GB4789.38-2012卫生部标准大肠埃希菌检验方法
大肠埃希菌的检测
食品加工环节的监控
在食品加工过程中，大肠埃希菌检测可用 于监控生产环境的卫生状况，以及加工过 程中食品是否受到污染。通过定期检测， 可以及时发现并纠正卫生问题，确保食品 的安全性。
临床诊断领域
疑似感染的诊断
在临床诊断领域，大肠埃希菌检测主要用于 疑似感染病例的诊断。当患者表现出类似感 染的症状时，通过检测粪便、尿液等样本中 的大肠埃希菌，可以协助医生确诊是否为大 肠埃希菌感染。
企业标准
01
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企业可以根据自身需求 和产品特性，制定适用 于自身的企业标准，对 大肠埃希菌的检测方法 和限量进行规定。这些 标准通常会高于国家和 国际标准，以确保产品 质量和消费者安全。
详细描述
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04
05
国际标准化组织（ISO） 国内标准通常由国家卫 发布的标准是全球范围 生健康委员会或相关部 内广泛接受的大肠埃希 门制定，并强制执行， 菌检测标准，为各国制 是保障食品安全的重要 定相关标准提供了参考 措施。 依据。
抗生素敏感性测试
对于大肠埃希菌感染病例，医生通常需要根 据病菌对不同抗生素的敏感性来选择合适的 药物治疗。通过检测大肠埃希菌对不同抗生 素的敏感性，可以指导临床用药，提高治疗 效果。
环保监测领域
水质监测
在环保监测领域，大肠埃希菌检测可用于水 质监测。水中存在大肠埃希菌可能表明水体 受到污染，可能对人类健康造成威胁。通过 定期检测水源中的大肠埃希菌，可以及时发 现水质问题，并采取相应措施保护公众健康 。
免疫学检测法
总结词
利用抗原-抗体反应的快速检测方法
详细描述
通过采集患者粪便、食物、水源等样本，利用特异性抗体与大肠埃希菌抗原结 合的原理，采用免疫学技术进行检测。该方法具有快速、简便的优点，但可能 会受到交叉反应的干扰，导致假阳性或假阴性结果。
大肠埃希菌检查法
大肠埃希菌检查法Escherichia Coli Test Method1.目的建立大肠埃希菌检查法的标准操作程序。
2.范围适用于大肠埃希菌检查的操作。
3.责任者QC化验员。
4.程序：4.1.简述4.1.1. 大肠埃希菌(Escherichia coli)即大肠埃希菌，为肠埃希菌科埃希菌属的模式种。
埃希菌属除大肠埃希菌外，新近发现有非脱羧埃希氏菌等5个种。
大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌，随粪便排出体外。
在药品中检出大肠埃希菌，表明该样品受到人和温血动物的粪便污染，即可能污染肠道病原体。
大肠埃希菌除普通大肠埃希菌外尚有致病性大肠埃希菌，可引起婴幼儿、成人爆发性腹泻。
为保证人体健康，口服药品必须检查大肠埃希菌。
4.1.2. 用4-甲基伞形酮葡糖苷酸(4-Methylumbelliferyl-β-D-glucuronide，MUG)和靛基质(Indole)试验检查大肠埃希菌是一项新技术，其检验步骤为：增菌培养后，转种MUG-蛋白胨培养基培养，多数情况下不需要从混合菌中分离单个菌，如MUG、Indole试验为阳性或阴性即可报告结果。
4.1.3. 原理：利用目标菌限定酶作用的底物的水解产物，产生颜色或荧光反应作为指示系统来鉴定目标菌。
实验证明，96％的大肠埃希菌含β-葡糖苷酸酶(β-glucuronidase，GUD)，约10％的沙门菌属一些菌种也含有此酶。
MUG被GUD水解，产生荧光，由于荧光反应的敏感度较颜色反应强千万倍，易于观察，没有主观性，因而用MUG 鉴定大肠埃希菌已被广泛应用于临床、食品、饮水、污水等的检测。
单一的MUG 鉴别大肠埃希菌其漏检率达6％，鉴于98％的大肠埃希菌其靛基质试验为阳性，故将MUG与靛基质试验结合，比单用MUG可提高大肠埃希菌的检出率。
如MUG与Indole试验的反应不一致时，则需将供试液的增菌培养物用EMB琼脂平板分离培养、革兰染色、镜检及生化试验鉴别。
该法理论上可使大肠埃希菌的检出率达98％。
微生物检验实验室埃希菌标准操作规程
微生物检验实验室埃希菌标准操作规程1. 概述埃希菌属包括大肠埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌和伤口埃希菌5个菌种。
大肠埃希菌是埃希菌属的代表种。
2. 标本类型痰液、脑脊液、穿刺液、脓液、血液等标本。
