C18色谱柱维护与保养
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗注意：每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书色谱柱维护保养是很重要的，关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性，所以任何人用过色谱柱之后，一定要对色谱柱进行保养，管理人员和使用者互相监督。
总的原则是色谱柱要轻拿轻放，避免损坏填料；另外没有使用的情况下，一定要保证两端的堵头封好。
对于具体的色谱柱，下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项，以便使用者参考。
对于未启用的新的色谱柱，先用甲醇或乙腈以小流速（0.2ml/min缓慢升高到0.5ml/min ）不接检测器冲洗色谱柱30分钟后，将色谱柱与检测器连上，流速调为1.0 ml/min冲洗色谱柱60分钟，然后不断降低有机相的比例（如80%、50%、 10%甲醇或乙腈）各冲洗至少 30分钟。
若色谱柱暂时不用，则将色谱柱保存在高比例有机相中（如80%甲醇或乙腈，或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中）；色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂（将缓冲盐溶液换成水）冲洗色谱柱15分钟，然后再换成流动相进行样品分析。
样品分析完后，色谱柱维护与保养方法：流动相中若含酸、碱、盐类物质，则要先用10%甲醇或乙腈冲洗，1.0ml/min 的流速冲洗至少30min,再用80%甲醇或乙腈冲洗至少30min,柱子保存在80% 甲醇或乙腈里（具体问题具体分析，洗脱程序可以是梯度洗脱程序，注意如果最后色谱柱保存的是高有机相，第二天用之前一定要用高水相过渡一下，再换成流动相）。
如柱子长时间未用，则柱子保存在 100%的甲醇或乙腈里。
对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等，柱子应采用梯度洗脱，一般用乙腈-水系统（水：90-10；乙腈：10-90）冲洗时间要稍长些，然后保存于90%乙腈。
需要特别强调的是，目前所有的C18柱均不能用纯水进行长时间（1小时以上）冲洗，除非有专门耐水的专用柱，否则，用纯水长时间冲洗色谱柱，会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷，损坏色谱柱。
c18色谱柱保养方法
C18色谱柱的保养方法C18色谱柱的保养方法主要包括以下几个方面：1.保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。
绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
2.每次新买的色谱柱虽然是经厂家测试过并密封好的，可是有的色谱柱到达手中时已经过很长的时间了，因此，每次拿到一根新的色谱柱都必须要对柱子进行处理。
首先，配制好65%的乙腈/水，再把色谱柱正确的连接在色谱仪上，出口放空（注意：出口端切不可连上检测器，以免污染了检测器），以低流速0.1ml/min~0.5ml/min（如果是LC/MC柱子，则应以0.3ml/min进行），不可以高流速进行，等看见柱子出口有液体流出后，过20分钟后再接上检测器，以循序渐进的方法将流速调至 1.0ml/min （如果是LC/MC柱子则应以0.3ml/min进行），继续冲洗2~8小时。
3.色谱柱的存储：在不使用色谱柱时，应将其存储在恒温箱或冰箱中，避免暴露在阳光下或高温环境中。
同时，要注意避免色谱柱的震动和振荡，以防止填料团聚或变形。
4.色谱柱的洗脱条件：为了避免填料的污染和附着物的积累，使用完毕后应进行适当的洗脱。
常用的洗脱方法包括使用pH2-3的酸性溶液，有机溶剂和水的混合溶液，或者乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脱能除去蛋白质污染。
阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗，阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗，除去交换性能强的盐，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有机物）、甲醇、水依次冲洗。
5.定期进行清洗：使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。
同时要定期用甲醇或丙酮冲洗色谱柱，保持色谱柱的清洁。
以上就是C18色谱柱保养的主要步骤和注意事项，遵循这些步骤可以有效延长色谱柱的使用寿命并保证实验结果的准确性。
C18液相色谱柱基础维护常识
C18液相色谱柱基础维护常识液相色谱柱中使用较多的就是C18色谱柱了，下面整理的有关C18液相色谱柱的基本维护，希望能给大家一些帮助。
1、色谱柱的流向不能改变在我们常规思维中，色谱柱上标示的流向是不可改变的，每次使用都要遵循。
可是，大家有没有想过这个方向的作用是什么呢?为什么要标示一个使用方向呢?其实色谱柱前后端的填料及填装工艺都是一样的，标示方向的目的就是让我们在使用中记住流动相从哪个方向流入色谱柱，那么这个流入段就是最先污染端。
这样就为我们日后维护或再生色谱柱做了准备，而我们需要遵循这个规定应该在色谱柱开始做样后。
