无菌检查操作规程
无菌检查操作规程
无菌检查操作规程文件编号：版本：编制/日期：审核/日期：批准/日期：受控状态:批准实施1 目的为了规范产品无菌检查操作，编制本规程。
2 适用范围本规程适用于产品无菌检查。
3 职责3.1 检验室负责对产品无菌检查的取样和化验，并填写报告；3.2 品管部经理负责签发检查报告。
4 工作程序（见《中国药典》2015年版）4.1 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
4.2 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
4.3 培养基及其制备方法硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
4.3.1 硫乙醇酸盐流体培养基（用于培养好氧菌、厌氧菌）酪胨（胰酶水解） 15.0g 氯化钠 2.5g葡萄糖 5.0g 新配制的0.1％刃天青溶液 1.0mlL-胱氨酸 0.5g 硫乙醇酸钠（或硫乙醇酸0.3ml） 0.5g琼脂 0.75g 酵母浸出粉 5.0g水 1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节 pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。
sop无菌检查操作规程
sop无菌检查操作规程SOP无菌检查操作规程1. 目的本操作规程的目的是确保无菌检查操作的标准化和正确性，以保证无菌产品的质量和安全性。
2. 适用范围本操作规程适用于无菌产品的生产和质检过程中的无菌检查。
3. 责任与义务(1) 生产人员应确保在无菌检查操作中遵守本操作规程，并按照要求进行操作。
(2) 质检人员应按照本操作规程进行无菌检查，并确保检查准确性和可靠性。
(3) 监督人员应对生产和质检过程中的无菌检查进行监督，并及时发现和纠正操作不规范的情况。
4. 设备和试剂(1) 无菌工作台：具备净化和无菌过滤功能的工作台。
(2) 紫外线灯：用于灭菌工作台和无菌操作区域的紫外线照射。
(3) 无菌检查培养基：用于培养和检测无菌产品中的微生物。
(4) 无菌接种环：用于取样和转移样品至培养基。
5. 操作步骤5.1 环境准备(1) 打开无菌工作台并等待净化系统启动，确保工作台内部洁净无菌。
(2) 打开紫外线灯，照射工作台和操作区域20分钟，杀灭空气和表面的细菌。
(3) 把无菌检查培养基准备好，摆放在无菌工作台上。
5.2 样品准备(1) 取无菌接种环，焰烧消毒后待其冷却。
(2) 打开无菌产品包装，取出样品。
(3) 用消过毒的剪刀将样品切取一小块，果皮向内。
5.3 样品接种(1) 将取好的样品迅速转移到无菌工作台上的无菌检查培养基上。
(2) 将样品放在培养基的中央，轻轻压一下以确保样品与培养基接触。
(3) 焚烧消毒无菌接种环，接种环冷却后用它切取一部分培养基上样品。
5.4 培养(1) 将接种好的无菌检查培养基盖好，记录好样品的相关信息。
(2) 将培养基培养在恒温培养箱中，温度设置为适宜的培养温度。
(3) 根据培养基的类型，进行适当的培养时间。
5.5 结果判断(1) 在培养时间到达后，观察培养基上是否有细菌生长。
(2) 如果培养基上有细菌生长，表示样品不符合无菌要求。
(3) 如果培养基上没有细菌生长，表示样品符合无菌要求。
无菌检查操作规程
无菌检查操作规程无菌检查操作规程无菌检查是医疗卫生机构的重要工作之一，是确保手术操作和医疗器械的安全有效性的必要操作。
本文将详细介绍无菌检查的操作规程。
一、无菌检查前准备1.收集必要的无菌检查器具，如指套、无菌钳、口罩等。
2.穿戴严密的无菌工作服和手术帽，要求紧贴身体，无污染。
3.清洁工作台面和清理无菌区的地面，准确地摆放器具，以使工作区面积最大化。
4.设定无菌检测计时器和偏光镜。
5.检查仪器是否器具过期，并做好记录。
二、无菌检查程序1.无菌检查前要先洗手，并在手部戴上0级无菌手套，以保证手部不会对无菌操作产生污染。
2.按照有关技术操作要求，用户在操作过程中应遵循严格的操作程序，按规定时间和密闭条件完成无菌操作。
3.使用特制口罩，以减少口腔的细菌排放。
4.无菌操作过程中，必须避免与外界发生接触。
如果需要进行人员进出等活动，必须在无菌状态下进行。
5.在完成无菌操作后，对已安装的无菌器具进行检查。
如发现污染或异常，必须及时更换或处理。
6.对于发现无法执行无菌操作原则的器具需要及时进行处理、保留记录，不得进入无菌资料保存范围内。
7.无菌操作完成后，器具必须储存在有关的储存库中，做好记号，并严格实行发放原则。
三、无菌检查后处理1.除去手套并脱穿手术服之后都要再次手洗。
2.检查各种登记单、记录表格的更新，并原样归档。
3.及时整理无菌工作区，对无菌区域内的物品进行清洗和整理。
4.定时地进行系统、设备、器具的清理和维护，并进行记录以便复查。
4.做好无菌器具、设备的外观和功能的检查，有问题及时报告或处置。
5.在每次结束无菌检查操作之后，要对检查器具和环境进行检查，检查是否符合无微量、无孔度和微生物数量的要求，确保工作质量。
结论无菌检查是医学工作中重要的环节之一，必须严格按照规定程序执行，保障手术操作和医疗器械的安全有效性。
同时，也需前后准备工作、归档整理和对设备的维护以做好应急处理。
操作人员必须具有清洁消毒、设备保障、清洁管理等基本知识，以确保医疗卫生的质量和安全。
无菌检查法标准操作规程
无菌检查法标准操作规程目的：建立无菌检查的基本操作，为无菌检查人员提供正确的操作规程。
2.依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
3.范围：本标准适用于QC无菌检查的操作。
4. 职责：QC无菌检查人员对本标准的实施负责。
5.程序：5.1. 定义：无菌检查法：系指检查药品、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其它品种是否无菌的一种方法。
5.2. 无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温控（18~26）℃及除湿装置，操作室或工作台应保持空气正压。
5.2.1. 无菌室的清洁与消毒应符合QC洁净室清洁、消毒规程（SOP ZL0014）。
5.2.1.无菌室无菌程度的检查应符合规定：见沉降菌监测规程（SOP ZL0006）、悬浮粒子监测规程（SOP ZL0005）。
实验设备及用具：5.3.1.电热干燥箱、电热手提式压力蒸汽灭菌器、电热恒温培养箱、试管、注射器、针头、试管架、刻度吸管、手术剪、手术镊、砂轮、注射器盒、搪瓷托盘、双碟、75%酒精棉球、无菌工作服（衣、裤、帽、口罩等）。
5.3.2.微孔滤膜：直径50mm、孔径0.45μm，应符合规定。