3. 鉴定3.1 形态与染色：革兰阴性杆菌，粗短，大小为（1.1~1.5um）×（2~6um），多数有周鞭毛3.2 培养特性：在血琼脂平板上菌落呈圆形，直径为2~3um，稍凸，边缘整齐，灰白色，不透明，少数菌株产生β溶血环；在麦康凯琼脂平板上形成不透明、红色菌落，部分不发酵乳糖的菌落呈无色菌落，不数呈粘稠状菌菌；在伊红亚甲蓝平板上菌落呈紫黑色，并有金属光泽；在中国蓝琼脂平板上菌落呈蓝色；在XLD琼脂平板上菌落呈不透明黄色；在HE琼脂平板上菌落呈黄色；在CHROMagar大肠杆菌显色培养基上呈蓝色菌落，而在CHROMagar尿道菌定位培养基上菌落呈红色。
3.3 生化反应：氧化酶试验阴性，三糖铁琼脂（TSI）为A/A；发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇等多种糖类，产酸产气；IMViC++--（占94.6%），动力试验和硝酸盐还原试验阳性，尿素酶试验、丙二酸盐试验、苯丙氨酸脱羧酶试验均为阴性，大部分菌株不产硫化氢。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征TSI为A/A，发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇等多种糖类，IMViC++--。
3.4.2 与痢疾志贺菌的鉴别：无动力而乳糖迟发酵的菌株，易与痢疾志贺菌相混淆，可通过赖氨酸脱羧酶、醋酸盐试验等和血清分型法区分。
见表5-39。
表5-39 大肠埃希菌和志贺菌的鉴别要点（阳性%）生化反应大肠埃希菌不活泼大肠埃希菌痢疾志贺菌赖氨酸90 40 0醋酸盐95 30 0粘液酸盐98 93 0甘露醇95 25 0乳糖95 5 03.4.3 与肺炎克雷伯菌的鉴别：少数粘液样菌落的大肠埃希菌在麦康凯琼脂平板上易与肺炎克雷伯菌菌落相混淆，大肠埃希菌粘液样菌落呈深粉红色，而肺炎克雷伯菌则呈浅粉红色，无动力，IMViC--++。
大肠埃希氏菌
3 设备和材料
3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻 度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量 移液器及吸头。 3.8 无菌锥形瓶：容量500 mL。 3.9 无菌培养皿：直径90mm。 3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 3.11 菌落计数器。 3.12 紫外灯：波长360nm～366nm， 功率≤6 W。
VRBA－MUG平板计数法
MUG对大肠埃希氏菌的生长繁殖没有抑制 作用也没有促进作用，对菌落形态也没有 影响。经实验发现，在MUG浓度从0 g/mL到200 g/mL的范围内，大肠 埃希氏菌生长繁殖率没有区别。 MUG方法有大约4%的假阴性，特别是倍 受关心的O157:H7菌株为阴性，令人感 到遗憾，但经典的常规方法也同样存在这 样的问题。
6.2 操作步骤
6.2.2.2 将10 mL～15 mL冷至 45℃±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂 （VRBA）倾注于每个平皿中。小心旋转 平皿，将培养基与样品匀液充分混匀。 6.2.2.2 …待琼脂凝固后，再加3mL～4 mL VRBA-MUG覆盖平板表层。凝固后 翻转平板，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
研究还证实，大肠埃希氏菌荧光反应比产 气反应出现得更早，并且不受食品的影响， 仅发现对牡蛎直接进行的检验不适合用 MUG方法，法
本标准采用的VRBA-MUG平板计数方法， 正是以上述理论为依据，参照FDA方法而 确立的，检验时间为18 h～24 h，并能 准确测出样品中大肠埃希氏菌的CFU数值， 操作简便，但对于对染菌量低（如＜10 CFU/g）的样品不如MPN法适用。
5.2.1 样品的稀释
5.2.1.5 根据对样品污染状况的估计，按 上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样 品匀液。每递增稀释1次，换用1支1 mL 无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品 接种完毕，全过程不得超过15 min。
食品中大肠埃希氏菌检验原始记录
食品中大肠埃希氏菌检验原始记录样品编号：检验开始时间：年月日样品名称：检验完成时间：年月日检测项目：大肠埃希氏菌检测依据：GB4789.38-2012一、MPN计数法（第一法）：1.样品稀释：无菌操作称（量）取样品25g加入盛有225ml的无菌磷酸盐缓冲液的无菌均质杯中，8000r/min~10000r/min均质2分钟，做成1∶10样品液；若样品为液态，吸取25ml 样品至盛有225ml无菌磷酸盐缓冲液的锥形瓶（预置适当数量的无菌玻璃珠）中，震荡混匀，作为1:10的样品匀液。
