热疗对人肺癌细胞凋亡的影响

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高烧癌细胞消失案例

高烧癌细胞消失案例高烧癌细胞消失案例：重要发现为癌症治疗带来新希望近日，一起关于高烧引起癌细胞消失的案例在医学界引起了广泛关注。

这一发现为癌症治疗带来了新的希望。

病例中的患者，一名40岁的女性，被诊断为晚期胃癌，她的体温剧烈升高到40摄氏度以上，引发了医学界的关注。

据病例报告，当患者的高烧首次发作时，她的身体开始出现剧烈的抽搐和大量出汗。

医生怀疑这些异常症状可能与体温的剧烈上升有关。

惊喜的是，在患者的体温恢复正常后，医生们发现她的癌细胞数量竟然大幅减少，甚至有部分消失了。

随后，医生们对患者进行了一系列的检查和观察，以进一步了解高烧可能对癌细胞的影响。

结果表明，高烧似乎能够刺激患者的免疫系统对癌细胞进行有效打击。

研究人员发现，高烧引发了巨噬细胞的活性增强，它们能够主动吞噬和消灭癌细胞。

此外，高烧还能够促进免疫细胞的增殖和活化，使其更加有效地攻击癌细胞。

这一案例的发现引发了医学界对于热疗在癌症治疗中的潜力的关注。

热疗是一种利用高温破坏癌细胞的治疗方法，但此前对于其疗效一直存在争议。

然而，这起案例揭示了高烧对于癌细胞的明显影响，为热疗的研究提供了新的方向。

尽管这一案例的发现令人振奋，但研究人员也指出，高烧可能并非所有癌症患者的治疗选择。

高烧有可能引发严重的副作用，如中枢神经系统的损伤和器官功能紊乱。

因此，研究人员呼吁加强对于热疗的研究，以寻找更为安全有效的方法。

总的来说，这起高烧癌细胞消失的案例为癌症治疗带来了新的希望。

它揭示了高烧对于癌细胞的明显影响，为热疗的研究提供了新的方向。

然而，研究人员仍需进一步探索高烧在癌症治疗中的潜力，并寻找更为安全有效的方法，以将这一发现转化为实际应用的治疗手段。

热处理联合依托泊苷疗法对非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响

热处理联合依托泊苷疗法对非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响刘　鑫1，汪　伟2，王晓东1，杨　阳3，齐　正41辽宁医学院附属第一医院，辽宁锦州　121001；2辽宁医学院济南军区总医院研究生培养基地，山东济南250031；3郑州大学公共卫生学院，河南郑州　450052；4郑州大学第一附属医院，河南郑州　450052摘要：目的探讨热处理联合依托泊苷疗法对非小细胞肺癌细胞(A549)增殖及凋亡的影响。

方法培养非小细胞肺癌A549细胞，随机分为对照组、热处理组、依托泊苷处理组、热处理联合依托泊苷处理组，采用MTT实验检测细胞活力、流式细胞仪检测细胞凋亡、RT-PCR方法检测HSP70、Bcl-2、Bax的mRNA表达水平(以β-actin为对照)。

结果经体外热处理、依托泊苷及联合处理后非小细胞肺癌细胞存活的细胞减少。

MTT实验显示除48h体外热处理组和对照组无统计学意义外，其余各组与对照组比较吸光度值均降低(P<0.05)。

流式细胞仪检测细胞凋亡显示三组与对照组比较细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)，RT-PCR显示Bcl-2及HSP70的水平明显低于对照组(P<0.01)而Bax的水平明显高于对照组(P<0.01)，且联合处理组凋亡率最高。

结论热处理、依托泊苷及联合处理均可降低非小细胞肺癌细胞的增殖能力，诱导细胞凋亡。

关键词：非小细胞肺癌；热处理；依托泊苷；凋亡中图分类号：R 734.2　文献标识码：A　文章编号：1005-1139(2012)08-0879-03　DOI：10.3969/j.issn.1005-1139.2012.08.032非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer NSCLC)是肺癌的主要类型，约占80%，5年生存率仅为15%。

由于早期诊断困难，多数发现时已接近中晚期。

综合治疗方案已成为非小细胞肺癌治疗的新方式。

热处理是一种极具发展前景的系统疗法，具有安全性高、不良反应程度低等优势。

《2024年热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的实验研究》范文

《热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的实验研究》篇一一、引言随着现代医学的快速发展，癌症的治疗手段日趋多样化，其中热疗作为一种非侵入性的治疗方法，已经得到了广泛的应用和深入研究。

