大肠埃希菌的检查
大肠埃希菌的鉴定流程及相应试验结果
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产超广谱b内酰胺酶大肠埃希菌诊断标准
产超广谱b内酰胺酶大肠埃希菌是一种引起肠道感染的细菌，它能够产生一种名为产超广谱b内酰胺酶的酶，使得其对抗常用的β内酰胺类抗生素产生耐药性。
在临床诊断中，准确地检测产超广谱b内酰胺酶大肠埃希菌对于及时进行有效的治疗至关重要。
建立明确的诊断标准对于控制此类细菌感染具有重要意义。
下面将从不同角度讨论产超广谱b内酰胺酶大肠埃希菌的诊断标准。
一、临床症状与体征1.1 腹泻产超广谱b内酰胺酶大肠埃希菌感染的患者主要表现为腹泻症状，轻者为腹痛、腹胀，严重者可伴随腹泻、脓血便甚至休克。
1.2 发热患者可能伴有体温升高，并且持续时间较长。
1.3 其他症状部分患者可能出现恶心、呕吐等胃肠道症状。
二、实验室检查2.1 病原学检测在临床实验室中，通过对患者的粪便样本进行细菌培养，能够得到确诊的结果。
产超广谱b内酰胺酶大肠埃希菌对于氧化/发酵双重试验呈阳性反应，且在MacConkey琼脂培养基上有独特的菌落形态，附有特征性的粘附物。
三、分子生物学检测3.1 PCR检测通过聚合酶链反应（PCR）技术，能够快速、准确地检测出产超广谱b 内酰胺酶大肠埃希菌的存在。
PCR技术可针对该菌株的特异基因序列进行扩增，从而达到检测的目的。
四、耐药性测试4.1 药敏试验通过对产超广谱b内酰胺酶大肠埃希菌进行抗生素的药敏试验，能够明确该菌株对于常用抗生素的敏感性及耐药性。
由于该菌株对常用的β内酰胺类抗生素产生耐药性，因此对其进行耐药性测试尤为重要。
5. 临床诊断标准产超广谱b内酰胺酶大肠埃希菌感染的临床诊断标准应当综合考虑患者的临床表现和实验室检查结果。
具体而言，应当包括患者的临床症状与体征、实验室检查结果、分子生物学检测结果以及耐药性测试结果。
仅有一个方面的检测结果不能确定该菌株的存在，需要综合多种方法进行诊断。
针对产超广谱b内酰胺酶大肠埃希菌感染的诊断标准应当充分考虑到临床表现和实验室检查结果。
通过综合不同方面的检测方法，能够更加准确地判断该菌株的存在并确定对应的治疗方案，达到更好的治疗效果。
20版药典大肠埃希菌检查操作规程
20版药典大肠埃希菌检查操作规程以下是一份20版药典大肠埃希菌检查操作规程的示例：1. 实验室准备a. 确保实验室设备、试剂和培养基的准备充足。
b. 检查培养基的质量和有效期限。
c. 清洗和消毒实验台面和工具。
2. 样品准备a. 收集待检样品，如食品、水源等。
b. 如果样品体积较大，将样品切割成适当大小的块。
c. 样品处理前，使用无菌容器收集样品。
3. 样品处理a. 杀菌样品以杀灭大肠埃希菌以外的其他微生物。
可以使用高温杀菌、化学杀菌等方法。
b. 对于液体样品，使用无菌技术将样品转移到含有适当培养基的试管中。
c. 对于固体样品，将一定重量的样品转移到含有适当培养基的培养皿中。
4. 培养与孵育a. 在适当温度下，将培养皿或试管放入培养箱孵育。
大肠埃希菌通常在37℃下生长。
b. 确保培养基含有抑菌物质（如抗生素），以防止其他非大肠埃希菌的生长。
5. 结果解读a. 在孵育一定时间后，观察培养基上是否有典型的大肠埃希菌菌落。
b. 大肠埃希菌菌落通常呈现金黄色、粘液状，有时也可能呈现其他形态。
c. 使用适当的显微镜技术，观察和鉴定菌落形态，并进行进一步的确认。
6. 结果记录和报告a. 记录培养结果和菌落形态的详细描述。
b. 如需要，进一步进行相关确认试验。
c. 根据操作结果，撰写实验报告，并将结果报告给相关人员或部门。
注意事项：- 确保操作过程中的无菌技术和消毒措施。
- 操作过程中遵循安全操作规范，注意个人防护。
- 严格遵守实验室操作流程，减少污染和误差的可能性。
- 如发现培养出大肠埃希菌，及时采取相应的措施，以避免传播和扩散。
SOPQC大肠埃希菌检查SOP
分发部门质量管理部设备部质量保证室车间质量控制室●大肠埃希菌检查SOP1.目的建立一个规程，规范大肠埃希菌计数操作方法。
2.范围本规程适用于xxxxxxxxxx公司质量控制室对水质、碳酸钙成品及其他的微生物限度检查。
3.职责QC检测人员负责按照本规程进行样品检测和记录；QC负责人及监管人员有权对检测过程及结果进行监督检查，有权制止不符合规程的操作并向QA提出重试请求，得到QA批准后方可进行重试。
必须开启偏差记录来解决不符合规程的操作。
