初始污染菌检验标准操作规程

1 目的：建立产品初始污染菌数检验及分析标准操作规程。

2 责任：质量检验人员负责执行此规程。

3 范围：适用于未灭菌产品初始污染菌数验证试验的检测分析。

4 内容：

4.1 初始污染菌检测

4.1.1 器材与试剂

4.1.1.1 器材

（1）生化培养箱、霉菌培养箱

（2）立式灭菌柜

（3）超净工作台

（4）无菌过滤装置

（5）无菌镊子、无菌剪子

（6）电子天平

（7）移液器

（8）接种环

4.1.1.2 稀释液、冲洗液

pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液

4.1.1.3 培养基

营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。

4.1.2 检验方法：平皿法

4.1.2.1 供试液的制备

供试品是纱布可用无菌手续称取10g,放入100ml pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。供试液10倍递减稀释。

供试品是液体取样10ml加至100ml pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。供试液10倍递减稀释。

4.1.2.2 供试液操作方法

每个稀释级各吸取1ml至直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每个稀释级注2个平皿。

4.1.2.3 阴性对照

取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。

4.1.2.6 培养条件

将已经凝固的平板倒置于37℃培养箱中，一般培养48±2h。

4.1.2.7 计数

将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。

4.1.2.7.1 菌落计数基本规则

①选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。如只有1个稀释级平均菌落数在30～300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。

②如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30～300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。

高稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数

比值=————————————————————

低稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数

当比值≤2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。当比值>2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。

③如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按最高平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。

④如各稀释级平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。

⑤如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于1时，应报告菌数为<10个/g或ml。

⑥如有3个稀释级平均菌落数均在30～300之间，则以后2级计算级间比值报告。

⑦菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。

4.1.3 清场

检验完毕，将使用的试剂归位，清理台面，并将用过的工具进行清洗。检测人员应及时填写《初始污染菌数检测记录》，并对检验结果进行判定。

4.1.4 注意事项

4.1.4.1 产品取样应在完成整个灌装或包装过程以后，而又在灭菌前取样；

4.1.4.2 本操作应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的无菌操作台内进行。操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。

4.1.4.3 无菌操作台必需定期进行洁净度检测，试验前提前开紫外灯15min后方可进行实验操作。

4.1.4.4 过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备使用前应进行灭菌，使用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。

5 依据标准及相关文件

2010版《中华人民共和国药典（二部）》附录Ⅺ J微生物限度检查法

GB/T19973.1-2005《医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一部分：产品中微生物数量的估计》

GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》