热疗通过对肿瘤细胞进行选择性热处理，从而引发细胞凋亡或坏死，以达到治疗肿瘤的目的。

本文以人肝癌细胞株Hep-G2为研究对象，通过实验研究热疗对其细胞凋亡的影响，以期为临床治疗提供理论依据。

二、材料与方法1. 材料人肝癌细胞株Hep-G2细胞、热疗设备、细胞培养基、MTT 试剂、流式细胞仪等。

2. 方法（1）细胞培养：将Hep-G2细胞在适宜的培养条件下进行培养，并观察其生长情况。

（2）热疗处理：将Hep-G2细胞分为对照组和实验组，实验组进行不同温度和时间的热疗处理。

（3）细胞凋亡检测：采用MTT法检测细胞活性，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。

（4）数据统计与分析：对实验数据进行统计分析，比较各组细胞凋亡率的差异。

三、实验结果1. 细胞活性检测结果通过MTT法检测细胞活性，结果显示，随着热疗温度和时间的增加，Hep-G2细胞的活性逐渐降低。

实验组细胞的活性明显低于对照组，表明热疗对Hep-G2细胞的生长具有抑制作用。

2. 细胞凋亡检测结果流式细胞仪检测结果显示，热疗处理后，Hep-G2细胞的凋亡率明显增加。

随着热疗温度和时间的增加，细胞凋亡率呈上升趋势。

实验组细胞的凋亡率显著高于对照组，表明热疗能够诱导Hep-G2细胞发生凋亡。

四、讨论本实验以人肝癌细胞株Hep-G2为研究对象，通过实验研究热疗对其细胞凋亡的影响。

实验结果显示，热疗能够抑制Hep-G2细胞的生长，并诱导其发生凋亡。

这可能与热疗对细胞内相关基因和蛋白的影响有关，从而引发细胞的凋亡机制。

此外，热疗的温度和时间对细胞凋亡的影响也具有重要作用。

适当的热疗温度和时间能够最大限度地发挥热疗的效果，提高肿瘤治疗的疗效。

然而，本实验仍存在一定局限性。

首先，实验仅在体外环境下进行，未能充分考虑体内环境的复杂性。

细胞凋亡调节在肿瘤治疗中的应用

细胞凋亡调节在肿瘤治疗中的应用随着医学技术的发展，肿瘤治疗方式也在不断的更新换代。

其中，以细胞凋亡调节为主的治疗方法越来越受到医学界的关注。

细胞凋亡是人体细胞自行死亡的一种方式，而细胞凋亡调节则是通过控制这种死亡方式达到治疗肿瘤的目的。

一、细胞凋亡机制细胞凋亡是一种合理且必要的生理过程，它在保持机体内环境平衡和维持正常细胞生长发育表现出重要的调控作用。

在正常情况下，机体通过自身调控细胞生命周期，避免某些细胞不断分裂增殖，从而导致疾病。

而在某些病变状态下，机体失去了对细胞的控制，导致某些细胞不间断增殖，形成了肿瘤。

细胞凋亡主要是通过激活caspase酶的方式将细胞内的核酸和蛋白质降解。

在这个过程中，还会利用PARP等核酸酶来降解DNA，从而让损坏或代谢异常的细胞自行死亡并被排除体外。

二、近些年来，细胞凋亡调节在肿瘤治疗中的应用越来越多。

目前，主要的治疗方式包括药物、基因治疗和免疫治疗三种方式。

1、药物治疗药物治疗的原理是通过特定的化学反应或抑制剂作用来干扰肿瘤细胞的DNA修复、结构调节和其他组成成分，从而扰乱肿瘤的生命周期和调整凋亡程序。

目前，常用的药物类别包括Bcl-2蛋白抑制剂、caspase酶抑制剂、核酸酶抑制剂等。

其中，Bcl-2蛋白抑制剂可以抑制细胞凋亡，并激活细胞增殖；caspase酶抑制剂可以抑制caspase酶的激活并阻止细胞凋亡；核酸酶抑制剂可以抑制DNA降解的程度，减少程序性死亡程度。

不过，药物治疗的副作用并不可忽视。

某些药物可能会导致毒性反应，损伤患者的肝、肾、心等器官，抑制正常细胞的生长发育和代谢等。

因此，在使用药物治疗时，一定要严格按照医嘱使用，防止药物的过量用于和副作用发生。

2、基因治疗基因治疗是将特定的DNA或RNA序列导入细胞内，使用固定方式激活或调节凋亡程序。

与药物治疗不同的是，基因治疗更加直接且针对性。

它可以针对某种遗传缺陷或生化途径缺陷，从而调整凋亡程序。

而在基因治疗中，病理基础和重要的药物的基因在mRNA和物理化学参数等的特征，已经成为许多新型细胞目标药物研究中的重要参考点。

清热消积方对人肺腺癌细胞诱导的人脐静脉内皮细胞增殖凋亡的影响

Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ３１０００６，ＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｅｆｅｃｔｏｎｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ（ＨＵＶＥＣ）ｉｎｄｕｃｅｄｂｙ
方可能具有抗肿瘤血管形成效应。关键词清热消积方人肺腺癌细胞人脐静脉内皮细胞凋亡
ＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄＡｐｏｐｔｏｓｉｓＥｆｆｅｃｔｏｎＨｕｍａｎＵｍｂｉｌｉｃａｌＶｅｉｎＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌＩｎｄｕｃｅｄｂｙＨｕｍａｎＬｕｎｇＡｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａＣｅｌｌｓＴｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ
ｉｎｈｉｂｉｔｅｆｆｅｃｔｉｏｎｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＳＰＣ — Ａ一１ａｎｄＨＵＶＥＣｃｅｌｌｓ．ａｎｄｓｈｏｗｅｄａｄｏｓｅ—ｅｆｅｃｔｄｅｐｅｎｄｅｎｔｃｕｒｖｅ，ｗｈｉｃｈｗａｓｄｉｆｅｒｅｎｔａｎｄ
ＱｉｎｇｒｅｘｉａｏｊｉＲｅｃｉｐｅ．ＣｈｅｎＰｅｆｉｅｎｇ，ＰａｎＬｅｉ，ＪｉｎＹｉｎｇｑｉ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｆｏＺｈｅｊｉａｎｇＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌ

热疗在肿瘤治疗中的研究进展

究报道称，４３℃ 热处理３ｈ后，ＢＺＲ— Ｔ３３肺癌细胞
含量低且有很强的流动性，温热作用明显。（２）改变肿瘤细胞骨架：可改变细胞形态、有丝分裂期等，因此可损伤细胞骨架。（３）抑制脱氧核糖核酸
性及细胞内的环境有所改变，肿瘤细胞膜的胆固醇
的合成；高热可以损害细胞膜的正常功能，使细胞
膜的通透性发生改变，引起蛋白外溢，核染色质结构发生改变，导致癌细胞的死亡。Ｖｅｒｔｒｅｅｓ等研
个热储器，致使热疗时肿瘤部位温度高于邻近正
常组织３～５℃ 。这种选择性加热现象导致温度差，保证了肿瘤局部加热到４０～４３℃ 时能大量杀灭肿瘤细胞而又不损伤正常组织细胞，产生肿瘤选择性
受损伤，从而聚集核内变性蛋白，导致其他分子的
作者单位：１．兰州军区兰州总医院，甘肃兰州７３００５０；２．第四军医大学西京医院，陕西西安７１００３２通讯作者：闰向勇，Ｅｍａｉｌ：ｙａｎｘｉａｎｇｙｏｎｇ＠１２６．ｃｏｎｒ
世界中西医结合杂志２０１４年第９卷第２期
ＷｏｒｌｄＪｏｕｎａｒｌｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ２０１４，Ｖｏ１．９，Ｎｏ．２

