第六章 植物器官培养
植物器官培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解植物组织培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握无菌操作技术，包括消毒、接种等。
3. 学习植物器官培养的过程，包括愈伤组织的诱导、分化以及再生植株的形成。
4. 观察并分析植物器官培养过程中的各种现象，加深对植物生长发育机制的理解。
二、实验原理植物组织培养是利用植物细胞的全能性，通过无菌操作将植物器官、组织或细胞在人工控制的培养条件下进行培养，使其生长发育成完整的植株。
实验过程中，植物激素的添加和培养条件的调控对愈伤组织的形成和器官分化起着关键作用。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：小麦种子、香蕉叶片、胡萝卜块根。
2. 试剂：70%乙醇、氯化汞、MS培养基、2,4-D、6-BA、蔗糖、琼脂等。
四、实验方法与步骤1. 无菌操作：将实验材料用70%乙醇和氯化汞消毒后，用无菌水冲洗干净，放置在超净工作台上进行接种。
2. 愈伤组织诱导：a. 将小麦种子接种于MS培养基中，添加2,4-D和6-BA，置于培养箱中培养。
b. 将香蕉叶片切成小块，接种于MS培养基中，添加2,4-D和6-BA，置于培养箱中培养。
c. 将胡萝卜块根切成小块，接种于MS培养基中，添加2,4-D和6-BA，置于培养箱中培养。
3. 愈伤组织分化：a. 当愈伤组织形成后，调整培养基中激素比例，诱导愈伤组织分化成根和芽。
b. 将分化出的芽和根接种于新的培养基中，继续培养。
4. 再生植株形成：a. 当芽和根生长到一定程度后，将其移植到土壤中，培养成完整的植株。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织诱导：实验结果表明，在不同植物材料中，愈伤组织的诱导效果不同。
小麦种子和香蕉叶片的愈伤组织诱导效果较好，而胡萝卜块根的愈伤组织诱导效果较差。
2. 愈伤组织分化：在调整培养基中激素比例后，愈伤组织分化成根和芽。
小麦种子愈伤组织分化出较多的根和芽，香蕉叶片愈伤组织分化出较多的芽，而胡萝卜块根愈伤组织分化出的根和芽较少。
3. 再生植株形成：将分化出的芽和根移植到土壤中，大部分植株成功生长。
第六章 营养器官培养
英东生命科学学院 白音
主要内容及其要求
1、掌握植物组织分化过程。 2、理解试管苗的移栽过程及管理措施。
器官培养主要是指植物根、茎、叶、 花及小果实的无菌培养。 器官培养的特点在于能保持它们所 具有的特征性结构，通过器官培养可快 速大量的繁殖。
风信子的克隆花芽
第一节 根的培养
马铃薯炼苗棚
3、移栽方式与管理
移栽方式：容器移栽和大田移栽。
（1）容器移栽
基质：主要为田园土，配以松针土， 腐植土，营养土：有时需加入锯末， 河沙或蛭石等。
容器：多选朔料营养杯，特别是废旧再生 朔料通过简单的工艺吹塑而成的软营养杯。 首先在营养杯中装入基质至1/4处，左手轻 拿试管苗，右手将苗根均匀分布于营养杯中； 然后，左手扶苗，右手在杯中填土。 接下来，用两手捏住杯沿两边轻轻在地上 墩几下营养杯，使苗根与营养土帖紧。刚刚移 入杯后小苗，应该经过短期遮荫，一般以3d为 宜，当然也与移栽季节，天气状况有关，应该 灵活掌握。
● 根培养多用于探索植物根系的生理及其代 谢活动。 ● 通过由单个直根衍生而来，并经继代培养 而保持遗传性一致的根的培养物，可称为离 体根的无性系。 ●根培养时一般从根尖一端切取1.0cm长的根 尖接种于培养基上。
第二节 茎的培养
茎的培养可分为茎尖培养和茎段培养。茎段培养 是指带有腋（侧）芽或叶柄、长数厘米的茎节段进行 离体培养。 茎段—不定芽（萘乙酸NAA低浓度）—再生苗—生 根—盆栽 愈伤组织（NAA高浓度）——芽分化