我曾将已经污染过的色谱柱反方向来使用，如果保留时间不是很长，而色谱柱足够长，还是能使用一段时间的。
2、看清色谱柱说明书后再上机使用色谱柱内部保存着什么溶剂一定要看清楚，因此色谱柱的说明书一定要看清楚，当然也包括说明书上建议的维护保养规定，对我们都非常的有用。
对于反相柱来说，溶剂基本就是乙腈或甲醇。
但正相柱就不同了，因为正相柱除了可以适用正相系统，也可以适用反相系统，因此一定要看清楚，对于你的方法来说是否需要置换色谱柱内部保存溶剂。
3、用纯水冲洗色谱柱才能把缓冲液冲洗干净使用强溶剂冲洗色谱柱对内部填料的损伤是最大的，尤其是纯水，除非你的色谱柱是耐水的。
冲洗色谱柱可以的方法是用流动相比例的水系和有机系来冲洗。
如果你认为流动相比例无法把色谱柱冲洗干净或者此比例中有机系占有比例过大，你可以使用内含10%左右的纯水来冲洗。
4、保存在乙腈或甲醇中的新色谱柱可以直接使用理论上液相色谱柱不同于气相色谱柱需要活化，但是由于液相色谱柱内部保存的有机系具有挥发性，因此在使用前还是应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。
可以是0.5ml/min，120min，但可以咨询厂家，根据色谱柱参数设定。
5、色谱柱应该保存在纯乙腈或甲醇中根据第4条，色谱柱内部保存液具有挥发性，因此为了减少其挥发速度，可以添加5%-10%的水，这样的话可以在一定程度上减少一些有机系的挥发。
C18色谱柱维护常识
【讨论】高效液相色谱柱的保护各位，为保证我们的分析效果，延长色谱柱的使用寿命，大家一起来贡献一下自己在色谱柱使用过程中的护柱秘诀吧。
我先来聊聊，算是抛砖引玉了1、最好用预柱。
（但要注意，若有时出峰异常，要先看看是不是它有问题了）2、每次做完分析，都要进行冲洗，分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质，建议用90％甲醇冲洗30～60min；若分析用流动相中含以上物质，要先用10％甲醇（或用与分析用流动相同比例，把含酸、碱、盐溶液换成水）冲洗1小时左右，再梯度走到90％甲醇冲洗30～60min（若用多元泵）。
有必要时再循环几次，可以适当缩短时间。
若长时间不用该色谱柱，要冲洗好后，用纯甲醇或乙腈封存。
3、若流动相中用到离子对试剂，更应该好好冲洗，且该色谱柱最好作为专用，不能再做其它物质分析用。
因色谱柱填料性质已与原来所不同，在该柱上所摸索的色谱条件，可能在其它同类柱子上得不到重现。
4、尽量避免反冲，除非该色谱柱厂家明确说明允许。
5、普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度下分析。
6、定期测柱效，有下降，可以用10％异丙醇甲醇冲洗色谱柱。
若柱效还没有改善，可以再生，甲醇－二氯甲烷－甲醇。
呵呵，还有的一时想不起来了，各位有经验的战友请发表高见！1．样品要采用0.22或0.45μm滤膜过滤，流动相采用0.45μm滤膜过滤并脱气。
2．大多数反相色谱柱的pH稳定围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH围3．避免流动相组成及极性的剧烈变化。
4. 避免纯水冲洗反相色谱柱。
5．每次测试完毕，要用20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱（分析色谱柱250×4.6mm柱体积3.2ml）。
如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕后将柱子用纯水冲洗干净，并保存于乙腈中。
6．压力升高是需要更换预柱的信号。
1：溶剂中的不溶物—应使用色谱纯溶剂，膜过滤（孔径不超过0.45μm）2：样品中的不溶物—应对样品进行膜过滤（孔径不超过0.45μm）3：泵，进样器等中的不溶物—在泵和进样器之间安装置过滤器，在进样器和柱之间安装预过滤器4：柱不溶物的形成：由于溶剂的不互溶而产生的沉淀—用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱；在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀—检查样品液和流动相是否互溶；由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀—将色谱柱密封紧，并保持室温恒定！还有就是平衡色谱柱、色谱柱的再生：1 平衡色谱柱：反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。
液相色谱维护-柱使用及保养
色谱柱内的死体积
流动相pH值及组成不合适造成固定相流失 流速急剧变化造成固定相物理损坏 机械震动造成固定相产生裂缝 柱床收缩或干枯
重复性差、回收率低
实验的重复性差 色谱柱被污染 流动相pH值及组成不合适造成键合相流失 样品溶剂不同或样品本身不稳定
回收率低，不出峰
“不可逆”吸附 固定相过强或流动相过弱 非特异性吸附
溶剂过滤-除去微粒
不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶 剂过滤器以及色谱柱。
遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器和 色谱柱的寿命：
������ 使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。
������ ������ ������ ������
用滤膜过滤溶剂去除微生物。 每两天更换或过滤溶剂。 避免溶剂瓶直接日照。 向溶剂中加入0.0001-0.001M的叠氮化钠。
