液相色谱柱子使用及保养
液相色谱柱使用问题解析
液相色谱柱使用问题解析液相色谱柱使用疑难问题解析就液相色谱柱的安装，使用和维护知识，以及各种柱压、峰形和色谱柱寿命等问题前来提问，也欢迎液相色谱方面的高手前来交流切磋。
内容提纲：一、液相色谱柱的安装、启用和维护中的重点注意事项1、柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配2、溶剂的匹配转换3、新柱使用前的平衡和老化4、pH使用范围5、色谱柱的保存二、柱压问题1、填料破碎和使用后，有填料粉末生成2、颗粒物堵塞引起柱压上升和对策1）预防措施2）故障排除3、化学污染物引起柱压上升和对策1）预防措施2）故障排除三、峰形问题1、峰后拖2、峰前延3、其他峰形问题四、保留时间问题1、保留时间的重现性2、保留时间漂移3、柱与柱之间的重现性4、批与批之间的重现性五、寿命问题六、其他疑难的色谱技术问题一.安装、启用和维护中重点注意事项色谱柱既是液相色谱仪的最核心部件，价格相对昂贵，请牢记它是高档仪器中的高档部件，给它以足够的尊重和关怀。
如避免强烈的碰撞和震动，尽管色谱柱从1米高的实验台掉落到水泥地上不至于100%会损坏，但50%的可能损坏你也承受不起。
另外不要让柱床变干，避免在严寒环境受冻等。
1. 柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配色谱柱是消耗品，不是仪器原配的情况很多。
上图表明柱连接的6种不同方式（数字单位是英寸），如果两者类型不匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。
接头比柱头深度长，不易拧紧而漏液；接头比柱头深度短，柱头内留有空隙而产生死体积，使谱带展宽和峰拖尾。
2. 溶剂的匹配转换色谱柱内保存溶剂和仪器系统内存留溶剂，如果和流动相不匹配，使用前需进行转换。
特别是流动相含缓冲盐时，如保存溶剂是纯有机相或有机相比例高，直接将新柱接入使用，会导致缓冲盐在柱内结晶析出，最严重会将新柱永久不可逆地损坏。
正相柱保存溶剂一般为正己烷，如果要转换成HILIC柱模式使用，由于正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好，转换中间需用二氯甲烷或乙酸乙酯过渡。
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗注意：每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书;色谱柱维护保养是很重要的,关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性,所以任何人用过色谱柱之后,一定要对色谱柱进行保养,管理人员和使用者互相监督;总的原则是色谱柱要轻拿轻放,避免损坏填料；另外没有使用的情况下,一定要保证两端的堵头封好;对于具体的色谱柱,下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项,以便使用者参考;min缓慢升高到min不接检测器冲洗色谱柱30分钟后,将色谱柱与检测器连上,流速调为ml/min冲洗色谱柱60分钟,然后不断降低有机相的比例如80%、50%、10%甲醇或乙腈各冲洗至少30分钟;若色谱柱暂时不用,则将色谱柱保存在高比例有机相中如80%甲醇或乙腈,或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中；色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂将缓冲盐溶液换成水冲洗色谱柱15分钟,然后再换成流动相进行样品分析;样品分析完后,色谱柱维护与保养方法：流动相中若含酸、碱、盐类物质,则要先用10%甲醇或乙腈冲洗,min的流速冲洗至少30min,再用80%甲醇或乙腈冲洗至少30min,柱子保存在80%甲醇或乙腈里具体问题具体分析,洗脱程序可以是梯度洗脱程序,注意如果最后色谱柱保存的是高有机相,第二天用之前一定要用高水相过渡一下,再换成流动相;如柱子长时间未用,则柱子保存在100%的甲醇或乙腈里;对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等,柱子应采用梯度洗脱,一般用乙腈-水系统水：90-10；乙腈：10-90冲洗时间要稍长些,然后保存于90%乙腈;需要特别强调的是,目前所有的C18柱均不能用纯水进行长时间1小时以上冲洗,除非有专门耐水的专用柱,否则,用纯水长时间冲洗色谱柱,会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷,损坏色谱柱;大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2~8,有的pH稳定范围会宽,具体pH稳定范围参照色谱柱说明书,当分析条件的pH值偏小或偏大时,可选择pH稳定范围宽的柱子进行分析,否则,会损坏色谱柱;在每次进行样品分析时,要保证流动相包括盐、缓冲盐、酸等与色谱系统及柱内的保存液要互溶,如不能互溶,则需要用一定比例的有机溶剂不低于10%或与分析流动相相当的有机溶剂对柱子进行过渡,否则,流动相中的盐会在系统与柱内析出,影响样品分析或损坏柱子;硅胶柱、正相手性色谱柱包括AS-H、AD-H、OD-H系列,5DMB、5TBB系列,OA 系列如OA-3100、OA-3300对于未启用的新的色谱柱,在保证系统是正相的情况下,可先用异丙醇小流速流速为~min冲洗色谱柱约15分钟,然后换上正相流动相平衡进行色谱分析;硅胶柱及正相手性柱不能过水相对于sepax系列的硅胶柱,可以过低比例的水相有机相不低于50%,接上色谱柱之前要保证液相色谱系统中的所有管路为正相流动相如是不含盐的反相溶液如水/乙腈；水/甲醇,先用异丙醇冲洗所有管路,然后用正相流动相冲洗所有管路,最后再接上色谱柱；若反相流动相中含有缓冲盐如缓冲盐/乙腈；缓冲盐/甲醇,先用纯水冲洗HPLC系统,然后用异丙醇冲洗所有管路,最后用正相流动相冲洗,再接上色谱柱;使用结束后,先用异丙醇冲洗色谱系统与色谱柱,再用色谱级的正己烷冲洗色谱柱,或者直接用正己烷－异丙醇90：10冲洗,并保存在正己烷－异丙醇90：10中;如长时间未用,则保存在正己烷中;需要特别强调的是,冲洗硅胶柱时,不能用纯水或含水的有机溶剂或缓冲盐体系冲洗色谱柱,只能用纯有机溶剂冲洗色谱柱对于sepax系列的硅胶柱可以用不低于50%有机相冲洗色谱柱,最后保存在纯的有机溶剂中;在进行样品分析前,一定要保证流动相与色谱系统及色谱柱柱内的保存液要互溶,如不互溶,则需要用异丙醇过度,否则,会影响色谱系统与损坏柱子;反相手性色谱柱如：CHIRALCEL