（二）组培苗的移栽及管理
1、组培苗的特点
₪根与输导系统不通。没有根毛或根毛很少。 ₪叶表保护组织不发达甚至完全没有。 ₪组织幼嫩。结构较松散。细胞含水率高 。机 械组织很不发达。
第六章 器官培养
长寿花的培养
长寿花实生苗的叶片，经表面消毒后，切成0.5 厘米见方的方块，接种于MS+1mg/L2.4D+0.1mg/LBA培养基中，经30天左右的培养， 叶片边缘开始出现淡绿色的颗粒状的愈伤组织， 继续培养后颗粒状突起逐渐扩大，以后形成致 密的淡绿色愈伤组织块。愈伤组织接种到 MS+1mg/LBA+0.1mg/LNAA培养基上，15天后 愈伤组织明显扩大、转绿，50天左右开始分化 出5~6株无根苗，在1/2MS培养基上，全部长出 不定根。
第六章 器官培养
第一节 根的培养 第二节 茎的培养 第三节 叶的培养
器官培养的概念和特点
器官培养（organ culture）主要指植物根、 叶、茎、花及小果实等器官在离体条件 下的无菌培养。 器官培养的特点在于能保持器官所具有 的特征性结构。
第一节 根的培养
离体根由于具有生长迅速、代谢活跃及在已知 条件下培养可根据需要增减培养基中的成分等 优点，对离体根的培养多用于探索植物根系的 生理及其代谢活动。 一．培养过程：在组织培养的研究中，离体根 在培养方法的历史上占有一定的地位，是第一 次通过无菌培养方法连续转移使根保存了很长 时间。在离体根培养中，首先要解决外植体消 毒问题，因为在自然条件下，根生长在土壤中， 要进行彻底的表面消毒是非常困难的。因此人 们常用无菌苗的根作为培养材料。 二．培养事例（略）
二．培养示例
选择优良月季当年生枝条中段（带饱满 而未萌发的侧芽），在自来水下流水冲 洗4~6小时，用0.1%HgCI2消毒8~12分钟， 无菌水冲洗4~5次，剪成1~2厘米左右带 腋芽的茎段接种。培养温度21~25度，每 日光照12小时。月季腋芽在茎段上的位 置也会影响嫩茎增殖的效果。
月季茎段培养（学生实验）
营养器官培养
番茄、胡萝卜、蝴蝶兰离体根的培养。
第二节 茎的培养
一、茎培养的意义：
1、用于无性系快速繁殖：变异率低，增殖快。 2、用于脱除植物病毒：提高植物产量和品质 3、用于育种：茎尖遗传性稳定，可快速繁殖新品
种，加速优良品种推广
①传统的无性繁殖：繁殖系数一般为1:10，推广慢； ②离体繁殖：不受季节限制，繁殖系数为几十至几百倍，
3 、促进试管苗生根的措施？
养发育最终形成幼苗。 （2）茎尖培养再生植株：外植体消毒 茎尖剥离
2、用于脱除植物病毒：提高植物产量和品质
茎尖培养
2、用于脱除植物病毒：提高植物产量和品质
③添加吸附剂，加入适量活性炭有利于生根；
2、用于脱除植物病毒：提高植物产量和品质
2、离体根培养的试验系统：需特殊装置
①传统的无性繁殖：繁殖系数一般为1:10，推广慢；
液体培养，25℃黑暗条件
研究根系生理和代谢、器官分化与形态建成。
7-10d继代一次，取主根增殖
4、用于形态建成研究：取材便利，培养条件可严格控制，且可排除其它部位的影响，实验重复性强。
指利用植物的根、茎、叶等器官的 2、茎尖的发育方向及其调节：
（2）茎尖培养再生植株：外植体消毒 茎尖剥离 茎尖培养 ①降低基本培养基无机盐的浓度，一般采用1/2MS培养基或改良White基本培养基；
营养器官培养
第六章 营养器官培养
教学目的：
掌握植物根、茎、叶培养的一般方法和技术，尤 其是茎段培养的方法及其特点，熟悉植物营养器 官培养的应用技术。
教学重点：
1、根的培养； 2、茎的培养； 3、叶的培养。
教学难点：
植物营养器官培养的应用。
②茎尖剥离：一般在解剖镜下剥离带两个叶原基的茎尖
第六章 动植物细胞培养
第一节
动植物细胞培养的特性
一、动物细胞培养的特性
技术发展历史：
