常用缓冲液配置

10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分的用量
L Tris-HCl
100mmol/L MgCl2
100mmol/L DTT
2mmol/L ATP
5mmol/L盐酸亚精胺（可选）
ml BSA（组分V）（可选）
3.适量分成小份后，-20℃保存。
17）10 mMATP
组份浓度：10 mMATP
配制量：20 ml
配制方法：
1.称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。
2.加20 ml的25 mMTris-HCl（，搅拌溶解。
3.适量分成小份后，-20℃保存。
一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加的浓盐酸至的水中。
须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管，加的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
2.高温高压灭菌后，4℃保存。
3.使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。
13）Solution II(质粒提取用)
组份浓度：200mMNaOH，1％(W/V)SDS
配制量：500ml
配制方法：
1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中
10％SDS 50ml
组份浓度：N HCl
配制量：100 ml
配制方法：
1.在ml的去离子水中加入ml的浓盐酸（N)，均匀混合。
2.室温保存。
11）5 MNaCl
组份浓度：5 MNaCl
配制量：1 L
配制方法：
1.称取292.2 gNaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至，再加水定容到100ml。
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）
2N NaOH 50ml
2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀
3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月
注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌
14）Solution III(质粒提取用)
组份浓度：3 MKOAc,5 MCH3COOH
配制量：500 ml
配制方法：
1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。
配制方法：
1.量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
1MTris－HCl Buffer（，，）
100ml
500mMEDTA
20ml
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3.将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4.室温保存。
3)1.5 MTris-HCl
组份浓度：1.5 MTris-HCl
配制量：1 L
3.高温高压灭菌后，4℃保存。
11）20％(W/V) Glucose
组份浓度：20％(W/V) Glucose
配制量：100 ml
配制方法：
1.称取20 gGlucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100 ml。
3.高温高压灭菌后，4℃保存。
3.用NaOH调节pH值至（约20 g NaOH)。
注意：pH值至时，EDTA才能完全溶解。
4.加去离子水将溶液定容至1 L。
5.适量分成小份后，高温高压灭菌。
6.室温保存。
16）1 MDTT
组份浓度：1 M DTT
配制量：20 ml
配制方法：
1.称取g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。
2.加20 ml的M NaOAc（，溶解后使用mm滤器过滤除菌。
12）Solution I(质粒提取用)
组份浓度：25 mMTris-HCl（,10 mMEDTA,50 mMGlucose
配制量：1 L
配制方法：
1.量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
1MTris-HCl（）
25ml
0.5MEDTA（）
20ml
20％Glucose（1.11M）
45ml
dH2O
910ml
水
5ml 1mol/L贮液
1ml 1mol/L贮液
1ml 1mol/L贮液
200ul 100 mmol/L贮液
50ul 1 mmol/L贮液
10 mg/mL贮液
将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。
100 mmol/L dNTP溶液（dNTP solutions）
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。
配制方法：
1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
10mmol/L dNTP混合液
成分及终浓度
配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/L dATP
10mmol/L dCTP
10mmol/L dGTP
10mmol/L dTTP
水
2ul 100 mmol/L dATP贮液
2ul 100 mmol/L dCTP贮液
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于水中（为减少变性，
KOAc
147g
CH3COOH
2.加入300 ml去离子水后搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至500 ml。
4.高温高压灭菌后，4℃保存。
15）0.5 MEDTA
组份浓度：0.5 MEDTA
配制量：1 L
配制方法：
称取g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。
8）10％(W/V) SDS
组份浓度：10％(W/V)SDS
配制量：100ml
配制方法：
1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解
2.滴加浓盐酸调节pH值至
3.将溶液定容至100ml后，室温保存。
9）2 N NaOH
组份浓度：2 N NaOH
配制量：100 ml
4)3 M醋酸钠
组份浓度：3M醋酸钠
配制量：100ml
配制方法：
1.称量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节pH值至
3.加去离子水将溶液定容至100ml
4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer
组份浓度：137 mMNaCl,2.7 mMKCl,10 mMNa2HPO4,2 mMKH2PO4
常用缓冲液配置
实验室常用缓冲液配置方案
1)1 MTris-HCl , ,
组份浓度：1 MTris-HCl
配制量：1 L
配制方法：
1.称量121.1 gTris置于1 L烧杯中。
2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
PH值
浓HCl
约70ml
约60ml
配制量：1 L
配制方法：
1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
NaCl
8g
KCl
0.2g
Na2HPO4
1.42g
KH2PO4
0.27g
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.滴加浓盐酸将pH值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。
4.高温高压灭菌后，室温保存。