5.3.3.除菌滤器：除菌滤器采用的是HTY-2000型全封闭式薄膜过滤器。
5.3.4. 所有进入无菌室的物品必须经过消毒或灭菌，应严格按照进入QC无菌室物品清洁、消毒、灭菌规程（SOP ZL0015）进行操作。
5.4. 稀释剂：灭菌注射用水。
5.5. 培养基：5.5.1.需气菌、厌气菌培养基（流体硫乙醇酸盐培养基）；真菌培养基。
5.5.2. 培养基的使用，配制、管理及灵敏度检查应按照培养基管理规程（SMP ZL0036）、培养基灵敏度检查规程（SOP ZL0019）、培养基配制规程（SOP ZL0016）进行操作。
5.6. 对照用菌液：5.6.1. 金黄色葡萄球菌（Staphyoccus sureus）菌液：取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30~35℃培养16~18小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10~100个菌。
无菌检查操作规程
无菌检查操作规程1、目的建立无菌检查标准操作规程，规范无菌检查操作过程，确保检查结果的准确性。
2、范围本规程适用于广州赛哲生物科技股份有限公司无菌检查操作过程。
3、职责相关操作人员负责本规程的具体实施，质检部负责对本规程的实施过程进行监督。
4、工作程序4.1培养基的制备及培养条件培养基可按以下给出的处方制备，也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光环境下，三周内使用。
4.1.1硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养。
配方如下：除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节p H 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH,使灭菌后在25℃的pH值为7.1土0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色)不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100°C水浴加热至粉红色消失（不释过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30〜35℃培养。
4.1.2胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。
配方如下：除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH使灭菌后在25℃的pH 值为7.3±0.2，加入葡萄糖，分装，灭菌。
胰酪大豆胨液体培养基置20〜25℃培养。
4.1.3胰酪大豆胨琼脂培养基配制方法如下：除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH使灭菌后在25℃的pH值为7.3±0.2，加人琼脂，加热溶化后，摇匀，分装，灭菌。
4.1.4沙氏葡萄糖琼脂培养基用于黑曲霉的培养。
培养如下：除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH使灭菌后在25℃的pH 值为5.6士0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。
无菌操作规程及注意事项
无菌操作规程及注意事项1. 引言无菌操作是在无菌环境下进行的一种技术操作，旨在避免微生物的污染和传播。
本文档旨在提供无菌操作的规程和注意事项，以确保操作的无菌性和安全性。
2. 规程以下是进行无菌操作时应遵循的规程：2.1 准备工作- 在无菌室内进行操作，确保环境清洁和无菌。
- 洗净双手并穿戴合适的无菌手套和个人防护装备。
2.2 准备试验器材- 所有试验器材应经过彻底清洁和消毒，包括培养皿、试管、移液器等。
- 使用已经经过高温高压灭菌处理的器材。
2.3 消毒操作区域- 对操作区域进行消毒处理，使用合适的消毒剂。
- 确保操作台面无菌，并进行适当的消毒。
2.4 打开培养皿- 对培养皿的外表进行消毒处理。
- 打开培养皿时，尽量减少周围环境和空气中的微生物进入。
2.5 液体传递- 使用无菌移液器和无菌吸管进行液体传递操作。
- 避免直接接触试管或培养皿的口部。
2.6 摇荡和混合- 使用无菌方式进行试管的摇荡和混合操作。
- 避免摇荡时造成液体溅出和微生物扩散。
3. 注意事项在进行无菌操作时，还需注意以下事项：- 避免与非无菌物体接触，如皮肤、衣物、工作台等。
- 避免喷嚏、咳嗽或大声说话，以防微生物扩散。
- 严格遵循操作顺序和规程，减少错误和污染的可能性。
- 定期检查设备和器材的清洁和状态，确保其无菌性。
- 注意药品和试剂的保存和有效期，避免使用过期或受损的物品。
4. 总结无菌操作是保证实验准确和结果可靠的重要环节，通过遵循规程和注意事项，可以有效提高实验的高质量和可重复性。
任何操作都应着重于无菌性和安全性，以避免微生物的污染和传播。
以上为无菌操作规程及注意事项，希望能对您的实验操作提供一定的指导和帮助。
细胞无菌检查标准操作规程
细胞无菌检查标准操作规程标准操作规程：细胞无菌检查1. 引言细胞无菌检查是实验室进行细胞培养和实验的关键步骤。
细胞环境的无菌性是保证实验结果准确性和细胞生长的重要因素。
本标准操作规程旨在规范细胞无菌检查的操作，以确保实验结果的可靠性。
2. 器材准备2.1 离心机：用于离心培养物，以分离细胞和培养液。
2.2 高温消毒器：用于消毒培养器具和试剂。
2.3 紫外线灯：用于消毒培养箱和操作台面。
2.4 细胞培养箱：用于细胞培养的环境，保持恒定的温度和湿度。
2.5 无菌离心管和移液器：用于处理无菌液体和细胞移植。
2.6 片玻片和培养皿：用于制备细胞标本。
2.7 无菌培养物：用于细胞培养和细胞无菌检查。
2.8 无菌培养基：用于培养细胞。
2.9 无菌生理盐水：用于洗涤细胞。
3. 操作步骤3.1 消毒操作台面和培养箱：使用紫外线灯对操作台面和培养箱进行紫外线照射消毒，确保无菌环境。
3.2 滴漏法消毒培养器具和试剂：将培养器具和试剂放入高温消毒器中，设置合适的温度和时间进行高温消毒。
3.3 细胞无菌接种：将需要无菌检查的细胞接种到无菌培养基中，按照实验要求进行培养，保持适宜的温度和湿度。
3.4 细胞收获和处理：在培养达到一定密度后，使用离心机将培养物离心，收集上清液。
将上清液转移至无菌离心管中，并进行离心，去除细胞沉淀。
3.5 细胞标本制备：将细胞沉淀转移至无菌离心管中，加入适量的无菌生理盐水悬浮细胞，然后将悬浮细胞制备成片玻片或涂布于无菌培养皿上。
3.6 烘干和固定：将制备好的片玻片或培养皿放入培养箱中，保持适宜的温度和湿度进行烘干固定，使细胞附着于玻片或培养皿上。