OZ-3R：同C18柱阴离子柱和阳离子柱：目前常见的阴子柱有waters IC-Pak TM anion,阳离子柱有磺酸基阳离子柱与waters阳离子交换柱钙型;对于waters IC-Pak TM anion 和waters阳离子交换柱钙型,新柱子使用前用高纯水小流速min缓慢升高到min冲洗约30分钟,然后再换成流动相平衡色谱柱;在冲洗色谱柱之前,要保证整个色谱系统为纯水相;对于磺酸基阳离子柱含有硅胶基柱的,使用前用甲醇或乙腈小流速冲洗30分钟,然后高纯水替换系统冲洗,然后接上色谱柱;分析完样品后,对于waters IC-Pak TM anion和waters阳离子交换柱钙型用高纯水冲洗色谱柱,色谱柱最后保存在纯化水中;对于磺酸基阳离子柱,用50%的乙腈或甲醇冲洗色谱柱30分钟,最后保存在甲醇或乙腈中参照柱子说明书;冲洗所用流速根据柱子耐压情况进行调整;需要特别强调的是waters IC-Pak TM anion和waters阳离子交换柱钙型是不能过有机相纯有机溶剂或有机溶液,否则会损坏色谱柱;氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱目前所使用的氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱基本都是使用反相系统,其操作方法与维护保养与C18相同;对于新碰到的别的型号的色谱柱,如本规程没有说明时,要参照色谱柱说明书具体问题具体分析;液相仪器的冲洗1、冲洗色谱系统具体情况具体分析,可针对缓冲盐浓度较高的流动相一般做完试验冲洗完色谱柱后,换上两通,将各通道放于10%乙腈中冲洗至少30分钟若原色谱系统中流动相含盐,则用高纯水有时候用温水效果更好冲洗至少30分钟后再用10%乙腈冲洗;若仪器长时间不用,则将仪器保存于80%乙腈中; 2、清洗进样针、柱塞杆洗针液应选择能较好溶解样品的溶剂如该样品在70%甲醇中溶解,则洗针液应选择70%甲醇或更高比例的甲醇；清洗柱塞杆的溶剂为了清洗流动相中析出的盐,一般选择低比例的有机相,如10%甲醇或乙腈;3、仪器的钝化色谱泵溶剂过滤头、进出口阀及管路包括进样器和检测池若被污染,系统应做清洗和钝化处理;一般采用30%磷酸水溶液作为清洗剂,用6mol/L硝酸作为钝化剂,先清洗再钝化;清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢;钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜;30%磷酸水溶液制备：取85%浓磷酸35ml与65ml水混匀;6mol/L硝酸的制备：取浓硝酸40ml与60ml水混匀;方法：将色谱柱取下,用两通连接进样器和检测器,将所有吸滤头放入高纯水中,以min流速过渡至少30分钟,待管路中有机溶剂洗脱干净；再换用30%磷酸清洗系统约45分钟,再换高纯水冲洗,直至出口水pH值约为6～7用pH试纸测试,清洗完成；然后换用6mol/L硝酸冲洗系统约45分钟,再换高纯水冲洗,直至出口水pH值约为6～7,钝化完成;用纯甲醇过渡,浸润泵头及管路,备用;。
液相色谱的维护保养
液相色谱的维护保养
液相色谱(LiquidChromatography,简称LC)是一种常用的色谱分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
为了保证LC的分析结果准确可靠，必须对仪器进行定期的维护保养。
1. 液相色谱系统的清洁
在使用液相色谱前，必须对系统进行清洁，以避免污染对结果的影响。
清洁步骤包括：
- 清洗色谱柱：根据柱子类型选择合适的洗涤溶液，如纯水、乙腈、甲醇等，按照厂家提供的清洗步骤进行操作。
- 清洗进样器：将进样器从系统中拆下来，用洗涤溶液进行清洗，再用纯水冲洗干净。
- 清洗管路：将管路中的溶液排空，并用纯水进行多次冲洗，确保管路干净。
2. 液相色谱系统的保养
液相色谱系统的保养包括：
- 定期更换耗材：如柱子、进样器、滤膜等。
- 定期校准：校准泵的流量、检测器的灵敏度等参数，保证仪器的准确性。
- 定期检查电子元件：如检测器的灯管、电极等，保证其正常工作。
3. 液相色谱系统的存储
如果液相色谱系统长时间不用，必须进行正确的存储，以避免损
坏设备。
存储步骤包括：
- 将溶液从系统中排空，清洁干净。
- 拆下柱子和进样器，将其分别用保护塞封住。
- 将检测器的灯管、电极等拆下，放在干燥、通风的地方存放。
以上是液相色谱维护保养的主要内容。
只有定期进行维护，才能保证液相色谱系统的精准度和稳定性，获得准确可靠的分析结果。
审计追踪液相色谱仪安全操作及保养规程
审计追踪液相色谱仪安全操作及保养规程1. 引言审计追踪液相色谱仪是一种常用的实验室仪器，用于分析和检测样品中的化合物。
在日常实验室工作中，安全操作和仪器的定期维护保养是确保实验结果准确可靠的重要环节。
本文将介绍审计追踪液相色谱仪的安全操作方法以及保养规程，以帮助用户正确并有效地使用这一仪器。
2. 安全操作2.1 实验室环境确保实验室环境整洁、通风良好，并保持适宜的温度和湿度。
为了防止仪器受到外界因素的干扰，实验室中应该尽量避免直接阳光照射和电磁干扰。
此外，实验室的工作区域应该保持整洁，杂物要尽量远离仪器。
2.2 电源连接审计追踪液相色谱仪的电源连接需要专业人员进行，确保仪器接线正确并与地线连接良好。
在连接电源之前，用户应仔细检查电源线和插座是否完好，避免出现短路或电流过载的情况。
2.3 液相色谱柱的安装在安装液相色谱柱之前，先确保柱子是否干净并符合使用要求。
然后，按照仪器操作手册的指导，正确安装柱子并调整相关参数。
在调整柱子时，应注意保持稳定的操作力，避免对柱子施加过大的压力，以免损坏柱子。
2.4 溶液准备在进行色谱分析之前，需要准备好合适的溶液。
用户应严格按照操作手册的要求，正确配置溶液的浓度、pH值等参数。
在配置溶液时，需要注意使用干净的容器和工具，并进行必要的标记，以避免混淆和误用。
2.5 样品处理在将样品注入液相色谱仪之前，需要先进行适当的预处理。
预处理方式根据具体样品的性质和测试要求而定，可能包括稀释、过滤和固相萃取等步骤。
在进行样品处理时，用户应遵循标准操作流程，并注意保持实验场地的整洁和安全。
2.6 仪器启动和关闭在启动和关闭液相色谱仪时，用户应按照操作手册的要求进行操作。
启动仪器时，应检查各个部件的连接是否正常，并确保检测器和泵浦等组件正常工作。
关闭仪器时，应先按照操作手册中的步骤逐一关闭各个部件，然后拔掉电源插头。
3. 保养规程3.1 日常清洁为保持仪器的正常运行和延长使用寿命，需定期对审计追踪液相色谱仪进行日常清洁。
液相色谱柱的保存 液相色谱维护和修理保养
