生显著变化. 目前, 代谢组学方法已被广泛应用[7～9], 但通过代谢组学方法推断得到的代谢通路缺少分子生物学方面的实验验证.本文将代谢组学与分子生物学方法相结合, 对正常大鼠、扩张性心肌病大鼠及应用丹参多酚酸盐干预后大鼠的血清中内源性小分子进行分析检测, 推断代谢通路, 并利用Western bloting法与酶联免疫吸附实验对代谢通路进行验证, 进而阐述扩张性心肌病的发病机制及丹参多酚酸盐的治疗机制, 从而为丹参多酚酸盐治疗扩张性心肌病提供理论依据.1.1 试剂与仪器甲醇和甲酸(色谱纯, 美国Thermo Fisher公司); 提取用乙醇(分析纯, 北京化工厂); 去离子水由Milli-Q纯水仪制备(美国Millipore公司); 阿霉素, 批号为 1206E4(深圳万乐药业有限公司); 注射用丹参多酚酸盐, 批号为061121(上海第一生化制药厂); Bax, Bal-2和GAPDH内参抗体(Wanleibio公司); 超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和ELISA试剂盒(深圳欣博胜生物有限公司).Acquity UPLC System超高效液相色谱仪、 Waters xevo G-2S QTOF质谱仪和Acquity BEH-C18色谱柱(50 mm×2.1 mm, 1.7 μm)(美国Waters公司); GE VIVID E9彩色超声波诊断仪(美国GE公司); DYY-7C电泳仪、 DYCZ-40D转移槽、DYCZ-24DN双垂直蛋白电泳仪和WD-9413B型凝胶成像系统(北京六一公司). 1.2 实验过程1.2.1 扩张性心肌病模型的建立健康Wister雄性大鼠24只, 每只体重200 g,常温(20 ℃)条件下, 每日日照14 h, 正常饮食, 适应7 d环境后, 随机分为正常组(C 组)(n=8)、模型组(M组)(n=8)和给药治疗组(T组)(n=8). M组腹腔注射ADR 2 mg/kg, 3次/周, 间隔2周, 再注射1周, 总共6次; T组腹腔注射ADR后, 用丹参多酚酸盐以40 mg/kg灌胃, 3次/周, 间隔2周, 再灌胃1周, 总共6次; C组腹腔注射0.9%(质量分数)NaCl(10 mL/kg ), 方法同ADR注射方法, 停药后自由饮食4周[10]. 在丹参多酚酸盐给药组大鼠末次给药24 h后, 将3组大鼠全部麻醉处死,取血, 以3000 r/min转速离心, 分别收集空白C组、 M组和T的血清, 于-80 ℃储存备用.1.2.2 血液样品的收集和制备血液样品检测前, 于4℃融化样品, 在100 μL样品中加入400μL乙腈, 涡旋振荡30 s, 在4 ℃下以12000 r/min转速离心10 min, 上层清液用0.22 μm滤膜过滤, 待测.1.2.3 大鼠心脏彩超检测应用GE VIVID E9彩超机对各组大鼠于第7周末进行多普勒心脏超声检测, 图1为C组、 M组和T组大鼠的心脏超声图. 由表1可见, 与C组比较, M组左室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVSd)明显增大, 左心室后壁(LVPWDd)明显变薄, 射血分数(LVEF)减低(P<0.05), 符合扩张性心肌病改变, 说明造模成功; 而T组大鼠与M组大鼠相比较, LVIDd, LVSd, LVPWDd 和LVEF值均有向正常大鼠改变的趋势, 具有统计学意义(P<0.05), 说明丹参多酚酸盐对扩张性心肌病有明显的治疗作用.1.2.4 大鼠左室心肌氧化应激验证实验病理取材在第7周末, 将大鼠在麻醉状态下于腹正中线剪开, 腹主动脉抽血处死, 在无菌状态下将大鼠左肋剪开, 暴露心脏, 将心脏取出, 剪下一部分左室壁部分心肌标本, 根据细胞量加入9倍体积的磷酸盐缓冲溶液, 吹散成细胞悬液, 用液氮反复冻融3次后在4 ℃下以12000 r/min转速离心10 min, 上层清液为实验所需蛋白组织匀浆, 于-20 ℃保存[11]. 采用ELISA 法检测各组大鼠SOD和MDA氧化应激指标, 另采用Western bloting技术检测各组大鼠心室肌Bcl和Bax蛋白.1.2.5 色谱及质谱分析条件色谱分析条件: 柱温40 ℃, 二元线性梯度洗脱: 流动相A为含0.1%(体积分数)甲酸的水溶液, B为甲醇. 流动相梯度组成: 1～3 min, 8%～85%B; 3～6 min, 85%～100%B; 6～8 min, 100%B; 8～9 min, 100%～8%B; 9～11 min, 8%B. 流速0.4 mL/min, 样品进样量10 μL.质谱分析条件: ESI离子源, 采用正、负离子模式, 扫描范围m/z 100～1000. 正离子模式: 毛细管电压3 kV, 锥孔电压40 V, 离子源温度100 ℃, 雾化温度400 ℃, 壳气流速800 L/h; 负离子模式: 毛细管电压2.5 kV, 锥孔电压40 V, 离子源温度80 ℃, 雾化温度150 ℃, 壳气流速600 L/h. MS2碰撞能量为10～30 eV. 