3.7 染色和观察：使用适当的染色方法对细胞进行染色，并通过显微镜观察细胞状态和无菌性。
3.8 结果判断：根据染色结果和观察到的细胞状态判断细胞是否具有无菌性。
4. 注意事项4.1 操作时需佩戴无菌手套，避免污染试剂和培养器具。
4.2 使用无菌移液器和管道处理液体，避免交叉污染。
无菌检验标准操作规程(最全)
无菌检验标准操作规程一、目的无菌检验是指检查经灭菌方法处理后的医疗器械(具)、植入物品、敷料等是否达到无菌标准的一种方法。
临床部门不应常规进行无菌检验，如有需要，可联系当地疾病预防控制中心派专人来采样检测。
二、试验前准备1．无菌检验应在洁净度为100级以上的洁净实验室内实施，并证实该实验室各项指标符合GB50073—2001《洁净厂房设计规范》、GB／T16292～16294—1996《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》等相关要求，且在有效期范围之内。
2．按卫生部《消毒技术规范》(2002年版)制备无菌检验用洗脱液、需氧一厌氧培养基与真菌培养基(见附)。
3．在无菌检验前三日，分别在需氧一厌氧培养基与真菌培养基内各接种1ml洗脱液，分别置30～35℃与20～25℃：培养72h，应无菌生长。
4．阳性对照管菌液制备：(1)在检验前一天取金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的普通琼脂斜面新鲜培养物，接种一环至需氧一厌氧培养基内，在30～35℃培养16～18h 后，用0．9％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml(可通过比浊法或稀释后用1m1接种平板来确认)。
(2)取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厌氧菌培养基新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于30～35℃培养18～24h后，用0.85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。
(3)取白念珠菌[CMCC(F)98001]真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于20～25℃培养24h后，用0．85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。
三、样本制备根据检样的类型与大小，以及带孔(腔)与否，可以按照以下不同的方法进行制备。
1．敷料类等非管道类样品：取2个包装内的样本，剪成约10mm×30mm 大小的样片21片，接种需氧一厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管。
每培养管含培养基40m1，各接种3片样片。
无菌检测操作方法
无菌检测操作方法
无菌检测是为了确定样品或设备是否受到污染，要求操作环境必须无菌。
以下是无菌检测的操作方法：
1. 操作环境准备：
- 洁净室或灭菌台上，配备必要的工具和试剂。
- 定期清洁操作环境，确保无菌状态。
- 使用无菌手套，操作前进行手部消毒。
2. 容器准备：
- 使用无菌器皿，如无菌培养皿或试管。
- 检查容器是否完整无损，无细菌生长。
3. 油门测试：
- 用无菌棉签蘸取试剂涂抹在试管内壁或培养皿表面。
- 打开灭菌台或安全柜的燃深度。
- 将试剂涂抹的试管或培养皿放入灭菌台或安全柜内，观察是否有细菌生长，如有则说明不符合无菌要求。
4. 空气检测：
- 使用无菌培养基或试剂，如无菌纱布。
- 打开灭菌台或安全柜的燃深度。
- 在工作区内垂直悬挂无菌纱布，晾晒一段时间。
- 观察无菌纱布是否有细菌生长，如有则说明不符合无菌要求。
5. 污染检测：
- 将待测样品或设备放入无菌培养皿或试管内。
- 加入无菌培养基或试剂。
- 将培养皿或试管加热灭菌，确保无菌状态。
- 在恰当的环境条件下，观察培养皿或试管内是否有细菌生长，如有则说明样品或设备受到污染。
注意事项：
- 执行无菌操作前，要确保自己已经经过培训并熟悉该操作。
- 操作要细致、准确，严格遵守操作规程。
- 每次操作之前、之中和之后都要进行无菌操作验证。
- 严禁将无菌操作用具与非无菌操作用具混放。
无菌检查.操作规程
无菌检查.操作规程无菌检查是指对无菌状态的物品、器械、培养基等进行检查，以确定其是否具有无菌性的一种操作。
无菌检查主要是为了保证医疗器械和药品的质量，防止传播致病菌和交叉感染。
下面是无菌检查的操作规程，共1200字。
一、仪器与试剂准备1. 玻璃器皿：无菌检查中常使用的玻璃器皿应先清洗，然后用高压蒸汽高温灭菌。
确保玻璃器皿表面没有任何污物和细菌。
2. 培养基：根据需要选择适当的培养基，如营养琼脂、肉膏琼脂等。
使用前应检查培养基包装是否完好，是否过期，如有问题应废弃，以免影响检测结果。
3. 培养皿：无菌培养皿应提前准备好，如果有无细菌培养基的培养皿，最好优先选择使用。
4. 培养皿贴壁：无菌贴壁是为了避免液体滴入培养皿内引起细菌污染，使用前应检查贴壁是否完好。
5. 双口试管：用于无菌培养物的传递，提前准备好。
二、人员准备工作1. 手部卫生：进行无菌检查前，操作人员应进行手部卫生，包括洗手和消毒。
先用流动水清洗手部，然后使用75%酒精进行消毒。
2. 穿戴无菌操作服：无菌检查需要穿戴无菌操作服，操作服要求干净、整洁，且经过高温蒸汽灭菌。
穿戴手套前，应先检查手套是否完整、无损。
3. 工作台表面消毒：将工作台表面用70%酒精进行擦拭消毒，确保无菌操作环境。
三、操作步骤1. 取一份待检物品：如医疗器械或药品，然后进行外观检查。
确保物品包装完好，无明显损伤和破损。
2. 打开培养皿：将培养皿的盖子拉开一些，方便后续操作。
3. 将待检物品放入培养皿：用镊子或无菌力ps，将待检物品放入培养皿内，尽量避免让待检物品直接接触培养皿的边缘。
4. 培养皿倒置：将培养皿倒置放于工作台上，检查物品是否有菌落生成。
5. 灭菌培养皿口：用长火柴将培养皿上的边缘逐一燃烧，防止细菌飞溅和传播。
6. 检查结果：观察培养皿上是否有菌落生成。
如果有菌落，则证明待检物品不符合无菌要求；如果无菌皿上没有菌落生成，则证明待检物品具有无菌性。
7. 结果记录：将无菌检查结果记录在检验记录表格上，包括待检物品的名称、批号、检查日期等信息。
无菌检查标准操作规程
无菌检查标准操作规程1 目的明确无菌检查法的过程，保证产品质量。
2 适用范围使用薄膜过滤法或直接接种法，检查要求无菌的产品及其原、辅料等是否无菌。
3 定义无。
4 职责与权限检验员：按本标准判定产品质量并出具报告。
负责人：监督执行情况，审批最终结果。