液相色谱柱的保存液相色谱维护和修理保养1.反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
2.长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度好是室温。
液相色谱柱的使用和维护在液相色谱操作过程中，我们需要下面的问题，便利维护液相色谱柱。
A柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。
必需防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。
B.假如仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。
C.避开压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的蓦地变化或者使液相色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充情形；柱压的蓦地上升或降低也会冲动柱内填料，因此在调整流速时应当缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
D.应渐渐更改溶剂的构成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂更改为全部是水，反之亦然。
E.如使用柱温掌控装置时，应注意在通人流动相后才能升温。
F.一般说来液相色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会快速降低柱效。
G.选择使用适合的流动相，以避开固定相被破坏。
有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避开分析柱中的硅胶基质被溶解。
H.避开将基质多而杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。
保护柱一般是填有相像固定相的短柱。
保护柱可以而且应当常常更换。
液相色谱柱的使用和维护保养
液相色谱柱的使用和维护保养液相色谱柱是一种广泛使用的分离技术，可用于分离和测定复杂混合物中的组分。
由于液相色谱柱具有精确分离、操作简便、分离效率高等特点，因此，越来越多的实验室都开始使用该技术。
在使用液相色谱柱时，正确的维护保养非常关键。
本文将介绍液相色谱柱的使用方法和维护保养技巧，以便确保您的分离实验能够得到最佳的结果。
一、液相色谱柱的使用1. 准备工作使用液相色谱柱之前，必须先进行预备工作。
这包括：清洗和准备液相色谱柱以免携带有污染物。
准备需要分离和测定的样品。
准备适当的流动相。
流动相必须符合样品的性质。
液相色谱柱的流动相应该是无色的，纯净的水或相应的缓冲液，并具有必要的缓冲能力。
根据柱的尺寸来选择适当的样品注射量。
2. 柱的装配通常情况下，液相色谱的柱是由管状的柱壳、填充柱节、柱端固定件和柱段之间的密封件组成。
在对柱进行装配的时候，对组件应该加强检查以保证每一个元件的质量。
柱被放置在可控压力的色谱装置中，直到达到设定的温度，流动相通过柱床高度。
在样品通过柱床的过程中，要确保流动相的速度恰好足够将所有的组分都分开并在规定的时间内溶出。
3. 分析过程准备工作完成后，可以开始进行样品的分离实验。
在整个过程中，以下措施应予以注意：在样品从样品室进入色谱柱之前，流动相必须在柱中流动。
否则，在注入样品时，将有空气囤积在柱床中，会在透射检测器处产生噪音。
更换液相色谱柱的流动相时需要小心，因为对于一些化学品来说，即使是微量的杂质也会对结果产生影响。
如果发现柱床粘住或困住，不应使用力量来拉动柱子，而应该使用相反方向的流动相，以使样品回到某一个位置，并反向流动一会，这样可以避免样品损坏柱子床。
二、液相色谱柱的维护保养液相色谱分析的成功与否，除了预备工作和分析过程外，还与样品的制备、取样位置以及样品进入液相色谱柱中的流动相的条件等因素有关。
因此，经常做好液相色谱柱的保养工作，可以有效防止柱子损坏，延长其寿命并保证实验结果的准确。
液相色谱柱的安装和使用 液相色谱如何做好保养
液相色谱柱的安装和使用液相色谱如何做好保养液相色谱柱的安装和使用液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分构成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工获得正确牢靠的试验数据的必经之路。
一、液相色谱柱的安装：1、液相色谱柱的结构：a、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。
柱接头接受低死体积结构，柱接头是两端螺纹组件，一端是为7/16英寸外螺纹，另一端是3／16英寸的内螺纹（国内外已规范化）。
7／16英寸外螺纹与 1／4英寸柱管（Φ6.35mm）连接，中心放置压坏用于密封。
3／16英寸的内螺纹与1／16英寸（Φ1.57mm）的连接管连接，中心也放置压环用于柱接头的密封。
为了尽量削减柱外死体积，在安装色谱柱时，用Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底，然后再拧紧空心螺钉。
压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上（连接管通过压环后露出的管长度应严格掌控在2．5mm长或其他固定尺寸）。
在两端柱接头内，柱管两端各放置一片不锈钢滤片（或滤网），用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。
空柱各组件均为316#不锈钢材质，能耐受一般的溶剂作用。
但由于含氯化物的溶剂对其有确定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避开腐蚀。
b、柱填料：液相色谱柱的分别作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。
正相柱：多以硅胶为柱填料。
依据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3—10 μm的范围内。
另一类正相填料是硅胶表面键合—CN，—NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。
反相柱：紧要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团（ODS）的非极性填料。