调样品匀液pH至6.5~7.5。
取1∶10样品匀液1ml加入到盛有9ml磷酸盐缓冲液稀释管中，混匀，做成1∶100样品均液。
根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。
每递增一次，换用1支1ml无菌吸头。
2.初发酵：每个样品，选取3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1ml（接种量超过1ml，则用双料LST肉汤），36±1∶培养24±2h，观察倒管内是否有气泡产生，对于24±2h产气者进行复发酵。
对于未产气者，则继续培养48±2h，观察，产气者进行复发酵实验。
如所有LST肉汤管均未产气，即可报告大肠埃希氏菌结果。
3.复发酵：用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于提前预温至45∶EC 肉汤管中，放入带盖的44.5±0.2∶水浴箱中。
水浴的水面应高于肉汤培养基页面，培养24±2h，检查小导管是否有气泡产生，如未有气泡产生则继续培养至48±2h。
记录24h和48h内产气的EC肉汤产气管数，如所有EC肉汤管均为产气，即可报告大肠埃希氏菌MPN结果；如有产气，则进行EMB平板分离。
4.EMB平板分离：用接种环取培养物分别划线接种于EMB平板，36±1∶培养18~24h，观察平板上有无具有黑色中心光泽或无光泽的典型菌落。
大肠菌群的测定方法
大肠菌群的测定
灭菌：将试管、小导管、吸管、药品（配制好的月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤）用纸包好，放入灭菌锅中灭菌121℃ 15分钟。
测定：以无菌吸管吸取10ml样品放入盛有90ml生理盐水的容量瓶中，充分混匀，制成稀释度为1:10的样品匀液。
用1ml灭菌吸管吸取1:10的稀释液1ml注入盛有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混匀制成1:100的稀释液。
另取1ml灭菌吸管，按上述吸取1:100的稀释液1ml，注入盛有9ml灭菌生理盐水的试管内，混匀制成1:1000的稀释液。
每递增稀释一次，换用一支1ml灭菌吸管。
一般选择三个稀释度，每个稀释度接种三个管，同时做空白对照试验，置36±1℃的恒温培养箱内，培养24±2h，如果倒管内都不产气则可报告大肠菌群阴性。
检验员：。
食品大肠菌群检测标准
食品大肠菌群检测标准食品微生物检测：食品微生物检验主要是指细菌学检验，包括细菌总数、大肠菌群和致病菌的检验。
经典的方法有固体培养基法（用于细菌总数的检验），液体培养基发酵法（用于大肠菌群的检验）服务范围：各类食品，植物性、动物性原材料、加工产品、半加工产品，如粮食、油脂、调味品、肉制品、饮料、罐头、饼干、糖果类、酒类、蔬菜、炒货、食品添加剂、农产品、婴儿食品、豆制品、糕点等。
菌落总数：食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB 4789.2-2016.大肠菌群计数：食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB 4789.3-2016.沙门氏菌：食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.4-2016 （不测血清分型）。
志贺氏菌：食品安全国家标准食品微生物学检验志贺氏菌检验GB 4789.5-2012.副溶血性弧菌：食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验GB 4789.7-2013 （不测血清分型、神奈川试验）。
金黄色葡萄球菌:食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB4789.10-2016.溶血性链球菌：食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验GB 4789.11-2014.蜡状芽孢杆菌:食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验GB4789.14-2014.霉菌和酵母计数:食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数GB 4789.15-2016.单核细胞增生李斯特氏菌:食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验GB 4789.30-2016.乳酸菌:食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验GB 4789.35-2016.。