1907年，美国，Harrison首次将蛙的神经组织在试管内培养 成功。 1950年，Enders及同事发表第一篇在培养细胞中生长病毒的 报告。 1972年，Knazek等创立中空纤维细胞培养技术，使细胞体外 培养扩展为大规模培养。 1986年，Demo生物公司用微囊化技术大规模培养杂交瘤细胞 生产单克隆抗体获得成功。 随后，动物细胞培养技术日趋完善。
维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，它 们在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶，对细胞的代 谢有重大的影响。 糖类：多数合成培养基都含有葡萄糖，它主要由糖 酵解作用代谢形成丙酮酸，并可转化乳酸或乙酰乙 酸进入柠檬酸循环形成CO2。对胚胎细胞和转化细胞， 乳酸在培养基中的积累特别明显。 无机离子：是细胞的重要组成部分之一，参与了细 胞的代谢活动。培养基中的无机离子除K+、Na+等外， 还含有Fe2+、Zn2+、Cu2+等微量离子。
生物反应工程原理
李艳 教授
生物科学与工程学院 lymdh5885@ ly5885@
第六章 动植物细胞培养
动植物细胞培养技术：将动植物组织、器官在适当 的培养基上进行离体培养的技术。 组织：指由结构和功能相似的细胞和细胞间质组成， 具有一定形态和生理功能的聚集体。 器官：指机体中具有特殊结构和完成特殊功能的分 化部分。 组织与器官培养：在人工条件下，使它们得以继续 生存或发展的一种培养方法。
1、动物细胞培养的环境要求 2、培养基组成 3、常用的合成培养基 4、培养基制备应考虑的因素
第六章植物愈伤组织培养
•Байду номын сангаас
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2、分裂期
分裂期 (division stage) 是不断增生子细胞的过程。 其特征是:细 胞 分 裂 快 ， 结 构 疏 松 ， 缺 少 有 组 织 的 结 构，颜色浅而透明。主要表现如下:
三、植物愈伤组织的形成过程
从单细胞或一块外植体形成典型的愈伤组织，大 致要经历4个时期:
诱导期 分裂期 形成期 分化期
1、诱导期 (起动期)
•
诱导期 (induction stage)是细胞准备进行分裂的 时期,通过一些刺激因素和激素的诱导作用，使处 在静止状态的细胞合成代谢活动加强，迅速进行 蛋白质和核酸物质的合成。此期间细胞的大小变 化不大。
① 细胞的数目迅速增加。 ② 每个细胞平均鲜重下降。
③ 细胞体积小，细胞内无液泡
④ 细胞核和核仁增至最大
⑤ 细胞中RNA含量减少，而DNA含量保持不变。
⑥ 组织的总干重、蛋白质和核酸含量大大增加，新细胞壁的合成 极快。
3、形成期
形成期 (formation stage)是指外植体的细胞经过诱导、 分裂形成了无序结构的愈伤组织的时期。 这一时期愈伤组织内细胞有以下特点是: ① 大而不规则、高度液泡化，整个组织是比较松散的。 ② 表面以下约5～10个细胞是细胞生长的中心这些中 心是愈伤组织的主要生长部位。
四、植物愈伤组织的继代培养
一般在愈伤组织长到直径2～3cm时才将其与外植体分 离，单独培养，并将其切成4-8个小块继续培养，此即继代 培养。用继代培养维持愈伤组织生长，是长期保存愈伤组 织的一种方法。 继代培养可选取生长迅速的部位。从外表看，生长迅速 的愈伤组织多呈浅色、质地松散。若要进行愈伤组织的分 化和再生，则应选生长较慢的愈伤组织。 每二次继代培养的时间取决于愈伤组织的生长速度。一 般可在4-6周继代一次。
生物技术制药-06讲义教材
2、生理活性物质
生理活性物质是一类对细胞内的生化反 应和生理活动起调节作用的物质的总称。 包括酶、维生素、植物激素和抗生素等。
（1）酶类 酶（enzymes）是一种有机催化剂。酶反 应一般在常温、常压、中性水溶液中进 行，高温、强酸、强碱和某些重金属离 子，会使其失活。
2、生理活性物质