4. 物料和设备4.1试剂和材料pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g、无水磷酸氢二钠5.77g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.00g，加水1000ml，微温溶解、滤清、分装、灭菌。
胰酪大豆胨液体培养基：胰酪胨17.0g 氯化钠5.0g 大豆木瓜蛋白酶水解物3.0g 磷酸氢二钾2.5g 以上成分混合加水1000ml，微温溶解，滤过，调节PH使灭菌后在25℃的pH为7.3±0.2，加入无水葡萄糖2.3g或葡萄糖2.5g，分装，灭菌。
20~25℃培养3～5天后无菌生长即可使用。
胰酪大豆胨琼脂培养基：胨 10.0g 氯化钠5.0g 牛肉浸出粉3.0g 水1000ml 葡萄糖5.Og除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，加入葡萄糖溶解后，摇勻，滤清，调节pH使灭菌后在25°C的pH值为7.2士0.2，分装，灭菌。
麦康凯液体培养基明胶胰酶水解物20.0g 溴甲酚紫10mg 乳糖10.0g 水1000ml牛胆盐 5.0g 除乳糖、溴甲酚紫外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH 使灭菌后在25℃的pH值为7.3±0.2，加入乳糖、溴甲酚紫，分装，灭菌。
麦康凯琼脂培养基明胶胰酶水解物17.0g 中性红30.0mg 胨3.0g 结晶紫1mg 乳糖10.0g 琼脂13.5g 脱氧胆酸钠1.5g 水1000ml氯化钠 5.0g除乳糖、中性红、结晶紫、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH 使灭菌后在25℃的pH值为7.1±0.2，加入乳糖、中性红、结晶紫、琼脂，加热煮沸1分钟，并不断振摇，分装，灭菌。
大肠埃希菌检查(新)
实训一大肠埃希菌的检查一、实训目标1．熟悉药品中大肠埃希菌的检验原理。
2．掌握由口服药品中分离鉴定大肠埃希菌的程序及步骤。
3．学会分析检验结果，识别大肠埃希菌的特征。
4．掌握检验数据的处理，能够规范书写检验原始记录及检验报告书。
二、实训原理大肠埃希菌是肠道中存在的正常菌群，故常来源于人和动物的粪便，所以常作为粪便污染的指标。
一旦被检药物中查出大肠埃希菌，表明该药品已被粪便污染，可能存在肠道致病菌和寄生虫卵，患者服用该药物后有引起感染的危险。
因此，大肠埃希菌被列为重要的卫生指标菌。
国家药品卫生标准规定口服药品不得检出大肠埃希菌。
中国药典采用了MUG－Indole快速测定药品中大肠埃希菌。
在MUG试验中，将MUG（4-甲基伞形酮葡糖苷酸）作为目标菌的基本营养物加入培养基中，被大肠埃希菌的β-葡萄糖醛酸酶直接分解产物又作为一种指示系统，在366 nm紫外光下呈现兰白色荧光，即MUG阳性；若无荧光，即MUG阴性。
靛基质（Indole）试验中，大肠埃希菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。
吲哚的存在可用显色反应表现出来。
吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。
因此根据大肠埃希菌的这一性质，对MUG呈阳性者，再加对-甲氨基苯甲醛试剂数滴，轻摇试管，培养液上层呈现玫瑰红色者(阳性)，报告检出大肠埃希菌。
如果两者都为阴性，报告未检出大肠埃希菌。
如果一阴一阳，需要进一步的培养和生化试验检查。
本方法对大肠埃希菌的检出率达98％。
培养温度：控制菌培养温度为30～35℃。
三、实训步骤（一）实训用设备、仪器与试药的准备100ml量筒、10ml吸量管、500ml烧杯、250ml锥形瓶、150ml锥形瓶、玻棒、大试管、6cm培养皿、吸耳球、小试管、1ml吸量管乳糖胆盐培养基、MUG培养基、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、蛋白胨、1.0mol/l HCl溶液、1.0mol/lNaOH溶液、EMB、对二甲氨基苯甲醛、戊醇、盐酸稀释液与培养基的配制1）PH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液（200ml/2组）磷酸二氢钾 0.7g 磷酸氢二钠 1.5g 氯化钠 0.9g蛋白胨 0.2g 蒸馏水 200ml配制：取上述成分混合，溶解，分装锥形瓶2个（用150ml锥形瓶），约90ml/个，包扎，标记，121。
大肠埃希菌的检验原理
大肠埃希菌的检验原理
大肠埃希菌的检验原理主要是基于大肠埃希菌能够产生酶、产生特定代谢产物以及具有一定生理特征等方面进行检测。