大肠杆菌测试片检定规程
大肠杆菌测试片成品检验规程一、用途大肠杆菌是国际上公认的卫生监测指示菌，食物或水中大肠杆菌的检出即意味着直接或间接被粪便污染。
大肠杆菌测试片采用将选择性培养基及显色剂加载在纸片上做成的一次性快速检测产品，与传统检测方法相比省去了乳糖发酵、氧化酶试验、三糖铁琼脂（TSI）、靛基质试验、尿素酶试验等鉴定过程，大大缩短了检测周期。
本产品适用于食品、饮用水及原料中大肠杆菌的计数，也可用于食品设备加工设备表面的卫生检查。
执行标准：食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数PetrifilmTM测试片法（GB/T 4789.38二、基本要求设施与生产质量管理按中国《药品生产质量管理规范》要求实施。
三、成品检定成品按下述技术指标进行检定。
【物理性状】组成规格盛装材料物理性状上层70×90cm 米色粉末淡黄色薄膜下层65×85cm 淡黄色培养基圆形淡黄色薄膜底板【相关参数要求】[准确度]大肠杆菌测试片对样本检测的准确度为：80%~100%[假阳性率]本测试片通过对判定为大肠杆菌阳性的菌落进行大肠杆菌和非大肠杆菌的生理生化鉴定，假阳性率应小于20%。
[误差率]随机抽取20片测试片进行同一样本平行检测，进行P值检验，比较P值与α值的大小，从而判断本测试片检测样本的均一性。
[稳定性及老化]取半成品30片分别进行4℃和37℃保存12天的数据比对,12天两组保存数据菌落数符合率大于90%（一）样品：食品大类食品品种典型代表样品序号1 饮料桶（瓶）装饮用水娃哈哈碳酸饮料可口可乐2 乳制品乳粉伊利女士营养奶粉液体乳旺仔牛奶、三花酸奶、伊利纯牛奶 3肉制品生肉 鸡肉、猪肉、里脊、鸭肉（选其一） 熟肉熟肉干制品、熏烧烤肉制品（选熟肉即可）4 速冻食品 速冻面米食品 饺子、汤圆 5蔬菜制品 蔬菜生菜蔬菜干制品挑选一种有代表性的注：每大类不少于2中样本，样本可随季节和客户需求进行更换2.国标方法所用试剂：VRBA -MUG 培养基、蛋白胨水、缓冲葡萄糖蛋白胨水、西柠檬酸盐培养基、无菌生理盐水、甲基红试剂、V-P 试剂、Kovacs 靛基质试剂、1M HCL 和 NaOH 等。
大肠埃希氏菌报告
靛基质 （I） + + -
+
-
+ +
+ +
典型产气肠杆菌 非典型产气肠杆菌
生化鉴定
注1：如出现表1以外的生化反应类型，表 明培养物可能不纯，应重新划线分离，必 要时做重复试验。 注2：生化试验也可以选用生化鉴定试剂盒 或全自动微生物生化鉴定系统等方法，按 照产品说明书进行操作
5.3大肠埃希氏菌MPN计数的报告
6.4 大肠埃希氏菌平板计数的报告
两个平板上发荧光菌落数的平均数乘以稀 释倍数，报告每g（mL）样品中大肠埃希 氏菌数，以CFU/g (mL)表示。若所有稀 释度（包括液体样品原液）平板均无菌落 生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告。
质量控制
人员培训 标准菌株：大肠埃希氏菌ATCC 25922， 产气肠杆菌ATCC 13048 消耗性材料技术性验收
6.3平板菌落数的选择
数在10 CFU～100 CFU之间的 平板，暗室 360nm～ 366nm 波 长紫外灯照 射下，计数 平板上发浅 蓝色荧光的 菌落。
6.2 操作步骤
检验时用已知MUG阳性菌株（如大肠埃希 氏菌ATCC25922）和产气肠杆菌（如 ATCC 13048）做阳性和阴性对照。
EMB琼脂上大肠埃希氏菌 典型菌与可疑菌落
典型菌落：具黑色中心有光泽或无光泽的 菌落。 非典型的可疑菌落：粉红色，无黑心。
5.2.5 营养琼脂斜面或平板培养
从每个平板上挑5个典型菌落，如无典型菌 落则挑取可疑菌落。用接种针接触菌落中 心部位，移种到营养琼脂斜面或平板上36 ℃±1 ℃，培养18 h～24 h。取培养物 进行革兰氏染色和生化试验
【干货分享】大肠菌群、粪大肠、大肠埃希氏菌检验的相关知识
【干货分享】大肠菌群、粪大肠、大肠埃希氏菌检验的相关知识食品微生物检测1、大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌检验方法（1）大肠菌群（colifoms）一群在36°C培养48h可发酵乳糖产酸产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。
（2）粪大肠菌群（Fecal colifoms）也称耐热大肠菌群。
指大肠菌群中能在44.5C生长、发酵乳糖产生气体的一群细菌。