（2）维生素 维生素（vitamin）是一类复杂的有机物， 常参与酶的形成，对植物的生长、呼吸 和物质代谢有调节作用，如对难以生根 的植物，用维生素B12处理后可促进不定 根的生长。
10、次级代谢和次级代谢产物
人们把除了核酸、核苷、核苷酸、氨基酸、蛋 白质及糖类（这些成分通常称为初级代谢产物） 以外，具有如下特征的成分称为次级代谢产物： ①有明显的分类学区域界限；②其合成需在一 定的条件下才能发生；③缺乏明确的生理功能； ④是生命的多余成分。现代定义：次级代谢作 用是特殊蛋白质内源化合物的合成、代谢及分 解作用的综合体现。上述作用的结果导致了次 级代谢产物的产生，如生物碱、黄酮体、萜类、 有机酸、木质素等。
四、植物培养细胞的生理特性
细胞团产生的原因有两个：（1）细胞分裂之 后没有进行细胞分离；（2）在间歇培养过程 中细胞处于对数生长后期时，开始分泌粘多糖 和蛋白质，或者以其它形式形成粘性表面，从 而形成细胞团。
植物细胞形态上的另一特性，就是其纤维素细 胞壁使得其外骨架相当脆弱，表现为抗张力强 度大，抗剪切能力小，故传统的搅拌式生物反 应器容易损坏植物细胞的细胞壁。再者，植物 细胞培养基黏度度比较高，且培养时间的延长， 细胞数量呈指数上升。
自此植物器官与营养需求之间关系研究、原生质体、 培养基以及培养方法的研究获得了高度重视，基因 工程技术也被用于植物次级代谢产物的生产中。
植物组织培养技术
植物组织培养技术第一章绪论第二章植物组织培养实验室组成、仪器设备及无菌操作技术第三章植物组织培养基本原理第四章器官培养技术第五章植物胚胎培养第六章花粉及花药培养第七章细胞及原生质体培养第八章组培培养技术在中药学上的应用第一章绪论一、植物组织培养的概念1. 概念植物组织培养（Plant tissue culture）广义上是指无菌条件下，在特定的培养基上对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体甚至包括完整植株进行培养的技术。
2.主要特征（1）在培养容器中进行；（2）无菌培养环境，排除了微生物如真菌、细菌以及害虫等的侵入；（3）各种环境因子如营养因子、激素因子以及光照、温度等物理因子处于人工控制之下，并可达到最适条件。
（4）通常打破了正常的植物发育过程和格局；（5）随着单细胞和原生质体培养技术的发展，对植物显微结构进行操作成为可能。
二、植物组织培养类型：根据不同分类的依据可以分为不同类型。
1、根据培养材料不同分为：（1）完整植株培养（Plant Culture）：对幼苗和较大植株等的培养。
（2）胚胎培养（Embryo Culture）：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。
（3）器官培养（Organ Culture）：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。
（4）组织培养（Tissue Culture）：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。
（5）细胞培养（Cell Culture）：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。
（6）原生质体培养（Protoplast Culture）：指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。
2、根据再生途径分为：（1）器官发生途径（Organogenesis）：直接器官发生途径：植物器官可以直接由外植体上诱导。
如茎尖培养。
间接器官发生途径：成熟细胞经过脱分化（dedifferentiation）及再分化（redifferentiation）过程而形成新的组织和器官的过程。
植物器官和组织培养的基本程序