5 内容及流程5.1 实验说明5.1.1 TSB为“胰酪大豆胨液体培养基”。
5.1.2 所用材料及用具（待检品、菌株除外）应经过灭菌处理；检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
5.1.3 直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的供试品。
5.2 检验量最少检验量（生物制品原液或半成品）：每个容器（每个容器制品）的取样量为总量的0.1%或不少于10mL，每开瓶一次，应如上法抽验。
5.3 实验材料与用具5.3.1 待检品（供试品）。
5.3.2 菌悬液（浓度≤100cfu/mL）：应根据供试品特性选择阳性对照菌。
①无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌作对照；②抗革兰阴性菌为主的供试品，以大肠埃希菌作对照；③抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌作对照；④抗真菌的供试品，以白色念珠菌作对照。
5.3.3 薄膜过滤法：无菌封闭式薄膜过滤器、无菌滤膜（孔径≤0.45μm，直径约50mm）、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、硫乙醇酸盐流体培养基（400mL/瓶）、TSB培养基（400mL/瓶）、无菌吸头、移液器。
5.3.4 直接接种法：0.9%无菌氯化钠溶液、硫乙醇酸盐流体培养基（15mL/支）、TSB培养基（10mL/支）、无菌吸头、移液器。
5.4 薄膜过滤法5.4.1 供试品处理：打开包装前，先用75%乙醇对供试品容器表面进行彻底消毒，再以无菌操作拆开每个包装。
如有需要可将供试品混合不少于100mL的稀释液中再进行操作。
5.4.2 润湿：取10mL pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液注入滤筒，过滤，使整个滤膜表面湿润。
无菌检查操作规程
无菌【2 】检讨操作规程1.目标树立无菌检讨标准操作规程,确保检讨成果精确.靠得住.2.应用规模本公司无菌产品的无菌检讨3.职责质量部QC4.根据2015版《中国药典》公则1101GB/T 19973.2-2005（ISO11737-2:1998）《疗器械的灭菌微生物学办法第2部分：确认灭菌进程的无菌实验》GB/T 14233.2-2005 《医用输液.输血.打针器具磨练办法第 2部分：生物学实验办法》5.内容5.1.无菌检讨情形保障5.1.1.无菌检査的所有操作均需在严厉掌握微生物污染的情形下进行,即无菌检査应在情形干净度10000级下的局部干净度100级的单向流空气区域内或隔离体系中进行.5.1.2.操作情形的无菌保障程度将直接影响无菌检讨成果,为了保证无菌检讨用干净室（区）情形的稳固性,确保检讨成果的靠得住性,对干净室（区）的情形按期监测并采取合理的措施保证干净情形相符请求.5.1.3.无菌检讨全进程必须严厉遵照无菌操作,防止微生物污染.5.1.4.干净区的温度.湿度等参数必须相符响应干净级别的请求.5.1.5.无菌检讨操作还须要对检讨情形进行监控,5.2.造就基.稀释液.缓冲液5.2.1.硫乙醇酸盐流体造就基,市售造就基干粉.除尚有划定,接种后应置30~35℃造就.5.2.2.胰酪大豆胨液体造就基,市售造就基干粉.接种后应置20~35℃造就.5.2.3.中和或灭活用造就基,按上述硫乙醇酸盐流体造就基或胰酪大豆胨液体造就基的处方及制法,在造就基灭菌或应用前参加合适的中和剂.灭活剂或表面活性剂,其用量同办法实用性实验.5.2.4.胰酪大豆胨琼脂造就基,市售造就基干粉.5.2.5.沙氏葡萄糖液体造就基,市售造就基干粉.5.2.6.沙式葡萄糖琼脂造就基,市售造就基干粉.5.2.7.PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液,市售造就基干粉.5.2.8.0.9%无菌氯化钠溶液.5.2.9.造就基应用性检讨无菌检査用的硫乙醇酸盐流体造就基和胰酪大豆胨液体造就基等应符造就基的无菌性检査及敏锐度检査的请求.本检讨可在供试品的无菌检査或与供试品的无菌检査同时进行.5.2.9.1.无菌性检讨：每批造就基随机取5支（瓶）,按各造就基划定的温度下造就14天,应无菌发展.5.2.9.2.敏锐度检讨5.2.9.2.1.菌种：造就基敏锐度检讨所用的菌株传代数不得超过5代(从菌种存中间获得的干菌种第0代）,并采用合适的菌种保藏技巧进行保存,以证实验菌株的生物学特征 .金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]生孢梭菌[CMCC(B)64 941]白色念珠菌[CMCC(F)98 001]黑曲霉[CMCC(F)98 003]5.2.9.2.2.菌液制备：接种金色葡萄球菌.铜绿假胞菌.枯草芽孢杆菌的造就物至胰酪大豆胨液体造就基中或胰酪大豆胨琼脂造就基上,接种生孢梭菌的造就物至硫乙醇酸盐流体造就基中,30〜35℃造就18〜24小时;接种白色念珠菌的造就物至沙氏葡萄糖液体造就基中或沙氏葡萄糖琼脂造就基上,20〜25℃造就24〜48小时,上述造就后的新颖造就物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液.接种黑曲霉的造就物至沙氏葡萄糖琼脂面造就基上,20〜25℃造就5〜7天,加人3〜5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱.然后,采用合适的办法吸出孢子悬液至无菌试管内,用0.05%(ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数目小于100cfu的孢子悬液.菌悬液若在室温下放置,应在2小时内应用;若保消失2〜8 ℃在24h 内应用.黑曲霉孢子悬液消失2〜8℃,在验证过的贮存期内用.5.2.9.2.3.造就基接种：取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体造就基7支,分离接种小于100cfu的色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.生孢梭菌各2支,另1支不接种作为空白对比,造就3天;取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体造就基7支,分离接种小于100cfu的草芽孢杆菌.白色念珠菌.黑曲霉各2支,另1支不接种作为空白对比,造就5天.每日不雅察结.5.2.9.2.4.成果剖断：空白管应无菌发展,加菌的管发展优越,解释该造就基敏锐度相符划定.5.3.办法试用性实验进行产品无菌检讨时,应进行办法实用性实验,以确认所采用的办法合适于产品的无菌检讨.