同济医院进修学习汇报

其他标本
8560, 19%
18124, 41%
呼吸道标本质量合 格率：20%-70%
中国CHINET：华中科技大学附新桥属医同院检济验医科微院生2物0室15年1-6月耐药监测数据
部分苛养菌分离情况
Nme, 3
Ngo, 4
Gva, 3
Bru-, 12 Cne, 23 Ngo, 4
Bru-, 12 Cne, 23
下设：
生化室、免疫室、血栓组 （外科楼）
临检室、门急诊、儿科急诊 （门诊部）
微生物室
（住院部）
新桥医院检验科微生物室
同济检验部（微生物室）
于2005年在全国率先通过了CNAS的医 学实验室认可 2015年准备美国CAP认可工作 与世界卫生组织合作负责湖北地区十 五所三级甲等医院细菌耐药性监测工作 起草卫生部颁布的《临床实验室管理 办法》配套检查标准之微生物部分 起草《CNAS-GL23医学实验室质量和 能力认可准则在临床微生物学检验领域 的指南》
不足： 1、标本前处理工作量加大很多； 2、前期临床的反响可能很大；
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B 真菌培养：
B
1、提高临床标本真菌培养项目的开展，特别是特殊标本（组织、穿刺
液）最好开展全套培养；
2、完善真菌培养条件：SDA，双相培养（25℃、35 ℃），培养时间
延长（7d），有利于提高丝状真菌和酵母菌的检出率；
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同济检验部（微生物室）
检验部主任：孙自镛
人员：14 人 + 1人
(进修生实习生20+人)
岗位：标本接种岗 染色镜检岗 微生物制剂岗
呼吸道标本岗 体液杂项岗 真菌培养岗 结核菌培养岗
轮班：08:00 — 17:00（白班）
17:00 — 22:00(中夜班)
晨会制度
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新桥医院检验科微生物室
快速鉴定方法：
F
1、部分常规的快速生化反应：氧化酶、触酶、凝固酶、脲酶；
2、β -内酰胺酶：Hin、Mca、 NE-、 ENT-，推测用药；
3、染色镜检结合快速生化鉴定，可以为临床提供分级报告，有助于感
染的尽早诊治，同时在一定程度可以缩短临床报告时间；
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关于结果报告：
中国C淋HI病N奈ET瑟：菌华N中go科技脑大膜学炎附新奈桥属瑟医菌同院检济Nm验医e科微院阴生2物道0室1加5德 年纳1-菌6月Gv耐a 药监测数据
03
工作改进建议
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A
Fra Baidu bibliotek
A 呼吸道标本：特别是痰液培养标本，可以考虑涂片染
色筛检标本质量后再接种培养。
优点： 1、涂片结果对平板筛选确定致病菌有一定指示作用； 2、提高致病菌检出率，且结果更准确可靠； 3、有利于提高部分苛养菌的分离率（Spn、Hin等）；
体征） 无菌体液分离的真菌 药敏试验：肉汤稀释法、K-B、ATB、E-test
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真菌培养
酵母菌属K-B法和MIC法药敏解释标准
抗菌药物
K-B法（mm）
S
I
R
MIC法（ug/ml）
S
I/SDD
R
氟康唑 (FCA,25ug) ≥19 15-18 ≤14
伊曲康唑 (ITR) —
—
C 组织标本处理：
C
1、碾磨器碾磨后接种培养，可以提高少见致病菌检出率，
2、不易分离的少见致病菌（放线菌、诺卡菌、结核菌、丹毒丝菌、厌
氧菌等），往往才是最根本的致病菌；
3、类似的像组织、脓肿、穿刺液等不易取材的标本，尽量开展全套检
查（如：革兰、抗酸等染色，细菌、真菌、结核菌、厌氧菌等培养）
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同济检验部（微生物室）