质谱以亮氨酸脑啡肽作内标, 甲酸钠校正质量轴.1.2.6 潜在的生物标记物筛选及解析用Masslynx V4.1软件对超高效液相色谱-质谱联用数据进行峰提取、峰对齐及归一化处理, 用EZinfo 2.0软件进行PCA和OPLS-DA分析, 根据VIP值(VIP>1.0)和P值(P<0.05) 筛选出潜在的生物标志物. 通过HMDB 及METLIN 等精确质量检索数据库, 筛选出最有可能的化合物, 最终通过数据库标准图谱确定标志物的化学结构.2.1 代谢轮廓分析利用UPLC-Q-TOF MS 的正、负离子模式对各组大鼠进行分析, 得到3 组基峰离子流色谱图(图2). 由图2可见, 各组大鼠的血液代谢产物得到了良好分离, 正离子模式下相应信号大于负离子模式, 并且检测到的物质多于负离子模式．在正、负离子模式下, 某些对应峰在3组色谱图间存在明显差异, 表明这些检测结果可能具有统计学意义.2.2 代谢差异分析PCA分析作为无监督的模式识别方法可以反映数据的原始状态, 直观地显示不同样品间的整体差异, 故首先对各组大鼠血液样品进行PCA分析. 由图3可见, 在正离子模式(R2X=0.9018, Q2=0.8352)和负离子模式(R2X=0.8609, Q2=0.8254)下, 3组血液样本均可明显区分, 表明扩张性心肌病造模成功, 而丹参多酚酸盐对该疾病有明显的治疗效果.为了找到引起扩张性心肌病的潜在生物标记物, 需要利用有监督的识别模式OPLS-DA分析. 有监督的模式识别方法可以扩大组间差异, 但需要利用外部模型验证方法排列实验来证明模型的有效性. 由图4(A)和(C)可见, 在正离子模式(R2Y=0.9987, Q2=0.9854)和负离子模式(R2Y=0.9935, Q2=0.9577)下, 正常组与模型组大鼠血液样本仍可被明显区分. 为寻找潜在的生物标记物, 采用OPLS-DA对正常组和模型组样本数据进行分析, 得到正、负离子模式下的S-Plot图[图4(B)和(D)], 图中“S”曲线的每一个点代表一个变量, 变量对分类的重要程度由VIP值的大小来衡量, 变量离远点越远, VIP值越大. 根据VIP值(VIP>1.0)和P值(P<0.05)筛选出潜在的生物标志物.2.3 主要生物标记物的分析通过与数据库标准谱图进行比对, 共鉴定出9种潜在的生物标记物(见表2), 分别为磷酯酰丝氨酸[16∶0/18∶1(9Z)]、溶血磷脂(16∶0)、溶血磷脂[20∶4(5Z,8Z,11Z,14Z)]、溶血磷脂[22∶6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)]、胆固醇硫酸酯、胆汁酸、γ-亚麻酸、二十二碳五烯酸和9′-羧基-γ-生育酚. 其中, 模型组相对于正常组, 胆固醇硫酸酯的含量升高, 其它成分含量下降; 大鼠经丹参多酚酸盐治疗后, γ-亚麻酸、二十二碳五烯酸和9′-羧基-γ-生育酚的含量相对于模型组明显升高, 其它成分含量未发生明显变化, 表明丹参多酚酸盐可能通过影响γ-亚麻酸、二十二碳五烯酸和9′-羧基-γ-生育酚的代谢通路从而达到治疗扩张性心肌病的目的. 将UPLC-QTOF MS数据导入HemI软件[12], 对γ-亚麻酸、二十二碳五烯酸和9′-羧基-γ-生育酚进行了热图分析, 结果示于图5.9′-羟基-γ-生育酚是维生素E(Vitamin E)酯水解为酚羟基后的代谢产物, Jiang等[13]通过实验证实, 生育酚可影响维生素E的形式, 起到抗炎和抗癌的作用. Kamal等[14,15]发现, 维生素E和生育酚均具有强烈的抗氧化作用, 而生育酚还具有保护血管内皮、减少氧化自由基对血管壁的破坏及扩张微小动脉的作用. 本研究发现, ADR所致扩张型心肌病大鼠心肌组织中的SOD和Bcl表达水平明显下降, 而MDA和Bax表达明显上升, 表明ADR可致大鼠心肌细胞发生氧化应激, 并使心肌细胞凋亡数量增加, 工作的心肌细胞数量减少, 从而导致心功能降低, 心脏扩大. 扩张型心肌病模型血清中9′-羟基-γ-生育酚的表达基本消失, 而经丹参多酚酸盐干预后大鼠血清中9′-羟基-γ-生育酚的表达明显升高, 说明丹参多酚酸盐对ADR所致扩张性心肌病的氧化应激途径有积极的治疗作用.γ-亚麻酸是人体必需的多不饱和脂肪酸, 它具有降脂、杀菌、抗炎、抗血栓和抗氧化应激等多种生物学功能[16～18]. γ-亚麻酸由亚油酸分解产生, 扩张型心肌病患者心肌及血浆中亚油酸缺乏, 这可能是引起扩张型心肌病的发病因素[19], 而经STS干预治疗后, γ-亚麻酸在血浆中的表达升高, 说明丹参酮多酚酸盐对ADR所致扩张型心肌病大鼠脂肪酸代谢通路具有调节作用.二十二碳五烯酸(EPA)属于不饱和ω-3型不饱和脂肪酸, 是人体必需由外界摄入的脂肪酸, 在生物体内多个系统具有较强的生物功能, 具有调节血脂、软化血管、促进生长发育和提高人体免疫功能等作用[20,21]. 