植物器官和组织培养的基本程序离体的植物器官和组织在人工培养条件下，通过不同的器官发生途径，形成体细胞胚或茎芽，进一步再生成完整植株。
因此，植物器官和组织培养的基本程序包括：无菌外植体的获得、初代培养物的建立、形态发生、植株再生以及培养产物的观察记载。
一、无菌外植体的获得从自然界和室内采集的植物器官和组织材料携带有各种微生物，这些污染源一旦进入培养容器中，造成培养基和培养材料污染，实验无法进行。
所以，污染是组织培养的一大障碍。
利用各种灭菌剂可以进行外植体的灭菌，但不同植物或同一植物不同器官和组织的带菌程度不同，所用灭菌剂的种类、浓度及灭菌方法也不尽相同。
(一)茎尖、茎段、叶片的灭菌灭菌前外植体用清水冲洗，茸毛较多的外植体用皂液洗涤后再用清水冲洗、用吸水纸吸干表面水分；将外植体浸泡在0.1%～0.2%的氯化汞溶液中2～10min，或先在70%～75%酒精中浸数秒，然后在10%次氯酸钙溶液中浸泡10～20min。
或先在70%～75%酒精中浸泡数秒，再在2%次氯酸钠溶液中浸泡15～30min进行灭菌；灭菌后倒掉灭菌液，无菌水冲洗外植体3～5次，置外植体于无菌滤纸上吸干表面水分，适当分割后接种。
(二)根、块茎、鳞茎的灭菌这类材料生长在土中，灭菌较困难，且挖取时易受损伤。
所以灭菌前应仔细清洗，对凹凸不平及鳞片缝隙处，需用软刷清洗，并切除损伤部位。
灭菌时应增加灭菌时间或增大灭菌剂浓度，如将外植体浸泡在0.1%～0.2%氯化汞溶液中5～12min，或在70%～75%酒精中浸数秒，然后用6%～10%次氯酸钠溶液浸5～20min进行灭菌。
灭菌后的操作步骤同上。
(三)花蕾的灭菌未开放花蕾中的花药为花被包裹，处于无菌状态，所以采摘后可直接灭菌。
灭菌时先在70%～75%酒精中浸蘸10～30s，然后在0.1%氯化汞溶液中浸泡3～10min或在1%次氯酸钠溶液中浸泡10～20min。
灭菌后的处理同上。
(四)果实、种子的灭菌这类材料有的表皮具有茸毛或蜡质。
第六章_器官的培养
湿度：在干燥季节还应注意培养室内湿度的 管理，以防培养基内的水分散失过多而对培养不 利。
2．芽的增殖
茎尖微繁主要通过顶芽、腋芽的形成和发展以 及培养茎尖组织不定芽产生而使苗在数量上迅速增 殖。
（l）顶芽和腋芽的发育: （2）诱导不定芽的产生
（3）原球茎的发育
（l）顶芽和腋芽的发育:
顶芽和腋芽在微繁殖培养中都能被诱 导发育，可以诱导出单一的苗或多个苗。原 理：利用细胞分裂素来抑制植物原有的顶端 优势,而使侧芽和顶芽能够共同生长。对于 顶端优势的植物，通常采用切除顶芽和适当 的增加细胞分裂素浓度两项措施来克服其顶 端优势。
（2）诱导不定芽的产生
不通过愈伤组织直接形成不定芽的途径更优 越一些，因为植物在脱分化形成愈伤组织中可能 会出现一些变异。但直接形成的不定芽并不总能 保持原品种的特性，有时在繁殖中还能出现严重 的质量问题。
（2）诱导不定芽的产生
观赏植物中有不少 遗传学上的嵌合体。如 一些带镶嵌色彩的叶子、 花、带金边、银边的植 物等，在通过不定芽繁 殖时，再生植株就失去 了这些富有观赏价值的 特性。
4.壮苗和生根
在生根阶段，培养基中的糖浓度要降低到1.0％～ 1.5％，以促使植株增强自养能力，同时降低了培养基 的渗透势，有利于完整植株的形成和生长；
另一方面应增加光强，达到33 00～10 000lx。在 这样的条件下，植物能较好的生长，对水分的胁迫和 对疾病的抗性将有所增加，植株可能在强光照下表现 出生长延缓和较轻微的失绿，但事实证明，这样的幼 苗，要比在低光强条件下的绿苗有较高的移植成活率。
2．芽的增殖
（2）诱导不定芽的产生
一.不定芽由外植体直接产生，这类不定芽通 常是从表皮细胞或表皮以下几层细胞产生的， 有时带有少量的愈伤组织
植物器官和组织培养讲义
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三、植物茎段培养
