植物组织培养植物器官以及组织培养
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第三章 植物器官和组织培养
植物器官和组织培养的基本程序 植物营养器官培养 植物繁殖器官培养 植物组织培养
植物组织培养植物器官以及组织培 养
组织培养步骤图
植物组织培养植物器官以及组织培 养
（1）准备阶段 查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合
实际制定出切实可行的培养方案。 根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段
植物组织培养植物器官以及组织培 养
一、离体根的培养
植物根段培养是指以植物的根切段为外植体进行培 养的技术。
（一）根无性系的建立 来自无菌种子发芽产生的幼根切段或植物根系经灭 菌处理后的切段，可以以两种方式进行培养，建立根的 无性繁殖系。
植物组织培养植物器官以及组织培 养
一、离体根的培养
1、根的直接增殖 1）根无性繁殖系的建立
将种子进行表面消毒，在无菌条件下进行无菌萌 发，待根伸长后从根尖一段切取长1.0cm的根尖，接种 培养基中。
这些根的培养生长很快，番茄根每天约生长10mm， 几天后发育出侧根。待侧根生长约一周后，即可切取 侧根的根尖进行扩大培养，它们又迅速生长出侧根， 又可切下进行培养，如此反复，就可得到从单个根尖 衍生而来的离体根的无性系。
（二）规范操作
操作技术熟练、工作经验、操作者、进入超净工作台 的物品表面。
（三）条件合适
培养基种类、激素种类和浓度、其他添加物、外植 体来源、生长发育状态、培养条件。
植物组织培养植物器官以及组织培 养
形态发生和植株再生
建立的无菌培养物在适宜的离体环境 中，生长发育（形态发生）形成完整的 小植株。
离体材料的形态发生的途径：
植物组织培养植物器官以及组织培 养
无菌外植体的获得
（一）茎尖、茎段、叶片的灭菌
清水冲洗，吸干—0.1-0.2%氯化汞浸泡2-10min， （70%酒精浸泡数秒，10%次氯酸钙浸泡10-20min或2% 次氯酸钠浸泡15-30min）—灭菌水冲洗3-5次—无菌滤 纸吸干—分割—接种。
（二）根、块茎、鳞茎的灭菌
诱导胚状体比诱导芽数量多、速度快、结构完整。 （三）外植体-直接形成根与芽-植株。如茎尖培养
植物组织培养植物器官以及组织培 养
植物组织培养植物器百度文库以及组织培 养
培养产物的观察与记载
（一）愈伤组织 诱导率=产生愈伤组织的外植体数/外植体总数×100% 生长量=培养一段时间后愈伤组织干重或鲜重-接种时愈伤
生长在土中，灭菌困难，以受损伤。 灭菌前仔细清洗，加大灭菌剂浓度或延长灭菌时间。
植物组织培养植物器官以及组织培 养
无菌外植体的获得
（三）花蕾的灭菌
未开放的花蕾中的花药为花被包裹，处于无菌状态， 采摘后可直接灭菌。 70%酒精浸泡10-30s—0.1-0.2%氯 化汞浸泡3-10min，（或1%次氯酸钠浸泡10-20min）—灭 菌水冲洗3-5次—无菌滤纸吸干—分割—接种。
组织的干重或鲜重 （二）胚状体 胚状体诱导率=产生胚状体的外植体数/外植体总数
×100% （三）芽 芽分化数=产生芽的外植体数/外植体总数×100% （四）根 发根率=发根芽数/培养芽数 每个材料平均发根数植物组织培养植物器官以及组织培
养
第二节 植物营养器官培养
植物根段培养 植物茎段培养 植物叶培养
植物组织培养植物器官以及组织培 养
外植体形态发生形成完整植株的途径
（一）外植体-愈伤组织-完整植株。 具体又可分为三种：
1、愈伤组织-同时长芽和根-植株。 2、愈伤组织-茎-根-植株。 3、愈伤组织-根-芽-植株。 4、愈伤组织-体细胞胚-植株
植物组织培养植物器官以及组织培 养
（二）外植体-胚状体-植株。可从以下几种培养物中产生： 1、器官上发生。 2、愈伤组织上发生。 3、游离单细胞发生。 4、小孢子发生。
（四）果实和种子的灭菌
表皮有茸毛或蜡质，需在灭菌剂中加入几滴土温-80。 果实70%酒精浸泡数秒—0.1-0.2%氯化汞浸泡3-10min， （或1%次氯酸钠浸泡10-20min）—灭菌水冲洗3-5次—无 菌滤纸吸干—分割—接种。
植物组织培养植物器官以及组织培 养
初代培养物的建立
（一）无菌环境
培养基、接种器械、超净工作台、接种室环境、抗 生素物质（去除侵入组织内部的病菌。见表）
所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。 （2）外植体的选择与消毒 选择合适的部位作为外植体，采回后经过处理，然后进
行消毒处理。 将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，