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02
进修学习见闻
新桥医院检验科微生物室
呼吸道标本处理 无菌体液标本处理 其他杂项标本处理 真菌培养 结核分枝杆菌培养 耐药监测情况
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分枝杆菌检测
分
1、标本前处理，震荡混匀，15min，
枝
PH6.8，标本：2%NaOH-NALC = 1:2
杆 2、BBL MGIT培养管：
菌
液
0.5 OADC + 0.1ml PANTA + 0.5ml标本
体 3、培养时间：14 d
培
养 4、阳性管经涂片染色后报告结果
NALC：半胱氨酸，OADC:营养添加剂，PANTA:杂菌抑制剂
A
S
-
R
无乳链
B
R
+
R
C、G群
C、G
R
-
S
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手工K-B法药敏试验
K/A,M U C E I
1、无菌体液等重要标本 上机测试，呼吸道标本 采用手工生E化cl:药A/敏AH；2S,+-+--
2、 K-B法比仪器MIC法 更符合CLSI更新标准；
3、对于不常见耐药表型 须复核（E-test法）；
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THANKS 谢谢聆听
Nme, 3 Gva, 3
Spn, 117 Spn, 117
Hin, 213 Hin, 213
流感嗜血杆菌 Hin 肺炎链球菌 Spn 新型隐球菌 Cne 布鲁氏杆菌 Bru淋病奈瑟菌 Ngo 脑膜炎奈瑟菌 Nme 阴道加德纳菌 Gva
流感嗜血杆菌 Hin 肺炎链球菌 Spn 新型隐球菌 Cne 布鲁氏杆菌 Bru-
国家临床重点专科30个 享受国务院政府特殊津贴者92名 教育部长江学者3名 特聘22名院士为医院兼职教授 国家自然科学基金数连续四年突破百项
2015年获得141项 2004－2013年国际ＳＣＩ论文引用次数 全国医疗机构排名第二
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同济检验部
同济检验部工作人员：100+人
Aba:K/K,--+--
Eco:A/A,----+ Aba:K/K,--+--
新桥医院检验科微生物室
标本来源及分离苛养菌
临床标本送检比例
945, 2%
420, 1%
738, 2%
呼吸道标本
4316, 10%
1%
尿液标本
5105, 11%
血液标本
伤口脓液标本
无菌体液
脑脊液标本 组织标本
6230, 14%
无菌体液标本—CSF
CSF标本
离心涂片
2000r/min 3min
染色镜检
报告结果
血平板
巧克力
脑
心
浸
液
有细菌 48小时
肉
生长
无菌生长
汤
增
菌
初步报告
有细菌生长
鉴定药敏
无菌生长
最终报告 阳性结果
报告72h 无菌新生桥医长院检验科微生物室
其他杂项标本
1.CLED 2.定量接种 3.菌落计数 4.致病菌判断
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真菌培养
烟曲霉 x40
黄曲霉（多头）x40
新桥医院检验科微生物室
黑曲霉 x40
真菌培养
犁头霉 x20
根霉 x20
茄病镰刀菌大分生孢子 镰刀菌 x40
新桥医院检验科微生物室
真菌培养
青霉血涂片 x40
马尔尼菲青霉 x100
新桥医院检验科微生物室
马尔尼菲青霉菌 x20
分枝杆菌检测
D 脑脊液标本：
D
1、离心甩片机，浓缩积菌。有利于涂片染色镜检细菌；
2、脑脊液培养污染了较高（SCN、微球菌等）。降低污染率，可以考
虑直接接种平板，同时巯基乙酸增菌；
E 常规质量控制：
E
1、周质控：K-B法质控，细菌形态培养基质控；
2、月质控：仪器质控、试剂批号验证；
3、室间质评：常规处理，避免“红地毯待遇”；
严谨专注
CLSI标准
新桥医院检验科微生物室
临床沟通
呼吸道标本
不合格痰标本判读标准：