1. 酶的检测：大肠埃希菌能够产生β-半乳糖苷酶和大肠埃希菌酶等酶。
常用方法是利用含有染色底物的培养基，如培养基中加入苔藓素和半乳糖时，大肠埃希菌能够分解底物产生酶，使底物变色。
这样可以通过颜色变化来判断培养基中是否存在大肠埃希菌。
2. 代谢产物的检测：大肠埃希菌在产酸过程中会产生大量的氢离子，降低培养基的pH值，可以使用酚红指示剂来检测pH值的变化。
另外，大肠埃希菌还会产生气体，如二氧化碳和氢气，在含有较少营养物质的培养基上可以形成气泡。
这些变化可以作为大肠埃希菌存在的判断依据。
3. 生理特征的检测：大肠埃希菌有一些特有的生理特征，如能够产生胆红素，对产酸、反应pH等均有一定特殊性。
对大肠埃希菌进行生理生化反应、鉴定和分析可以通过不同试剂和培养基来进行。
综合上述三个方面的检测方法，能够较准确地鉴定出是否存在大肠埃希菌。
当然，最常用的方法是利用尿液或食物中的大肠埃希菌进行培养，并在培养基上观察酶活性、产酸、产气等特征变化。
大肠埃希菌
Shandong Liaocheng Ehua Medicine CO., LTD大肠埃希菌(Escherichia coli)即大肠杆菌，为肠杆菌科埃希菌属的模式种。
用4-甲基伞形酮葡糖苷酸（MUG）和靛基质（Indole）试验检查大肠埃希菌，检验步骤为：增菌培养后，转种MUG-蛋白胨培养基培养，多数情况下不需要从混合菌中分离单个菌，如MUG、Indole 试验为阳性或阴性即可报告结果。
原理：利用目标菌限定酶作用的底物的水解产物，产生颜色或荧光反应作为指示系统来鉴定目标菌。
实验证明，96%的大肠埃希菌含β-葡糖苷酸酶（GUD）。
MUG被GUD水解，产生荧光，由于荧光反应的敏感度较颜色的反应强，易于观察。
通常将MUG与靛基质试验结合，来检测大肠杆菌。
如MUG与Indole试验的反应不一致时，则需将供试液的增菌培养物用EMB琼脂平板分离培养、革兰染色、镜检及生化试验鉴别。
2．仪器、设备及用具2.1无菌室微生物检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。
2.2 净化工作台2.3 培养箱（36℃±1℃）。
2.4 高压蒸汽灭菌器。
2.5 显微镜（1500×）。
2.6 恒温水浴（45℃±1℃）。
2.8 离心机（500~4000r/min）。
2.9 电冰箱。
2.10 匀浆仪。
2.11 366nm紫外灯。
2.12 玻璃器皿、器具[参照细菌、霉菌和酵母菌计数2.2.2]。
3．试液、指示液。
3.1 0.9%无菌氯化钠溶液。
3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。
3.3 pH7.2无菌磷酸盐缓冲液。
3.4 靛基质（Kovacs）试液。
3.5甲基红试液。
3.6 V-P试液。
3.7 革兰染色液。
3.8 中性红指示液。
3.9 亚甲蓝指示液。
3.10 溴麝香草酚蓝指示液。
3.11 酸性品红指示液。
3.12 曙红钠指示液。
4．培养基4.1 营养肉汤4.2 营养琼脂4.3 胆盐乳糖(BL)培养基。
大肠埃希菌的微生物检验方法及临床意义
大肠埃希菌的微生物检验方法及临床意义摘要：目的：阐述大肠埃希菌的微生物检验方法，探讨大肠埃希菌检验的临床意义。
方法：选取本院收治的患者52例作为样本，准备全自动微生物分析仪及Mac A培养基，组织52例患者采集痰液、尿液及切口组织等标本，采用全自动微生物分析仪检验大肠埃希菌。
结果：52例样本中，共10例检出大肠埃希菌，与临床观察结果一致。
阴性对照组大肠埃希菌检出率为0。
大肠埃希菌大小平均为1.52μm、周身鞭毛、可运动、无芽。
Mac A平板上呈桃红色，为圆形，表面光滑。
结论：临床应将全自动微生物分析仪应用到大肠埃希菌的检验中，提高检出率，为感染的防治，以及患者疾病治疗有效率的提高奠定基础。
关键词：大肠埃希菌；微生物检验；感染前言大肠埃希菌为革兰阴性菌的一种，在人及动物肠道内广泛存在。
当人体免疫力降低时，大肠埃希菌的生存环境同样会发生变化。
受其影响，感染等风险的发生几率将明显提升。
因此，为提高患者疾病治疗的安全性，及时通过大肠埃希菌检验，评估感染风险较为重要。
本文于本院2016年10月--2017年10月收治的患者中，随机选取52例作为样本，阐述了大肠埃希菌的检验方法，探讨了大肠埃希菌检验的临床意义：1 资料与方法1.1 一般资料选取本院收治的患者52例作为样本，患者资料如下：性别：男26例、女26例。
年龄（13--57）岁，平均（41.59±1.99）岁。
52例患者中，确诊感染者共10例，其余均未见感染发生。
患者均自愿参与研究。
