无菌检查操作规程

无菌检验操作规程

文件编号：BR3-SR0

版本：01

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广州保瑞医疗技术有限公司

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号

《无菌检验操作规程》2016-02-22 1

生效时间2016.02.22 页次4-1 1.目的

建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。

2.范围

本规程适用于本公司一次性使用体腔热灌注治疗管道组件的无菌检测

3.职责

负责对一次性使用体腔热灌注治疗管道组件的无菌检测

4.内容

4.1检验依据《中华人民共和国药典2015年版》1101 无菌检查法

4.2仪器、设备

超净工作台、电热干燥箱、恒温培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪、电子天平、PH计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶，接种环、镊子，试管架，大试管若干等。

4.3.培养基

4.3.1需气菌、厌气菌培养基（硫乙醇酸盐流体培养基）

4.3.2 霉菌培养基（胰酪大豆胨琼脂培养基）

4.3.3 培养基的无菌性检查

每批配制的培养基均应进行无菌性检查（可与产品无菌检验同步进行）。检查时，每批培养基随机取不少于5支（瓶）培养14天，应无菌生长。

4.4.无菌检验室的环境要求

4.4.1无菌检验应在环境洁净度10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。

4.4.2 缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa。无菌检验室的室温应保持18～26℃，相对湿度：45～65%。

4.4.3 无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子》和《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子每月检测一次，沉降菌的监测每周检测一次。

6.4 无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3个营养琼脂平板，暴露30min，于30～35℃培养48小时，菌落数平均应不超过1CFU/平板。

生效时间2016.02.22 页次4-2 4.5.无菌检验前的准备

4.5.1 器具灭菌、消毒：压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用。

4.5.2 人员、物料进入无菌检验室

4.5.2.1 开启紫外线灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理，消毒时间不得少于30min。

4.5.3 物料进入无菌检验室流程

4.5.3.1 消毒：进入无菌操作室的所有培养基、供试品等的外表都应采用适用的方法进行消毒处理，以避免将外包装污染的微生物带入无菌检验室。

4.5.4 人员进入无菌检验室流程

4.5.4.1 更鞋脱衣：在一更区脱去一般区工作鞋，穿上无菌检验室工作鞋；脱去一般区工作服。

4.5.4.2 洗手：首先用洗手液在手上揉擦出泡沫，再用流水连续冲洗20秒，洗净泡沫。

4.5.4.3 更衣：在二更区按照要求穿衣，要求鞋子套在裤子外面，口罩掩住口鼻，帽子包裹所有头发。

4.5.4.4 手消毒：用75%酒精消毒液的棉球擦拭双手。消毒液可用、新洁尔灭、碘伏、75%酒精等。

4.5.4.5 人员进入：经缓冲间进入无菌检验室。

4.5.5 人员进入无菌检验室后，进一步用消毒液擦拭工作台面，戴无菌手套。

4.6无菌检验操作要求

4.6.1 全过程必须严格执行无菌操作，防止微生物污染。

4.6.2 使用玻璃器皿应轻取轻放，避免破损，以防培养物扩散。

4.6.3 所有操作不得有大幅度或快速动作，以免搅动空气中的尘埃微粒。

4.6.4 使用金属接种器具时，用前、用后均需灼烧灭菌。

4.6.5 在接种培养物时，动作应轻、准，防止培养物溅出，产生汽溶胶，造成污染。

4.6.6 操作过程中所有的带菌物品，用后均应作消毒、灭菌处理。可在检验过程中随用随时放入消毒液缸内浸泡或消毒桶内，或在检验完成后经传递窗传至一般区，立即用压力蒸汽灭菌锅121℃灭菌30分钟。

4.7.稀释液、冲洗液的制备

4.7.1 pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液

4.7.2微温溶解，分装后置入压力蒸汽灭菌器内，121℃灭菌30分钟后，于4℃保存备用。

生效时间2016.02.22 页次4-3 4.7.3 冲洗液：0.9%无菌氯化钠溶液

4.8. 对照菌液制备

4.8.1 无菌检验所用的菌株传代次数不得超过5代。

4.8.2取金黄色葡萄球的普通琼脂斜面培养物，接种金黄色葡萄球至营养琼脂培养基内，在30～35℃培养18～24h后备用，同时制备0.9%氯化钠溶液加入在6支小试管内，每支试管内加9.0ml 的0.9%氯化钠溶液，在压力锅内经121℃灭菌30min备用。将已配好的金黄色葡萄球菌培养菌液取1.0ml加入第一支小试管内，稀释成浓度1:10的菌液；取第一支试管内1.0m l菌液加入第二支小试管内，稀释成浓度1:100的菌液，同法稀释成浓度1:106（每ml含菌量≤100CFU）即可。

10.3 采用平皿计数法测定活菌数。

4.9 无菌检验培养温度

4.9.1硫乙醇酸盐流体培养基，置30～35℃培养。

4.9.2胰酪大豆胨液体培养基，置23～28℃培养。

12. 无菌检验

12.1 抽样

根据GB14233.2-2005抽样的规定，随机抽取同一个灭菌批产品检验3套产品。

4.10检验方法

4.10.1 直接接种法

每个包装以无菌操作拆开把各导管中的帽子，直接投入含100ml硫乙醇酸盐流体培养基及胰酪大豆胨液体培养基的容器中，接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中。

4.10.2 培养、观察

4.10.3薄膜过滤法

每个包装以无菌操作拆开包装注入500ML的0.90.9%无菌氯化钠溶液启动循环泵冲洗循环管壁并收集冲洗液，用集菌仪滤过，加入100ML适宜的培养基培养。其中一份作阳性对照，一份做阴性对照。

4.10.3.1上述含培养基的容器分别置规定温度的恒温培养箱中，除阳性对照管培养48～72小时外，其余管培养14天。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。

4.10.3.2如在加入供试品后、或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观