2）如果柱头塌陷较深（小于1cm）可逐渐减低流速至零，
再次拆下柱子，用填料修补直到塌陷填满为止。
色谱柱的存放
存放前的处理 除去杂质、盐等，防止细菌生长 合适的存放溶剂 两端密封保存，避免色谱柱床干枯
避免机械震动
注意存放的温度
色谱柱以外的因素（一）
“柱效”问题，不一定是色谱柱问题！ 仪器问题：连接不好造成死体积
记 住 ∶ 每 种 色 谱 柱 可 能 有 特 定 的 方 法 一 定 要 先 看 其 使 用 说 明 ！
色谱柱的清洗-物理阻塞
在安装柱前后测试压力差
如果柱压力太高，反装色谱柱，并用10-20倍柱体积的
若出现沉淀 (如：蛋白凝聚、细胞物、聚合物) 设法用
流动相冲洗色谱柱，监测压力变化
相应的可溶性溶剂，如 0.1% TFA/ 80% 乙腈, 6M 盐酸
如何保护色谱柱柱效 色谱柱维护和修理保养
如何保护色谱柱柱效色谱柱维护和修理保养1.色谱柱断裂熔融石英色谱柱的聚酰亚胺涂层如有少许分裂它就会断裂。
聚酰亚胺涂层可保护易碎的熔融石英管线。
柱温箱持续的加热或冷却、柱温箱风扇的震动以及把色谱柱绕在圆形柱架上均会对管线造成压力。
zui后在薄弱处发生断裂。
通过轻划或磨损聚酰亚胺涂层会造成显现薄弱处。
通常锋利的尖或边划管线时会造成划痕。
色谱柱挂钩和标签、GC柱温箱的金属边、色谱柱切割器以及试验室试验台上的各种物品都带有锋利的尖或边。
色谱柱自身断裂的情况很少。
色谱柱制造业试图找出全部有缺陷的管线并避开在已制好的色谱柱中使用这些管线。
直径较大的色谱柱更简单断裂。
也就是说在处理0.45—0.53mm 内径的管线时要比处理0.18—0.32mm内径的管线更加谨慎以防断裂。
已断裂的色谱柱并非不能用。
假如已断裂的色谱柱保持在高温下连续运行或运行多个温度程序，则将特别简单损坏。
已断裂色谱柱的后半段暴露在高温的氧中会快速损坏固定相。
而色谱柱的前半段因有载气通过仍会保持完好。
假如已断裂的色谱柱未经加热而是仅在高温或含氧的环境下暴露很短时间，则后半段将不会受到任何严重损坏。
可以通过安装接头来接上已断裂的色谱柱。
任何合适的接头都可重新连接色谱柱。
一支色谱柱上不能装入超过2—3个接头。
多个接头会造成死体积（拖尾峰）问题。
2.热损坏超杰出谱柱的温度上限会造成固定相和管表面的加速损坏。
这样会造成色谱柱的过分流失，活性组分形成拖尾，以及/或降低柱效（分别度）。
幸好热损坏是一个很慢的过程，因此，在色谱柱严重损坏之前还有一段很长的时间可在高于温度极限的条件下使用。
当有氧存在时会大大加速热损坏。
对有泄漏或载气中氧含量较高的色谱柱进行过度加热可快速并*地损坏该柱。
将GC的柱温箱zui高温度设定为色谱柱温度极限或稍高于该温度极限是防止热损坏的zui 佳方法。
这样可避开色谱柱意外的过热。
即使色谱柱受到热损坏，仍旧可使用。
把色谱柱从检测器上卸下来。
C18色谱柱通用使用方法
C18色谱柱通用使用方法1.柱的准备：a.检查柱的完整性和封闭性。
确保柱的端口和连接器没有损坏，没有杂质进入柱内。
b.检查柱的包装是否完好。
确保柱没有受到损坏或污染。
2.柱的预处理：a.将新的C18色谱柱进行预处理。
通常情况下，柱需要进行反相条件下的"洗涤"，以去除柱内的杂质和残留物。
b.使用适当的洗涤溶液，如乙腈/水或甲醇/水混合溶液，进行柱的洗涤。
通常需要使用高浓度有机溶剂，如100%乙腈或甲醇，进行洗涤。
c. 洗涤柱时，使用较高的流速，通常为1-2 mL/min，以加快杂质的去除。
3.样品的准备：a.样品前处理。
根据需要，对样品进行适当的前处理，如过滤、离心、稀释等。
b.样品溶剂的选择。
根据样品的性质选择合适的溶剂，通常为乙腈/水或甲醇/水混合溶剂。
c.样品的溶解。
将样品溶解于适当的溶剂中，并通过过滤器进行过滤，以去除悬浮物和固体杂质。
4.色谱条件的设置：a.流动相的选择。
根据需要选择合适的流动相组成，通常为乙腈/水或甲醇/水混合溶剂。
b.pH值的调节。
根据需要调节流动相的pH值，以适应目标化合物的分离。
c. 流速的设置。
根据样品的复杂性和分离的要求，设置合适的流速。
通常情况下，流速为0.5-2 mL/min。
d.分析温度的控制。
根据样品的性质和分析要求，设置合适的温度。
通常为室温或稍高温度。
5.色谱分离：a.样品注射。
将样品通过自动进样器或手动注射器注入到色谱柱中。
b.等待分离。
在流动相的作用下，样品组分将按照其亲水性和疏水性被分离。
根据需要，调节流动相的组成和温度，以实现最佳的分离效果。
c.收集分离的组分。
根据需要，收集分离出的目标组分，可以通过分级洗脱或梯度洗脱的方式进行。
6.柱的保养：a.柱的再生。
根据需要，可以使用适当的再生溶液（如有机溶剂）对柱进行再生，以去除残留的样品和杂质。
b.柱的保存。
在不使用柱时，将其存放在干燥、避光和低温的环境中，以保持柱的稳定性和使用寿命。
色谱柱使用注意事项及维护和修理保养
色谱柱使用注意事项及维护和修理保养色谱作为一种分别技术与方法，自本世纪初起已经有100多年的历史了，现在已经成为分析化学学科中的一个紧要的分支。
随着科技的进展，生产生活的需要，使得色谱技术也得到进一步的进展。
将来不断有新的联用的技术得到应用。
色谱柱的维护与保养的紧要性概括为9点：1.柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或猛烈震动；2.当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路确定要清洗干净；3.要注意流动相的脱气；4.避开使用高粘度的溶剂作为流动相；5. 进样样品要提纯；6.严格掌控进样量；7.每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；8.每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；9.若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭。
