氨氧化菌活性测定

1.3.3菌株硝化活性的测定

使用溶液培养法[9,12]，接种菌株于氨氧化细菌液体富集试管中，30℃恒温培养20d后，通过测定培养液中NO2-的累积量计算分离获得菌株的亚硝化速率，分析菌株的硝化活性。

林先贵,胡君利,楮海燕等.土壤氨氧化细菌对大气CO2浓度增高的响应[J].农村生态环境,2005,21(1):44-46

[9]许光辉,郑洪元.土壤微生物分析方法手册[M].北京:农业出版社,1986:113-116

[12]孙克江,郑金来.土壤中硝化细菌的分离及初步研究[J].环境与健康杂志,2002,19(3):238-239

1.3复合流湿地各基质层氨氧化菌活性测定

对复合流湿地各取样口采集的样品，分别准确称取100 g混匀基质，置于250 mL三角瓶中，加入100 mL NH4+培养液(氨氮浓度为25 mg/L)，用脱脂棉塞住瓶口，在恒温振荡器中(25℃,150-160r/min)振荡24 h，离心后过滤，测定滤液中的NO3--N浓度，用基质硝化作用产生的NO3--N的量表示氨氧化菌的活性[测定结果以单位质量(1 kg)烘干基质单位时间(1 h)内产生的NO3--N的量(mg)表示[6]。

黄德锋，李田.复合垂直流湿地氨氧化菌种群结构及活性的空间分布.环境科学.2008,29(8):2160-2165.

[6]丁晔,韩志英,吴坚阳,等.不同基质垂直流人上湿地对猪场污水季

节性处理效果的研究[J].环境科学学报，2006，26(7)：1093-1100.

1.7土壤氨氧化菌硝化能力

使用无机液体培养基(LM)对土壤氨氧化菌进行分离纯化培养。取10 g土壤(潮土,黄泥土,红壤))加入装有100 ml灭菌培养基的250 ml 三角瓶中。180 r/min,26℃,黑暗培养14d后,将10 ml培养液转接到100ml含5m mol/L NH4+-N的磷酸缓冲液(Ph 5.8,7.0,8.0),同上条件培养14 d后,测定NH4+-N,NO2-,NO3-浓度。由于该方法纯化出来的氨氧化菌一直伴随有亚硝酸氧化菌，产生的亚硝酸盐立即氧化为硝酸盐。所以以土壤中NO3-和NO2-浓度之和占NH4+-N, NO2-和NO3-浓度之和的百分数表示不同土壤分离出的氨氧化细菌硝化能力。

袁飞,冉炜,胡江,等.变性梯度凝胶电泳法研究我国不同土壤氨氧化细菌群落组成及活性[J],生态学报,2005,25(6):1318-1324.