植物茎段培养是指对植物的带有定芽或 不定芽的外植体进行离体培养，再生完 整植株的过程。
茎段培养是植物离体快繁的主要途径。 易培养、变异小、性状均一、繁殖速度 快。（下节课讲解）
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第三节 植物繁殖器官培养
一、植物花器官的培养(主要见胚胎培 养和花药培养) 二、植物幼果培养(了解)
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三、植物种子培养：
定义。
用途：打破种子休眠，缩短生活周期；挽救远缘 杂种，提高杂种萌发率等。
对培养的要求：成熟种子萌发培养所用培养基成 分简单，不需生长调节剂；未成熟种子萌发培养 则需要添加一定的营养成分和生长调节剂。若需 要其形成愈伤组织，需要相应的生长调节剂及营 养物质。
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二、植物根段培养
植物根段培养是指以植物的根切段为外 植体进行离体培养，再生完整植株的过程。 是研究根系生理代谢、器官分化及形态建 成的良好实验体系。培养方法与叶片培养 相似。
培养过程包括愈伤组织诱导、不定芽分 化、无菌苗的增殖与生根等。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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（二）不定芽的分化：
由脱分化形成的愈伤组织细胞分化出不 定芽及不定根的过程。
分化过程受细胞分裂素/生长素比值的 影响。通常添加高浓度的细胞分裂素，降低 生长素浓度以诱导不定芽的形成。
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（三）不定芽的增殖及生根：
分化形成的不定芽切下后，接种于 增殖培养基中，促进不定芽的增殖，增 殖的无根苗转接于生根培养基中可以诱 导不定根的形成。
植物组织培养知识点归纳
植物组织培养知识点归纳第⼀章1、植物组织培养：是指在离体条件下，利⽤⼈⼯培养基对植物的器官、组织、细胞、原⽣质体等进⾏培养，使其长成完整植株2、外植体：在植物组织培养中，由活体（in vivo）植物上提取下来的、接种在培养基上的⽆菌细胞、组织、器官等均称为外植体。
3、愈伤组织：指在⼈⼯培养基上由外植体长出来的⼀团⽆序⽣长的薄壁细胞。
4、应⽤⼀、农业上的应⽤1. 种苗快速繁殖(rapid propagation)2.⽆病毒苗(virus free)的培养3.在育种上的应⽤(breeding)（1）倍性育种，缩短育种年限，杂种优势明显；（2）克服远缘杂交的不亲合性和不孕性（胚培养）；（3）保存种质（4）创造变异⼆、在遗传学、分⼦⽣物学、细胞⽣物学、组织学、胚胎学、基因⼯程、⽣物⼯程等⽅⾯的应⽤。
⽤于基因⼯程技术创造植物新种质。
⽤于植物⽣长发育理论研究，包括⽣理学、病理学、胚胎学和细胞与分⼦⽣物学等。
三、利⽤组织培养材料作为植物⽣物反应器第⼆章1、细胞全能性（Totipotency）：指任何具有完整的细胞核的植物细胞都拥有形成⼀个完整植株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能⼒。
2、细胞分化（cell differentiation）：指导致细胞形成不同结构，引起功能或潜在的发育⽅式改变的过程。
3、脱分化（Dedifferentiation）：指离体条件下⽣长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构和功能⽽恢复分⽣状态，形成⽆组织结构细胞团或愈伤组织的过程。
4、再分化（Redifferentiation）：指脱分化的细胞重新恢复分化能⼒，形成具有特定结构和功能的细胞、组织、器官甚⾄植株的过程。