青蒿琥酯联合热疗对肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响

２ｅｅ９１／ｎ７ＩＬＬ，ｓｅｔｅ．ＣｍｎｉｍｐＤ，ｎｍｂｒｆｅｔｇ０Ｇｎｒａｅ４ｈｗｒ３６０Ｌａｄ１２Ｉ／ｒｐｃｖＩｏｐｇｗｔＬｌｏｅｉｙｈｕｕｅｕｉｓｅＧ／ｌｃｅｓｄｏｃｎａｉａｄｄｃｅｓｄｉｓｇＪｅｒｅｔｅＳ帅ｄＧ／ｍｕｎ尸＜．１．Ａｏｔｓａｆ５９ｗｒ２．ｏｉ州ｐＡａｄｌａｎａ２ＭｉｇｐＡａｄＣ（０Ｏ）ｐｐ０ｉｒｔ０Ａ４ｅｅ８９％ｎｇｎｎｓｅ１．７ｉｍｕａｄｗｒｈｇｅｔａ．８ｉ６７％ｎｇｐＣ，ｎｅｅｊｈｒｈｎ２Ｏ％ｎｐＤＰ＜．１．ＣｎＪ０ｌａｔｕａ，ｎｓｎｔｃｍｉｅ（０Ｏ）ｏｃＩｒｓｎｔａｅｕａ０ｂｎｄｓｅｅｅ
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加热对肿瘤细胞微环境的影响及意义

加热对肿瘤细胞微环境的影响及意义王斌;孙小单;刘玉侠;王首寒;程显斌;陈佳祺【摘要】目的探讨加热对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721分泌的细胞因子的影响,以及细胞因子在肿瘤微环境中的作用,为热疗治疗肿瘤提供实验依据.方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721至对数生长期,换成无血清培养基,将其放入恒温水浴箱中,42℃恒温加热2 h.将加热后的人肝癌细胞株SMMC-7721放回到37℃,5%CO2的培养箱中进行复温培养,取复温后不同时间(0、24、48、72 h)的人肝癌细胞株SMMC-7721培养上清进行TNF-α、IL-2、IFN-γ和VEGF等抗肿瘤细胞因子的检测,并与未加热的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞培养上清进行比较.结果复温不同时间的人肝癌细胞株SMMC-7721培养上清中TNF-α、IL-2和IFN-γ抗肿瘤细胞因子的分泌浓度均较未加热的人肝癌细胞株SMMC-7721培养上清中上述肿瘤细胞因子的分泌浓度有不同程度的提高,而VEGF的分泌浓度逐渐下降.结论42℃恒温加热2 h可以促进人肝癌细胞株SMMC-7721培养上清中IL-2、IFN-γ、TNF-α等抗肿瘤细胞因子分泌浓度的增加,减少促进肿瘤生长的细胞因子VEGF的分泌浓度.%Objective To investigate the effect of heating on the cytokines secreted by liver cancer cells SMMC-7721,and to study the effect of these cytokines on cell microenvironment,to provide experimental evidence of hyperther-mia for tumor treatment.Method Human liver cancer cell SMMC-7721 were cultured in vitro to the logarithmic growth phase, and then were replaced with a serum-free medium, placed in constant temperature water bath and heated for 2 hours at 42℃.After heating,the human liver cancer cell line SMMC-7721 were placed to cool down to 37℃,and were cultured again in an incubator with 5% CO2byrewarming,the supernatant of the cultures at various time points after re-warming(0,24,48,72 h)were taken to detect TNF-α,IL-2,IFN-γ,VEGF and other cytokines,and were compared with unheated SMMC-7721 cell culture supernatant.Result After rewarming for different duration,the secretion of cytokines TNF-α,IL-2,and IFN-γ in human cancer cells SMMC-7721 were generally increased as compared with unheated cul-tures,while VEGF secretion gradually decreased.Conclusion Constant heating at 42℃for 2 h can promote the secre-tion of cytokines IL-2,IFN-γ,TNF-α,and other anti-tumor cytokines,while reduce the secretion of VEGF that can pro-mote tumor growth.【期刊名称】《癌症进展》【年(卷),期】2017(015)010【总页数】4页(P1150-1152,1208)【关键词】热疗;肝癌细胞;细胞因子;肿瘤微环境【作者】王斌;孙小单;刘玉侠;王首寒;程显斌;陈佳祺【作者单位】吉林省肿瘤医院肝胆胰腺外科,长春130012;吉林省肿瘤医院妇瘤二科,长春130012;吉林省肿瘤防治研究所临床分子生物学研究室,长春130012;吉林省肿瘤医院肝胆胰腺外科,长春130012;吉林省肿瘤医院肝胆胰腺外科,长春130012;吉林省肿瘤医院肝胆胰腺外科,长春130012【正文语种】中文【中图分类】R735.7热疗是近年来发展起来的无创伤的肿瘤治疗方法。

热疗法治疗肿瘤的研究进展

热疗法治疗肿瘤的研究进展前言癌症是人类面临的严重健康问题之一，治疗方法也不断地在进化和更新。

热疗法作为辅助治疗手段，已经被广泛应用于肿瘤治疗中，取得了一定的疗效。

本文将对热疗法治疗肿瘤的研究进展作一综述。

理论基础热疗法是指使用高温来治疗疾病的一种治疗方式。

肿瘤热疗是一种特殊的高温疗法，主要基于肿瘤细胞对热的敏感性比健康细胞更高这一原理。

热可使肿瘤细胞的蛋白质变性、细胞膜通透性提高、代谢加速以及DNA链断裂等，从而导致肿瘤细胞的死亡。

热疗法分类根据热源不同，热疗法可以分为高温疗法和低温疗法。

1.高温疗法高温疗法一般是指体内温度或热损伤部位温度达到42℃以上的治疗方式。

高温疗法可以进一步分为：•局部高温疗法局部高温疗法是指使用电磁波、微波、激光等高频电磁波作为热源，将其作用于肿瘤局部，使局部组织升温到杀死肿瘤细胞的温度范围。

•全身性高温疗法全身性高温疗法是指将患者的体温升高到杀死肿瘤细胞的杀伤温度范围，如磁热疗法、微波热疗法等。

2.低温疗法低温疗法是指体内温度或热损伤部位温度低于37℃的治疗方式。

低温疗法可以分为：•冷冻疗法冷冻疗法是利用液氮或制冷剂注射到病灶内部，使局部组织温度降至-20℃到-70℃，杀死肿瘤细胞。

•微波冷疗法微波冷疗法是利用微波作为能量源，通过热效应和非热效应对人体组织进行治疗，通过对肿瘤细胞的杀伤作用，实现治疗效果。

病症应用热疗法在肿瘤治疗中的应用主要是为了提高其他治疗手段的疗效并减少副作用。

目前主要应用在肿瘤手术前、化疗后和放疗后的综合治疗中。

1.放疗后热疗放疗后常见并发症包括疲劳、恶心、呕吐等，热疗可以缓解这些症状。

同时，放疗对病理组织产生热效应，如放疗前的瘤体体积大，放疗后收缩趋势明显，容易导致瘤体气化、坏死或裂解等。

2.化疗后热疗化疗后常有恶心、呕吐、腹泻等不良反应。

热疗可以通过激活机体代谢、促进病灶血液循环，增强化疗药物在病灶的渗透性，提高化疗效果。

3.手术前热疗手术前热疗可以降低手术创伤，减轻术后疼痛和切口肿胀等不良反应。

一文读懂热消融技术治疗肺癌

一文读懂热消融技术治疗肺癌引言：肺癌的发病率、病死率最高，早期治疗方法是外科手术治疗，因缺乏明显症状，导致患病前期不能及时发现与防治，随着病情的加重使患者自身的各项条件无法满足手术治疗标准，直接危害着患者的生命安全。

