微生物学教程
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滴加一滴碘液于干净载玻片中央，按 无菌操作要求，用接种环取少量啤酒酵 母培养物于碘液中混匀，使呈轻度浑浊。 加一洁净盖玻片，注意勿产生气泡，制 成染色水浸片。高倍镜下观察酵母细胞 形状、大小及出芽情况。
3、死活酵母细胞的染色鉴别 加一滴0.1％美蓝染色液于干净载玻片中央，按无
菌操作要求，用接种环取少量啤酒酵母培养物于美蓝 染液中混匀。加盖一洁净盖玻片，注意不要产生气泡。 高倍镜下观察，活细胞无色，死细胞蓝色，而衰老细 胞则呈淡蓝色。
1、目镜测微尺的校正
Hale Waihona Puke Baidu目尺每格
台尺的格数
长度 ＝ ———————— ×10
（µm）
目尺的格数
2、微生物细胞大小的测定 （1）取下镜台测微尺，将细菌染色标本片置于 载物台上，先用低倍镜找到目的物，然后在油镜 下用目镜测微尺测量菌体的长和宽各占几格，计 算其大小。 （2）取酵母菌水浸片标本，同上法在高倍镜下 测量酵母细胞的长和宽， 注意：一般测定微生物细胞的大小，通常测量 10～20个菌体，求出平均值，即可代表该菌体 的大小。
三、实验内容
（一）酵母菌形态观察
1、原理：酵母菌为不运动的单细胞真核微生物，细 胞呈圆形、卵圆形或圆柱形。用美蓝染色液可对酵 母菌细胞进行死活鉴别。活的酵母细胞，因体内新 陈代谢旺盛，氧化还原电位较低，能把美蓝还原为 变为无色的美白。因此，染色后活细胞无色，死细 胞呈蓝色，而衰老细胞则呈淡蓝色。
2、水浸片法观察酵母细胞形态及无性繁 殖方式
4、显微镜计数：加样后静止片刻，先用低倍镜找 到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。
注意： （1）浓度适宜：一般样品稀释度要求每小格约有 6~10个菌体为宜。 （2）计数原则：计数时，取左上、右上、左下、右 下、中央五个中格（共80个小格）计数；对于压线 的菌，数上不数下，数左不数右；对于正在出芽的酵 母，若子细胞大于母体的1/2则单独计数；对于视野 中细胞团不予计数；酵母菌有自絮凝特性，取样时要 混匀。 （3）使用完毕后，将血细胞计数板在用水冲洗干净， 切勿硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜 检，观察每个小格内是否有残留菌体或其它沉淀物， 若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
酵母细胞形态图
（二）微生物细胞大小的测定
原理：微生物细胞的大小是微生物分类鉴定 的重要依据之一。测量微生物细胞大小，必须 借助于测微尺和显微镜。 测微尺由镜台测微 尺和目镜测微尺两部分组成。使用前须先用镜 台测微尺进行标定，求出某一放大率下，目镜 测微尺每一小格所代表的长度，然后用目镜测 微尺直接测量细胞的大小。
（三）微生物细胞的镜检计数
原理：显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮 液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上， 于显微镜下直接计数的一种简便，快速，直观的方 法。目前常用的有：血细胞计数板，PeterffHause计菌器以及Hawksley计菌器等，都用于酵 母，细菌，霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。
优点是直观，快速，操作简单；
缺点是所得的结果通常是死菌体和活菌体的总和。
血球计数板结构示意图
1、菌悬液制备：用无菌水将菌液稀释至适当倍数 （100倍）；
2、将血球计数板及专用的厚盖玻片擦干净后，盖 玻片盖在中央的计数室上；
3、加样品：用无菌的吸管将菌悬液在盖玻片边缘 滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进 入计数室，吸去多余的菌液；