若磨练程序或产品产生化可能影响磨练成果时,应从新进行办法实用性实验.办法实用性实验按“5.4供试品的无菌检讨”的划定及下列请求进行操作.对每一实验菌应一一进行办法.5.3.1.菌种及菌液的制备：大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]外,金黄色葡萄球菌.枯草芽孢杆菌.生孢梭菌.白色念珠菌.黑曲霉的菌株及菌液制同“5.2.9.2造就基敏锐度检讨”.大肠埃希菌的菌液制同金黄色葡萄球菌.5.3.2.薄膜过滤法：每种造就基划定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤,冲洗,在最后一次的冲洗液中参加小于100cfu实验菌,过滤.加硫乙醇酸盐流体造就基或胰酪大豆胨液体造就基至滤筒内.另取一装有同体积造就基的容器,参加等量实验菌,作为对比.置划定温度下造就,造就时光不得超过5天,各实验菌同法作.5.3.3.直接接种法：取符直接接种法造就基用量请求的硫乙醇酸盐流体造就基6管,分离接入小于100cfu的金黄色葡萄球菌.大肠埃希菌.生孢梭菌各2管,取符直接接种法造就基用量请求的胰酪大豆胨液体造就基6管,分离接入小于100cfu的枯草芽孢杆菌 .白色念珠菌.黑曲霉各2管.个中1管接入每支造就基划定的供试品接种量,另1管尴尬刁难比,置划定的温度造就,造就时光不得超过5天.5.3.4.成果断定：与对比管比较,如供试品各容器中的实验菌均发展优越,则解释供试品的磨练量在磨练前提下无抑菌感化或其抑菌感化可以疏忽不计,照此检査办法和检讨前提进行供试品的无菌检讨.如供试品的任一容器中的实验菌发展微弱.迟缓或不发展,则解释供试品的磨练量在磨练前提下有抑菌感化,应采用增长冲洗量.增长造就基的用量.用中和剂或灭活剂.改换滤膜品种等办法,清除供试品的抑菌感化,并从新进行办法实用性实验.办法实用性实验与供试品的无菌检讨同时进行.5.4.供试品无菌检讨无菌检査法括薄膜过滤法和直接接种法.只要供试品性质许可,应采用薄膜过滤法.供试品无菌检讨所采用的检讨办法和磨练前提应与办法实用性实验确认的办法雷同.无菌实验进程中,若需用面活性剂.灭活剂.中和剂等试剂,应证实其有用性,且对微生物无毒性.5.4.1.磨练数目：除尚有划定外,按表1划定.5.4.2.磨练量：即接种量,除尚有划定外,按表2划定.5.4.3.阳性对比：应根据供试品特征选择阳性对比菌：无抑菌感化及抗革兰氏阳性菌为主的供试品,以金色葡萄球菌为对比菌;抗革兰氏阴性菌为主的供试品,以大肠埃希菌为对比菌;抗厌氧菌的供试品,以生孢梭菌为对比菌;抗真菌的供试品,以白色珠菌为对比菌.阳性对比实验的菌液制同“5.2.9.2造就基敏锐度检讨”,加菌量小于100cfu,供试品用量同供试品无菌检讨时每份造就基接种的样品量.阳性对比管造就72小时内应发展优越.5.4.4.阴性对比：供试品无菌检讨时,应取响应溶剂和稀释液.冲洗液同法操作,作为阴性对比.阴性对比不得有菌发展.5.4.5.供试品的处理及接种造就基操作时,用合适的消毒液对供试品容器面进行彻消毒,如供试品容器内有必定的真空度,可用合适的无菌器材(如带有除菌过滤的针头向容器内导入无菌空气,再按无菌操作启开容器掏出内物.5.4.5.1.薄膜过滤法：薄膜过滤法一般应采用关闭式薄膜过滤.无菌检査用的滤膜孔径应不大于0.45um,直径约50mm.根据供试品及其溶剂的特征选择滤膜材质.应用时,应保证滤膜在过滤前后的完全性.5.4.5.1.1.水溶性供试品：水溶性供试液过滤前应先将少量的冲洗液过滤,以润湿滤膜.取划定量,直接过滤,或混至含不少于100ml合适的稀释液的无菌容器中,混匀,立刻过滤.如供试品有抑菌感化,须用冲洗液冲洗滤膜,冲洗数一般不少于3次（每滤膜每次冲洗量一般为100ml,且冲洗量不得超过1000ml,以避免滤膜上的微生物受毁伤）,所用的冲洗量.冲洗办法同办法实用性实验中肯定的.除生物成品外,一般样品冲洗后,1份滤器中加人100ml硫乙醇酸盐流体造就基,1份滤器中参加100ml胰酪大豆胨液体造就基.5.4.5.1.2.非水溶性供试品：取划定量,直接过滤;或混杂溶于适量含聚山梨酯80或其他合适乳化剂的稀释液中,充分混杂,立刻过滤.用含0.1%〜1 %聚山梨酯80的冲洗液冲洗滤膜至少3次.参加含或不含聚山梨酯80的造就基.接种造就基照水溶液供试品项下的办法作.5.4.5.1.3.具有导管的医疗器具（输血.输液袋等）供试品：取划定量,每个最小装用50〜100ml冲洗液分离冲洗内壁,收集冲洗液于无菌容器中,然后照水溶液供试品项下办法作.同时应采用直接接种法进行装中所配带的针头.针管的无菌检査.5.4.5.2.直接接种法：直接接种法实用于无法用薄膜过滤法进行无菌检査的供试品,即取划定量供试品分离等量接种至硫乙醇酸盐流体造就基和胰酪大豆胨液体造就基中.除生物成品外,一般样品无菌检讨时两种造就基接种的瓶或支数雷同.除尚有划定外,每个容器中造就基的用量不得大于接种到该容器中的供试品体积的10倍,同时,硫乙醇酸流体造就基每管装量不少于15ml,胰大豆胨液体造就基每管装量不少于10ml.供试品检査时,造就基的用量和髙度同办法实用性实验中肯定的.5.4.5.2.1.灭菌医用器具供试品：取划定量,必要时应将其拆散或切成小碎段,等量接种于各管以浸没供试品的适量造就基中.5.4.6.造就及不雅察：将上述接种供试品后的造就基容器分离按各造就基划定的温度造就14天;造就时代应每日不雅察并记载是有菌发展.如在参加供试品后或在造就进程中,造就基消失污浊,造就14天后,不能从外不雅上断定有无微生物发展,可取该造就液适量转种至同种新颖造就基中,造就3天,不雅察接种的同种新颖造就基是否再消失污浊;或取造就液涂片,染色,镜检,断定是否有菌.5.4.7.成果断定5.4.7.1.阳性对比管应发展优越 ,阴性对比管无菌发展,供试品管都无菌发展,则供试品相符划定.5.4.7.2.阳性对比管应发展优越,阴性对比管无菌发展,供试品管中有随意率性一管有菌发展,则供试品不相符划定.5.4.7.3.阳性对比管应发展优越 ,阴性对比管无菌发展,供试品管污浊,经确实无菌发展,则供试品相符划定;经确证有菌发展,则供试品不相符划定.5.4.7.4.有以下情形的,判实验无效.5.4.7.4.1.无菌检讨实验所用的装备及情形的微生物监控成果不相符无菌检讨法的请求.5.4.7.4.2.回想无菌实验进程,发明有可能引起微生物污染的身分,并且已经确证.5.4.7.4.3.供试品管中发展的微生物经剖断后,确证是因无菌实验中所用的物品和（或)无菌操作技巧不当引起的.5.4.7.5.实验若经确认无效,则应重试.重试时,从新取同量供试品,依法检讨,若无菌发展,判供试品符划定;如有菌发展,判供试品不符划定.6.相干文件《干净区尘埃粒子监测操作规程》《干净区沉降菌监测操作规程》《实验室干净区干净.消毒操作规程》《干净区情形监测治理规程》《ZW型集菌仪应用.保护操作规程》《SPX-150型生化造就箱应用.保护操作规程》《MJK-150型霉菌造就箱应用.保护操作规程》《SW-CJ系列干净工作台应用.保护规程》《阳性菌种治理规程》7.记载《无菌检讨原始记载》附表：表1：批出厂产品的起码磨练数目注：表中起码磨练数目不包括阳性对比用的供试品数目表2：供试品的起码磨练量注：假如医疗器械体积过大,造就基用量可再2000ml以上,将其全部完全浸没.无菌检讨原始记载（薄膜过滤法）磨练编号：磨练人/日期：复核人/日期：无菌检讨原始记载（直接接种法）磨练编号：无菌检讨原始记载（直接接种法）磨练编号：磨练人/日期：复核人/日期：。