新时期发展背景下，我国医疗研发力度的加强，治疗方法越来越多，其中就包括热消融技术，也是目前肺癌治疗中效果佳、安全性高的主要手段之一。

一、肺癌治疗中常用的热消融技术肺癌治疗的根本意义是破坏细胞组织结构，根据癌症类别、特点、发展规律等针对性治疗，在热消融技术应用的过程中能受热效应影响，使细胞在高温条件下细胞凝固性坏死，临床治疗中较常用的技术手段包括射频消融、微波消融、冷冻消融、激光消融、高强度聚焦超声，均有较强的治疗效果，直接影响着肺癌临床治疗效果，也是当前大众重点关注的医疗内容，引起医疗研发部门的重视，能从技术手段方面入手全面创新，提升医疗技术水平的同时还能创造巨大的综合效益，最大化地保护大众生命安全。

（一）射频消融从临床治疗角度分析，射频消融主要原理是在肺癌组织内施加一定频率的射频电流，形成高频率电磁波，在高度震荡下使肺癌组织的分子相互摩擦，热能转化的过程中局部温度高达120℃，因肺癌组织不耐高温，最终细胞凝固性坏死，有良好的治疗效果。

在此基础上，防止癌细胞转移，经炎性反应分析，进一步导致肺癌坏死，增强患者身体机能免疫力，抑制肺癌生长。

射频消融技术的安全性、可靠性高，属于一种微创手段，能对肺癌局部进行重复治疗，适合应用的患病群体较广，并为后续放疗、化疗、靶向治疗等提供有利条件。

（二）微波消融现阶段我国医疗领域中对肺癌疾病的治疗应用微波消融技术，是以915MHz、2450MHz频率为主，受微波电磁场作用影响，使肺癌组织中的极性分子高速振动，使其相互摩擦、碰撞，提高温度，引发细胞凝固性坏死。

与其他消融技术相比较，微波消融最突出的优势是能在极短的时间内使温度达到150℃，效果直接，消融范围大，灭活病灶原位的过程中保证气肺组织不受影响，修复能力较强。

热疗联合顺铂对小细胞肺癌NCI—H446细胞凋亡的影响及机制探讨

Ｃ组比较，Ｐ均＜．５００。结论
达、高Ｂｘ表达有关。升ａ
热疗联合顺铂可诱导小细胞肺癌ＮＩ４６细胞凋亡，Ｃ－４Ｈ其机制与降低细胞中Ｂｌｃ２表－
关键词：热能疗法；顺铂；细胞凋亡；Ｂ细胞淋巴瘤细胞因子２；Ｂｌ人ｃ－２相关ｘ蛋白；小细胞肺癌；肺肿瘤中图分类号：７４２Ｒ３．Ｒ３．；７０５文献标志码：Ａ文章编号：０２２６（０２１－０－３１０－Ｘ２１）８０１６００
山东医药２１第５０２年２卷第１８期
・
论著・
热疗联合顺铂对小细胞肺癌ＮＩ４６Ｃ— ４Ｈ细胞凋亡的影响及机制探讨
黄波，晓东，贤平王郎
（宁医学院附属第一医院，宁锦州１１０）辽辽２００
１．２００％ ±０８％ｉｏｐＣ．１．２ ±０４％ｉｒｕ．２ｎｇｕｒ２１％．９ｎｇｏｐＤ，４２％ ±０５％ｉｏｐＡ．Ｔｅｃｌａｏｔｓｓｒｔｆ．５．６ｎｇｕｒｈｅｌｐｐｏｉａｅｏ
ｇｏｐＢ，Ｃ，ＤｗｒｉｈｒｔａｏｐＡ，ｌＰ＜０．５；ｇｏｐＤｗａｉｈｒｔａｏｐＢａｄＣ，ａｌ＜００ｒｕｅｅｈｇｅｈｇｕａｌｎｒ０ｒｕｓｈｇｅｎｇｕｎｌｈｒＰ．５．ＴｅＢｌｈｃ－２ａｄＢｘｅｐｅｓｎｉｒｕｗｅｅ０８ ±００２８，０１ｎａｘｒｓｉｎｇｏｐＡｒ．９ｏ．０．８±００．０１８；ｇｏｐＢｗｒ．１±００４２，０３ｒｕｅｅ０．０±Ｏ．００．８±００ｒｏｐＤｅｅ０２ｇｏｐＣｗｅｅ０３０３６，４．０１４；ｇｕｗｒ．１±０．０１７，０６ ±００２５．ＴｅＢｌ２ａｄＢｘｅ — ０．４．０ｈｃ－ｎａｘｐｅｓｏｆｒｕｒｓｉｎｏｏｐＢ，Ｃ，ＤｗｒｉｈｒｔａｏｐＡ，ａｌ＜０．５；ｇｏｐＤｓｈｇｅｈｎｇｏｐＢ，ｇｅｅｈｇｅｈｎｇｕｒｌＰ０ｒｕｗａｉｈｒｔａｕＣ，ａｌＰ＜００．ｒｌ．５ＣｏｃｕｉｎＨｙｅｔｅｍｉｏｉｅｔｉｌｔａｎｕｅｓｌｌｃｌｌｎａｃｒＮＣ－４ｅｌａｏｔｓｓｔｃａｎｌｓｏｐｒｒａｃｍｂｎｄｗｉｃｓａｉｖｉｄｃｍａｅｌｕｇｃｎｅＩＨ４６ｃｌｐｐｏｉ，ｉｍｅｈ — ｈｈｐｎｎｓｎｓｍａｅａｅｉｈｒｄｃｎｈｌ２ｅｐｅｓｏｎｃｅｓｎａｘｒｓｉｎｉｍｙｒｌｔｄｗｔｅｕｉｇｔｅＢｃ－ｘｒｓｉｎａｄｉｒａｉｇＢｘｅｐｅｓ．ｎｏ

