丹皮酚的提取与鉴定

丹皮酚的提取分离及结构鉴定

摘要:丹皮酚是牡丹皮和徐长卿的主要活性成分，在医药、香料、化工领域具有广泛用途，其药理活性广泛: 镇静、镇痛、催眠、解热、抗炎、抗过敏，免疫调节等，提取丹皮酚的方法主要有有机溶剂浸出法、水蒸气蒸馏法、超临界流体萃取法等。本报告主要就丹皮酚的研究状况等作了介绍，实验采取水蒸气蒸馏法从牡丹皮中提取丹皮酚。并用薄层色谱法，紫外分光光度法等对丹皮酚进行了结构鉴定。

关键字：丹皮酚水蒸气蒸馏法薄层色谱法

一、文献综述

1 前言

丹皮酚( paeonol, 简称Pae) , 又称牡丹酚, 主要是从萝摩科植物徐长卿干燥根或全草和毛茛科芍药属植物牡丹、芍药的根皮中提取分离出来的一种活性成分, 其成分单一、纯度高、质量控制良好、药理作用明确、毒副反应小，而且临床使用安全。是一种小分子的酚类化合物, 化学式为，2-羟基-4-甲氧基-苯乙酮，呈白色针状结晶, 具有镇静、镇痛、解热、解痉、抗炎等作用, 并具有抗心律失常、抗动脉粥样硬化、改善微循环、保护缺血组织、抗菌和抑制皮肤色素合成等作用。近年来还发现丹皮酚具有抗肿瘤作用, 同时能提高机体免疫力且无明显副作用。

2.研究进展

丹皮始载于《本经》, 具有清热凉血, 活血化瘀的功效, 为历版《中华人民共和国药典》收载品种,.其主要有效成分为丹皮酚。药理活性广泛、高效、低毒，在心脑血管系统疾病和肿瘤防治等方面具有广阔的开发前景和临床应用价值。目前市场上对丹皮酚的需求量较大，除用于医药制剂原料外，还广泛用作牙膏及护发、护肤、美容等日化产品的原材料。对于丹皮酚的研究，早在1964，Doifode 等就合成了α-溴代的丹皮酚。Rehman等合成了丹皮酚5-位的卤化衍生物，并且发现均具有较好的抗真菌性。 1995年，徐鸣夏等合成了乙酰水杨酸丹皮酚酯，即2-（乙酰氧基）苯甲酸-2-乙酰基-5-甲氧基苯酯，其药理作用与乙酰水杨酸酯

类药物相似，但抗血栓形成作用较强，适用于防治心脑血管栓塞性疾病。潘显道阳对合成得到的

5个丹皮酚酯类化合物通过MTT法进行体外抗肿瘤药理活性的评价，初步筛选结果显示：5-硝基-2-呋喃甲酸的丹皮酚酯的抑制肿瘤细胞活性与临床上常用的抗癌药物5一氟尿嘧啶(5-Fu)的活性相近，对人肿瘤细胞有一定抑制作用，其细胞毒活性可能与该化合物分子具有的氧化特征有关。

今年来，对于丹皮酚的制备方法，定量分析，药理作用和结构修饰方面都有许多进展。

2.1 丹皮酚的提取方法

牡丹皮中丹皮酚的提取方法：蒸馏法，溶剂浸取法，其中，热浸取法明显优于冷浸取法。酸水乙醇，碱水乙醇提取法优于醇提取法。经酸碱水解提取液中丹皮酚量升高可能由于酸碱增加了丹皮酚中原苷和次级苷的水解，游离出更多的丹皮酚。

徐长卿中丹皮酚的提取方法：蒸馏法，有机溶剂浸取法，直接蒸馏，大孔树脂法，超临界流体萃取法等。

人工合成丹皮酚：由于从天然药物中提取费用高，自然条件限制大，时间长，所以，人工合成很广泛，均以间苯二酚为起始原料，但具体工艺流程，工艺条件，收率有所不同，部分方法收率可达55%，且纯度高。

2.2丹皮酚的主要分析方法

2.2.1HPLC法：是测定中药成分的主要方法，方便，快捷，准确盛习锋等用该法测定了不同产地丹皮药材中丹皮酚和去甲丹皮酚的量.

2.2.2气相色谱法：凌娅等用直接蒸馏—毛细管气相色谱法，以正十五烷为内标物对康溃丸中的丹皮酚进行了内标比对定量研究。

2.2.3薄层扫描法：该法简单易行，测定结果稳定，重现性好，准确可靠尤其在中药复方制剂中，可较好的排除其他成分的干扰，叶凤等用该法测定了血脂平胶囊中丹皮酚的量，刘义海等用薄层扫描法测定了知地黄丸中丹皮酚的量。

2.2.4毛细管电泳法：赵新锋等选用芦丁为内标用胶束电动毛细管色谱法分离牡丹皮及中药六味地黄丸中丹皮酚的量。以丹皮酚对照品峰面积与内标的比值对其浓度作图，得标准曲线，线性关系良好且加样回收率高，简单，快捷，经济高效

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2.2.5化学发光法：丹皮酚含有酚羟基，具有还原性。汪宝其等选用鲁米诺-过氧化氢-钴离子为空白发光体系利用光氧化氢对丹皮酚结构中酚羟基的氧化作用，而消耗发光体系中的过氧化氢，致使原空白发光体系的发光强度降低，即淬灭，淬灭程度的强弱在一定范围内与丹皮酚的浓度呈线性关系进而，对丹皮酚进行测定。

2.2.6 分光光度法

应用分光光度法测定丹皮酚含量的技术较为成熟，按不同的原理又可分为以下几种方法：

1）紫外分光光度法：具有操作简单、费用较低等优点。但由于该法基本上没有分离能力，样品处理要求严格，故常被用于要求不很严格的一般测定、中药材炮制方法与处理条件比较、制剂工艺选择等方面。胡锡波等以紫外分光光度法测定了丹皮酚包合物中丹皮酚的含量，结果显示丹皮酚质量浓度在1．24—10．25 Ixg／mL范围内与吸光度线性关系良好(r=0．999 6)。

2）一阶导数分光光度法：王焕云等用水蒸气蒸馏法提取丹皮酚得样品溶液，分别对样品溶液、对照品溶液及阴性对照品溶液在210～360 nm波长范围内绘制吸收光谱及一阶导数光谱图。从一阶导数光谱可知，选择263 llm和267 nm两波长以峰零法定量效果较好。以△A=A：一A：为纵坐标、质量浓度为横坐标，丹皮酚质量浓度线性范围是3．018～8．048 Ixg／mL，回收率为101．95％。结果表明，此法可不经分离对丹皮酚进行含量测定，且结果准确。

3）正交函数分光光度法：王焕云等用水蒸气蒸馏法提取麦味地黄丸得供试品溶液，以水为空白，在220～350 nm波长范围内分别对丹皮酚对照品、供试品和阴性对照品溶液进行扫描，得吸收光谱。根据光谱信息，选用二次正交多项式系数(P2)作为定量参数，以消除阴性对照的干扰，在263．8—283．8 nlTl波长之间每间隔4 nm测定各个波长的吸收度值，按公式P2：(+5)A1+ (一1)A2+(一4)A3+(一4)A4+(一1)A5+(+5)A6计算P2值。结果P2与质量浓度C呈良好的线性关系，平均回收率为99．0％。

3.丹皮酚的药理作用

3．1 改善心脑血管作用