热疗对人肺癌细胞凋亡的影响

·论著·

热疗对人肺癌细胞凋亡的影响

蒋东　李芳　葛锦峰　郑世营

【摘要】　目的　探讨热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞生长与凋亡的影响。方法　ＭＴＴ法检测热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞生长的抑制作用；流式细胞术观察热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞周期和凋亡的影响；ＲＴ－ＰＣＲ检测凋亡相关基因ｐ５３及Ｃａｓｅｐａｓｅ－３的表达。结果　热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９两种细胞的生长均有抑制作用。热疗可以明显改变人肺癌Ａ５４９细胞生长周期的分

布，Ｇ０／Ｇ１期细胞明显减少；但对人肺癌Ｈ１２９９细胞生长周期的分布影响不大。热疗能使Ａ５４９细胞ｐ

５３蛋白的表达明显增强，但不能诱导Ｈ１２９９细胞ｐ５３蛋白的表达。热疗能同时诱导Ａ５４９、Ｈ１２９９两种细胞Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达的增强，并且以Ａ５４９细胞的表达尤为明显。结论　热疗对两种肺癌细胞的生长均有抑制作用，可以增加细胞凋亡。ｐ５３基因可能在热疗诱导肺癌细胞凋亡和周期分布改变的过程中起主导作用。

【关键词】 热疗；肺癌细胞；ｐ

５３基因；凋亡【中图分类号】　Ｒ７３４ 【文献标识码】　Ａ 【文章编号】　０２５３－３６８５（２０１２）１５－１７３７－０３Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｏｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ＪＩＡＮＧ　Ｄｏｎｇ，ＬＩ　Ｆａｎｇ，ＧＥ　Ｊｉｎｆｅｎｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ　Ｓｕｒｇｕｒｙ，Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｏｏｃｈｏｗ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｕｚｈｏｕ２１５００６，ＣＨＩＮＡ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆｈｕｍａｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｏｆ　Ａ５４９ａｎｄ　Ｈ１２９９．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｏｎＡ５４９ａｎｄ　Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　

ＭＴＴ，ｔｈｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｏｆ　Ａ５４９ａｎｄ　Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　

ＦＡＣＳ，ａｎｄ　ＲＴ－ＰＣＴ　ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅｓｏｆ　ｐ５３ａｎｄ　Ｃａｓｐａｓｅ－３．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ａ５４９ａｎｄ　Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｏｆ　Ａ５４９ｃｅｌｌｓ　ｗａｓ　ｃｈａｎｇｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ　

ｗｉｔｈ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｉｎ　Ｇ０／Ｇ１ｐ

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ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ，ｉｎｗｈｉｃｈ　ｐ５３ｇｅｎｅ　ｍａｙ　

ｔａｋｅ　ａ　ｒｏｌｅ．【Ｋｅｙ　

ｗｏｒｄｓ】 Ｈｙｐｅｒｔｈｅｒｍｉａ；Ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ；ｐ５３ｇｅｎｅ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ａｕｇ

ｕｓｔ　２０１２，３８（１５）：１７３７－１７３９．］ 基金项目：

江苏省社会发展重大课题资助项目（ＢＳ２００５０４７）作者单位：２１５００６　江苏省，苏州大学附属第一医院心胸外科（蒋东、葛锦峰、郑世营）；苏州大学基础医学与生命科学学院人体解剖与组织胚胎系（李芳）

通讯作者：郑世营　Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｙｚｈｅｎｇ８８＠ｖｉｐ

．ｓｉｎａ．ｃｏｍ 近年来肿瘤热疗已成为继手术、

化疗、放疗、生物治疗之后的对肿瘤的第五类有效治疗手段。肺癌目前的发病率和死亡率在我国男性中较高，约６５％的肺癌患者确诊时已属晚期，失去手术机会，因而包括热疗在内的综合治疗在晚期肺癌的治疗中占有重要的地位。本研究以我们培养的Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞为实验对象，主要观察不同温度加热处理对ｐ５３表达情况不同的两种肺癌细胞生长、细胞周期和凋亡的影响，探讨热疗促肺癌细胞凋亡的机制。

材料与方法

一、材料

人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞株由苏州大学分子生物实验室提供。ＲＰＭＩ１６４０培养基（Ｇｉｂｃｏ），小牛血清（杭州四季青），逆转录试剂盒、Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶（立陶宛Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司），引物由南京金思特科技有限公司合成。

二、方法

１．细胞培养　人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞常规在含１０％小牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养液中，３７．０℃、５％ＣＯ２培养箱中培养，待细胞生长汇合达８５％时，用０．２５％胰酶消化，

按１∶３传代。实验时选取对数生长期细胞。

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７３７１·江苏医药２０１２年８月第３８卷第１５期　Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ａｕｇｕｓｔ　２０１２，Ｖｏｌ　３８，Ｎｏ．１５