5、植物组织培养中常遇到的问题以及解决措施⼀、污染及防治：1、真菌污染后，如果已形成孢⼦，则必须经⾼压灭菌后扔掉。
但若是细菌污染，只要及时发现，将材料上部未感菌的部分剪下转接，材料仍可使⽤。
2、⽤抗⽣素等杀菌药剂的处理，会影响植物材料正常⽣长。
植物的器官培养共73页
植物的器官培养36、如源自我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进 而变成 法律。 ——朱 尼厄斯
40、人类法律，事物有规律，这是不 容忽视 的。— —爱献 生
31、只有永远躺在泥坑里的人，才不会再掉进坑里。——黑格尔 32、希望的灯一旦熄灭，生活刹那间变成了一片黑暗。——普列姆昌德 33、希望是人生的乳母。——科策布 34、形成天才的决定因素应该是勤奋。——郭沫若 35、学到很多东西的诀窍，就是一下子不要学很多。——洛克
植物器官的培养-花器官的培养(花蕾)1(精)
一、植物器官的培养-花器官的培养（花蕾）1. 定义：花器官培养指整个花器及其组成部分如花托、花瓣、花丝、花柄、子房、花药等的无菌培养。
2、意义：通过离体花芽培养可了解整体植物和内源激素在花芽性别决定中所起的作用；可以了解花器各部分对果实和种子发育的作用；内、外源激素在果实种子发育过程中的调控作用；生产上也可用于珍贵品种的扩大繁殖。
3. 培养方法(1) 取材、消毒：从健壮植株上取未开放的花蕾→75％酒精浸润约30s →饱和漂白粉浸泡10-15min（或0.1％升汞中浸3-5min ）→无菌水冲洗数次→接种。
(2)接种：花蕾培养：花梗插入培养基中。
部分花器培养：切片接入培养基中。
(3)培养培养基：MS、B5。
附加生长素（NAA0.1 mg/L ）和细胞分裂素（6-BA 2mg/L ），诱导形成愈伤组织或胚状体，再分化培养成植株。
培养条件：温度：25±2℃；光照时间：10-12h/d，光照强度：1500-3000 Lx。
培养约1周，形成少量愈伤组织。
再经1个月就分化出绿色芽点，再切割转接，可形成大量无根苗，经长根成植株，用于繁殖。
二、种子的培养1定义：种子培养是指受精后发育完全的成熟种子和发育不完全的未成熟种子的无菌培养。
2.意义：可以打破种子休眠，促进萌发；解决远缘杂种败育性，产生后代；快速繁殖苗木。
优点：植株分化容易，无菌操作方便。
3.培养技术(1) 种子灭菌：种皮厚或不饱满的种子，宜用0.1％升汞消毒10-20min。
幼嫩的或发育不全的种子，宜用饱和漂白粉消毒15-30min。
若种子上有绒毛或蜡质，应先用95％酒精或吐温80处理，提高消毒效果。
对壳厚难萌发的种子，可去壳培养。
(2)培养基：A.促种子萌发用MS培养基，加或不加激素，诱导愈伤组织则可加入6-BA或2,4-D。
B.无胚乳种子（棉花、大豆、花生、向日葵、番薯、马铃薯、苹果、烟草、薄荷）应适当加生长素。
C.一般糖浓度为1-3%。
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第六章植物器官培养
•植物器官培养（plant organ culture）是指利用植物的根、茎、叶、花、果实、子房和胚的等器官的全部或部分或器官原基进行离体培养的技术。
•离体培养的植物器官可分为营养器官和繁殖器官，包括根、茎、叶、花、果实、子房和胚。
•器官培养的特点在于能保持器官所具有的特征性结构。
•通过器官培养可以快速建立试管苗，实现快速繁殖，目前这一技术已在生产上得到广泛应用。
1、根的培养
•对根的培养多用于探索植物根系的生理及其代谢活动。
•在离体根培养中，首先要解决外植体消毒问题，因此在自然条件下，根生长在土壤中，要进行彻底的表面消毒是非常困难的，因此，常用无菌苗的根做为培养材料。
•离体根的培养方法
•（1）外植体的消毒
•离体根来源：生长于土壤中的植株；
无菌苗根系