热疗治疗肿瘤原理

热疗治疗肿瘤原理嘿，朋友们！今天咱来聊聊热疗治疗肿瘤这档子事儿。

咱先想想啊，肿瘤就像个调皮捣蛋的小坏蛋，在咱身体里瞎折腾。

那热疗呢，就好比是个厉害的“热武器”，专门来对付这个小坏蛋的。

你说这热疗咋就这么神奇呢？其实啊，就跟咱平时煮东西有点像。

咱把水烧热了，就能把食物煮熟煮透，对吧？热疗也是这个道理呀。

通过给肿瘤那一块儿加热，让温度升高，就可以让肿瘤细胞受不了啦！肿瘤细胞可比正常细胞娇气多了，稍微热点它们就扛不住了，这不就被咱给制服了嘛！你想想看，热疗的时候，就好像是给肿瘤细胞来了一场“高温桑拿”，它们在里面被蒸得晕头转向的。

而且啊，这热度还能让肿瘤的血管扩张，就像给马路拓宽了一样，那药物啊、免疫细胞啊就能更容易地进到肿瘤里面去，一起把肿瘤给收拾了！这多棒啊！咱再打个比方，肿瘤就像是一块顽固的污渍，而热疗就是那瓶强力去污剂。

用了它，就能把污渍给清理得干干净净。

这热疗啊，不仅能单独作战，还能和其他治疗方法一起配合，那效果更是杠杠的！就像一群好汉一起上，还怕打不败肿瘤这个大坏蛋吗？有人可能会问了，那这热疗会不会伤到咱自己的好细胞啊？嘿，别担心！医生们可都是有分寸的，他们就像经验丰富的大厨，知道怎么掌握火候，既能把肿瘤给搞定，又不会伤到咱自己太多。

热疗的方式也有好几种呢，有体外的，有体内的。

体外的就像是在外面给肿瘤加热，体内的呢，就更直接一些，把加热的东西放到肿瘤旁边去。

就好像咱对付敌人，有时候在远处攻击，有时候就得冲到敌人跟前儿去战斗。

咱可得重视起这热疗来呀，它可是咱对抗肿瘤的有力武器之一呢！咱要相信医生，相信科学，让热疗为咱的健康出一份力。

别小瞧了这小小的热度，它说不定就能创造大大的奇迹呢！所以啊，要是医生建议咱用热疗，咱可别犹豫，大胆地去尝试，和肿瘤抗争到底！让我们一起用热疗这个“热武器”，把肿瘤打得落花流水，让我们的身体重新恢复健康和活力！怎么样，是不是觉得热疗很神奇很厉害呀？。

热疗在肿瘤综合治疗中的应用

热疗最好在放疗后40 min 内开始,尽量不要超过1 h 。
我院热疗中心
几种局部热疗机
热疗中心
NRL-002型热疗机
NRL-001型热疗机
HRL-001型颈部热疗机
GRL-001型肢体热疗机
WE2102-A型微波热疗机
全身热疗机
热疗
一、热疗的生物学机制二、热疗的适应症与禁忌症三、热疗的副反应与注意事项四、热疗的方法五、热疗的应用与展望
一、热疗的生物学机制
1.热疗对肿瘤细胞的直接杀伤作用
a.改变细胞膜的通透性，直接导致细胞骨架损伤 b.抑制DNA和RNA聚合，损伤与DNA 结合的染色体蛋白及抑制蛋白质合成 c.加重低氧和酸性环境，激活溶酶体活性。
2.热疗对肿瘤细胞的间接杀伤作用
a.热疗时肿瘤组织的血流下降，供氧不足 b.热疗可抑制肿瘤源性的血管内皮生长因子及其产物的表达 c.热疗时超氧化物及自由基的形成可能是热疗致肿瘤细胞死亡的另一重要原因
胃癌、膀胱癌、卵巢癌、肠癌、盆腔转移癌、腹腔转移癌； 3.腔内肿瘤：宫颈癌、直肠癌、食道癌、前列腺癌； 4.晚期肿瘤顽固性疼痛的止痛治疗； 5.治疗癌性胸水、腹水； 6.预防肿瘤术后复发、转移； 7.妇科、外科、皮肤科等良性疾病，如：乳腺炎、盆腔炎、
附件炎、软组织急、慢性炎症、关节炎、前列腺炎等
肿瘤热疗是泛指用加热来治疗肿瘤的一类治疗方法。基本原理是利用物理能量加热人体全身或局部，使肿瘤组织温度上升到有效治疗温度，并维持一定时间，利用正常组织和肿瘤细胞对温度耐受能力的差异，达到既能使肿瘤细胞凋亡、又不损伤正常组织的治疗目的。
热疗的热度概念
气化热疗（>200℃）固化热疗（50-100 ℃ ）常规高温热疗（42-45 ℃ ）亚高温热疗（39.5-41.5 ℃ ）

热疗对SMMC-7721肝癌细胞形态、增殖、凋亡的影响

胞形态变化，用四甲基偶氯唑蓝（采ＭＴＴ法检测细胞增殖，Ａｎｘ／Ｉ色后用流式细胞仪检测细胞凋亡，３６Ｃ和）予ｎｅｉＶＰ染ｎ予６ＥＦＴ一ＩＣ羊抗鼠ＩＧ处理细胞后用流式细胞仪检测细胞Ｄ５表达，Ｆｕ一／ｇＲ用ｌｏ３ＡＭ负载细胞检测胞内Ｃ浓度的变化。结果热疗ａ可导致肿瘤细胞形态改变，表现为细胞变小，圆，落，变脱出现空泡；疗可抑制细胞增殖，胞热疗后０６１、４热细、、２２ｈ细胞抑制率分别为２．８、６７、１３、６６。热疗后Ｏ２１％２．６３．Ｏ３．２ｈ细胞凋亡率为ｌ．），中早期凋亡率为２Ｏ，期凋亡率为１．Ｏ；５（其（］．Ｏ晚３Ｏ热疗后６ｈ细胞凋亡率为６．５，中早期凋亡率为４．３，期凋亡率为２．２；疗后１ｈ细胞凋亡率为１．２，中５４其３２晚２２热２２３％其早期凋亡率为４６，期凋亡率为７７；疗后２ｈ细胞凋亡率为２．８，中早期凋亡率为７１，期凋亡率为．Ｏ晚．２热４２５其．５晚
摘要：目的探讨热疗对ＳＭＭＣ７２一７１肝癌细胞的影响。方法将ＳＭＭＣ７２一７ｌ肝癌细胞置恒温循环水浴锅中（２５４．土