大肠埃希菌标本来源：痰标本16例、尿标本14例、切口组织标本10例、其他12例。
1.2 仪器与试剂实验需准备的仪器与试剂如下：（1）准备电热恒温培养箱（CP-ST200）。
（2）准备全自动微生物分析仪（VITEK2）。
（3）准备Mac A培养基。
1.3 方法（1）组织52例患者采集标本，包括痰标本、尿标本及切口组织标本等。
其中，尿标本需以尿中段为主，血液标本为健侧肘静脉血。
控制菌(大肠埃希菌)检查操作规程
把握菌〔大肠埃希菌〕检查操作规程文件类型操作规程〔SOP〕文件编号编制人编制日期年月日编制部门审核人审核日期年月日审核部门批准人批准日期年月日颁发部门编订依据《中国药典》2023 年版、《GMP》2023 年版替代文件1.目的建立一个把握菌大肠埃希菌把握菌大肠埃希菌检查标准工作程序，标准QC 把握菌大肠埃希菌检查人员的把握菌大肠埃希菌检查的操作。
2.范围适用于本公司的口服制剂完成内包后外包前的中间体和局部给药制剂产品的内包装材料的把握菌大肠埃希菌的检测。
3.责任者QC 把握菌大肠埃希菌检查人员；质量治理部4.内容4.1检测预备4.1.1QC 人员接到把握菌大肠埃希菌检查的《工作进程打算单》后，核对《取样指令》，确定把握菌大肠埃希菌检查所需容器具、试液、培育基等工程和数量，执行微生物检查预备工作操作程序和培育基配制操作规程，进展把握菌大肠埃希菌检查前的预备工作。
4.1.2为了保证被检品在取样后规定的时间内完成检验，取样前应预备好检验需要的各种器皿〔清洗→枯燥→包裹〕、培育基和稀释剂等〔配制→分装→包裹〕，并灭菌备用。
4.2供试液的制备4.2.1供试液供试液是指依据供试品的理化特性与生物学特性，实行适宜的方法将供试品制成供试验用的均匀液体。
4.2.2供试液的制备依据供试品的理化特性与生物需特性，实行适宜的方法制备供试液。
假设使用了乳化剂、分散剂、中和剂和灭活剂，其用量应证明是有效的，并对微生物的生长和存活无影响性。
4.2.2.1可溶性液体供试品文件名称把握菌大肠埃希菌检查操作规程文件类型操作规程〔SOP〕文件编号编订依据《中国药典》2023 年版、《GMP》2023 年版替代文件取供试品10ml，加pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。
可溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。
4.2.2.2非水溶性液体供试品油剂可先参加适量的无菌聚山梨酯80 使供试品分散均匀，然后再加0.9%无菌氯化钠- 蛋白胨缓冲液至100m，混匀，作为供试液。
大肠埃希菌的微生物检验分析
大肠埃希菌的微生物检验分析摘要】目的：探讨大肠埃希菌的微生物检验。
方法：对大肠埃希菌采集培养及操作步骤进行分析。
结果：大肠杆菌常引起各种肠内外感染，是腹泻和泌尿道感染的主要病原菌。
结论：革兰阴性杆菌很多是条件致病菌，且有许多细菌对很多抗生素天然耐药。
有些细菌是医院感染的常见细菌。
【关键词】大肠埃希菌；细菌检验；操作方法【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）16-0235-02大肠埃希菌俗称大肠杆菌，属肠杆菌科埃希菌属的一个种。
本菌是人类和动物肠道正常菌群的主要成员。
每克粪便中约含109个大肠杆菌。
因其广泛分布于自然界(水、土壤、食品、牛乳等)，故卫生学上将其作为卫生监督的指示菌。
从对肠道的作用来看，可将其分为致病性与非致病性两大类[1]。
其血清分群用O：K：H表示。
O抗原(菌体抗原)迄今已有171种，是血清分型群的基础；K抗原(荚膜抗原)，有99种；H抗原(鞭毛抗原)有60种。
一些血清型对肠道生理起着重要作用，另一些血清型能引起不同特征性腹泻和肠道外感染。
主要致病的有肠致病性大肠杆菌、肠道聚集一粘附性大肠杆菌、产肠毒素性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌，兼性厌氧。
现对大肠埃希菌操作分析如下。
1.大肠埃希菌主要特征1.1 形态特征大肠埃希菌大小为1.1～1.4μm×2.0～6.0μm(活菌)或0.4～0.7μm×1.0～3.0μm(干菌和染色菌)，多数有周身鞭毛，能运动，周身还有菌毛，无芽孢，某些菌株有包膜，单个存在，少数成对。
1.2 培养特征最适生长温度为37℃，pH为7.4～7.6，普通培养液上生长良好，形成直径2～3mm、圆形、凸起、湿润、光滑、灰白色、半透明、边缘整齐的菌落。
在血琼脂平板上，某些菌株可产生β-溶血环。
在伊红-亚甲蓝琼脂平板上，菌落呈蓝紫色，在中国蓝琼脂平板上为蓝色。