色谱柱的保养色谱柱是装填有固定相用以分别混合组分的柱管。
多为金属或玻璃制作。
有直管形、盘管形、U形管等形状。
色谱作为一种分别技术与方法，自本世纪初起已经有100多年的历史了，现在已经成为分析化学学科中的一个紧要的分支。
在人类进入新时代之际，人们面临着在信息科学、生命科学、材料科学、环境科学等领域的快速进展的挑战，在这些领域人才的需求成为国家高度进展的至关紧要的因素。
色谱柱在使用前，可以进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是依照色谱柱出厂报告中的条件进行，只有这样，测得的结果才有可比性。
我们在对色谱柱使用前进行测试以后，我们要依据不同的情况对色谱柱进行保养：①反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
②长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
c18柱色谱填料使用
c18柱色谱填料使用
C18色谱柱是一种常用的色谱柱，其填料具有亲脂性，常用于反相色谱中。
以下是使用C18色谱柱的注意事项：
1. 流动相的选择：C18色谱柱通常使用正己烷和甲醇作为流动相。
正己烷可以增加分离物与固定相的相互作用力，甲醇则有助于溶解非极性溶剂。
根据分析需要，可以调整正己烷和甲醇的比例。
2. 预处理：在使用C18色谱柱之前，需要进行预处理以去除可能存在的杂质和保证柱子的稳定性。
常见的预处理方法包括使用高压液相系统进行洗脱、使用有机溶剂或酸碱溶液进行洗脱等。
应避免用过酸性或过碱性的洗脱剂，以免对C18柱填料造成损害。
3. 样品准备：样品的溶解度和纯度对分离效果有很大影响，因此在分析前需要充分溶解样品，并通过滤器除去杂质。
4. 色谱柱平衡：在使用C18色谱柱之前，需要将其平衡至最佳状态。
可以通过逐步增加流动相的流速并监测基线来找到最佳流速。
在达到最佳流速之前，应缓慢增加流速以避免对色谱柱造成过度压力。
5. 柱效测定：在使用C18色谱柱之前，需要测定其柱效。
可以通过使用标准品进行测定，并比较标准品和样品的保留时间和峰形来进行评估。
6. 清洗和维护：在使用C18色谱柱过程中，需要定期清洗和维护以保持其性能和寿命。
需要定期更换流动相、清洗柱子并检查其性能。
总之，使用C18色谱柱需要了解其特点和注意事项，并进行充分的预处理、样品准备、色谱柱平衡、柱效测定以及清洗和维护。
这些步骤对于获得准确、可靠的色谱结果非常重要。
色谱柱维护系统安全操作及保养规程
色谱柱维护系统安全操作及保养规程色谱柱是色谱分析的核心部件，对于任何一种色谱柱维护系统，都需要注意其安全操作和保养规程。
本文就通过对色谱柱维护系统的安全操作和保养规程进行概述，希望能够对相关从业人员有所帮助。
安全操作1. 使用前检查在使用色谱柱前，必须对其进行检查，确保没有受到损坏或者有其他异常情况。
具体需要注意的内容如下：•检查色谱柱的接口是否正确，是否与仪器连接牢固；•检查柱体是否有异味；•检查柱体表面是否晶莹剔透；•检查柱尖是否损坏；•对柱子进行表面清洁后，观察柱子是否有损伤或表面划痕等。
2. 使用时注意在使用色谱柱的过程中，也要注意以下安全操作：•在操作之前要戴好手套、面罩和护目镜等安全装备；•操作前，要熟悉试剂的性质，并对一定会产生危险的试剂进行特别注意；•操作人员必须严格遵守操作规程，确保自己和周围人员的安全；•操作期间禁止抽烟、喝饮料或进食等易造成创伤的行为。
3. 停用后处理停用后的色谱柱，也需要特别处理才能保障安全：•在停用之前，要将流路关闭，把柱子从仪器上拆下来；•在取下柱子后，在空气中晾干4~5个小时，使得柱子干燥，避免受潮；•在存放的时候，避免阳光直接曝晒。
保养规程色谱柱是分析样品的基础设备，在使用过程中，需要在保证其性能的同时，进行正确的保养，以确保其寿命和性能一直处于在稳定的状态。
1. 清洗柱子在使用前后，需要对色谱柱的柱体进行清洗处理。
步骤如下：•先将柱子插入，确保流路紧闭，电压关断；•开启胶管瓶，在样品成功进入废柱处时关闭胶管瓶；•反向从样品向废针冲洗；•开启旋钮，调整反向泵和正向泵的比例为3:7时，开始正向注入清洗溶液洗脱样品，连续运行3个扫描周期长度；•调整正向和反向泵的比例为1:1，清洗溶液在整个柱子内循环1个小时左右（视污染程度而定）；•关闭胶管瓶，将柱子拿出来，用纯水和90%甲醇交替冲洗，保证柱子表面干净；•最后，将柱子放置在胶盖里面干燥。
2. 保养柱子在使用色谱柱一段时间之后，为了保持柱子的性能，在必要的时候还需要对柱子进行保养处理。
C18柱日常所需注意问题
C18柱日常所需注意问题总结如下，如有遗漏之处或对某项内容有不同看法来电讨论。
1、新柱在使用前需用纯有机试剂（如甲醇、乙腈）低流速冲洗，冲洗体积以20倍柱体积为宜，以便固定相能充分润湿、碳链舒展彻底，使色谱柱的性能达到巅峰状态；
2、使用时需在每日实验结束后冲洗色谱柱，尤其是流动相中含有酸或盐时，需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净，通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积；