1、SEC＞25个∕LPF 2、SEC＞10个∕LPF （除外WBC＞25个∕LPF ，SEC＜10个∕LPF； 或者WBC:SEC＞10:1，且单一形态细菌达3+～4+ ）
细胞计数
细菌计数
1+（偶见）： ＜1个∕LPF
1.血平板 2.菌落计数＞15cfu
1.常规处理 2.革兰染色
尿
便
导 管
组织
创口、 脓
1.沙志气邻弧 2.BA+XLD+TCBS
1.碾磨接种 2.常规培养，特殊培养 3.革兰染色、抗酸染色
CLED：胱氨酸乳酸无电解质培养基，XLD：木糖-赖新氨桥酸医院-检脱验氧科胆微生酸物盐室培养基
真菌培养
SDA，双相培养（25 ℃ 、35℃） 培养时间：7d 酵母菌：科马嘉显色培养基、API、ATB 霉菌：10% KOH压片 呼吸道真菌定植判断（镜检、平板生长情况、
无菌体液标本
血液 脑脊液、关节液、心包积液、胸水、腹水、
胆汁、引流液 血平板 + 巧克力 + 肉汤增菌 + 涂片镜检 培养时间：72小时
1、降低标本接收前的不可知污染率 2、对于平板生长阴性标本，再次转种肉汤到血平板复核 3、平板生长和肉汤转种结果不一致？（涂片、常规生化）
新桥医院检验科微生物室
—
≤8 ≤0.125
16-32
(SDD)
0.25-0.5 (SDD)
≥64 ≥1
两性霉素B (AMB) —
—
—
≤0.5
—
≥1
5-氟胞嘧啶 (FCT) —
—
—
伏立康唑(VOR,1ug) ≥17 14-16 ≤13
≤4
8-16
≥32
≤1
2
≥4
(SDD)
备注：1.CLSI M44-S3，2009 ； 2.伊曲康唑标准只适用于粘膜感染；
G
1、无菌体液（血、CSF、胸腹水等）分三级报告，有助于临床及时跟
踪培养结果，及时治疗；
1st d 涂片染色结果
2nd d 快速生化鉴定
3rd d 最终报告：鉴定药敏
2、药敏报告：MIC法 + K-B法（临床要求增加药敏）； 3、微生物报告系统有待进一步优化；
新桥医院检验科微生物室
差异 ≠差距
认识 借鉴 提升
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分枝杆菌检测
设施 设备
生物安全防护
1、III级生物安全实验室 2、II级B2型生物安全柜
（全排型：100%空气外排，工作 窗口流速≥100 fpm）
标准化操作
个人 防护
N95口罩、防护服等
新桥医院检验科微生物室
部分手工检测
β-溶血链球菌的鉴别试验
菌群
杆菌肽
CAMP
SXT
化脓链
同济医院进修
学习 汇报
汇报人：唐 朋 2015 年 10 月
CONTENTS 目录
同济医院介绍 进修学习见闻 工作改进建议
新桥医院检验科微生物室
01
同济医院介绍
华中科技大学同济医学院 附属同济医院 同济医院检验部
新桥医院检验科微生物室
医院现有病床4000张 设52个临床和医技科室 门、急诊量达到428万人次 出院病人17.6万人次 住院病人手术量7.1万人次
分枝杆菌检测
分
1、前处理，标本:4%NaOH=1:2，混匀15min
枝 2、接种0.1ml，L-J培养基(双份)
杆 3、37℃，5-10%CO2，8周，每周观察结果 菌
固 4、阳性标本：
体
① 涂片，抗酸染色
培
养
② 转种L-J培养基、PNB L-J各一支
③ 培养1周，观察结果(MTB or NTM？)
荧光、抗酸染色
1.荧光染色筛查：敏感 性高，观察视野多，降 低漏检率； 2.抗酸染色复核；
PNB:对硝基苯甲酸
T-spot检测
1.T-spot.TB (免疫斑点法) 2.IFN-γ 体外释放试 验（ELISA）
新桥医院检验科微生物室
分枝杆菌培养
1.固体培养：L-J培养基、 L-J + PNB培养基； 2.液体培养：BACTEC MGIT 960、BBL- MGIT；
＜1个∕OIF
2+（少量）： 1-9个∕LPF
1-5个∕OIF
3+（中量）： 10-25个∕LPF
6-30个∕OIF
4+（大量）： ＞25个∕LPF
＞30个∕OIF
新桥医院检验科微生物室
A12042 SEC 4+ 不合格
A11198低倍镜(W4+,S2+)
A10253 SPN 3+
痰涂片诺卡菌
新桥医院检验科微生物室 痰中曲霉菌丝