也有无定型和球型之分。
常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3—10 μm之间。
2，色谱柱的安装：a、拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。
b、拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。
月旭液相色谱柱安全操作及保养规程
月旭液相色谱柱安全操作及保养规程月旭液相色谱柱是一种常见的实验室仪器，它广泛应用于药物分析、生命科学和环境保护等领域。
在使用月旭液相色谱柱时，正确的操作和保养至关重要，这不仅可以提高实验结果的准确性和可靠性，还可以延长液相色谱柱的使用寿命。
本文将介绍月旭液相色谱柱的安全操作和保养规程。
安全操作1. 压力限制液相色谱柱在操作时会产生高压，因此必须确保操作过程中压力始终处于安全范围内。
不同型号的液相色谱柱压力限制不同，应严格按照仪器使用说明书上的指示进行操作，不得超过压力限制值。
此外，当压力突然升高时，应立即停止操作并进行检查。
2. 操作前检查在操作前，应检查柱子和接头的密封性。
如果柱子和接头的密封不良，将导致流体泄漏和柱子的破裂，从而对操作人员和仪器造成伤害。
因此，应定期检查柱子和接头的密封性，并在发现问题时及时更换。
3. 操作时的防护措施在使用月旭液相色谱柱时，应遵守实验室的安全操作规程。
操作人员应正确穿戴实验室安全防护用品，如实验室大衣、护目镜、手套等。
4. 操作结束后的处理操作结束后，应按照实验室的废物处理规程处理废液和废料。
同时，应关闭色谱柱，并按照操作手册上的指示进行保养。
保养规程1. 柱子储存月旭液相色谱柱应在常温下储存，并保存在干燥通风的地方。
柱子不得存放在高温和高湿的环境中。
2. 定期检查和保养在使用液相色谱柱过程中，应定期进行检查和保养。
首先，检查并清洗柱子表面，以确保表面的洁净和光滑。
其次，检查紫外可见检测器和泵的运行情况，确认设备的正常运行。
如果发现设备不正常，则应立即停止使用并进行维护。
3. 液相色谱柱的清洗清洗液相色谱柱的方法主要包括用纯水冲洗、以及使用醇、甲醛等溶液进行反向冲洗。
清洗时应避免使用强酸或强碱。
清洗后，应将色谱柱空转数小时，以便将水分和其他残留物完全清除。
4. 更换液相色谱柱液相色谱柱随着使用时间的增加和寿命的结束，应定期更换。
在更换柱子时，应按照操作手册上的指示进行操作。
高效液相色谱仪色谱柱的维护与保养
高效液相色谱仪色谱柱的维护与保养一、高效液相色谱仪色谱柱的维护与保养1. 注意安全在进行高效液相色谱仪色谱柱的维护和保养时，应注意安全，不要将手放在柱子上或柱子的内部，以免受到电击。
同时，也要注意防止外界的杂质进入柱内，避免影响柱子的性能。
2. 清洁色谱柱首先，使用湿抹布将色谱柱表面清洁干净，然后使用笔刷和溶剂将柱子内壁清洁干净。
清洁完毕后，需要将柱子放置在洁净的空气中，以便完全自然晾干。
3. 保养色谱柱在保养色谱柱时，需要注意柱子的密封，定期检查柱子的密封情况，如果发现柱子有渗漏现象，及时采取措施进行修理。
另外，还需要定期检查柱子的耐压强度，以免因耐压强度不足而造成柱子的破裂。
4. 定期更换色谱柱定期更换色谱柱是高效液相色谱仪色谱柱的保养工作之一。
色谱柱的使用寿命一般为2-3年，随着使用时间的延长，色谱柱的性能会发生变化，从而影响测试结果的准确性。
因此，需要定期更换色谱柱，以保证测试结果的可靠性。
二、色谱柱的存储1. 色谱柱应存放在干燥、无污染的环境中，避免阳光直射，以免受到湿气和污染物的侵害。
2. 色谱柱应放置在室温下，避免高温环境，以免影响色谱柱的性能。
3. 色谱柱应存放在通风良好的环境中，避免过多的湿气，以免影响色谱柱的密封性能。
4. 色谱柱应存放在有足够空间的地方，以免柱子撞击，造成损坏。
5. 色谱柱应存放在牢固的架子上，以免柱子受到重力的影响，造成损坏。
6. 色谱柱应存放在有足够防护措施的地方，以免受到杂质的污染，影响柱子的性能。
三、总结高效液相色谱仪色谱柱的维护与保养是高效液相色谱仪色谱柱使用的必要措施，既要注意安全，又要注意清洁和保养，定期更换柱子，并且要认真维护存储环境，以确保高效液相色谱仪色谱柱的正常使用。
常用液相色谱柱的规范化使用与保养标准操作规程
目的：规范液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。
延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。
提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。
范围：适用于使用高效液相色谱仪的仪器分析操作人员及相关管理人员。
责任：设备员、液相操作人员、质控主管、质量管理部经理、质量受权人。
内容：1.定义1.1 液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。
1.2 色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。
1.3 运载溶剂：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱内的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。
1.4 保存条件：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。
1.5 保存溶剂：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。
1.6 反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等。
常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
1.7正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱，常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
1.8氨基柱（-NH2）：可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。
使用时需注意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。
[氨基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂，例如：正己烷-乙腈（99：1）]。