在SS琼脂平板上多数被抑制，生长菌落为红色，在营养肉汤内均匀浑浊生长。
《微生物与实验技术》食品中大肠埃希菌的检验实验
《微生物与实验技术》食品中大肠埃希菌的检验实验一、实验目的1.熟悉大肠埃希菌的检验原理2.熟悉大肠埃希菌检验的基本操作二、实验原理1.大肠杆菌，又叫大肠埃希氏菌是条件致病菌，在一定条件下可以引起人和多种动物发生胃肠道感染或尿道等多种局部组织器官感染。
因此，检查食品中是否存在治病大肠埃希氏菌具有实际意义。
2. 在TSI琼脂中,典型菌株为斜面与底层均呈黄色，产气或不产气，不产生硫化氢(H2S)。
置MUG-LST肉汤管于长波紫外灯下观察,MUG阳性的大肠埃希氏菌株应有荧光产生,MUG阴性的应无荧光产生，大肠埃希氏菌O157:H7/NM为MUG试验阴性,无荧光。
三、试剂及器材1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤：2 EC肉汤（E.coli broth）：3 蛋白胨水：4磷酸盐缓冲液：5伊红美蓝（EMB）琼脂：6 营养琼脂斜面：7结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：8革兰氏染色液：9无菌1mol/LNaOH：10无菌1mol/LHCl：四、操作方法样品的稀释1. 固体和半固体样品：称取25g样品，放入盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min，制成1:10的样品匀液或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min制成1:10的样品匀液。
2.液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1.10的样品匀液。
3. 样品匀液的pH值应在6.5~7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl 调节。
4 .用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL 磷酸盐缓冲液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）振摇试管或换用1支1mL无菌吸管或吸头反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。
大肠埃希菌检查用培养基适用性检查验证方案
1.概述:培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。
适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制是提供优质培养基的保证。
供试品微生物限度检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
2.验证目的：本次验证的目的是确认大肠埃希菌检查用的麦康凯琼脂培养基、麦康凯液体培养基的质量，以及其制备程序、保存条件等是否满足微生物限度检查用要求。
3.验证依据：《中国药典》2015年版四部“1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法”、“9203药品微生物实验室质量管理指导原则”。
4.验证项目：麦康凯琼脂培养基、麦康凯液体培养基的适用性检查。
5.适用范围：成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
6.验证周期：除另有规定外，在实验室中，若采用已验证的配制和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基的适用性检查试验可以只进行一次。
如果培养基的制备过程未经验证，那么每一灭菌批培养基均要进行适用性检查试验。
7.验证小组人员及职责:7.2验证人员职责及要求7.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
7.2.2认真观察并做好验证原始记录。
7.2.3对实施验证的结果负责。
7.3验证中各部门的职责7.3.1验证领导组职责7.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
7.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。
7.3.1.3负责验证方案的批准工作。