无菌检查的实验流程
无菌检查的实验流程实验流程如下：一、准备工作1.1 准备无菌台和无菌室，确保工作台面、仪器和耗材都处于无菌状态。
1.2 对实验用的培养基、试剂、器皿进行无菌处理。
1.3 洗手并穿戴无菌手套、口罩、无菌帽等无菌装备。
二、无菌技术操作2.1 操作前要用70%乙醇擦拭工作台面、培养箱门把手和其他可能接触的物体。
2.2 打开无菌台和无菌室，等待5-10分钟达到无菌状态后，进行实验操作。
2.3 操作时要避免通风口、门窗等位置，以防外界空气污染。
2.4 打开无菌培养皿盖时，不要直接将培养皿覆在工作台上，而是持细胞铲轻轻地将其盖在培养皿上。
2.5 取用所有培养物及试验所需物品，尽可能减少外部环境对培养物的污染。
三、无菌实验操作3.1 对待检样品进行无菌操作前，先进行手部无菌处理，然后放入无菌实验筒内。
3.2 无菌操作时，需注意手部的动作是否干净、纯净。
特别注意于手部气温，它对培养物有影响。
3.3 打开培养皿或试管的盖子时，应尽量避免翻倒。
盖子翻倒时宜合上绒布柜门并于列绒外或盒内封闭检测。
四、培养物的无菌操作4.1 从生物体内取得的组织，如内脏及胃肠道组织、咽喉及呼吸道部位的组织、尿道、耳道及产后羊水等，穿戴帽纹布套外衣向自苫内方操作采培培，不易产生空气中续菌。
4.2 从血液、中尿、脑脊液，体积少者a托皿棵蜻汇；绿皮口特罩置Mes'%真空中讲可微标志捏空管瓶封榉后入帽尽必举程序前4.3 对外必部位-±取检标本7--第，做常规无菌检测，当//如何人分繁是正必低于五、检查结果5.1 在无菌实验操作后，将培养皿或试管置于无菌培养箱中进行培养。
5.2 培养一段时间后，观察培养皿或试管中是否产生细菌或真菌的生长。
5.3 如果观察到有生长的培养物，则说明操作过程中发生了污染，需要重新进行实验操作。
六、总结无菌检查是实验室中非常重要的一步，通过严格的无菌技术操作和无菌实验操作，可以保证实验结果的准确性和可靠性。
医疗器械产品无菌检验操作规程
医疗器械产品无菌检验操作规程一、目的：为了保证医疗器械产品的无菌性，减少感染的风险，确保器械在使用前不会对患者产生任何不良影响。
二、适用范围：适用于医疗器械产品的无菌检验操作。
三、设备与工具：1.灭菌器：包括高压蒸汽灭菌器和乙烯氧化物灭菌器。
2.无菌室：应具备无菌室必备的设备，如无菌工作台、超净台和灭菌器等。
3.操作工具：包括手套、无菌棉签、无菌剪刀、无菌镊子等。
四、检验步骤：1.准备工作：(2)检查设备与工具的正常工作状态，如灭菌器是否正常运行，无菌室的洁净程度等。
(3)检查器械包装是否完好无损，无破损、打开或湿润的情况。
2.环境准备：(1)打开无菌室，确保无菌室内外的卫生环境。
(2)将要检验的医疗器械产品放置在无菌工作台上，避免与非无菌物品接触。
3.无菌检验操作：(1)佩戴手套并将其消毒，确保双手干净。
(2)打开器械包装，注意保持包装内物品的无菌性。
(3)使用无菌棉签、无菌剪刀或无菌镊子等工具检查器械的外观，如有任何异常，应及时记录并报告。
(4)若器械需要使用前进行灭菌处理，则将其放入灭菌器中进行灭菌，按照灭菌器的操作规程进行处理。
(5)灭菌完成后，将器械取出并放置在无菌工作台上，等待其冷却。
(6)冷却后，使用无菌棉签或其他无菌工具进行取样，采样点应包括器械的各个部位。
(7)采样完成后，将无菌棉签放置在含有营养物质的培养基中，进行菌落培养。
(8)培养基培养一定时间后，观察培养基上是否有菌落生长，如有则说明器械不符合无菌要求。
5.清洁与记录：(1)清洁无菌工作台和使用的工具，保持无菌室的清洁。
(2)进行记录，包括器械的名称、批号、灭菌方式、采样结果等。
六、注意事项：1.操作者应注意个人的清洁和卫生，保证双手清洁且戴好手套。
3.在操作过程中，应尽量避免对器械进行过多的接触，以免造成污染。
4.检查无菌室的洁净程度并及时清理，保持其无菌环境。
七、附录：无菌检验操作记录表器械名称：批号：灭菌方式：采样结果：日期：时间：。
无菌检查标准操作规程
范围：无菌检查法包括直接接种法和薄膜过滤法。
前者适用于非抗菌作用的供试品，后者适用于有抗菌作用的或大容量的供试品。
职责：检验室对本规程的实施负责正文：1.操作前准备1.1试验设备、仪器用具1.1.1开放式滤器、真空泵、抽滤瓶1.1.2恒温培养箱(30℃~35℃)、生化培养箱(20℃~25℃)恒温水浴1.1.3高压蒸汽灭菌器、电热恒温干燥箱(250℃)1.1.4显微镜1.1.5玻璃器皿：试管、锥形瓶、量筒、培养皿(φ90mm)、刻度吸管(1、5、10ml)、注射器(5、10、20、30ml)、针头——洗净、晾干，用牛皮纸包扎严密，121℃蒸汽灭菌30分钟。
1.1.6手术镊、剪——160℃～180℃干烤2h。
1.2供试品等的处理供试品试验用盘、试管架等进入无菌室之前用消毒剂擦试。
1.3按无菌衣服的着装程序穿戴好无菌衣、帽、鞋。
2.检查2.1直接接种法2.1.1供试品的制备，按规定量取供试品混合。
2.1.2接种——取备妥的供试品，以无菌操作将该供试品分别接种于需、厌气菌培养基6管，其中1管接种金黄色葡萄球菌对照用菌液1ml作阳性对照，另接种于真菌培养基与5管，轻轻摇动，使供试品与培养基混合。
2.1.3培养——需、厌气菌培养基管置30-35℃培养箱中培养7日、真菌培养基管置20-25℃培养箱中培养7日，在培养期间应观察并记录是否有菌生长，阳性对照管在24小时内应有菌生长，如在加入供试品后，培养基出现浑浊，培养7天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或斜面培养基上继续培养，细菌培养2日真菌培养3日，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长，或用接种环取培养液涂片、染色，用显微镜观察是否有菌。
——有轻微抑菌性的供试品可加入扩大量的每种培养基中，使供试品稀释至不含抑菌活性的。
2.2薄膜过滤法2.2.1抽滤——按该药品项下规定的方法处理后，加入0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜的溶液至少100ml的适当容积的容器中混合后，通过装有孔径不大于0.45μm的薄膜过滤器，然后用0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜的溶液冲洗滤膜至阳性对照菌正常生长为度。