3、长期保存前要将色谱柱彻底冲洗，建议冲洗3-4小时以上，最后保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液（如90%甲醇水）中；
4、日常保存溶剂（即第二天需继续使用）尽量与3中相同；
5、由于C18柱（极性改性处理的除外）的固定相疏水性较强，在使用过程中尽量不要使用高水相条件，若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的负面影响，Diamonsil（2）由于碳载量高，表现尤为明显，建议使用过程中水相比例不超过90%；
6、色谱柱压力升高、柱性能下降：通常为色谱柱被污染，对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效；
7、色谱柱压力骤升：通常由盐析出或筛板堵塞引起，若是盐析出，用10%甲醇水低流速冲洗至压力恢复即可；若判断并非盐析出，以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱（将色谱柱反接，不接检测器），若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效，需寻找其他原因。
色谱柱再生程序：
按照下列次序冲洗色谱柱，冲洗体积均为20倍柱体积：
10%甲醇水→甲醇→异丙醇（或氯仿）→甲醇→10%甲醇水
（步骤3选用异丙醇时，由于异丙醇粘度较大，需适当降低流速，建议流速设为0.2-0.3ml/min）。
色谱柱使用及维护
色谱小知识
常用的缓冲盐溶液有哪些？ 色谱柱参数ID=4.6um, ø =3,5um的意义？ 为什么色谱柱再生时都选用异丙醇？
一般来说，5um与3um的微粒分别用2um与0.5um孔 径的不锈钢滤片
发生不良反应的可能比色谱柱内壁大得多
峰型不好与样品回收率低可能预示滤片出现问题
压帽：即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱 帽，中部有小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定 筛板
密封环：位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四 氟乙烯制成，用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封
解决方案： 降低进样量 加入扫尾剂（酸---1%乙酸；碱----10mmol/ml三乙胺，
三乙胺无效，可改为EDTA） 尽量采用色谱级试剂 增加缓冲盐的浓度
产生次保留效应的因素--离子交换效应
离子交换效应：质子化的碱性分子与离子化的硅羟 基发生离子交换产生次级保留效应
产生次保留效应的因素—痕量金属离子
金属离子所产生的强吸附位比硅羟基强50倍！！ 更易引起碱性物质的拖尾Βιβλιοθήκη 严重拖尾-----强保留组分
严重拖尾峰的出现往往是强保 留污染物在柱头进口处聚集的 信号！！！
峰分叉
可能原因： 柱填料坍塌 柱过载 色谱柱中存在“空穴”（使用中避免撞击）
解决方案： 更换色谱柱 降低进样量
柱填料：色谱柱担体，常用的填料为硅胶、多孔聚 合物、氧化铝等
硅胶填料的特性
优点
优良的物理特性 可控的成熟工艺 理想的表面活性 优良的溶剂兼容性（不存在不溶胀）
缺点
在高pH条件下，硅胶溶解
良好的色谱柱使用习惯
使用前的准备工作
阅读使用说明书（特别注意使用事项、pH范围、保 存条件）→按要求活化色谱柱→测定柱效，记录色 谱柱参数信息→流动相平衡色谱柱进样
色谱柱维护、保养与常见故障排除MicrosoftWord文档1
色谱柱维护、保养与常见故障排除MicrosoftWord文档1色谱柱的维护保养、再生与常见故障排除现在质量部液相色谱仪上所使用的是c18色谱柱，色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的，新的色谱柱在使用之前应该在液相色谱仪上进行性能测试，因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍柱体积的色谱级甲醇平衡色谱柱；并且应注意用纯水"过渡"。
平衡过程中，应将流速先设定0.3 ml/min 0.5 ml/min 0.8 ml/min缓慢地提高.最后用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线。
色谱柱的维护1.配制流动相pH决不能超过该色谱柱规定的pH使用范围。
2.避免流动相组成剧烈变化。
3.流动相使用前必须经脱气和过滤处理。
4.应在实验完毕后将柱子冲洗干净，并保存在10；90甲醇水溶液中色谱柱的保存（1）色谱柱每天实验后的保养：实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗20分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用纯甲醇冲洗20分钟。
注意：不能用纯水常时间冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止使填料水解键合相失效而产生填料塌陷。
2）长期保存色谱柱：色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
可以储存在纯甲醇中，并将购买新色谱柱时附带的堵头堵上防止干枯。
3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现双峰的现象，一般来说是柱效下降。