热疗联合依托泊苷对非小细胞肺癌A549细胞凋亡相关基因的影响

热疗联合依托泊苷对非小细胞肺癌A549细胞凋亡相关基因的影响刘鑫，汪伟，王晓东，杨阳(辽宁医学院附属第一医院，辽宁锦州121001)摘要:目的探讨热疗联合依托泊苷对非小细胞肺癌(NSCLC)凋亡相关基因Bcl-2、Bax、热休克蛋白70 (HSP70)的影响。

方法培育NSCLC细胞株，分为热疗组、依托泊苷组、热疗联合依托泊苷组(联合组)和对照组，干预结束后提取RNA，用RT-PCR方法检测HSP70、Bcl-2、Bax的相对表达量和mRNA表达水平。

结果热疗组、依托泊苷组及联合组Bcl-2、HSP70水平明显低于对照组(P均＜0．01)，Bax水平明显高于对照组(P＜0．01)。

结论热疗、依托泊苷均可一定程度地诱导NSCLC细胞凋亡，二者联合应用具有一定的协同作用，可进一步诱导NSCLC 细胞的凋亡。

关键词:癌，非小细胞肺;热休克蛋白质70;Bcl-2;Bax中图分类号:R734．2文献标志码:B文章编号:1002-266X(2012)21-0052-03非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌的80%，其早期诊断困难，大部分患者确诊时已属中晚期。

大部分患者对化疗药物易产生耐药性，因而其疗效不佳。

近年来，热疗与化疗联合抗癌成为一个研究热点。

2011年10月，我们探讨了热疗联合依托泊苷对NSCLC A549细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax和热休克蛋白70(HSP70)的影响。

现报告如下。

1材料与方法1．1材料人NSCLC A549细胞由郑州大学基础医学院生化教研室惠赠;依托泊苷注射液购于齐鲁制药有限公司;Transzol、Marker、RT试剂盒、PCR试剂盒购于北京TransGen公司。

1．2方法1．2．1细胞培养及分组A549细胞在含20%胎牛血清的1640培养液中培养，接种细胞。

取对数生长期细胞，用0．25%胰酶消化后，制成单细胞悬液，调整细胞密度为5ˑ104/mL，接种于150cm2培养瓶中，培养24h后，将细胞分为热疗组、依托泊苷组、联合组和对照组。

热疗联合组织因子靶向治疗对人大肠癌细胞增殖及凋亡的影响

基金（０００２３８１９）
肠癌实验室提供，用含１％胎牛血清的ＤＭ作为培０ＭＥ养基，３５Ｃ的培养箱中培养。ＤＭ高糖在７ｏ％ＯＣ，ＭＥ培养基、牛血清购自美国Ｇｂｏ公司。ＲＰ细胞裂胎ｉｃＩＡ解液、ＡＤＧＰＨ抗体、根过氧化物酶结合的第二抗体辣和电化学发光试剂盒购自ＳｎａＣｕ司；Ｉ购自ａｔｒｚ公ＭｒＴ
作者单位：１０３北京大学第一医院普通外科（００４李辉、汤坚强、万远廉、于歌、汪欣、朱静）北京航天总医院ｗｎｊｕｅｕｃ；Ｅａ：ａ＠ｂ．ｄ．ｎ汤坚强，ｍｉｄｅｔｌｍＥａ：ｏ—ｊｌｑ
＠ｈｔｉｃｍｏｍａｌｏ．
２１ｏ２年ｌ第鲞第８４且朔
ＣｉＪＣｉｉａｓＥｅｔｎｄｔｎ。ｒ５２１．０６Ｎ．ｈｎｌｃｎ（ｌｒｉＥｉｏ）Ａｏｉ１．０２Ｖ１．ｏ８ｎｉｃｏｃｉｌ．
Ｓｇｉｍａ公司；凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司；Ｆ抗体购自Ａｃｍ公司；ＡＰ抗体购自ＴｂｏＰＲＣｌｓｎｌｇ司；ＲＡ提取试剂盒、ｅｉａｉ公ｌｇｎ总Ｎ逆转录试剂盒购自Ｐｏｅａ公司；ＹＧＥＮ购自ＡＩ司；龄ｒｍｇＳＢＲＥＢ公６周雌性裸鼠（ａｌｃ，Ｂｂ）由北京大学医学部动物实验所提／供，饲养于ＳＦ级环境中。Ｐ二、法方

癌症细胞凋亡途径的调控及干预策略

癌症细胞凋亡途径的调控及干预策略癌症是一种严重威胁人类健康的疾病，其中一种治疗策略是通过调控细胞凋亡途径来抑制癌症细胞的生长和扩散。

本文将探讨癌症细胞凋亡途径的调控机制以及当前的干预策略。

一、癌症细胞凋亡的调控机制细胞凋亡是一种程序性细胞死亡方式，它在调节细胞生长和组织发育方面起着重要作用。

在正常细胞中，凋亡过程受到多种分子信号的调控，其中包括细胞因子、信号转导通路以及凋亡相关蛋白等。

然而，癌症细胞通过多种机制来抵制凋亡信号，从而实现其异常生长和无限增殖。

其中一个主要的机制是异常表达或缺失凋亡相关蛋白，比如Bcl-2家族蛋白。

这些蛋白通过调控线粒体的质膜通透性来影响细胞凋亡。

此外，癌症细胞还可以通过激活细胞生长和存活信号通路，如PI3K/Akt、MAPK等通路，来抑制凋亡。

二、针对癌症细胞凋亡途径的干预策略1. 药物治疗目前，许多化疗药物通过干扰癌症细胞的凋亡途径来达到抑制癌症细胞生长的目的。

例如，顺铂是一种常用的化疗药物，它通过与DNA结合，干扰DNA复制和修复过程，导致细胞凋亡。

此外，还有一些化合物可以选择性地靶向凋亡相关蛋白如Bcl-2家族蛋白，以增强凋亡信号。

2. 基因治疗基因治疗是一种利用基因工程技术来干预细胞凋亡途径的治疗方法。

例如，通过导入凋亡相关基因如p53或Bax，可以增强细胞凋亡信号。

此外，还可以利用RNA干扰技术来抑制抗凋亡蛋白的表达，从而促进凋亡。

3. 免疫治疗免疫治疗是一种利用免疫系统来干预癌症细胞凋亡途径的方法。

例如，通过激活抗肿瘤免疫细胞如T细胞或自然杀伤细胞，可以识别并消灭癌症细胞。

此外，还可以利用免疫检查点抑制剂来抑制免疫抑制信号，增强免疫监视。

4. 其他干预策略除了药物治疗、基因治疗和免疫治疗外，还有一些其他干预策略可以调控癌症细胞的凋亡途径。

例如，热疗和辐射疗法可以通过诱导DNA损伤来促进细胞凋亡。

此外，一些天然产物如黄酮类化合物和多肽等也被发现具有调控凋亡途径的潜力。

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·论著·热疗对人肺癌细胞凋亡的影响蒋东　李芳　葛锦峰　郑世营【摘要】　目的　探讨热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞生长与凋亡的影响。