2.液相色谱柱的使用及保养2.1普通C8及C8反相色谱柱的老化处理与使用保养程序新购色谱柱出厂前均采用适合的运载溶剂饱和，密封，由于运输过程周期较长，柱床容易干涸，所以新柱使用前需重新饱和与老化。
液相色谱使用注意及保养
高效液相色谱(HPLC)使用中常见故障及解决方法（一）峰型异常问题峰型问题是液相的主要问题，在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。
1、色谱图中未出峰。
解决方法：系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。
2、一个峰或几个峰是负峰。
解决方法：流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。
3、所有峰均为负峰。
解决方法：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光学装置尚未达到平衡。
4、所有峰均为宽峰。
解决方法：系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响。
、5、所出峰比预想的小。
解决方法：样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确．定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。
6、出现双峰或肩峰。
解决方法：进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。
7、前伸峰。
解决方法：进样量或样品浓度高；溶解样品的溶剂较流动相极性强；保护柱或色谱柱污染或失效。
8、。
解决方法：柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值；柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连接点降至最低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护柱，对柱子进行再生。
9、出现平头峰。
解决方法：检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。
10、出现鬼峰。
解决方法：进样阀残余峰，在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用HPLC级试剂；流路中有小的气泡，打开Purge阀，加大流速排除。
色谱柱的维护与保养
色谱柱的维护与保养一、C8及C18反相色谱柱（新的色谱柱）应该在自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。
使用前应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。
具体步骤如下：（1）准备新鲜超纯水及色谱级乙腈或甲醇，冲洗色谱仪器系统，保证仪器系统管路干净。
（新柱老化前，此步决不可忽略）（2）将色谱柱反向连接，不接检测器。
用水-有机相（90：10～95:5），以0.3～0.6ml/min流速冲洗20～30min。
（目的是冲洗出柱入口端无机杂物与筛板孔杂物，使筛板正常）（3）再将色谱柱正向连接，不接检测器。
用水-有机相（90：10～95:5），以0.3～0.6ml/min流速冲洗20～30min。
（目的是冲洗出柱出口端无机杂物与筛板孔杂物，使筛板正常）（4）连接检测器，开启柱温达30℃～40℃，用水-有机相（90：10～95:5），以0.3～0.6ml/min流速冲洗4h以上。
（目的是充饱和色谱柱，去除柱内空气）（5）用水-有机相（10：90～5:95），以0.3～0.6ml/min流速冲洗2h以上[或在120min内以水-有机相（95:5→0:100）梯度变化，以0.3～0.6ml/min流速冲洗]→再用100%有机溶剂，以0.3～0.6ml/min流速冲洗1h以上→最后用100%有机溶剂，以1ml/min流速冲洗1h以上。
（目的是老化色谱柱）（6）在平衡前根据水相-有机相的比例，首先调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例，以1ml/min流速冲洗30左右（目的是相平衡过渡）。
如果流动相中含有缓冲盐，决不可在柱老化后立即用流动相平衡，必需先用90%以上水进行预平衡30min以上，否则，会导致缓冲盐在柱内析出结晶，严重时会将新柱永久不可逆地损坏。
（7）然后更换成新制并经0.45um滤膜过滤，超声脱气后的流动相，按检测方法平衡至少1h，待基线稳定后，开始进样检测。
液相色谱柱的分类、选择及维护
液相色谱柱的分类、选择及维护一、液相色谱柱的分类(按色谱固定相基质分)1、硅胶基质1.1、反相色谱柱：反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。
反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。
1.2、正相色谱：正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)，以及其他具有极性官能团，如胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN，CPS)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform)，二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
1.3、离子交换色谱柱：以磺化交联强阴/阳离子键合硅胶色谱柱，常用规格：强阴离子色谱柱(SAX)，强阳离子交换色谱柱(SCX) 2、聚合物基质聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在PH值为1-14均可使用。
相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。
现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。
所有聚合物基质在流动相发生变化时都会出现膨胀或收缩。
用于HPLC的高交联度聚合物填料，其膨胀和收缩要有限制。
溶剂或小分子容易渗入聚合物基质中，因为小分子在聚合物基质中的传质比在陶瓷性基质中慢，所以造成小分子在这种基质中柱效低。