依次以20-30倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱，然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。
4、色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决办法色谱柱在使用中最常见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加，属于正常现象。
但柱压在使用过程中突然升高（应是系统出现故障）。
部分常见原因及解决办法：（1）色谱柱头的过滤筛板或单向阀堵塞和污染；解决方法：如是色谱柱头的过滤筛板或单向阀被污染，卸下色谱柱头或单向阀，将其放在10％的稀硝酸内超声清洗10分钟，后再用纯水超声10分钟，（注：单向阀在超声时千万不要倒置超声）重新装入色谱柱。
C18色谱柱的选用、保养与维修要点
C18色谱柱的选用、保养与维修要点一、C18的选用 C18的选用主要考虑2个问题，即柱填料和柱规格对色谱柱的影响 1.1C18柱的填料对色谱柱的影响柱填料的物理性能对填料色谱行为有重要影响。
填料主要的物理性能包括如下：颗粒度、孔径、孔体积、键合相化学、含碳量及烷基化处理。
(1)颗粒度是指柱填料的颗粒直径的大小。
事实上色谱柱上所标的粒径是一个平均值。
如粒径“5μm”并不是柱中填料全部的颗粒直径都是5μm，事实上有一个颗粒分布度。
这种分布度对柱反压及柱效有重要作用。
普通来说，平均颗粒度越小，颗粒分布度越小，色谱柱效越高，反压亦越高。
目前C18柱填料粒径在4～10μm之间。
(2)孔径是指填料颗粒间的孔间隙。
普通所说的孔径是指填料的平均孔径。
球形填料装柱后平均孔径分布比较窄，柱床结构匀称，柱效高，重临性好；无定形填料平均孔径分布较宽，柱床结构不匀称，流淌相线性速度不匀称，谱带扩宽。
平均孔径的大小对分别大分子化合物有较大的影响，在分别含有较大分子的样品时可能会有分子排阻效应，或产生吸附效应从而影响定量的回收率及精确度。
因而在用反相色谱分别诸如蛋白或多肽样品时应考虑选用大孔径(如30nm)的反相柱填料。
孔体积作为硅胶多孔性的参数，在分别分析较大分子化合物时可作参考，选用较大孔体积的反相柱填料。
(3)化学键合相填料在高效液相色谱法中占有极重要的地位。
它可以键合极性较大的有机基团，采纳极性较小的溶剂作流淌相。
亦可键合极性较小的有机基团，选用极性较大的溶剂作流淌相。
C18色谱柱是以硅烷化键合型(Si-O-Si-C)存在的，这类键合反应目前应用最为普遍。
如以十八烷基三氯硅烷与全多孔型硅胶M-Porasil-C18反应生成烷基化学键合相，商品名为M-Bondapak-C18。
(4)碳含量即填料中的含碳量。
传统的测量技术是将填料加热到碳氢键断裂，然后通过测定损失的分量或形成的二氧化碳来计算碳含量。
可以通过增强碳键的长度或增强键合密度来增强碳含量。
依利特色谱柱的c18柱子
依利特色谱柱的c18柱依利特色谱柱的C18柱是一种在色谱分析中广泛应用的色谱柱。
C18柱是指柱内填充物为十八烷基硅烷（C18）的色谱柱，因其具有良好的疏水性能，所以主要用于分离和分析非极性或弱极性的化合物。
以下将从多个方面详细介绍依利特色谱柱的C18柱。
1. C18柱的原理和特点C18柱的填充物为十八烷基硅烷，其表面具有较强的疏水性。
在色谱分析中，样品中的化合物在流动相和固定相（色谱柱填充物）之间进行分配，非极性或弱极性的化合物会在C18柱上停留较长时间，从而实现与其他极性化合物的分离。
C18柱具有较好的稳定性和重复性，广泛应用于各种色谱分析。
2. 依利特色谱柱的C18柱依利特色谱柱是一种高品质的色谱柱品牌，其C18柱采用优质的十八烷基硅烷填充物，具有良好的柱效、稳定性和重复性。
依利特色谱柱的C18柱在制药、化工、环保、食品等多个领域的色谱分析中得到了广泛应用。
3. C18柱的适用范围C18柱主要适用于分离和分析非极性或弱极性的化合物，如烃类、脂肪烃、醇类、酯类、胺类等。
在制药行业中，C18柱可用于药物分析、质量控制、药效研究等；在化工行业中，可用于产品纯度分析、杂质检测等；在环保和食品行业中，可用于检测和分析环境污染物、食品安全指标等。
4. C18柱的使用和维护在使用C18柱进行色谱分析时，需要根据样品的特性和分析要求选择合适的流动相和色谱柱。
同时，要严格按照操作规程进行操作，确保色谱柱的稳定性和重复性。
在色谱分析过程中，要注意观察柱压、流量等参数的变化，及时调整流动相的组成和比例。
色谱柱使用完毕后，要进行正确的清洗和保养，以延长色谱柱的使用寿命。
5. C18柱的常见问题及解决方法在使用C18柱进行色谱分析时，可能会遇到一些常见问题，如柱压升高、柱效下降、峰形异常等。
这些问题可能是由于色谱柱污染、填充物破损、操作不当等原因引起的。
针对这些问题，可以采取相应的解决方法，如更换色谱柱、清洗柱子、优化操作条件等。
C18色谱柱维护常识要点
C18色谱柱维护常识要点1.色谱柱的存储：在不使用色谱柱时，应将其存储在恒温箱或冰箱中，避免暴露在阳光下或高温环境中。
同时，要注意避免色谱柱的震动和振荡，以防止填料团聚或变形。
2.色谱柱的洗脱条件：为了避免填料的污染和附着物的积累，使用完毕后应进行适当的洗脱。
常用的洗脱方法包括使用pH2-3的酸性溶液，有机溶剂和水的混合溶液，或者乙腈/甲醇和水的混合溶液。
洗脱条件可根据具体实验需求进行调整。
3.色谱柱的保养：在每次使用之前，可以采用反向流动的方式，用纯溶剂（如甲醇或乙腈）冲洗色谱柱，以去除悬浮物和固体颗粒。
此外，还可以使用纯溶剂进行适当的冲洗，以除去柱底的附着物。