方法　ＭＴＴ法检测热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞生长的抑制作用；流式细胞术观察热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞周期和凋亡的影响；ＲＴ－ＰＣＲ检测凋亡相关基因ｐ５３及Ｃａｓｅｐａｓｅ－３的表达。

结果　热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９两种细胞的生长均有抑制作用。

热疗可以明显改变人肺癌Ａ５４９细胞生长周期的分布，Ｇ０／Ｇ１期细胞明显减少；但对人肺癌Ｈ１２９９细胞生长周期的分布影响不大。

热疗能使Ａ５４９细胞ｐ５３蛋白的表达明显增强，但不能诱导Ｈ１２９９细胞ｐ５３蛋白的表达。

热疗能同时诱导Ａ５４９、Ｈ１２９９两种细胞Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达的增强，并且以Ａ５４９细胞的表达尤为明显。

结论　热疗对两种肺癌细胞的生长均有抑制作用，可以增加细胞凋亡。

ｐ５３基因可能在热疗诱导肺癌细胞凋亡和周期分布改变的过程中起主导作用。

【关键词】热疗；肺癌细胞；ｐ５３基因；凋亡【中图分类号】　Ｒ７３４【文献标识码】　Ａ【文章编号】　０２５３－３６８５（２０１２）１５－１７３７－０３Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｏｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ＪＩＡＮＧ　Ｄｏｎｇ，ＬＩ　Ｆａｎｇ，ＧＥ　Ｊｉｎｆｅｎｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ　Ｓｕｒｇｕｒｙ，Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｏｏｃｈｏｗ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｕｚｈｏｕ２１５００６，ＣＨＩＮＡ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆｈｕｍａｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｏｆ　Ａ５４９ａｎｄ　Ｈ１２９９．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｏｎＡ５４９ａｎｄ　Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＭＴＴ，ｔｈｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｏｆ　Ａ５４９ａｎｄ　Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ＦＡＣＳ，ａｎｄ　ＲＴ－ＰＣＴ　ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅｓｏｆ　ｐ５３ａｎｄ　Ｃａｓｐａｓｅ－３．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ａ５４９ａｎｄ　Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｏｆ　Ａ５４９ｃｅｌｌｓ　ｗａｓ　ｃｈａｎｇｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｗｉｔｈ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｉｎ　Ｇ０／Ｇ１ｐｈａｓｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｗｈｉｃｈ　ｏｆ　Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ　ｗａｓ　ｎｏｔ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐ５３ｉｎ　Ａ５４９ｃｅｌｌｓ　ａｆｔｅｒｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｗａｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｗｈｉｃｈ　ｉｎ　Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｃａｓｐａｓｅ－３ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎ　ｂｏｔｈ　Ａ５４９ａｎｄ　Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ　ｉｎ　Ａ５４９ｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｈａｓｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｃｉｒｃｌｅ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｉｎｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ，ｉｎｗｈｉｃｈ　ｐ５３ｇｅｎｅ　ｍａｙ　ｔａｋｅ　ａ　ｒｏｌｅ．【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】Ｈｙｐｅｒｔｈｅｒｍｉａ；Ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ；ｐ５３ｇｅｎｅ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ａｕｇｕｓｔ　２０１２，３８（１５）：１７３７－１７３９．］基金项目：江苏省社会发展重大课题资助项目（ＢＳ２００５０４７）作者单位：２１５００６　江苏省，苏州大学附属第一医院心胸外科（蒋东、葛锦峰、郑世营）；苏州大学基础医学与生命科学学院人体解剖与组织胚胎系（李芳）通讯作者：郑世营　Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｙｚｈｅｎｇ８８＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ近年来肿瘤热疗已成为继手术、化疗、放疗、生物治疗之后的对肿瘤的第五类有效治疗手段。

肺癌目前的发病率和死亡率在我国男性中较高，约６５％的肺癌患者确诊时已属晚期，失去手术机会，因而包括热疗在内的综合治疗在晚期肺癌的治疗中占有重要的地位。

本研究以我们培养的Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞为实验对象，主要观察不同温度加热处理对ｐ５３表达情况不同的两种肺癌细胞生长、细胞周期和凋亡的影响，探讨热疗促肺癌细胞凋亡的机制。

材料与方法一、材料人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞株由苏州大学分子生物实验室提供。

ＲＰＭＩ１６４０培养基（Ｇｉｂｃｏ），小牛血清（杭州四季青），逆转录试剂盒、Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶（立陶宛Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司），引物由南京金思特科技有限公司合成。

二、方法１．细胞培养　人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞常规在含１０％小牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养液中，３７．０℃、５％ＣＯ２培养箱中培养，待细胞生长汇合达８５％时，用０．２５％胰酶消化，按１∶３传代。

实验时选取对数生长期细胞。

·７３７１·江苏医药２０１２年８月第３８卷第１５期　Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ａｕｇｕｓｔ　２０１２，Ｖｏｌ　３８，Ｎｏ．１５２．加温实验　实验分为两组。

对照组：将Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞装入离心管，３７℃水浴放置１ｈ；实验组：将Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞装入离心管，分别于４０℃、４２℃、４４℃水浴中加热１ｈ。

３．ＭＴＴ法检测细胞生长　将上述处理的肺癌细胞分别制成５×１０５／ｍｌ单细胞悬液，接种于９６孔板，每孔１００μｌ。

培养４８ｈ后，加ＭＴＴ　１００μｌ后继续孵育４ｈ，每孔加１００μｌ　ＳＤＳ－ＨＣｌ终止反应。

于３７℃存放过夜，测Ａ５７０值。

抑制率＝（１－实验组平均Ａ值／阴性对照组平均Ａ值）×１００％。

４．流式细胞术检测细胞周期及凋亡　将上述肺癌细胞离心后，新鲜培养液打匀继续３７℃、５％ＣＯ２培养２４ｈ，收集细胞，ＰＢＳ清洗两次后７０％乙醇固定，送检测细胞周期。