与大肠菌群一样，并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某-一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的-组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
食品卫生学意义：作为粪便污染食品的指标菌，MPN值愈低则说明食品受粪便污染程度及对人体健康危害程度愈低作为肠道致病菌污染食品的指针，大肠菌群数量越多则肠道致病菌存在的可能性就越高，但两者之间并不总是呈平行关系。
（3）大肠埃希氏菌（Escherichia coli）分类学概念：肠杆菌科、埃希氏菌属。
是人和温血动物肠道内普遍存在的细菌，是粪便中的主要菌种。
一般生活在人大肠中并不致病，但它侵入人体一些部位时，可引起感染。
主要有：■O抗原(菌体抗原，150个)■K抗原(荚膜抗原，90个)■H抗原( 鞭毛抗原，50个)（4）致泻性大肠埃希氏菌能侵入肠粘膜上皮细胞,引起食物中毒的大肠埃希氏菌。
产毒性大肠埃希氏菌(ETEC)-肠胃炎、旅行性腹泻。
■致病性大肠埃希氏菌(EPEC)-婴儿腹泻；■肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)--出血性结肠炎；(O157∶H7；O104∶ H4；O111；O126等)■侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)—杆菌性痢疾；■粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)—急慢性腹泻。
2、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌的关系3、相关检验方法标准■GB4789.3-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数■GB 4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数■GB 4789.39- -2013食品安全国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数■GB4789.6- 2016 食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验■GB4789.36-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验。
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测方法大肠菌群检测是指对人体肠道内的大肠菌群进行检测，以了解肠道内微生物的种类和数量，从而评估肠道健康状况，并为相关疾病的预防和治疗提供参考依据。
目前，常见的大肠菌群检测方法主要包括DNA测序技术、16S rRNA基因测序技术、荧光原位杂交技术等。
本文将对这些大肠菌群检测方法进行介绍和分析，以便读者更好地了解大肠菌群检测的原理和应用。
DNA测序技术是一种通过对肠道微生物DNA进行测序，来获取肠道微生物组成和功能信息的方法。
这种方法可以全面地了解肠道微生物的种类和数量，但是需要较长的测序时间和较高的成本。
16S rRNA基因测序技术是一种通过对16S rRNA基因进行测序，来鉴定和分类细菌的方法。
这种方法可以快速地了解肠道微生物的种类和数量，但是对微生物的数量和功能信息了解较少。
荧光原位杂交技术是一种通过将荧光标记的探针与肠道微生物的特定序列结合，来观察和鉴定微生物的方法。
这种方法可以直接在样本中观察微生物的分布和数量，但是对微生物的种类了解较少。
综合比较这三种大肠菌群检测方法，可以发现它们各自有着优缺点。
DNA测序技术能够全面了解肠道微生物的种类和数量，但是成本较高；16S rRNA基因测序技术能够快速了解肠道微生物的种类和数量，但是了解微生物的数量和功能信息较少；荧光原位杂交技术能够直接观察微生物的分布和数量，但是了解微生物的种类较少。
因此，在选择大肠菌群检测方法时，需要根据具体情况综合考虑各种因素，选择最适合的方法。
总之，大肠菌群检测是一项重要的检测方法，可以为肠道健康状况的评估和相关疾病的预防和治疗提供参考依据。
在选择大肠菌群检测方法时，需要根据实际需求和条件选择最适合的方法，以便更好地了解肠道微生物的种类和数量，从而指导相关的临床实践和科研工作。
希望本文对大肠菌群检测方法的介绍和分析能够对读者有所帮助。
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测方法