四、实验报告
1、绘制出酵母菌细胞形态图。 2、计算所观察酵母的大小。 3、计算酵母菌培养液的浓度。 4、说明如何校正目镜测微尺？ 5、说明酵母菌美兰染色判断死活的原理。
实验内容
实验一、显微镜的使用与单染色法 实验二、革兰氏染色与荚膜染色 实验三、放线菌形态观察与芽孢染色 实验四、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术 实验五、霉菌形态观察与各大类微生物菌落特征 实验六、培养基的制备 实验七、菌种分离纯化技术与平板菌落计数 实验八、水质微生物学检测 实验九、消毒与灭菌技术
实验四、酵母菌形态观察、显微计数与 显微测量技术
一、实验目的
1、认识酵母菌的细胞形态并能通过染色鉴别其死活。 2、了解测微尺的原理并掌握细胞大小测定法。 3、了解血球计数板的构造并熟练掌握镜检计数法。
二、实验材料
1、培养12～48小时的啤酒酵母。 2、显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺、血
球计数板等。
微生物学实验课的目的在于加强课堂讲授的基本理论与基本知 识的理解，掌握研究微生物最基本的操作技能和实验手段，培 养分析问题和从事实践应用的能力。为上好实验课，必须做到： 1. 安全第一！注意水、电、门、窗安全；如有意外，及时报告 2. 严守纪律！严禁迟到、喧哗，吸烟、接打电话，做与实验无 关的事情，不要随意走动。 3. 认真完成实验。实验前预习，明确实验目的、原理、方法； 实验操作要细心谨慎，认真进行观察和记录，培养严谨求实的 科学态度；认证完成实验报告。课上认真听讲，课后积极讨论 4. 爱惜仪器，保持秩序。每次实验之后必须清理好实验台，待 实验老师检查之后才能离开。
实验考核办法：
1、平时成绩占70%，期末卷面成绩占30%。 2、每次实验课预习报告占30分，实验操作占50分，结果
与讨论（实验报告）占20分；∑实验得分/9，为平时成 绩。 3、出现安全责任事故，实验课成绩记为不及格；无故缺 课一次，本次实验为零分；迟到或早退一次，扣20分； 逃避值日或实验后未整理实验台，扣20分；喧哗、接听 手机、随意走动，扣10分。
3、死活酵母细胞的染色鉴别 加一滴0.1％美蓝染色液于干净载玻片中央，按无
菌操作要求，用接种环取少量啤酒酵母培养物于美蓝 染液中混匀。加盖一洁净盖玻片，注意不要产生气泡。 高倍镜下观察，活细胞无色，死细胞蓝色，而衰老细 胞则呈淡蓝色。
1、目镜测微尺的校正
Hale Waihona Puke Baidu目尺每格
台尺的格数
长度 ＝ ———————— ×10
（µm）
目尺的格数
2、微生物细胞大小的测定 （1）取下镜台测微尺，将细菌染色标本片置于 载物台上，先用低倍镜找到目的物，然后在油镜 下用目镜测微尺测量菌体的长和宽各占几格，计 算其大小。 （2）取酵母菌水浸片标本，同上法在高倍镜下 测量酵母细胞的长和宽， 注意：一般测定微生物细胞的大小，通常测量 10～20个菌体，求出平均值，即可代表该菌体 的大小。
三、实验内容
（一）酵母菌形态观察
1、原理：酵母菌为不运动的单细胞真核微生物，细 胞呈圆形、卵圆形或圆柱形。用美蓝染色液可对酵 母菌细胞进行死活鉴别。活的酵母细胞，因体内新 陈代谢旺盛，氧化还原电位较低，能把美蓝还原为 变为无色的美白。因此，染色后活细胞无色，死细 胞呈蓝色，而衰老细胞则呈淡蓝色。
2、水浸片法观察酵母细胞形态及无性繁 殖方式
4、显微镜计数：加样后静止片刻，先用低倍镜找 到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。
注意： （1）浓度适宜：一般样品稀释度要求每小格约有 6~10个菌体为宜。 （2）计数原则：计数时，取左上、右上、左下、右 下、中央五个中格（共80个小格）计数；对于压线 的菌，数上不数下，数左不数右；对于正在出芽的酵 母，若子细胞大于母体的1/2则单独计数；对于视野 中细胞团不予计数；酵母菌有自絮凝特性，取样时要 混匀。 （3）使用完毕后，将血细胞计数板在用水冲洗干净， 切勿硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜 检，观察每个小格内是否有残留菌体或其它沉淀物， 若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