收集细胞，调整待测细胞浓度为２×１０６／ｍｌ，２００μｌ细胞悬液加１ｍｌ冷ＰＢＳ，１０００ｒ／ｍｉｎ　４℃离心１０ｍｉｎ，弃上清液，重复两遍，将细胞重悬于２００μｌ标记缓冲液，加１０μｌ　ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ，混匀，避光室温反应１５ｍｉｎ，再加３００μｌ标记缓冲液，立刻上机检测。

５．ＲＴ－ＰＣＲ检测ｐ５３及半胱天冬氨酸蛋白酶３（Ｃａｓｐａｓｅ－３）的表达　按Ｔｒｉｚｏｌ说明书常规提取处理后人肺癌Ａ５４９，Ｈ１２９９细胞株总ＲＮＡ，按ＲＴ－ＰＣＲ一步法试剂盒说明书操作。

Ｃａｓｐａｓｅ－３上游引物序列：５′－ＣＴＣＧＧＴＣＴＧＧＴＡＣＡＧＡＴＧ－ＴＣＧＡＴＧ－３′，下游引物序列：５′－ＧＧＴＴＡＡＣ－ＣＣＧＧＧＴＡＡＧＡＡＴＧＴＧＣＡ－３′；ｐ５３上游引物序列：５′－ＧＣＴＡＣＧＧＴＴＴＣＣＧＴＣＴＧＧＧＣＴＴＣＴ－３′，下游引物序列：５′－ＧＡＧＴＧＡＧＧＴＣＧＧＴＧＧＡＣＴ－ＴＣＡＧＧＴ－３′。

反应条件：９４℃、５ｍｉｎ预变性，然后进行下列循环：９４℃、４５ｓ，５８℃、４５ｓ，７２℃、１ｍｉｎ，共３０个循环，最后７２℃下延伸１０ｍｉｎ。

以ＧＡＰＤＨ为内参照。

ＰＣＲ反应产物置１％琼脂糖凝胶电泳。

三、统计学处理使用ＳＰＳＳ　１３．０统计软件，计量数据用均数±标准差（珚ｘ±ｓ）表示，组间均数比较采用方差分析，组间两两比较采用ｑ检验，率的比较采用卡方检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。

结果一、ＭＴＴ法检测加热对Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞的抑制率与３７℃时比较，Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞分别在加热至４０℃、４２℃、４４℃后，两株细胞的Ａ５７０值明显降低，抑制率明显升高（Ｐ＜０．０５）。

与４０℃、４２℃时比较，两株细胞在加热至４４℃后，Ａ５７０值明显降低，抑制率明显升高（Ｐ＜０．０５）。

加热温度越高抑制程度越强（表１）。

表１　加热后肺癌细胞的Ａ５７０值和抑制率（珚ｘ±ｓ，ｎ＝４）温度（℃）Ａ５４９细胞Ａ５７０值抑制率（％）Ｈ１２９９细胞Ａ５７０值抑制率（％）３７℃０．４４５±０．０２４　０　０．４５０±０．０２３　０４０℃０．３１６±０．０３６ａ２９．０ａ０．３７３±０．０２１ａ１７．１ａ４２℃０．２３３±０．０１８ａ４７．６ａ０．３０５±０．０１９ａ３２．３ａ４４℃０．０９６±０．０２５ａｂ　７８．４ａｂ　０．１３８±０．０１７ａｂ　６９．３ａｂ与３７℃比较，ａＰ＜０．０５　与４０℃、４２℃比较，ｂ　Ｐ＜０．０５二、流式细胞仪检测加热对肺癌细胞周期和调亡率的影响与３７℃时比较，Ａ５４９细胞在加热至４０℃、４２℃、４４℃后，Ｇ１期细胞减少，Ｓ期细胞增多，细胞调亡率明显增加（Ｐ＜０．０５）；与４０℃、４４℃时比较，加热至４２℃时细胞调亡率最高（Ｐ＜０．０５）（表２）。

与３７℃时比较，Ｈ１２９９细胞加热至４０℃、４２℃、４４℃后，细胞周期比例变化不明显，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），但细胞调亡率明显增加（Ｐ＜０．０５）；与４０℃、４４℃时比较，在细胞加热至４２℃时，其凋亡率最高（Ｐ＜０．０５）（表３）。

表２　加热后Ａ５４９细胞的周期及凋亡率变化（珚ｘ±ｓ，ｎ＝４）温度Ｇ０／Ｇ１（％）Ｓ（％）Ｇ２／Ｍ（％）凋亡率（％）３７℃６７．８４２±１．４６３　２０．３９３±１．５６４　１１．７６８±２．８７３　０．５０５±０．１０９４０℃６２．１７３±１．３２４ａ２６．８９４±０．９６７ａ１０．９３３±１．３１７　５．８１２±１．３５６ａ４２℃５２．８７１±０．５３９ａｂ　３０．０９６±０．７８６ａｂ　１７．０３２±０．２７３ａ１４．２４９±０．４９９ａｂ４４℃５４．９８３±１．２１７ａ２７．７３０±０．７６４ａ１７．２８７±０．４６３ａ１０．３１５±１．１６２ａ与３７℃比较，ａＰ＜０．０５　与４０℃、４４℃比较，ｂ　Ｐ＜０．０５表３　加热后Ｈ１２９９细胞的周期及凋亡率变化（珚ｘ±ｓ，ｎ＝４）温度Ｇ０／Ｇ１（％）Ｓ（％）Ｇ２／Ｍ（％）凋亡率（％）３７℃６４．１９６±１．３２４　２４．５８４±２．３５７　１１．２２０±１．６７０　０．５９３±０．２４７４０℃６４．７４３±０．９７９　２５．１７６±１．６８７　１０．０８１±２．６３３　４．９１８±１．３２６ａ４２℃６２．９８５±２．３６４　２５．３７９±１．５５９　１１．６３６±２．０３３　１０．４５４±０．４７３ａｂ４４℃６３．６２３±１．６５７　２５．７６４±２．０４７　１０．６１３±１．６７５　９．２８５±０．３２１ａ与３７℃比较，ａＰ＜０．０５　与４０℃、４４℃比较，ｂ　Ｐ＜０．０５三、ＰＴ－ＰＣＲ检测加热对肺癌细胞ｐ５３及Ｃａｓｐａｓｅ－３表达的影响Ａ５４９细胞在加热处理后，ｐ５３蛋白表达明显增强，并且以在４２℃加热时其表达最强。