大肠菌群是人体内重要的微生物群落之一，它对于维持肠道健康、消化食物、
合成维生素等方面起着重要作用。
因此，对大肠菌群进行检测具有重要的临床意义。
本文将介绍几种常见的大肠菌群检测方法，帮助读者更好地了解大肠菌群检测的原理和应用。
首先，常见的大肠菌群检测方法之一是通过粪便样本进行分析。
粪便样本是最
常用的样本类型，采集方法简单、成本较低，并且能够全面反映肠道微生物的情况。
通过对粪便样本中的细菌进行培养和鉴定，可以获得大肠菌群的组成和数量信息。
其次，分子生物学方法也被广泛应用于大肠菌群的检测中。
例如，通过16S rRNA基因测序可以对肠道微生物进行分类和鉴定，从而了解大肠菌群的多样性和
丰度。
此外，还可以利用荧光原位杂交技术（FISH）直接在样本中观察和定量大
肠菌群的情况。
除了以上两种方法，近年来，基于高通量测序技术的宏基因组学分析也成为大
肠菌群检测的重要手段。
这种方法可以对肠道微生物的整个基因组进行测序和分析，揭示大肠菌群的功能和代谢特点，为肠道微生物相关疾病的诊断和治疗提供重要依据。
总的来说，大肠菌群检测是一项复杂而又重要的工作，不同的方法各有优劣。
在实际应用中，可以根据具体情况选择合适的检测方法，结合临床病情进行综合分析，从而更好地指导临床诊疗工作。
希望本文介绍的大肠菌群检测方法能够为相关人士提供一定的参考价值，促进大肠菌群检测技术的进一步发展和应用。
大肠埃希菌检查法
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2.范围适用于大肠埃希菌检查的操作。
3.责任者QC化验员。
4.程序：4.1.简述4.1.1. 大肠埃希菌(Escherichia coli)即大肠埃希菌，为肠埃希菌科埃希菌属的模式种。
埃希菌属除大肠埃希菌外，新近发现有非脱羧埃希氏菌等5个种。
大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌，随粪便排出体外。
在药品中检出大肠埃希菌，表明该样品受到人和温血动物的粪便污染，即可能污染肠道病原体。
大肠埃希菌除普通大肠埃希菌外尚有致病性大肠埃希菌，可引起婴幼儿、成人爆发性腹泻。
为保证人体健康，口服药品必须检查大肠埃希菌。
4.1.2. 用4-甲基伞形酮葡糖苷酸(4-Methylumbelliferyl-β-D-glucuronide，MUG)和靛基质(Indole)试验检查大肠埃希菌是一项新技术，其检验步骤为：增菌培养后，转种MUG-蛋白胨培养基培养，多数情况下不需要从混合菌中分离单个菌，如MUG、Indole试验为阳性或阴性即可报告结果。
4.1.3. 原理：利用目标菌限定酶作用的底物的水解产物，产生颜色或荧光反应作为指示系统来鉴定目标菌。
实验证明，96％的大肠埃希菌含β-葡糖苷酸酶(β-glucuronidase，GUD)，约10％的沙门菌属一些菌种也含有此酶。
MUG被GUD水解，产生荧光，由于荧光反应的敏感度较颜色反应强千万倍，易于观察，没有主观性，因而用MUG鉴定大肠埃希菌已被广泛应用于临床、食品、饮水、污水等的检测。
大肠埃希氏菌计数 产气
大肠杆菌-I M Vi C 试验
靛 基 质 试 验
甲 基 红 试 验
试 验
柠 檬 酸 盐 试 验
V-P
GB4789.38-2012 第二法大肠埃希氏菌平板计数法
原理
4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷，英文缩写 MUG。是一种不产生荧光的底物。由于 96%的大肠杆菌都具有葡萄糖苷酶，能分 解β-D-葡萄糖苷，而使4-甲基伞形酮游离 出来，在366nm紫外光下产生蓝色荧光。 观察到蓝色荧光即可认为是大肠杆菌阳性。 MUG对大肠杆菌的生长繁殖既没有抑制作 用也没有促进作用，对菌落形态也没有影 响。
生化试验
靛基质试验：将培养物接种于蛋白胨水， 36℃±1℃培养24 h±2h，加Kovacs靛基质试 剂0.2~0.3ml，上层出现红色为阳性。 MR-VP试验：将培养物接种于MR-VP培养基， 36℃±1℃培养48h±2h，移取培养物1ml至 13mm×100mm小试管中，加5%α-萘酚乙醇 溶液0.6ml、40%氢氧化钾0.2ml和少许肌酸 结晶。振摇后静置2h，如出现伊红色为VP试 验阳性。
I M Vi C试验的最佳观察结果时间
靛基质试验：36℃±1℃，24h ±2h； 甲基红试验：36℃±1℃，4d；滴加甲基红 试剂，出现红色为阳性；出现黄色为阴性结 果。 V-P试验： 36℃±1℃，48h ±2h；滴加试剂 后若未出现伊红色，应再培养2h后再观察结 果。 柠檬酸盐试验： 36℃±1℃，96h ±2h；观 察有无细菌生长。有细菌生长培养基可变为 蓝色。