生物体细胞量代谢的60%～90%来源于外周血中游离脂肪酸的氧化, 而当扩张型心肌病发生时, 心脏本身射血分数降低, 可能导致机体全身细胞处于乏氧状态, 全身细胞迅速消耗掉外周血当中游离的不饱和脂肪酸为其供能, 继而引发能量能量代谢障碍; 当应用STS干预治疗扩张型心肌病大鼠后, 二十二碳五烯酸含量升高, 通过其抗氧化作用可以减少对心肌细胞的损害, 从而提高了心脏射血功能, 这证明了丹参酮多酚酸盐对扩张型心肌病大鼠的脂肪酸代谢及能量代谢具有调节作用.2.4 代谢通路的验证性分析2.4.1 第7周末大鼠左心室心肌组织SOD和MDA表达超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内天然的氧化酶, 可有效清除氧化自由基, 保护细胞受到氧化自由基攻击; 而丙二醛(MDA)则是氧化应激发生指标, 二者若互为平衡, 则生物体处于健康状态, 若MDA表达增多, 表明SOD的表达减少, 可推断氧化应激的发生[22,23]. 由图6可见, 与C组比较, M组大鼠心肌组织内SOD含量明显下降(P<0.01), 丹参多酚酸盐组大鼠较M组大鼠心肌组织内SOD含量明显上升(P<0.01); 与C组比较, M组大鼠心肌组织内MDA含量明显上升(P<0.01), 丹参多酚酸盐组大鼠较M组大鼠心肌组织内MDA含量明显下降(P<0.05), 说明应用丹参多酚酸盐可有效减轻ADR对心肌细胞的氧化应激损伤.2.4.2 第7周末大鼠左心室心肌组织Bax和Bcl-2表达Western bloting技术是检测蛋白的重要半定量技术, 目标蛋白与内参蛋白的比值可以反映目标蛋白表达量的相对变化. 图7(A)中, Bax和Bcl-2蛋白为目标蛋白, 而β-actin为内参蛋白, Bax/β-actin及Bcl-2/β-actin可以反映Bax和Bcl-2的相对表达量. Bcl-2是氧化应激“下游”的抗凋亡因子, 而Bax是氧化应激“下游”的凋亡因子, Bax可与Bcl-2结合形成二聚体, 从而减少抗凋亡分子与Bcl-2的同源二聚体化, 促进细胞凋亡[24,25]. 如图7(B)所示, 与M组大鼠相比, C组大鼠左室心肌细胞中Bcl-2表达明显减少(P<0.05), 而Bax表达增多(P<0.05), 表明M组大鼠左室心肌组织中异常凋亡正在发生;与M组相比, T组大鼠Bcl-2表达趋于正常(P<0.05), 而Bax表达下降(P<0.05), 说明丹参多酚酸盐具有通过调节抗氧化分子表达水平抗心肌细胞凋亡的作用, 从而改善了扩张型心肌病大鼠的心脏功能.将代谢组学与分子生物学方法相结合, 研究了丹参多酚酸盐治疗扩张性心肌病的作用机制. 通过代谢组学方法共鉴定了磷酯酰丝氨酸、溶血磷脂、溶血磷脂、溶血磷脂、胆固醇硫酸酯、胆汁酸、γ-亚麻酸、二十二碳五烯酸和9′-羧基-γ-生育酚等9种内源性代谢产物. 实验结果表明, 丹参多酚酸盐通过影响脂肪酸代谢和抗氧化等通路发挥治疗作用, 其中抗氧化通路是其减少心肌损伤的重要作用途径. 本文阐述了丹参多酚酸治疗ADR所致扩张型心肌病的作用机理, 为临床治疗扩张性心肌病提供理论依据.† Supported by the National Natural Science Foundation of China(Nos. 81560702, 81260682).【相关文献】[1] Quiles J. L., Huertas J. R., Battino M., Mataix J., Toxicology, 2002, 180, 79—95[2] Han Y. M., Oh H., Na M., Kim B.Y., Jeong D. G., Ryu S. E., Sok D. E., Ahn J. S., Biol. Pharm. 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三、DNA与RNA分析方法
1 x : 90 mM Tris-磷酸
10 x : 108 g Tris 碱
2 mM EDTA
15.5 ml 85% 磷酸
40 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0)
TBE (pH 8.3)
0.5 x : 45 mM Tris-硼酸 1 mM EDTA
5 x : 54 g Tris 碱 27.5 g 硼酸 20 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0)
2. 琼脂糖凝胶的制备
1) 配胶：按一定的比例加入琼脂糖和电泳缓冲液 常见的电泳缓冲液。
缓冲液
TAE ( pH 7.5 – 8.0） 1x:
使用浓度
40 mM Tris-乙酸
储存液
50 x : 242 g Tris
1 mM EDTA
TPE (pH 7.5 – 8.0)
57.1 g 冰乙酸
100 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0)