或剥离出茎尖、挑出花药，接种到启动培养基上。
植物组织培养植物器官以及组织培 养
（3）启动培养 接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使
器官发生 体细胞胚胎发生
植物组织培养植物器官以及组织培 养
形态发生和植株再生
器官发生：芽或芽原基起源于培养组织中比较表 层的细胞，即外起源。根原基发生在组织较深处，即 内起源。两者之间一般没有什么联系，呈现单向极性。
胚状体发生：极大多数体细胞胚起源于单细胞， 形成的胚状体具有双极性，在其发育的早期阶段，在 方向相反的两端分化出茎端和根端，其维管组织与母 体植物或外植体的维管组织通常没有联系。胚状体维 管组织呈独立的Y形。
植物组织培养植物器官以及组织培 养
拟定培养方案
外植体预处理
外植体无菌接 种
启动培养
分化出芽、胚 状体或原球茎
继代增殖培养
生根培养
炼苗移栽
成活供生产使 用
培养基配制灭菌
植物组织培养的一般程序
植物组织培养植物器官以及组织培 养
第一节 植物器官和组织培养的基本程序
无菌外植体的获得 初代培养物的建立 形态发生和植株再生 培养产物的观察记载
植物组织培养植物器官以及组织培 养
（5）生根培养 刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降
低或不加细胞分裂素浓度，提高生长素浓度，促进芽苗 生根，提高其健壮度。 （6）炼苗移栽
选择生长健壮，有3～5条根的生根苗进行炼苗，移 栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫。当苗 完全成活后，再移向大田。
外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋 芽直接萌发形成芽。
将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基 或形成胚状体，最后发育形成再生植株。 （4）增殖培养
分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的增殖培 养基经反复多次切割转接。
当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根， 另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的还要进行病 毒检测。
植物器官和组织培养的基本程序 植物营养器官培养 植物繁殖器官培养 植物组织培养
植物组织培养植物器官以及组织培 养
组织培养步骤图
植物组织培养植物器官以及组织培 养
（1）准备阶段 查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合
实际制定出切实可行的培养方案。 根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段
植物组织培养植物器官以及组织培 养
一、离体根的培养
植物根段培养是指以植物的根切段为外植体进行培 养的技术。
（一）根无性系的建立 来自无菌种子发芽产生的幼根切段或植物根系经灭 菌处理后的切段，可以以两种方式进行培养，建立根的 无性繁殖系。
植物组织培养植物器官以及组织培 养
一、离体根的培养
1、根的直接增殖 1）根无性繁殖系的建立
将种子进行表面消毒，在无菌条件下进行无菌萌 发，待根伸长后从根尖一段切取长1.0cm的根尖，接种 培养基中。
这些根的培养生长很快，番茄根每天约生长10mm， 几天后发育出侧根。待侧根生长约一周后，即可切取 侧根的根尖进行扩大培养，它们又迅速生长出侧根， 又可切下进行培养，如此反复，就可得到从单个根尖 衍生而来的离体根的无性系。
（二）规范操作
操作技术熟练、工作经验、操作者、进入超净工作台 的物品表面。
（三）条件合适
培养基种类、激素种类和浓度、其他添加物、外植 体来源、生长发育状态、培养条件。
植物组织培养植物器官以及组织培 养
形态发生和植株再生
建立的无菌培养物在适宜的离体环境 中，生长发育（形态发生）形成完整的 小植株。
离体材料的形态发生的途径：
植物组织培养植物器官以及组织培 养
无菌外植体的获得
（一）茎尖、茎段、叶片的灭菌
清水冲洗，吸干—0.1-0.2%氯化汞浸泡2-10min， （70%酒精浸泡数秒，10%次氯酸钙浸泡10-20min或2% 次氯酸钠浸泡15-30min）—灭菌水冲洗3-5次—无菌滤 纸吸干—分割—接种。
（二）根、块茎、鳞茎的灭菌
诱导胚状体比诱导芽数量多、速度快、结构完整。 （三）外植体-直接形成根与芽-植株。如茎尖培养
植物组织培养植物器官以及组织培 养
植物组织培养植物器百度文库以及组织培 养
培养产物的观察与记载