GB4789大肠杆菌计数MPN法检验程序
检样25g(ml)+225ml稀释液，均质
10倍稀释 选择3个连续稀释度样品匀液接种LST
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前言
本标准代替GB/T 4789.38-2008 《食品卫生微生物学检验大肠杆菌计数》。
本标准与GB/T 4789.38-2008 相比，主要变化如下：
——修改了标准的中文名称；
——修改了培养基和试剂；
——将“第二法大肠杆菌VRB-MUG 平板计数法”改为“大肠埃希氏菌平板计数法（第二法）”；
——删除了“第三法大肠杆菌Petrifilm TM 测试片计数法”；
——修改了附录A。
GB 4789.38-2012
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食品安全国家标准
食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数
1 范围
本标准规定了食品中大肠埃希氏菌（Escherichia coli）计数的方法。
本标准适用于食品中大肠埃希氏菌的计数，其中大肠埃希氏菌平板计数法（第二法）不适用于贝类产
品。
2 术语和定义
2.1 大肠埃希氏菌Escherichia coli
大肠杆菌
广泛存在于人和温血动物的肠道中，能够在44.5℃发酵乳糖产酸产气，IMViC（靛基质、甲基红、VP
试验、柠檬酸盐）生化试验为＋＋－－或－＋－－的革兰氏阴性杆菌。
以此作为粪便污染指标来评价食品
的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。
2.2 最可能数
基于泊松分布的一种间接计数方法，简称为MPN。
3 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
a）恒温培养箱：36 ℃±1 ℃；
b）冰箱：2 ℃～5 ℃；
c）恒温水浴箱：44.5 ℃±0.2 ℃；
d）天平：感量为0.1 g；
c）均质器；
d）振荡器；
e）无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头；
f）无菌锥形瓶：容量500 mL；
g）无菌培养皿：直径90 mm；
h）pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸；
i）菌落计数器；
j）紫外灯：波长360 nm～366 nm，功率≤6 W。
4 培养基和试剂
4.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤：见附录A 中A.1。
4.2 EC 肉汤（E.coli broth）：见附录A 中A.2。
4.3 蛋白胨水：见附录A 中A.3。
GB 4789.38-2012
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4.4 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红(MR)和V-P 试验用]：见附录A 中A.4。
4.5 西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录A 中A.5。
4.6 磷酸盐缓冲液：见附录A 中A.6。
4.7 伊红美蓝（EMB）琼脂：见附录A 中A.7。
4.8 营养琼脂斜面：见附录A 中A.8。
4.9 结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：见附录A 中A.9。
4.10 结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷琼脂（VRBA-MUG）：见附录A 中
A.10。
4.11 革兰氏染色液：见附录A 中A.11。
4.12 Kovacs 靛基质试剂：见附录A 中A.12。
4.13 无菌1 mol/L NaOH：见附录A 中A.13。
4.14 无菌1 mol/L HCl：见附录A 中A.14。
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5 大肠埃希氏菌MPN 计数（第一法）
5.1 检验程序
大肠埃希氏菌MPN计数的检验程序见图1。
图1 大肠埃希氏菌MPN计数法检验程序
不产气
36℃±1℃18h～24h
36℃±1℃18h～24h
36℃±1℃48h±2h
44.5℃±0.2℃48 h±2 h
检样
25g（mL）样品+ 225ml 稀释液，均质