消毒方法：自来水洗涤解剖刀分割
滤纸吸干根段表面的水分
95% 酒精漂洗10~30s
0.1%-0.2%升汞处理5~10min,或在2%次氯酸钠溶液中浸
15~20min
无菌水冲洗3-5次无菌纸吸干根段表面多余的水分
（2）培养方法
•①固体培养法
•②液体培养法100或200ml三角瓶，内装20~40ml的培养液，适宜温度。
•③固体-液体培养法将根基部一段插入固体琼脂培养基中、根尖一段尽在液体培养基中
•基础培养基的选择
•多为无机盐浓度较低的White、N6等培养基
•其他常用培养基如MS、B5等也可采用，但将其大量元素浓度稀释到2/3或1/2
培养实例
•采用White培养基对番茄根进行立体培养。
•将番茄种子表面消毒后，在无菌条件下萌发。
待胚根伸长至30-40mm后，从根尖一端切取10mm长接种于固体培养基，暗条件下培养4天有侧根发生，7-10天后再切下侧根的根尖做为新的培养材料再进行扩大培养
2、茎段培养
•指对不带芽和带有腋（侧）芽或叶柄的茎切段，包括幼茎和木质化的茎切段，进行离体培养的技术。
•培养技术简单、繁殖速度较快、繁殖系数高等优点。
•一般情况下，将经过表面消毒的茎段在无菌条件下，切成几厘米长带节的节段，接种在固体的培养基上。
经过培养后，在茎段可直接发生不定芽，或先诱导形成愈伤组织，再脱分化形成再生苗，把再生苗切割下来转接到生根培养基上培养，便可得到完整植株。
•常用的MS培养基附加2%-4%蔗糖和0.7%琼脂
培养实例
•如对月季当年生枝条的离体培养。
•选择优良健壮的月季当年生枝条（具饱满而未萌发的腋芽），冲洗后表面消毒，剪成1-2cm的带腋芽的茎段接种培养。
•3、叶的培养
•指包括幼嫩叶片、成熟叶片、叶柄、子叶、叶鞘、叶尖组织、叶原基等叶组织做为外植体的无菌培养技术。
•水稻、小麦、油菜、番茄、杨树、菊花、百合、猕猴桃•从枝上摘叶后，用水冲洗数小时，将叶片表面洗干净，再进行表面消毒。
将完成表面消毒的叶片平放在固体培养基上培养。
•叶片在培养基的生长情况大多依赖于叶片离体时的成熟程度。
一般来说幼叶比接近成熟的叶片生长潜力大。
•如对非洲紫罗兰嫩叶的培养。
•选取嫩叶，经升汞消毒后，无菌水洗干净后，切成小块接种于MS培养基上，光照下培养。
一段时间后，叶片可直接分化出许多不定芽。
将小芽转接于生根培养基上诱导生根。
10天后，叶片明显增大，根的诱导率达到98%以上，两周后即可移栽。
植物繁殖器官的培养
•植物的繁殖器官包括花托、花瓣、花丝、花柄、子房、花茎和花药等花器官，果皮、果肉等果实器官和胚珠、胚乳、种子等种子器官。
•花器官培养：包括花托、花瓣、花丝、花柄、子房、花茎和花药等花器官。
•（1）取材与接种从健壮植株上摘取未开放的花蕾（已开花的不宜用于培养），先用70%酒精消毒20s，再用饱和漂白粉溶液浸10-20min，或用0.1%升汞消毒4~6min,再用无菌水冲洗3-5次。
•（2)接种在整个花蕾培养时，只要把花梗插入固体培养基中即可。
若用花器的某个部分则分割成0.3cm×0.5cm左右的小片，用于接种。
•培养实例
•菊花花托培养在母株上采摘尚未开放的小花蕾，清洗消毒后，用镊子吧花蕾上的萼片与花瓣、雌蕊、雄蕊去掉，并切下花托接种于培养基上，置于26℃左右，光照强度1500勒克斯，光照时间10h的培养室培养。
约两周后即可形成愈伤
组织，一月后便分化出绿色芽点，并抽茎展叶长大成苗。
将无根苗从愈伤组织基部切下继代到不含任何激素的White培养基上，3周后就能长成完整植株。
植物幼果培养
•果实培养即利用果皮、果肉组织、或细胞进行培养的组织培养工作。
•从葡萄浆果培养，草莓、葡萄、越橘幼果培养中获得成熟果实。
培养实例
•朱顶红：
•摘取朱顶红幼嫩蒴果，清洗消毒后，纵切成两半，再切成2mm 的小段，接种于培养基上。
1周后，蒴果切段开始膨大，果皮呈深绿色。
3周后，在培养基上切段，表皮及切口处长出淡黄色颗粒状的愈伤组织。