7.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
7.3.1.5负责验证报告的批准工作。
7.3.2验证项目小组职责7.3.2.1负责验证方案的起草工作。
7.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
7.3.2.3负责验证方案的实施。
7.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
7.3.2.5参与验证结果的评价工作。
7.3.3质量部职责7.3.3.1负责公司验证日常管理工作。
7.3.3.2负责验证方案的审核工作。
7.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。
大肠埃希菌的微生物检验分析 王春玲
大肠埃希菌的微生物检验分析王春玲摘要】目的：探讨大肠埃希菌的微生物检验方法及临床意义。
方法：对100例各类送检标本中大肠埃希菌的肠道外感染大肠埃希菌鉴定和肠道内感染大肠埃希菌鉴定方法进行分析。
结果：大肠埃希菌中检出率48%。
大肠埃希菌常引起各种肠内外感染，是腹泻和泌尿道感染的主要病原菌。
结论：肠道外感染的鉴定是临床分离的革兰阴性杆菌中最常见的之一。
可引起各种感染，常见的是泌尿系感染。
还可引起胆囊炎、菌血症、肺炎及新生儿脑炎等，亦可引起腹腔内脓肿、肠穿孔继发腹膜炎，术后感染或大面积创面感染等，又易混合厌氧菌感染等症。
肠道外感染大肠埃希菌的鉴定。
肠道内感染的大肠埃希菌的鉴定这些菌株可引起轻微腹泻或霍乱样腹泻。
严重时，可引起致死性并发症(HUS)，造成严重后果。
【关键词】大肠埃希菌；微生物检验【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）14-0376-02大肠埃希菌是重要的条件致病菌，俗称大肠杆菌，常引起各种肠内外感染，是腹泻和泌尿道感染的主要病原菌。
现对大肠埃希菌的微生物检验及临床意义进行分析如下。
1.资料与方法1.1 一般资料对2014年1月～12月收治的各类送检标本100例，为住院或门诊患者，年龄8～83岁，其中尿液45例，痰液16例，脓液13例，血液11例，分泌物5例，胆汗4例，引流液2例，其他2例。
1.2 方法1.2.1肠道外感染大肠埃希菌鉴定1.2.1.1标本采集根据不同疾病采集不同部位的标本。
采集血液标本以无菌操作技术抽取静脉血5mL；痰标本取自口腔清洁后从深部咳出的痰液；脓、分泌物等标本用无菌棉拭子直接采取。
1.2.1.2检验方法(1)标本直接检查：除血液标本外，其他标本均可作涂片染色镜检。
中段尿和其他各种体液标本以3000r／min离心10 min后取沉淀物涂片，脓、痰、分泌物等可直接涂片，革兰染色后镜检。
镜下可见革兰阴性短杆菌。
(2)分离培养与鉴定：①分离培养：血液标本接种肉汤增菌培养，待生长后移种于血平板；其他标本直接或离心取沉淀接种于血平板及肠道弱选择性平板，35℃孵育18～24h。
大肠埃希氏菌
甲基红试验
原理:某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖 产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解，产生甲酸、 乙酸、乳酸等，使培养基的pH降至4.5以下， 当加入甲基红试剂则呈红色，为甲基红试验阳 性。若细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸 进一步转化为其他物质（如醇、酮、醚、气体 和水等），则培养基的酸度仍在pH6.2以上， 故加入甲基红指示剂呈黄色，是为阴性。
柠檬酸实验
柠檬酸盐培养基系一综合性培养基，其中柠檬酸钠为 碳的唯一来源。而磷酸二氢铵是氮的唯一来源。有的 细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在 柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸 盐，使培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香草酚 蓝指示剂由绿色变为深蓝色。不能利用柠檬酸盐为碳 源的细菌，在该培养基上不生长，培养基不变色。 ①将试验菌培养在柠檬酸盐培养基斜面上37℃培养 24-28小时. ②观察有无细菌生长与培养基颜色变化.如果含有溴 麝香草酚蓝的斜面蓝色者为阳性反应,呈绿色的为阴 性反应;含苯酚红的斜面如果呈红色为阳性反应,呈黄 色为阴性反应.