4. 色谱柱的压力限制：为了避免色谱柱的损坏和破裂，应注意限制色谱柱的最大操作压力。
一般来说，C18色谱柱的最大操作压力为400-600 bar，具体压力限制应视柱子型号而定。
5.色谱柱的管线连接：在连接色谱柱和管线时，应注意连接的紧密性。
确保连接口无泄漏，避免溶剂泄漏造成的柱底液滴，以免影响分离效果。
6.色谱柱的pH范围：C18色谱柱主要用于中性和弱酸性化合物的分离，不适用于酸性和碱性化合物。
一般来说，C18色谱柱的pH工作范围为2-8，超过此范围会影响柱子的稳定性和寿命。
7.色谱柱的再生和保养周期：根据柱子使用情况和样品类型的不同，可以适当延长色谱柱的使用寿命。
通常情况下，C18色谱柱的寿命在100-200次左右。
超过这个次数后，可以考虑对柱子进行再生，使用适当的再生溶剂（如甲醇/乙腈和酸性溶液）进行再生处理。
8.色谱柱的操作温度：C18色谱柱的操作温度范围通常在室温到50℃之间。
在操作过程中，应注意温度的控制，避免温度过高或过低对柱子的影响。
9.色谱柱的保健：在柱子存放和使用期间，应注意避免强烈的酸碱溶液的接触。
柱底的固相填料可以通过适当的保护剂（如硅胶）进行保护，以延长柱子的使用寿命。
总之，C18色谱柱的维护对于保证色谱技术的准确性和可靠性非常重要。
色谱柱的维护与保养
色谱柱的维护与保养一、C8及C18反相色谱柱（新的色谱柱）应该在自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。
使用前应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。
具体步骤如下：（1）准备新鲜超纯水及色谱级乙腈或甲醇，冲洗色谱仪器系统，保证仪器系统管路干净。
（新柱老化前，此步决不可忽略）（2）将色谱柱反向连接，不接检测器。
用水-有机相（90：10～95:5），以0.3～0.6ml/min流速冲洗20～30min。
（目的是冲洗出柱入口端无机杂物与筛板孔杂物，使筛板正常）（3）再将色谱柱正向连接，不接检测器。
用水-有机相（90：10～95:5），以0.3～0.6ml/min流速冲洗20～30min。
（目的是冲洗出柱出口端无机杂物与筛板孔杂物，使筛板正常）（4）连接检测器，开启柱温达30℃～40℃，用水-有机相（90：10～95:5），以0.3～0.6ml/min流速冲洗4h以上。
（目的是充饱和色谱柱，去除柱内空气）（5）用水-有机相（10：90～5:95），以0.3～0.6ml/min流速冲洗2h以上[或在120min内以水-有机相（95:5→0:100）梯度变化，以0.3～0.6ml/min流速冲洗]→再用100%有机溶剂，以0.3～0.6ml/min流速冲洗1h以上→最后用100%有机溶剂，以1ml/min流速冲洗1h以上。
（目的是老化色谱柱）（6）在平衡前根据水相-有机相的比例，首先调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例，以1ml/min流速冲洗30左右（目的是相平衡过渡）。
如果流动相中含有缓冲盐，决不可在柱老化后立即用流动相平衡，必需先用90%以上水进行预平衡30min以上，否则，会导致缓冲盐在柱内析出结晶，严重时会将新柱永久不可逆地损坏。
（7）然后更换成新制并经0.45um滤膜过滤，超声脱气后的流动相，按检测方法平衡至少1h，待基线稳定后，开始进样检测。
Scherzo SW-C18色谱柱说明
Scherzo SW-C18色谱柱说明
１、使用前注意事项
ｌ）出厂的色谱柱保存在乙腈／水（65／35）中，进样前请先用纯甲醇或乙腈冲洗色谱柱30ml，再更换成能与检测流动相互溶的流动相冲洗30ml，最后用流动相稳定系统至基线平稳；
２）色谱柱可适用于反相模式和极性有机模式。
２、流动相
１）反相流动相一般使用甲醇、乙腈和水，流动相允许的最高有机相比例为100％，最高的水相比例为90％；
２）当需要使用缓冲溶液时，缓冲液的浓度不宜太高，有机和无机的缓冲溶液浓度不能超过0.3％；
３）色谱柱可承受的缓冲溶液ｐＨ范围为2.0～8.0，超过该范围时会降低色谱柱的寿命；
３、色谱柱保养
１）必须使用色谱级试剂配制流动相，使用前需经0.45ｕｍ滤膜过滤和超声脱气处理；
２）进样前，需过滤样品溶液；
３）使用了含酸、碱或盐的反相流动相后，应用低比例有机相冲洗色谱柱60ml去除，用乙腈／水（65／35）冲洗色谱柱30ml，保存色谱柱；
４）若流动相中不含酸、碱或盐等，可用乙腈／水（65／35）
冲洗色谱柱30ml，保存色谱柱。
５）建议不要长期在极端条件下使用色谱柱，以避免色谱柱使用寿命变短。
c18色谱柱 保存 步骤
C18色谱柱的保存步骤如下：
保存前的处理
1. 清洗：使用适当的流动相（例如甲醇-水混合物）以低流速冲洗色谱柱，以去除残留在柱内的样品和杂质。
2. 脱气：如果可能，使用氮气或其他惰性气体吹扫色谱柱内部，以去除残留的溶剂蒸汽。
3. 保护液填充：用适合的保护液充满色谱柱。
对于反相C18色谱柱，通常推荐使用甲醇：水=50:50（v/v）的溶液作为保护液。
存放条件
1. 温度：将色谱柱存放在室温（大约15-25℃）下，避免极端的温度变化。
2. 湿度：防止色谱柱受潮，如果可能的话，可以将其储存在干燥箱中。
3. 避光：色谱柱应存放在避光的地方，因为紫外线可能会导致固定相的降解。
长期不使用时的注意事项
1. 定期检查：即使色谱柱未在使用，也应定期检查其是否保持良好状态，并根据需要重新平衡或更换保护液。
2. 重新启用：在重新使用长期存放的色谱柱之前，最好先进行一次温和的清洗和再生过程。
C18色谱柱的选用、保养与维修知识汇总!