第一节 琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖是从海藻中提取出来的线状高聚
物，经过纯化后可作为分离DNA或RNA的介
质。琼脂糖经某些化学修饰后可变为低熔点 琼脂糖，其熔点和凝固点降低，但凝固后凝 胶的强度无明显改变。琼脂糖的基本结构：
琼脂糖凝胶分离DNA片段的原理
琼脂糖吸水形成胶球，不同大小的DNA 分子通过胶球之间的孔隙时移动的速度不同， DNA分子越小移动的速度越快，DNA分子越 大移动的速度越慢。
玻璃珠法
硅胶膜
二、脉冲场凝胶电泳( 10 - 2000 kb)
1. 倒转场凝胶电泳： 通过周期性地改变电场的方向而使不同大小 的DNA片段分离的方法 a) 可分离的最大片段 ( kb): 0.13×(T+40)×V1.1×(3-A)0.6×t0.875 b) 可分离的最小片段 (kb)：
用DNA条形码鉴定常见鱼翅的种类与真伪
Vol.33,No.6Dec. 2020第33卷第6期2020年12月水产学杂志CHINESE JOURNAL OF FISHERIES文章编号:1005-3832( 2020 )06-0028-06用DNA 条形码鉴定常见鱼翅的种类与真伪熊娟，黄启红，陈敏儿，方军(广东省科学院，广东省测试分析研究所(中国广州分析测试中心)，广东省化学危害应急检测技术重点实验室，广东省保健食品功效成分检测与风险物质快速筛查工程技术研究中心，广东广州510070)摘要:用形态鉴定了物种的市面上常见的6种正品鱼翅作标准样品，以明胶为主要原料制作的2种假鱼翅作阴 性对照，用DNA 条形码技术研究了广东省市场流通的35种鱼翅的遗传多样性，探讨从基因水平鉴别鱼翅制品真伪的方法，提高鱼翅产品标识准确性。
采用不同基因组DNA 提取方法比对，选择适合鱼翅DNA 的提取旗 筛选出C01序列DNA 条形码通用引物,对鱼翅DNA 进行PCR 扩增并测序,应用MEGA 6.0软件对64条鱼翅COZ 序列进行多序列比对，基于邻接法(N-J )构建进化树，分析遗传距离。
同时应用DNAman 构建相应COZ 序列的聚类同源树。
结果表明,本研究所建立的条形码技术能鉴别13种鱼翅物种。
分子系统发育树显示侗_个物种的不同个体基本都能形成单系，节点支持率大都为99% ~ 100%。
聚类分析显示侗一物种都位于同一个分支，不同个体的鱼类的CO/序列相似度均大于95%。
该方法可为广东省流通的鱼翅制品的鉴定提供分子生物 学基础。
关键词:鱼翅;DNA 条形码技术;鉴定中图分类号:S917文献标识码:AIdentification of Species and Authenticity of Shark Fins by DNA Barcoding TechnologyXIONG Juan, HUANG Qihong, CHEN Miner, FANG Jun(Guangdong Provincial Engineering Research Center for Efficacy Component Testing and Risk Substance Rapid Screening of H ealthFood, Guangdong Provincial Key Laboratory of E mergency Test for Dangerous Chemicals, Guangdong Institute of A nalysis ( ChinaNational Analytical Center Guangzhou), Guangdong Academy of Sciences, Guangzhou 510070, China)Abstract: Six species of authentic shark fins in the market were identified by morphology as standard samples, and two kinds of fake shark fins made with gelatin as the main raw material were used as negative controls. The genetic diversity of 35 types of shark fins in the market in Guangdong Province was investigated using DNA barcode technology to probe for a method of identifying the authentic ity of shark fin products from the genetic level with higher accuracy of identification of shark fins products in Guangdong Province. Different genomic DNA extraction methods were compared