无菌检查标准操作规程
无菌检查标准操作规程无菌检查法是检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。
事实上，若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。
无菌检查法有薄膜过滤法、直接接种法两种方式。
细菌培养温度32.5℃±2.5℃，真菌培养温度25.5℃±2.5℃。
1 无菌检查的环境无菌检查的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，操作环境的无菌保证程度将直接影响无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可考性，对洁净室（区）的环境质量采取合理的控制措施和评价方法是必要的。
无菌检查应在环境洁净度10000级和局部洁净度100级的单向留空气区域内或隔离系统中进行，其全过程笔削严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。
面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。
由1～2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间与缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。
在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。
墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。
操作间内不应安装下水道。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18～26℃，相对湿度45%～65%。
缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。
无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。
无菌检查操作规程
建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。
合用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。
化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。
无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。
5. 1 无菌操作设备：无菌操作室或者超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。
5.1.1 无菌室分无菌操作室和缓冲间。
在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌 衣放置架及挂钩、拖鞋等。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局 部洁净度 100 级超净工作台。
缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外 光灯和照明灯，操作室或者工作台应保持空气正压。
5.1.2 无菌室应每周和每次操作前用 0.1％新洁尔灭或者 2％甲酚液擦拭操作台及 可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌 1 小时。
在每次操作完毕，同样用 2％甲酚或者 0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小时。
5.1.3 无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程 中需检查空气中菌落数。
取直径 90mm 双碟，在接种室内点燃酒精灯，在酒精灯 旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约 20ml ，制成平板： 在 35-37℃预培养 48 小时，证明无菌后将 3 个平板以无菌方式带入无菌操作间 颁发部门接收部门生效日期操作标准---质量文件编号文件页数 共 7 页分发部门制定日期 审核日期 批准日期 制定人 审核人 批准人的洁净区域左、中、右各放 1 个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露 30 分钟后将盖盖好，置 35-37℃培养 48 小时，取出检查， 3 个平板上生长的菌落数相加总数不得超过 10 个。
无菌操作台面或者超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100 级(普通用尘埃粒子计数仪)，检测尘埃粒径≤5p m 的粒数不得超过 3.5个／升；空气流量应控制在 0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1 个，可根据无菌状况定期置换过滤器。
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无菌检验操作规程
文件编号：BR3-SR0
版本：01
制定：______________ 日期：______________审核：______________日期：______________批准：______________日期：______________
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修订记录
序
修订内容摘要版本变更日期
号
《无菌检验操作规程》2016-02-22 1
生效时间2016.02.22 页次4-1 1.目的
建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。
2.范围
本规程适用于本公司一次性使用体腔热灌注治疗管道组件的无菌检测
3.职责
负责对一次性使用体腔热灌注治疗管道组件的无菌检测
4.内容
4.1检验依据《中华人民共和国药典2015年版》1101 无菌检查法
4.2仪器、设备
超净工作台、电热干燥箱、恒温培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪、电子天平、PH计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶，接种环、镊子，试管架，大试管若干等。