对于大分子像蛋白质或合成的高聚物，聚合物基质的效能比得上陶瓷性基质。
因此，聚合物基质广泛用于分离大分子物质。
3、其他无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。
液相色谱柱的保护及操作规程
液相色谱柱的保护及操作规程液相色谱柱的保护在液相色谱仪的使用中,保持液相色谱柱的柱效、容量和渗透特性,延长柱子的使用寿命特别紧要。
色谱柱用久后常显现柱压上升,柱效降低,峰形畸变, 保留时间更改等变化,如不实行适当措施,色谱柱将无法再使用,缩短色谱柱的使用寿命,本文从影响色谱柱的外界因素启程,并考虑色谱柱固定相性质的变化,讨论流动相和样品对色谱柱造成损害的因素,探讨保护方法。
1、样品对色谱柱的损害因素杂质堵塞:样品中的微粒同样会使柱子堵塞,样品也应进行过滤处理。
样品组分的不可逆吸附:通常被吸附的组分有蛋白质、醣等,可以实行加装保护柱,或使用适应的溶剂反冲来处理。
常用溶剂有四氢呋喃（适用于溶解有机高聚物和工业样品中的焦油）、高浓度的脲或盐酸胍溶液（使蛋白质改性而洗脱）、高离子强度的磷酸盐缓冲液（pH=7,适合反相柱和离子交换柱,可除去蛋白质和醣等）。
样品组分与固定相反应:这种反应对NH2柱的影响较严重,NH2易和酐、酮形成希夫（Schiff）缩合而削减活性点,使保留时间缩短,因此羰基化合物样品和流动相（如丙酮、乙酸乙酯等）不宜使用NH2柱。
活性点被覆盖:由于固定相吸附样品中的构成或杂质而使活性点被覆盖,在柱压上升的同时保留时间削减,将样品过滤或使用萃取分别柱（对大分子有机物如蛋白质、白细胞等）效果较好。
2、动相对色谱柱的损害因素颗粒杂质:目前广泛使用的柱填料直径多在10um以下,微小的颗粒杂质很简单使柱子发生堵塞,因此使用的溶剂应当过滤,柱子上端接头应当装微孔过滤片以阻拦颗粒物进入柱中。
水溶液中的微生物:以水溶液为流动相时,应防止细菌的生长,五氯酚、叠氮化钠、辛酸等能防止细菌生长。
当用水溶液或有机酸缓冲液保护柱子时,一些厌氧霉菌可能在色谱柱中繁殖,堵塞固定相颗粒间的空隙。
pH值:对硅胶基键合相填料,水溶液pH值不可超过2—7.5这一范围,当pH8时,硅胶会释出生成絮状物堵塞柱子,且难以复原,柱效很快降低,甚至完全失效。
常用液相色谱柱的规范化使用与保养标准操作规程
目的：规范液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。
延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。
提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。
范围：适用于使用高效液相色谱仪的仪器分析操作人员及相关管理人员。
责任：设备员、液相操作人员、质控主管、质量管理部经理、质量受权人。
内容：1.定义液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。
色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。
运载溶剂：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱内的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。
保存条件：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。
保存溶剂：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。
反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等。
常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱，常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基柱（-NH2）：可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。
使用时需注意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。
[氨基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂，例如：正己烷-乙腈（99：1）]。
2.液相色谱柱的使用及保养普通C8及C8反相色谱柱的老化处理与使用保养程序新购色谱柱出厂前均采用适合的运载溶剂饱和，密封，由于运输过程周期较长，柱床容易干涸，所以新柱使用前需重新饱和与老化。
色谱柱的安装,设置,老化和维护
色谱柱的安装,设置,老化和维护液相色谱柱的使用方法：1、色谱柱的使用说明：（1）、色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
（2）、流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）、样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存（1）、反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）、长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
高效液相色谱柱在保养时注意事项
高效液相色谱柱在保养时注意事项
哎呀呀，朋友们！高效液相色谱柱的保养那可是相当重要的呀！这可不能掉以轻心！
你瞧瞧，要是不好好保养，那可就像一辆豪车没了定期维护，性能大打折扣啦！
首先呢，使用后的清洁工作得做彻底呀！千万别偷懒，残留的物质会损害柱子的寿命呢！这就好比牙缝里的食物残渣不清理，会引发蛀牙一样。
还有哇，储存的时候环境要合适哟！不能太潮湿，也不能温度太高或太低，得像呵护娇嫩的花朵一样给它创造适宜的条件。
再者呀，别随便更换流动相的种类和比例，这可不是闹着玩的，不然柱子可能会“发脾气”的。
另外呢，使用过程中压力也得控制好，过高的压力就像给柱子施加了巨大的负担，能不累坏它嘛！
哎呀，要时刻关注柱子的性能指标，一旦发现不对劲，千万别犹豫，赶紧采取措施解决。
这就跟身体不舒服要及时看医生一个道理。
总之啊，高效液相色谱柱的保养注意事项一定要牢记心间，认真对待，这样才能让它发挥最佳性能，为我们的工作提供有力支持呀！。
高效液相色谱NH2柱安全操作及保养规程
高效液相色谱NH2柱安全操作及保养规程一、NH2柱的使用原理NH2柱是一种液相色谱柱，使用时会采用氨基化的硅胶作为固定相。