and the most suitable DNA extraction methods for shark fins were chosen.The universal primers of DNA barcode of COI sequence were screened out, and the DNA of shark fins was amplified and sequenced by PCR. The multiple sequence alignment of 64 shark fin COI sequences was carried out by MEGA 6.0 software. The phylogenetictree was constructed based on the Neighbor-Joining method (N-J ), and the genetic distance was analyzed, and DNAman was used to construct cluster homology tree of COI sequences, with 13 species of shark fin being identified by the DNA barcode technology.Molecular phylogenetic tree showed that diSerent individuals of the same species had basically monophy form, with support rate of 99%〜100% for most of the nodes. Cluster analysis revealed that the same species was located in the same branch, and that the COI se quence similarity of fishes with different individuals was all greater than 95%. In conclusion, this method provides molecular biological basis for identification of shark fins products in Guangdong Province.Key words: shark fin; DNA barcode technology; identification广东省素被誉为养生大省，而鱼翅作为广东著 度水涨船高。
WD-9413C凝胶成像分析系统和凝胶成像分析系统价格
SF-CJ-1A净化工作台
标题：SF-CJ-1A净化工作台
SF型系列净化工作台适用范围：净化工作台是开展生物技术研究和实验必不可少的基础设备之一，广泛适用于医疗卫生、制药、化学实验、电子、国防、精密仪器，仪表、高等院校等行业提供操作空气净化用。产品特点：※外壳采用优质冷轧钢板，静电喷塑，操作台面采用镜面不锈钢材质，耐腐蚀，清洗方便。※本机采用由离心式风机和高效、中效过滤器组成的空气净化系统，使得空气从一开始便得以过滤，洁净度高。※采用可调风机组，轻触型开关可调节工作区风速大小，保证工作区风速始终处于理想状态，并配备独立控制的照明灯和紫外线杀菌灯。※垂直单向流流形闭合工作台面，有效防止外部气体透入和操作区异味对人体的伤害。※采用配重式移动操作门，用户根据需要可任意定位，使实验操作更方便...
厂家：南北凝胶电泳
标题：JY-TD331变性梯度凝胶电泳
JY-TD331变性梯度凝胶电泳参数凝胶面积(W×L)：16×16cm凝胶厚度：1mm梳子齿数：21、35；（选配15、1、2）凝胶板数：双板缓冲液容积：12升详细描述◇DGGE变性梯度凝胶电泳系统被广泛应用于基因突变检测及相关研究。◇产品性能指：·双板凝胶面积：16 × 16 cm，凝胶厚度1mm；·加样数量：21、35；（选配15、1、2）；·配一体化梯度胶电动生成器和原位制胶器；·缓冲液垂直直板搅拌桨，缓冲液温度均匀度可达到±0.5℃；...
厂家：南北
标题：TDH-500原位杂交仪
TDH-500是原位杂交的佼佼者在原位杂交和FISH实验中，变性温度是至关重要的环节，也是确保实验成功的关键步骤。TDH-500原位杂交仪可以根据实验者的设置，自动完成变性和杂交过程。在严格的温度控制，适宜的湿度环境下，加上低廉的成本，和时间上的节省，为分子水平的研究提供了可靠的保证。TDH-500原位杂交仪系统一次可处理12张玻片。全密封式上盖设计和全自动的加湿方法保证了理想的温度和湿度，系统保证了高度的温度均一性，使得所有玻片温差上下不超过土1℃。玻片很容易用手取出或放入。利用触摸屏可以简单快速的编辑40个用户定义方案和3种操作模式：变性／杂交、杂交、固定温度、自定义以及原位PCR实验（In-situ PCR）模式。程序化操作，保证实验结果更准确1.一次可进行12张切片的实验...