酵母细胞形态图
（二）微生物细胞大小的测定
原理：微生物细胞的大小是微生物分类鉴定 的重要依据之一。测量微生物细胞大小，必须 借助于测微尺和显微镜。 测微尺由镜台测微 尺和目镜测微尺两部分组成。使用前须先用镜 台测微尺进行标定，求出某一放大率下，目镜 测微尺每一小格所代表的长度，然后用目镜测 微尺直接测量细胞的大小。
（三）微生物细胞的镜检计数
原理：显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮 液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上， 于显微镜下直接计数的一种简便，快速，直观的方 法。目前常用的有：血细胞计数板，PeterffHause计菌器以及Hawksley计菌器等，都用于酵 母，细菌，霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。
优点是直观，快速，操作简单；
缺点是所得的结果通常是死菌体和活菌体的总和。
血球计数板结构示意图
1、菌悬液制备：用无菌水将菌液稀释至适当倍数 （100倍）；
2、将血球计数板及专用的厚盖玻片擦干净后，盖 玻片盖在中央的计数室上；
3、加样品：用无菌的吸管将菌悬液在盖玻片边缘 滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进 入计数室，吸去多余的菌液；
四、实验报告
1、绘制出酵母菌细胞形态图。 2、计算所观察酵母的大小。 3、计算酵母菌培养液的浓度。 4、说明如何校正目镜测微尺？ 5、说明酵母菌美兰染色判断死活的原理。
实验内容
实验一、显微镜的使用与单染色法 实验二、革兰氏染色与荚膜染色 实验三、放线菌形态观察与芽孢染色 实验四、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术 实验五、霉菌形态观察与各大类微生物菌落特征 实验六、培养基的制备 实验七、菌种分离纯化技术与平板菌落计数 实验八、水质微生物学检测 实验九、消毒与灭菌技术
实验四、酵母菌形态观察、显微计数与 显微测量技术
一、实验目的
1、认识酵母菌的细胞形态并能通过染色鉴别其死活。 2、了解测微尺的原理并掌握细胞大小测定法。 3、了解血球计数板的构造并熟练掌握镜检计数法。
二、实验材料
1、培养12～48小时的啤酒酵母。 2、显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺、血
球计数板等。
微生物学实验课的目的在于加强课堂讲授的基本理论与基本知 识的理解，掌握研究微生物最基本的操作技能和实验手段，培 养分析问题和从事实践应用的能力。为上好实验课，必须做到： 1. 安全第一！注意水、电、门、窗安全；如有意外，及时报告 2. 严守纪律！严禁迟到、喧哗，吸烟、接打电话，做与实验无 关的事情，不要随意走动。 3. 认真完成实验。实验前预习，明确实验目的、原理、方法； 实验操作要细心谨慎，认真进行观察和记录，培养严谨求实的 科学态度；认证完成实验报告。课上认真听讲，课后积极讨论 4. 爱惜仪器，保持秩序。每次实验之后必须清理好实验台，待 实验老师检查之后才能离开。
实验考核办法：
1、平时成绩占70%，期末卷面成绩占30%。 2、每次实验课预习报告占30分，实验操作占50分，结果
与讨论（实验报告）占20分；∑实验得分/9，为平时成 绩。 3、出现安全责任事故，实验课成绩记为不及格；无故缺 课一次，本次实验为零分；迟到或早退一次，扣20分； 逃避值日或实验后未整理实验台，扣20分；喧哗、接听 手机、随意走动，扣10分。