标准
《中国药典》（2010年版）二部 口服给药制剂 细菌总数每1ml不得过100cfu 霉菌和酵母菌总数每1ml不得过100cfu 大肠埃希菌总数不得检出
备料单（增菌培养）
序号 1 2 3 品名 锥形瓶 刻度吸管 刻度吸管 规格 250ml 10ml 1ml 数量 4 2 1 备注
10ml
样 BLห้องสมุดไป่ตู้养基
备料单（快速生化试验）
序号 1 2 3 品名 刻度吸管 试管 MUG培养 基 规格 1ml 中 5ml 数量 3 4 4 分装到试 管中 备注
4
靛基质
药品控制菌检查法中大肠埃希菌贮藏方法的研究
药品控制菌检查法中大肠埃希菌贮藏方法的研究
大肠埃希菌是一类常见的致病菌，在药品的生产过程中起着重要作用。
为了确保药品的安全性和有效性，需要进行大肠埃希菌的质量控制检查。
而在大肠埃希菌的检查中，贮藏方法对其生长和存活状态有着重要影响。
本文旨在探讨药品控制菌检查法中大肠埃希菌的贮藏方法对其检测结果的影响。
为了研究大肠埃希菌贮藏方法的影响，我们选取了不同种类的贮藏方法进行了实验。
实验分为三组，分别是冷冻贮藏、室温贮藏和干燥贮藏。
每组实验设置了不同的时间段进行观察，并对大肠埃希菌的存活情况进行了统计分析。
结果显示，不同贮藏方法对大肠埃希菌的存活和生长状态有明显影响。
在冷冻贮藏条件下，大肠埃希菌的存活率较高，并且菌落生长也较为充足。
这可能是由于低温冻结能够有效地抑制细菌的代谢和生长活性，从而保持其相对稳定的状态。
而在室温贮藏条件下，大肠埃希菌的存活率明显下降，并且菌落生长不如冷冻贮藏情况下充足。
这可能是由于室温环境中，细菌容易受到环境中的氧气、水分和营养物的影响而导致细菌的死亡或生长受限。
而在干燥贮藏条件下，大肠埃希菌的存活率更低，并且菌落生长更为有限。
这可能是由于干燥环境中，细菌容易受到干扰和破坏，从而导致其死亡和生长受限。
通过对不同贮藏方法下大肠埃希菌存活和生长情况的观察和统计分析，可以得出以下结论：冷冻贮藏是维持大肠埃希菌稳定存活和生长的最佳方法；室温贮藏虽然能够保持菌体的存活，但是会明显影响细菌的生长活性；干燥贮藏条件下，细菌的存活率和生长状况都较差。
口服液药品中控制菌大肠埃希菌的检查
口服液药品中控制菌大肠埃希菌的检查生物工程学院11生物5.2 作者：王千牵绪论：大肠菌群系指一群在37℃、24h能发酵乳糖产酸、产气，需氧和兼性厌氧菌的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
大肠菌群主要来自人或温血动物粪便，药品中检测出大肠菌群则说明药品受到了人或动物粪便的污染，大肠菌群数量越多则表明粪便污染越严重，由此推测该药品在肠道致病菌污染的可能性，潜伏者药品中毒和流行病的威胁。
故以此作为大肠菌群污染指标来评测药品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。
微生物营养需求是微生物维持其生命和增长所需求的营养物质。
营养物对微生物作用有：提供合成细胞质需要的物质（CO2、、HCO3-、有机化合物及微量元素和生长素）；作为细胞增长和生物合成反应的能源（有机化合物、无机化合物、能源）；充当产能反应所释放的电子受体（O2、有机化合物、无机化合物中的化合氧）。
按所需碳源形式的不同，微生物可分为为：自养型(即用CO2、或HCO3-作为唯一的碳源)和异养型（即需要摄取存在于相对复杂的还原态有机化合物中的碳）。
按所需能源不同，微生物可分为：光营养型和化能营养型（即利用氧化-还原反应提供能源）。
微生物代谢是指微生物吸收营养物质维持生命和增殖并降解基质的一系列化学反应过程，包括有机物的降解和微生物的增殖。
在分解代谢中，有机物在微生物作用下，发生氧化、放热和酶降解过程，使结构复杂的大分子降解；合成代谢中，微生物利用营养物及分解代谢中释放的能量，发生还原吸热及酶的合成过程，使微生物生长增殖。
内源呼吸是细胞质进行自身氧化并放出能量的过程，当有机物充足时，细胞质得到大量合成，而内源呼吸则并不显著；当缺乏营养时，则只能通过内源呼吸吸收氧化自身的细胞物质而获得微生物生命活动所需的能量。
药品中检验微生物的原则：对试剂的要求：有效性和无毒性。
检验方法的选择：尽量选择操作简便，快捷及避免损伤供试品中污染的微生物的方法。