10 倍系列稀释
选择适宜3 个连续稀释度的样品匀液，接种LST 肉汤管
产气
EC 肉汤
不产气产气
EMB 平板划线
可疑菌落移种营养琼脂斜面或平板
IMViC 生化试验，革兰氏染色
阴性管阳性管
查MPN 表
报告
GB 4789.38-2012
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5.2 操作步骤
5.2.1 样品的稀释
5.2.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品，放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内，8 000
r/min～10 000 r/min 均质1 min～2 min，制成1:10 样品匀液，或放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液的无菌均质
袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min 制成1:10 的样品匀液。
5.2.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适
当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
5.2.1.3 样品匀液的pH 值应在
6.5～
7.5 之间，必要时分别用1 mol/L NaOH 或1 mol/L HCl 调节。
5.2.1.4 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL 磷酸盐缓冲液
的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1 mL 无菌吸管或吸头反复
吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
5.2.1.5 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。
每递增稀释1
次，换用1支1 mL无菌吸管或吸头。
从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。
5.2.2 初发酵试验
每个样品，选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3 管
月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1 mL（如接种量超过1 mL，则用双料LST 肉汤），36 ℃±1
℃培养24 h±2 h，观察小倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h 产气者进行复发酵试验，如
未产气则继续培养
48 h±2 h。
产气者进行复发酵试验。
如所有LST 肉汤管均未产气，即可报告大肠埃希氏菌MPN 结果。
5.2.3 复发酵试验
用接种环从产气的LST 肉汤管中分别取培养物1 环，移种于已提前预温至45 ℃的EC 肉汤管中，放
入带盖的44.5 ℃±0.2 ℃水浴箱内。
水浴的水面应高于肉汤培养基液面，培养24 h±2 h，检查小倒管内是否
有气泡产生，如未有产气则继续培养至48 h±2 h。
记录在24 h 和48 h 内产气的EC 肉汤管数。
如所有EC
肉汤管均未产气，即可报告大肠埃希氏菌MPN 结果；如有产气者，则进行EMB 平板分离
培养。
5.2.4 伊红美蓝平板分离培养
轻轻振摇各产气管，用接种环取培养物分别划线接种于EMB 平板，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
观察
平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。
5.2.5 营养琼脂斜面或平板培养
从每个平板上挑5 个典型菌落，如无典型菌落则挑取可疑菌落。
用接种针接触菌落中心部位，移种到
营养琼脂斜面或平板上，36 ℃±1 ℃，培养18 h～24 h。
取培养物进行革兰氏染色和生化
试验。
5.2.6 鉴定
取培养物进行靛基质试验、MR-VP 试验和柠檬酸盐利用试验。
大肠埃希氏菌与非大肠埃希氏菌的生
化鉴别见表1。
GB 4789.38-2012
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表1 大肠埃希氏菌与非大肠埃希氏菌的生化鉴别
靛基质（I）甲基红（MR）VP试验（VP）柠檬酸盐（C）鉴定（型别）
＋。