六一凝胶成相仪的特点(新)
69000元（计算机打印机可选配，价格面议）WD-9413A型凝胶成像分析系统的特点:1.六一厂生产的凝胶成像分析系统,已经买了和已经看过实际演示的客户们评价很高，大家共同感觉：（1）体积小，价格比国外凝胶成像仪低3—4倍，但清晰度、分辨率高于或等同于国外凝胶成像仪。
（2）中英文软件加起来其分析功能高于国内外任何同类产品。
国外凝胶成相仪本身价格昂贵，大都只单单仅有一个照相功能，而如需要分析软件则要再花另一笔昂贵的费用（3）国外凝胶成像都是CCD的，固定死的，只能用于凝胶成像，而六一配的是数码相机，可以灵活移动，用于多地点多用途照相。
（4）国外凝胶成像的照片要进行若干个格式转换，才能进入分析软件。
六一的凝胶成像仪，不用任何格式转化，照片直接可进入软件。
（5）国外凝胶成像仪有的不能照白光片子，大部分国外的都没有照大板DNA测序槽的功能，而六一的凝胶成像仪功能齐全，既能拍暗室下紫外照片，也能拍白光照片，还能拍大板DNA测序槽的照片.（6）六一厂专为该像机配备了高质量的紫外滤光镜和紫外灯管、相机固定托架。
高清晰度,高分辨率的相机,500万像素约1500---2000dpi .例如,一张核酸荧光片子放了 1.5-2个月了,荧光基本粹灭了,紫外灯下显示很弱了,但数码相机照出来的条带非常清晰. 而一般国外的凝胶成像仪都是CCD的,大约只有700—800dpi.（7）六一中英文软件功能齐全，中文软件带图片数据管理库,可以把图片放数据管理库,进行检索,查询,管理. 中文软件图片编辑功能极强,可根据研究和发表文章的需要进行某一局部，某几个条带的计算、编辑、切割、重组、比较，光密度扫描,在图片上增加注解说明的字符和文字。
可测算电泳条带的光密度、迁移率、蛋白分子量和浓度。
中文软件随仪器配套，客户可根据不同的需要选择不同的英文软件。
英文软件有：a、有专门DNA测序用的。
b、有可做DNA，RNA分析的，包括RFLP聚类同源分析、PCR、RAPD-SSR-差异显示等分子标记数十条电泳条带多肽性的自动识别，2D计算重组质粒面积、总数，和双相电泳，杂交斑点的不规则面积的计算和计数及双相。
凝胶成像分析系统的选择
凝胶成像分析系统的选择发布时间：2009-6-1 编辑：admin 点击率: 370分子影像成像分析系统的选择----凝胶成像分析系统的选择关键词：凝胶成像分析系统化学发光成像分析系统，多色荧光成像分析系统，多功能活体成像分析系统一、前言：随着生物学研究的逐渐加深和生物学相关的分子生物交叉学科研究逐步加深，分子成像分析系统的实际应用逐渐的普遍化，但是现在广大的用户面对市场上品牌众多进口和国产的分子影像成像分析系统怎么样选择是一个难题。
二、分子影像成像分析系统包括成像系统和分析软件系统，成像系统包括：，相机，暗室，透射仪，UV和白光照明、琥珀色滤光玻片和UV防护罩等小配件。
相机根据CCD有可以分为有低到高：45万左右，100万左右，140万左右，200万左右，300万左右，400万左右，500万左右，甚至还有更高的，根据CCD 的温度有可以分为常温CCD相机，绝对制冷CCD相机，这两个相比绝对制冷CCD 相机无论从灵敏度和分辨率以及外界对实验的影响来看绝对制冷CCD相机，这两者相比绝对制冷CCD相机绝对是高端分子影像成像分析系统的未来的发展趋势和必须要求。
三、软件部分有成像软件系统，分析软件系统，又可以大致分为1D软件，2D 软件四、根据分子影像成像分析系统的应用范围又可以分为普通凝胶成像分析系统化学发光成像分析系统，多色荧光成像分析系统，多功能活体成像分析系统。
1 普通凝胶成像分析系统：可以蛋白电泳凝胶，DNA凝胶，样品进行图象采集并进行定性和定量分析，样品包括：EB、SYBR Green、SYBR Gold、Texas Red、GelStar、Fluoroscecin、 Radiant Red等染色的核酸监测；以及Coomassie Blue、SYPRO Orange、各种染色的蛋白质凝胶如考染等。
（或UV,EB和有色及可见样品成像）2化学发光成像分析系统：成像范围涵盖：UV,EB,化学发光、紫外-荧光、有色及可见样品成像3多色荧光成像分析系统：成像范围涵盖: UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像4多功能活体成像分析系统：UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像和离体组织和小型动物，及大型型动物五、选择现在分子影像成像分析系统的选择大致来看有这样的趋势：1专业研究分子生物学的在以前已经装配了普通凝胶成像分析系统，这两年有一些有远见教授或者研究到化学发光成像和多色荧光成像方向的实验室已经装配了，化学发光成像分析系统，多色荧光成像分析系统，这有部分已经有一定的数量了。