由于硅胶表面的官能团是氨基基团，能够与样品中的极性分子发生相互作用，进而对分离进行调节。
二、NH2柱的使用方法1.连接装置安装NH2柱时应连接检测设备，如进样器，检测器等。
连接时，应先连接进样器，再连接检测器。
2.洗涤在第一次使用NH2柱时，需进行洗涤。
使用洗涤液流通2-3个小时后，清空出柱中的洗涤液，然后用纯水进行洗涤，以去除任何残留物。
3.平衡在柱洗干净后，应用该检测方法的溶液和需要分析的溶液对NH2柱进行平衡。
溶液中需要下降等温升级，升温速度不要过快，以避免硅胶固定相表面积损失过大。
4.样品处理样品应先进行过滤或系列化。
如果需要，还可进行脱盐处理。
接下来，可以直接使用这个样品进行连续检测，得到相对准确的定量分析结果。
5.清洗当分析结束后，应立即用纯水进行冲洗，避免任何污渍残留在NH2柱上。
三、NH2柱的保养方法1.不会使用的人员不得安装或拆卸NH2柱；2.应使用安全稳固的操作平台；3.注意检查NH2柱连接的阀门、管道及垫片是否严密；4.避免机械冲击，特别是避免NH2柱连接处遭到打击；5.存放NH2柱时应避免阳光直射，不能暴露在高温、潮湿、有酸性气体或腐蚀性气体的环境中；6.避免NH2柱柱筒陷入液相内，以避免液相侵犯NH2柱内部，导致NH2柱出现问题；7.保持NH2柱表面清洁，避免表面污垢的附着。
四、NH2柱的故障与解决方法NH2柱在使用过程中，可能会出现以下故障情况：1. 柱运行异常问题原因可能是样品处理不当：样品会形成附着在NH2柱表面上的沉淀，导致柱进行正常分离的障碍或减缓。
此时需要对样品进行再次过滤或降温等处理。
2. 样品无法通过柱可能是进样器或检测器出现故障。
需要关闭进样器或检测器，检查柱筒是否存在压力问题，如果发现气泡等问题，需要及时清洗气泡。
3. 封补过强的流量或特別严重的样品陈成很容易出现封补。
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专用色谱柱∶样品及溶剂的要求
记 住 ∶ 拿 到 一 根 从 未 用 过 的 色 谱 柱 时 一 定 要 先 看 其 使 用 说 明 ！
色谱柱的保养（一）
样品方面 除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度
如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止 其在流动相中析出
了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用
硅 胶 的 溶 解 曲 线
填料新的键合技术 - PH范围 2-12
- 稳定性好，使用寿命长
1 2 3 4 5 6 7 8 9 p H
良好的色谱实验习惯
拿到一根新色谱柱时，先测柱效 保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录条件 定期检测柱效
色谱柱的使用及操作
流动相的转换 特别是GPC柱 流速(压力)的变化幅度 温度的变化幅度
色谱柱的保养（二）
流动相方面 除去微粒 纯度的要求
超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低（建议走空白检验） 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内 缓冲液（盐）的浓度 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂
流动相对样品的溶解度
有机溶剂或水的比例
2）如果柱头塌陷较深（小于1cm）可逐渐减低流速至零，
再次拆下柱子，用填料修补直到塌陷填满为止。
色谱柱的存放
存放前的处理 除去杂质、盐等，防止细菌生长 合适的存放溶剂 两端密封保存，避免色谱柱床干枯
避免机械震动
注意存放的温度
色谱柱以外的因素（一）
“柱效”问题，不一定是色谱柱问题！ 仪器问题：连接不好造成死体积
2 星期 1 星期
1天 1 小时 新鲜配制
0
5
10 分
15
20
25
保存于标准棕色玻璃瓶中的超纯水
测试条件 水样: 40ml trace enrichment @ 2.0 ml/min 色谱柱: C18 反相柱 (Waters) 梯度: 线性 100% 水－ 100% 乙腈 波长: 254 nm
1星期
典型的流速
流动相的保存
有机溶剂流动相: 室温下密封,避光保存
缓冲盐流动相: 当日现配现用 低温下密封保存,一般不超过3天 防止长菌 有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相: 低温密封保存 防止有机相的挥发 选用适宜的容器
保存于聚乙烯瓶中的超纯水
测试条件 水样: 40ml trace enrichment @ 2.0 ml/min 色谱柱: C18 反相柱 (Waters) 梯度: 线性 100% 水－ 100% 乙腈 波长: 254 nm
样品准备
为什么溶剂和样品要过滤?
溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护 作用，消除由于污染对分析结果的影响。 色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样 品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。 仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨 损，同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。
常用的脱气方法比较：
氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹 氦脱气，效果较好，但成本高。
加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染
抽真空脱气法：易抽走有机相。 超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波振荡 10-15min，此法效果最差。 在线真空脱气法：LC 真空脱机利用膜渗透技术， 在线脱 气，智能控制，无需额外操作，成本低，脱气效果明显优 于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。
色谱柱以外的因素（二）
柱压过高问题，不一定是色谱柱问题！ 系统反压问题
阻尼器堵塞 进样器堵塞 管路或连接口堵塞 在线过滤器不干净 保护柱
压力传感器不准确
流速是否错误?