C18色谱柱的选用、保养与维修知识汇总！一、C18柱的选用1.1C1.2C1.3C二、C18柱的日常使用和维护在日常分别分析工作中，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命。
下面介绍C18柱在日常使用过程中应留意的事项。
(1)柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。
必需防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。
(2)假如仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置1根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。
(3)如使用柱温掌握装置时，应留意在通入流淌相后才能升温。
(4)流淌相使用前需进行脱气处理，以免降低柱效和影响检测等。
样品溶液需经适当的前处理及过滤，以削减柱污染和堵塞。
(5)在更换流淌相种类时，应留意溶剂的互溶性，防止发生盐析现象。
(6)柱子的实际操作压力应低于填装时的最高压力，最好在最高压力一半以下。
一般不超过20 593.965～29 419.95 kPa。
在低压力(14 709.975 kPa)的范围使用，可使柱保持长时期的高柱效。
(7)C18色谱柱属非极性键合相色谱柱，流淌相的pH值应严格掌握在2～7之间，以免损坏柱子。
(8)在完成分别分析工作之后，不应马上停机，需准时对色谱分析系统进行冲洗，一般0.5 h以上，以除去色谱柱内的杂质。
(9)假如流淌相中有盐类，首先用水充分清洗。
假如是胺类(如三甲胺类或四丁基胺类)添加到流淌相中，要用50%甲醇和0.05%磷酸溶液混合溶剂冲洗，不要只用水冲洗。
(10)C18一般用100%甲醇作为保存溶剂，以防柱子干裂而损坏。
严禁水或缓冲溶液长时间在色谱流路中保留。
(11)选用合适的C18爱护柱，以爱护分析柱免受杂质颗粒及不行逆吸附的干扰物的影响。
爱护柱内装填料颗粒度应与分析柱填料的颗粒度尽量全都。
(12)柱的保存期不宜太长。
短期不用的C18柱，用甲醇冲洗30～60 min，然后将柱两端密封。
较长期不用的柱子，一是实行定期冲洗，再密封的方法；二是在冲洗后，柱两端各装1只有肯定容量的灌满甲醇的容器(只装一端也可)，以补充在较长存放期间柱内溶剂的蒸发。
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C18色谱柱的维护与保养
1、新柱的处理：
我们每次新买的柱子虽然是经厂家测试过并密封好的，可是有的柱子到达手中时已经过很长的时间了，因此，我们每拿到一根新的色谱柱都必须要对柱子进行处理。
首先，是配制好65%的乙腈/水，再把色谱柱正确的连接在色谱仪上，出口放空（注意：出口端切不可连上检测器，以免污染了检测器），以低流速0.1ml/min~0.5ml/min（如果是LC/MC柱子，则应以0.3ml/min进行）均可，不可以高流速进行，等看见柱子出口有液体流出后，过20分钟后再接上检测器，以循序渐进的方法将流速调至1.0ml/min（如果是LC/MC柱子则应以0.3ml/min进行），继续冲洗2~8小时。
2、新柱的使用：
首先我们确认所分析样品流动相的PH是不是在色谱柱PH的耐受范围(2~8)之内，以免损伤柱子!如果，确认在柱子的使用范围之内，就用做样品的流动相平衡柱子(如果流动相中含用缓冲盐溶液，在平衡柱子之前务必要先用5%甲醇或5%乙腈去过渡30分钟以上。
再用带盐的流动相去平衡色谱柱。
)当色谱柱平衡了足够时间，基线非常平稳的时候，方可进样分析。
不管是分析什么样的产品，由于各种各样的因素，样品中总有杂质。
因此，最好在色谱柱前端加上保护柱。
以增加色谱柱的使用寿命！
3、色谱柱清洗：
①如果样品分析中只用到一般的乙腈、甲醇和水的流动相，在做完样品之后可直接用55%~65%乙腈/水或者用55%~65%甲醇/水冲洗色谱柱40~80分钟，然后以纯甲醇或乙腈冲洗30分钟，即可保存；②如果样品分中流动相里含用
缓冲液或酸或离子对试剂的流动相，在做完样品之后的清洗必须按照如下步骤进行清洗柱子:先用5%的甲醇/水或5%的乙腈/水，以1ml/min,冲洗1.5小时以上(如果色谱柱更长，则还需要增加适当时间);然后用55%~65%甲醇//水冲洗色谱柱30~60分钟.最后用甲醇或乙腈以1ml/min冲洗30分钟。
4、色谱柱的再生：
当色谱柱用过很长的时间之后，就可能发生柱压力升高、分离度不好、柱效降低、峰形不好等等情况，这时我样就需要对色谱柱进行再生，以延长色谱柱的使用寿命。
具体方法有如下：先用5%甲醇/水或者是5%乙腈/水，把色谱柱反向以1ml/min,冲洗60分钟以上.然后用四氢呋喃以1ml/min冲洗30分钟以上；再用65%甲醇/水或者65%乙腈/水，以流速1ml/min冲洗60分钟。
最后用纯甲醇或乙腈冲洗30分钟保存即可。
备注：甲醇、乙腈、四氢呋喃均要用质量好色谱纯。
水用是重蒸留水。