自拟中药复方金苓蓝口服液对靶动物临床试验效果的研究报告
用于金苓蓝口服液治疗ILT的实验性临床试验。
评价指标
表1 ILT病例纳入评分标准
次数/分钟或程度
分值
无
0
1
1
咳嗽
2
2
M3
3
无
0
罗音
1-2
1
3-4
2
M5
3
W41.5T：
0
41.6-42.0%：
1
发热
42.1-42.5 T：
2
M42.6T：3Leabharlann 无0喉头肿胀
轻微
1
明显
2
严重且出血
3
223金苓蓝口服液治疗ILT使用剂量和疗程依据
药效学试验验证，金苓蓝口服液连续用药5天可 以有效治疗动物呼吸道炎性病症,故设置金苓蓝
口服液临床用药疗程为5天。 药物对照组喉炎净散根据《中国兽药典》规
成年鸡饮水量约0.2L,鸡的饮水给药剂量应为
0.39mL/0.2L=1.93mL/L,本试验设置金苓蓝口服
液中剂量为饮水中添加2.0mL7L。故确定复方苓
兰口服液3个试验组的给药方案为：在饮水中分
别按高、中、低三个剂量(4.0 mL/L、2.0 mITL、1.0
m!7L)添加金苓蓝口服液。 参考临床治疗鸡病常用中药用药疗程并经
2019年第7期(总第212期) 作人员无交叉流动。
2.1.3主要仪器设备 微电脑全自动孵化机(FT-XF4)：北京春明方通
电子有限公司；PCR仪(AB2700)：美国应用生物
系统中国公司；凝胶成像分析仪(WD-9413A)：
北京六一仪器厂；KD2508轮转式切片机：浙江金
华科迪仪器设备有限公司。
2.2方法
2.2.1 ILT病例诊断标准
一例鸭疫里默氏杆菌病的诊断
鸭疫里默氏杆菌又称鸭传染性浆膜炎，原名 鸭疫巴氏杆菌病，是家鸭、家鹅、火鸡和多种家禽 和野禽的急性或慢性传染病。在自然条件下，该 病一年四季都有发生。主要通过污染的饲料、飞 沫和尘土等，经呼吸道和消化道或皮肤伤口感染。
1〜8周龄的鸭均易感，但以2〜3周龄的雏鸭最易感。 齐齐哈尔市某养鸭场送检5只雏鸭，临床症
胶成像仪(WD-9413B)为北京六一仪器厂产品。
表1 引物信息
引物
序列
大小/bp
靶基因
F
5— TTAGATAGTTGGTGAGGTAA-3*
475
R
5— ATCGGTGTTCTGAGTAAT-3，
巴氏杆菌KMT1T
收稿日期：2021 — 03 —12 第一作者简介:沈思思(1991-),女，黑龙江齐齐哈尔人，硕士，研究实习员，研究方向：微生物方面的研究。
1材料
2方法
2.1细菌的分离培养
无菌采集心脏、肝脏和脾脏病料接种于巧克
力培养基上，在含CO2的37°C培养箱中培养24〜 48 h,观察菌落形态和生长状况。挑取单个菌落
接种于血平板培养基上纯培养。 2.2革兰氏染色镜检
挑取血平板培养基中单个菌落进行涂片、革 兰氏染色镜检山。
2. 3 PCR扩增 挑取镜检过的同个单个菌落接种于5 mL的
4小结与讨论
在临床症状和病理剖解的基础上,对该场5只
雏鸭进行实验室诊断，通过细菌分离培养、镜检、
PCR检测确诊为鸭疫里默氏杆菌，采用敏感药物
丁胺卡那的治疗，病情得到了有效的控制。 从药敏试验的结果可以看出，该养鸭场对丁
胺卡那极敏，对环丙沙星、青霉素高敏，对罗红霉 素中敏，对庆大霉素低敏，对其他抗生素均耐药， 这与该养鸭场不规范使用抗生素密不可分，使得 细菌耐药性不断增强，为以后养鸭行业带来了极 大的隐患。如果想改变此现象必须规范养殖场抗
科学研究基础--应掌握的要点
科学研究基础—复习提纲一、科学研究与开发选题原则6点1.结合实验室基础和条件：设备、经验积累2.结合社会需求：人类、国家、省、地、县、企业、个人，国情、省情、校情；3.结合个人兴趣和能力：有些人不宜野外。
4.资料检索判断新颖性和可行性(从理论及前人的工作来判断理论上是否新颖和可行)5.实际可行性分析：内外部条件、经费、时间6.应撰写选(开)题报告：背景、目的意义、方法和技术路线、目标、创新性和可行性、进度、经费预算。
均应有参考文献。
二、基础设备：使用及注意事项—-约90点1、超净工作台---1）超净台可将环境空气经初效过滤、高效过滤除去大于0.3μm的尘埃、真菌和细菌孢子等，然后从出风面吹出；2）出风面分水平和垂直两类，各有优缺点，且出风量可调；3）操作台有单双人、单双面之分，操作室内力求简洁，凡与操作无直接关系的物品一律不能放入，以利保持无菌状态。
4）使用时需提前30分钟开台内紫外灯杀菌，提前20分钟开风机。
在进入操作之前应先关掉紫外线灯，关后10分钟即可入内。
5）定期用70%酒精或0.5%苯酚喷雾降尘和消毒，70%酒精擦拭台面和用具，用福尔马林(40%甲醛)加少量高锰酸钾定期密闭熏蒸，菌检≤0.5个/皿·时（Φ9皿）6）注意事项：操作时严防易燃物失火，禁止在工作台面上记录，工作时应须尽量避免作明显扰乱气流的动作。