色谱柱以外的因素（三）
实验的重复性差 梯度实验时平衡时间不足 温度波动 流动相组成改变
样品溶剂不同
样品稳定性不好 方法的开发不好
注意：1）每张滤膜只能用一次。
2）水相和有机相不要搞混。
溶剂的相溶性
溶剂信息
避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：
������ ������ ������ ������ ������ 卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。 高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸。 能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。 在有机溶剂中的有机酸溶液。 含有强络合剂的溶液。
回收率低，不出峰
“不可逆”吸附 固定相过强或流动相过弱 非特异性吸附
色谱柱的日常清洗
对所做的样品要有充分的了解
用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗（如反相C18柱用100%甲醇或乙 腈） 先用甲醇洗去极性杂质，再用干燥的二氯甲烷、正庚烷100~200ml依次 活化
硅胶柱的一般方法
键合相柱(烷基)的一般方法
1天
新鲜配制
0
5
10 分
15
20
25
色谱柱日常使用
过滤所有的溶剂和样品 使用保护柱 不要把柱接头上得太紧，损坏接头螺纹易渗液 开机时，流速和柱压要逐渐增加
进样前检查色谱系统的各个接头是否有漏液
注意色谱柱的pH值使用范围 不要高温下过长时间使用硅胶键合相柱子
关机前先用水冲洗整个系统，移走缓冲液后再用有机相冲洗
固定相稳定，不易流失
应用广泛，可使用多种溶剂 消除硅羟基的不良影响
缺点∶
pH值不能小于2或大于8 同样填料，各种牌号色谱柱不尽相同
反相HPLC柱（C18）的性能
常规C18填料的稳定性
硅胶基质填料 pH范围：2-8 pH值大于7时 键合相粉碎或溶解 pH值小于2时 键合相的化学键断裂 经常用缓冲液 固定相降解
缓冲液的pH值不合适 缓冲液的缓冲能力不足
手动进样器-六通阀的结构
手动进样器清洗
为避免出现怪峰，冲洗注射针时最好用流动相（不含盐）冲洗
溶剂准备：过滤
选择合适的滤膜
聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可 溶物。
醋酸纤维滤膜：适用于水基溶剂，不适用于有机溶剂，推 荐用于蛋白质和其相关的样品。
尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于 强酸、70%乙醇、二氯甲烷、不适用于DMF二甲基甲酰胺 再生纤维素滤膜：具有蛋白质吸收低，同样适用于水溶性 样品和有机溶剂。
记 住 ∶ 每 种 色 谱 柱 可 能 有 特 定 的 方 法 一 定 要 先 看 其 使 用 说 明 ！
色谱柱的清洗-物理阻塞
在安装柱前后测试压力差
如果柱压力太高，反装色谱柱，并用10-20倍柱体积的
若出现沉淀 (如：蛋白凝聚、细胞物、聚合物) 设法用
流动相冲洗色谱柱，监测压力变化
相应的可溶性溶剂，如 0.1% TFA/ 80% 乙腈, 6M 盐酸
进样器 检测器 管路，连接口 保护柱 在线过滤器堵塞
流动相问题：色谱柱未平衡好
进样量太大
色谱柱与仪器的联接
不同公司产品，其接头不同。处理不当时，会造 成： 色谱峰展宽（死体积）使柱效下降、或渗漏 解决办法：
使用“通用”型接头（锥箍及螺母）
这种锥箍在不锈钢管上是活动的，因此可以换接不同的色谱 系统及色谱柱。PEEK工程塑料的接头，可用在所有类型的色 谱柱上的。
溶剂过滤-除去微粒
不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶 剂过滤器以及色谱柱。
遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器和 色谱柱的寿命：
������ 使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。
������ ������ ������ ������
用滤膜过滤溶剂去除微生物。 每两天更换或过滤溶剂。 避免溶剂瓶直接日照。 向溶剂中加入0.0001-0.001M的叠氮化钠。
柱床膨胀
不可逆吸附 细菌生长
柱效低
为什么柱效低 色谱柱被污染 过滤片部分堵塞
样品、流动相或密封垫的细小颗粒造成的堵塞
色谱柱内的死体积
流动相pH值及组成不合适造成固定相流失 流速急剧变化造成固定相物理损坏 机械震动造成固定相产生裂缝 柱床收缩或干枯
重复性差、回收率低
实验的重复性差 色谱柱被污染 流动相pH值及组成不合适造成键合相流失 样品溶剂不同或样品本身不稳定
通用柱套 - 适用于所有的HPLC柱(3.9及4.6内径) 整体式- 使用方便，容易
各种不同填料配合色谱柱
色谱柱常见毛病
柱压过高 多少才算高?
不同色谱柱有差异 不同系统有差异 不同溶剂有差异
柱效低
重复性差
不出峰，回收率低
柱压过高
为什么柱压会过高 微粒堵塞
样品 流动相 密封垫
液相色谱实用技术
色谱柱的使用和保养
色谱柱的选择
非极性或极性较小的样品可用一般的C18柱
酸碱性的化合物建议选用填料经封尾钝化过的C18 柱，PH范围2-9（12）
糖类，氨基酸，有机酸，多环芳烃，GPC有专用柱
键合相色谱柱
以硅胶为基质，通过化学键合方式把碳十八、碳八、胺 基等基团联在基质上作为固定相。这种固定相要占所有 柱填料的60-70% 优点∶
不要高压冲洗柱子
色谱柱保护
在线的保护装置
给色谱柱提供物理的保护 除去样品及流动相中的颗粒 给色谱柱提供化学的保护 防止分析柱被化学污染
装置
在线过滤器
自装填料保护柱
预装保护柱
新型的保护柱
特点 高质量, 高效填料 - 不损失柱效 增加分析柱效 - 增加适应范围 20mm柱长 - 脏样品载荷能力大，能延长保护柱 寿命 手可拧紧接头，安装时不需要工具