4.3.培养基
4.3.1需气菌、厌气菌培养基（硫乙醇酸盐流体培养基）
4.3.2 霉菌培养基（胰酪大豆胨琼脂培养基）
4.3.3 培养基的无菌性检查
每批配制的培养基均应进行无菌性检查（可与产品无菌检验同步进行）。
检查时，每批培养基随机取不少于5支（瓶）培养14天，应无菌生长。
4.4.无菌检验室的环境要求
4.4.1无菌检验应在环境洁净度10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。
4.4.2 缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。
无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa。
无菌检验室的室温应保持18～26℃，相对湿度：45～65%。
4.4.3 无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子》和《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子每月检测一次，沉降菌的监测每周检测一次。
6.4 无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3个营养琼脂平板，暴露30min，于30～35℃培养48小时，菌落数平均应不超过1CFU/平板。
生效时间2016.02.22 页次4-2 4.5.无菌检验前的准备
4.5.1 器具灭菌、消毒：压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用。
4.5.2 人员、物料进入无菌检验室
4.5.2.1 开启紫外线灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理，消毒时间不得少于30min。
4.5.3 物料进入无菌检验室流程
4.5.3.1 消毒：进入无菌操作室的所有培养基、供试品等的外表都应采用适用的方法进行消毒处理，以避免将外包装污染的微生物带入无菌检验室。
4.5.4 人员进入无菌检验室流程
4.5.4.1 更鞋脱衣：在一更区脱去一般区工作鞋，穿上无菌检验室工作鞋；脱去一般区工作服。
4.5.4.2 洗手：首先用洗手液在手上揉擦出泡沫，再用流水连续冲洗20秒，洗净泡沫。
4.5.4.3 更衣：在二更区按照要求穿衣，要求鞋子套在裤子外面，口罩掩住口鼻，帽子包裹所有头发。
4.5.4.4 手消毒：用75%酒精消毒液的棉球擦拭双手。
消毒液可用、新洁尔灭、碘伏、75%酒精等。
4.5.4.5 人员进入：经缓冲间进入无菌检验室。
4.5.5 人员进入无菌检验室后，进一步用消毒液擦拭工作台面，戴无菌手套。
4.6无菌检验操作要求
4.6.1 全过程必须严格执行无菌操作，防止微生物污染。
4.6.2 使用玻璃器皿应轻取轻放，避免破损，以防培养物扩散。
4.6.3 所有操作不得有大幅度或快速动作，以免搅动空气中的尘埃微粒。
4.6.4 使用金属接种器具时，用前、用后均需灼烧灭菌。
4.6.5 在接种培养物时，动作应轻、准，防止培养物溅出，产生汽溶胶，造成污染。
4.6.6 操作过程中所有的带菌物品，用后均应作消毒、灭菌处理。
可在检验过程中随用随时放入消毒液缸内浸泡或消毒桶内，或在检验完成后经传递窗传至一般区，立即用压力蒸汽灭菌锅121℃灭菌30分钟。
4.7.稀释液、冲洗液的制备
4.7.1 pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液
4.7.2微温溶解，分装后置入压力蒸汽灭菌器内，121℃灭菌30分钟后，于4℃保存备用。
生效时间2016.02.22 页次4-3 4.7.3 冲洗液：0.9%无菌氯化钠溶液
4.8. 对照菌液制备
4.8.1 无菌检验所用的菌株传代次数不得超过5代。
4.8.2取金黄色葡萄球的普通琼脂斜面培养物，接种金黄色葡萄球至营养琼脂培养基内，在30～35℃培养18～24h后备用，同时制备0.9%氯化钠溶液加入在6支小试管内，每支试管内加9.0ml 的0.9%氯化钠溶液，在压力锅内经121℃灭菌30min备用。
将已配好的金黄色葡萄球菌培养菌液取1.0ml加入第一支小试管内，稀释成浓度1:10的菌液；取第一支试管内1.0m l菌液加入第二支小试管内，稀释成浓度1:100的菌液，同法稀释成浓度1:106（每ml含菌量≤100CFU）即可。
10.3 采用平皿计数法测定活菌数。
4.9 无菌检验培养温度
4.9.1硫乙醇酸盐流体培养基，置30～35℃培养。
4.9.2胰酪大豆胨液体培养基，置23～28℃培养。
12. 无菌检验
12.1 抽样
根据GB14233.2-2005抽样的规定，随机抽取同一个灭菌批产品检验3套产品。
4.10检验方法
4.10.1 直接接种法
每个包装以无菌操作拆开把各导管中的帽子，直接投入含100ml硫乙醇酸盐流体培养基及胰酪大豆胨液体培养基的容器中，接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中。
4.10.2 培养、观察
4.10.3薄膜过滤法
每个包装以无菌操作拆开包装注入500ML的0.90.9%无菌氯化钠溶液启动循环泵冲洗循环管壁并收集冲洗液，用集菌仪滤过，加入100ML适宜的培养基培养。
其中一份作阳性对照，一份做阴性对照。
4.10.3.1上述含培养基的容器分别置规定温度的恒温培养箱中，除阳性对照管培养48～72小时外，其余管培养14天。
培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。
4.10.3.2如在加入供试品后、或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观
生效时间2016.02.22 页次4-4上判断有无微生物生产，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或划线接种于斜面培养基上，细菌培养2天，真菌培养3天，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。
4.11 结果判断
4.11.1培养结束后，阳性对照管应有菌生长，阴性对管应澄清。
否则，就判结果无效。
4.11.2所有供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定。
4.11.3若供试品管中任何1管显浑浊并确证有菌生长判供试品不符合规定。
5.相关文件
5.1《无菌检测培养基适用性检查规程》
5.2《无菌检查法方法验证》
6.相关记录
6.1《无菌检测原始记录》。