2、高压蒸汽灭菌器：水3、压力温度3、时间3、其它1-31）操作要点：通电→查看水位（确定是否需要加水）→放灭菌物品→密封→设定温度与时间→排气→关闭排气阀→灭菌→放气(按照灭菌物品的不同性质和不同要求，进行快放气，慢放气和自然冷却 )→开盖2）注意事项：必须充分排除冷空气、灭菌物品体积适宜,布局合理,严禁堵塞安全阀和放汽阀的出汽孔、水质要求清洁，水量切忌过多或过少，灭菌液体时以不超过3/4体积为好，瓶口选用棉花塞或透气的封口膜，切勿使用未打孔的橡胶或软木塞。
保持自然降压, 保持系统原有的平衡 , 以防产生液体减少或喷溅现象）。
WD-9413C凝胶成像说明书
WD-9413C凝胶成像分析仪使用说明书北京市六一仪器厂特别提示：使用该仪器前，请认真阅读使用说明书。
使用说明书应与仪器放在一起，以便操作者随时阅读，一旦说明书丢失，请向我们索取。
一、用途：该套实验室设备用于对电泳凝胶图像的分析研究，采用模拟摄像头将置于暗箱内的电泳凝胶在紫外光或白光照射下的影像取进计算机，通过相应的凝胶分析软件，可一次性完成DNA、RNA、蛋白凝胶、薄层层析板等图像的分析，最终可得到凝胶条带的峰值、分子量或碱基对数、面积、高度、位置、体积或样品总量。
二、结构与特点WD-9413C型凝胶成像及分析系统是带暗箱的分析仪，由紫外透射灯箱、白光灯箱、暗箱、摄像头、计算机系统，凝胶分析软件等组成，可在明室中操作。
该仪器配备白光光源及三种波长的紫外光源，您可根据自己的需要，单独使用其中某个波长的光源，亦可同时使用几种波长光源。
产品特征：* 高灵敏度，高分辨率数字成像系统；* 提供白光和紫外光源,可对银染、荧光、胶片、考马斯亮蓝、EB染色图像进行数字化处理；* 可以配合凝胶分析软件进行各种图像分析；* 多用途暗箱，免除实验室的暗房设置，并可进行紫外或白光透射及紫外反射照相。
设计同时考虑到尽可能降低紫外光对人体的伤害；* 光照均匀，最大成像面积达200×250 mm。
仪器外观示意图：控制面板门把手图1摄像头镜头控制器图2USB线232线电源插座电源总开关图3三、主要性能指标基本参数外型尺寸（L×W×H）：440×430×770mm；反射紫外光源波长：254nm、365nm；透射紫外光源波长：302nm；紫外光透射面积：200×250mm。
环境条件：环境温度：5℃～40℃；相对湿度：≤80%；大气压力：86kpa～106kpa。
电源条件：电源电压：单相正弦交流220V±22V；频率：50Hz±1Hz。
其它：各波长的紫外光源的窗口辐照度不小于10μW/cm２；白光照度≥100lx(勒克司)；可以连续工作时间4小时。
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北京六一WD-9413A型凝胶成像分析系统
产品用途：
主要用于核酸、蛋白质电泳观察、照相和实验结果科学分析
特点：
＊暗箱式，无需暗室，可全天候使用
＊抽屉式灯箱互换，使用方便，防止污染
＊具有实时预览、自动对焦功能
＊紫外滤光镜：兼容EB、Sybr、GoldView等荧光染料
＊兼容tif、jpg、bmp、gif、pcx等诸多图像格式
系统配置：
进口高分辨率数码相机
进口专业分析软件
高配置品牌计算机
高分辨率彩色喷墨打印机
技术指标：
分辨率：与相机一致
有效像素数：1470万像素
素像素密度：8位（256灰度）
数码变焦：与相机一致
光学变焦：与相机一致
光圈范围：F2.8/F4.5-F8.0
快门速度：15-1/ 4000秒
微距自动调焦：与相机一致
可进行1D、2D、AFLP等实验结果的专业分析
功能强大的分析软件:
1.图象处理功能：
调整图像大小、调整亮度、调整灰度、调整对比度、图像旋转、图像反色、图像裁切、图像缩放2．1D分析功能：
＊分子量、浓度计算（可按连接点、线性衰减，指数衰减等三种方法得出结果）
＊可计算出每根条带的迁移率（Pix），强度（lnt），净面积值，最大面积值和百分比
＊条带标注、文字与图形标注
＊泳道的自动识别
＊弯曲泳道的手动识别
＊可在同一屏幕显示出所有泳道所有条带的灰度值、分子量、浓度、面积、迁移率
＊可显示分子量的标准曲线图
＊可添加各种文字、箭头，图形符号的注解
3．AFLP，RFLP，PCR聚类等同源性遗传树分析
＊多肽性分析
＊差异显示分析
＊自动给出遗传树状图
4．2D分析功能：
＊可计算出每个点的迁移率（Pix），强度（lnt）和百分比
＊根据标准蛋白点自动计算分子量和等电点PH值
＊可求双向电泳某点的面积、直径、灰度值
＊自动统计点的总数，计算面积，灰度值
＊可分析双向电泳三个重复样品的平均数、差异位置，根据平均数生成新的图形
5．克隆计数（蓝白斑筛选）
6．菌落、斑点杂交
7．数据结果与MS Excel无缝联接
8．软件支持Win98/Me/2000/XP/Windows7。