（一）愈伤组织 诱导率=产生愈伤组织的外植体数/外植体总数×100% 生长量=培养一段时间后愈伤组织干重或鲜重-接种时愈伤
生长在土中，灭菌困难，以受损伤。 灭菌前仔细清洗，加大灭菌剂浓度或延长灭菌时间。
植物组织培养植物器官以及组织培 养
无菌外植体的获得
（三）花蕾的灭菌
未开放的花蕾中的花药为花被包裹，处于无菌状态， 采摘后可直接灭菌。 70%酒精浸泡10-30s—0.1-0.2%氯 化汞浸泡3-10min，（或1%次氯酸钠浸泡10-20min）—灭 菌水冲洗3-5次—无菌滤纸吸干—分割—接种。
组织的干重或鲜重 （二）胚状体 胚状体诱导率=产生胚状体的外植体数/外植体总数
×100% （三）芽 芽分化数=产生芽的外植体数/外植体总数×100% （四）根 发根率=发根芽数/培养芽数 每个材料平均发根数植物组织培养植物器官以及组织培
养
第二节 植物营养器官培养
植物根段培养 植物茎段培养 植物叶培养
植物组织培养植物器官以及组织培 养
外植体形态发生形成完整植株的途径
（一）外植体-愈伤组织-完整植株。 具体又可分为三种：
1、愈伤组织-同时长芽和根-植株。 2、愈伤组织-茎-根-植株。 3、愈伤组织-根-芽-植株。 4、愈伤组织-体细胞胚-植株
植物组织培养植物器官以及组织培 养
（二）外植体-胚状体-植株。可从以下几种培养物中产生： 1、器官上发生。 2、愈伤组织上发生。 3、游离单细胞发生。 4、小孢子发生。
（四）果实和种子的灭菌
表皮有茸毛或蜡质，需在灭菌剂中加入几滴土温-80。 果实70%酒精浸泡数秒—0.1-0.2%氯化汞浸泡3-10min， （或1%次氯酸钠浸泡10-20min）—灭菌水冲洗3-5次—无 菌滤纸吸干—分割—接种。
植物组织培养植物器官以及组织培 养
初代培养物的建立
（一）无菌环境
培养基、接种器械、超净工作台、接种室环境、抗 生素物质（去除侵入组织内部的病菌。见表）
所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。 （2）外植体的选择与消毒 选择合适的部位作为外植体，采回后经过处理，然后进
行消毒处理。 将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，
或剥离出茎尖、挑出花药，接种到启动培养基上。
植物组织培养植物器官以及组织培 养
（3）启动培养 接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使
器官发生 体细胞胚胎发生
植物组织培养植物器官以及组织培 养
形态发生和植株再生
器官发生：芽或芽原基起源于培养组织中比较表 层的细胞，即外起源。根原基发生在组织较深处，即 内起源。两者之间一般没有什么联系，呈现单向极性。
胚状体发生：极大多数体细胞胚起源于单细胞， 形成的胚状体具有双极性，在其发育的早期阶段，在 方向相反的两端分化出茎端和根端，其维管组织与母 体植物或外植体的维管组织通常没有联系。胚状体维 管组织呈独立的Y形。
植物组织培养植物器官以及组织培 养
拟定培养方案
外植体预处理
外植体无菌接 种
启动培养
分化出芽、胚 状体或原球茎
继代增殖培养
生根培养
炼苗移栽
成活供生产使 用
培养基配制灭菌
植物组织培养的一般程序
植物组织培养植物器官以及组织培 养
第一节 植物器官和组织培养的基本程序
无菌外植体的获得 初代培养物的建立 形态发生和植株再生 培养产物的观察记载
植物组织培养植物器官以及组织培 养
（5）生根培养 刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降
低或不加细胞分裂素浓度，提高生长素浓度，促进芽苗 生根，提高其健壮度。 （6）炼苗移栽
选择生长健壮，有3～5条根的生根苗进行炼苗，移 栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫。当苗 完全成活后，再移向大田。
外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋 芽直接萌发形成芽。
将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基 或形成胚状体，最后发育形成再生植株。 （4）增殖培养
分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的增殖培 养基经反复多次切割转接。
当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根， 另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的还要进行病 毒检测。