对照培养基的说明：由中检测所研制计分发。
大肠埃希菌检查法
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载大肠埃希菌检查法地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容大肠埃希菌检查法Escherichia Coli Test Method1.目的建立大肠埃希菌检查法的标准操作程序。
2.范围适用于大肠埃希菌检查的操作。
3.责任者QC化验员。
4.程序：4.1.简述4.1.1. 大肠埃希菌(Escherichia coli)即大肠埃希菌，为肠埃希菌科埃希菌属的模式种。
埃希菌属除大肠埃希菌外，新近发现有非脱羧埃希氏菌等5个种。
大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌，随粪便排出体外。
在药品中检出大肠埃希菌，表明该样品受到人和温血动物的粪便污染，即可能污染肠道病原体。
大肠埃希菌除普通大肠埃希菌外尚有致病性大肠埃希菌，可引起婴幼儿、成人爆发性腹泻。
为保证人体健康，口服药品必须检查大肠埃希菌。
4.1.2. 用4-甲基伞形酮葡糖苷酸(4-Methylumbelliferyl-β-D-glucuronide，MUG)和靛基质(Indole)试验检查大肠埃希菌是一项新技术，其检验步骤为：增菌培养后，转种MUG-蛋白胨培养基培养，多数情况下不需要从混合菌中分离单个菌，如MUG、Indole试验为阳性或阴性即可报告结果。
4.1.3. 原理：利用目标菌限定酶作用的底物的水解产物，产生颜色或荧光反应作为指示系统来鉴定目标菌。
实验证明，96％的大肠埃希菌含β-葡糖苷酸酶(β-glucuronidase，GUD)，约10％的沙门菌属一些菌种也含有此酶。
MUG被GUD水解，产生荧光，由于荧光反应的敏感度较颜色反应强千万倍，易于观察，没有主观性，因而用MUG鉴定大肠埃希菌已被广泛应用于临床、食品、饮水、污水等的检测。
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药品中大肠埃希菌的检验
(1)按细菌总数测定方法制备供试液。
(2)取供试品l：10稀释液10mL，接种在制好的100mL胆盐乳糖培养基中,在37℃恒温箱中培养18～24 h，进行增菌培养。
(3)用接种环挑取上述培养物接种在麦康凯琼脂平板(MacC)或伊红美蓝琼脂平板(EMB)上，置37℃培养18～24 h，进行分离培养。
观察有无鲜桃红色或微红色、中心深桃红色、圆形、扁平、边缘整齐、表面光滑、湿润的菌落形成。
(4)挑取2～3个疑似大肠埃希菌菌落，分别接种在营养琼脂斜面培养基上，在37℃下培养18～24 h，进行纯培养。
(5)将疑似大肠杆菌的培养物涂片进行革兰染色，经镜检证明为G－无芽孢短杆菌的，应继续做生化试验。
(6)生化试验
①乳糖发酵试验。
将上述纯培养物接种在乳糖发酵管中，在37℃下培养24～
48 h。
凡大肠埃希菌，可发酵乳糖产酸产气。
②靛基质试验。
将上述纯培养物接种在蛋白胨水培养基中，在37℃下培养(48±2)h．加入0 .3～0 .5 mL靛基质试液(对二甲基氨基苯甲醛)，观察液面。
液面呈玫瑰红色为阳性反应，呈试剂本色为阴性反应。
③甲基红试验将纯培养物接种在磷酸盐葡萄糖胨水培养基内，在37℃下培养(48±2)h，在1 rnL培养液中加入l滴甲基红试剂，立即观察结果。
呈鲜红色或橘红色为阳性反应。
呈黄色为阴性反应。
④乙酰甲基甲醇生成试验(VP试验)。
将纯培养物接种在磷酸盐葡萄糖胨水培养基内，在37℃下培养(48±2)h，在2mL培养液中加入α一萘酚乙醇液1 mL_，混匀，再加入质量分数为40％的氢氧化钾溶液0.4mL后观察结果。
培养液应在加入试剂后的4 h内呈红色为阳性反应，无红色为阴性反应。
⑤枸橼酸盐利用试验。
将纯培养物接种在枸橼酸盐斜面培养基上,在37℃下培养(48±2)h,观察结果。
斜面有菌生长，培养基由绿色变为蓝色为阳性反应，斜面无菌生长培养基仍呈绿色为阴性反应。
(7)判断结果。
经染色镜检证实为G–无芽孢短杆菌，乳糖发酵试验产酸产气，IMVC试验结果为++––或–+––的，可确认供试品中含有大肠埃希菌。