肺癌组织凋亡相关基因的表达意义(一)

肺癌组织凋亡相关基因的表达意义(一)

作者：王述民，马颖艳，程庆书

【关键词】肺肿瘤；癌基因；TUNEL；免疫组织化学；基因表达

【Abstract】AIM:TodiscusstheexpressionsoftheapoptosisrelatedoncogenesFas,Bcl2,Baxandp53inlungcancertis suesandtheirsignificance,inordertoprovidethetheoreticalbasisforthemolecularbiologicalstudy.ME THODS：Theexpressionsofp53,Bcl2,BaxandFasproteinsin57casesoflungcancerweredetectedbytheimmuno histochemicaltechniqueandTUNEL.RESULTS：TheexpressionratesofBcl2,p53,Bax,Fasproteinsinlungcancertissueswere33%,69%,70%and28%,res pectively,andtheexpressionrateofeachapoptosisrelatedoncogenewasdifferentinlungcancertissues ofthedifferentpathologictypes.Therewasnodefiniterelationshipbetweenthelymphnodemetastasis andtheapoptosisrelatedoncogenes

（P0.05）.Withtherisingofthepathologicstagingofthetumor,theexpressionsofp53andFasproteinsi ncreased,whiletheexpressionofBcl2decreased.Thereseemedtobenodefiniterelationshipbetweent heexpressionofBaxproteinandthepathologicalstaging（P0.05）.CONCLUSION：Therearetheapoptosisrelatedoncogeneexpressionsinlungcancertissues,andtheirexpressiondegree isrelatedwiththeirpathologicaltypes.Theoverexpressionsofp53andFasproteinsmaybeassociatedwit hthebadprognosisoflungcancer.

【Keywords】lungneoplasms;oncogenes;TUNEL;immunohistochemistry;geneexpression

【摘要】目的：探讨肺癌组织中凋亡相关基因Fas，Bax，p53，Bcl2蛋白的表达意义，为进行肺癌的分子生物学研究提供理论依据.方法：应用原位末端DNA片段标记法（TUNEL），结合免疫组化技术对57例肺癌切除标本进行Fas，Bax，p53及Bcl2蛋白检测.结果：在肺癌组织中凋亡相关基因阳性率分别为：Fas28%，Bax70%，p5369%，Bcl233%，各基因在肺癌不同病理类型中表达率亦不同，且肺癌的淋巴结转移与调亡相关基因表达无明显关系（P0.05）.其中，p53，Fas随肺癌病理分期的升高而增加，Bcl2则随病理分期的升高而减少，而Bax 则与病理分期无明显关系(P0.05).结论：肺癌组织有调亡相关基因表达，其表达程度与肺癌的病理类型有关，p53,Fas表达可能与不良预后有关.

【关键词】肺肿瘤；癌基因；TUNEL；免疫组织化学；基因表达

肺癌的发病率逐年升高，从分子水平进一步阐明肺癌的发生和发展，对其防治具有一定的意义.Fas，Bax，p53及Bcl2均为凋亡相关基因，在肺癌组织中的表达情况报道尚少.我们应用原位末端DNA片段标记法（TUNEL），结合免疫组化技术，检测了57例肺癌石蜡包埋组织中Fas，Bax，p53，Bcl2蛋白的表达情况，探讨其彼此之间的关系及其与临床分期、预后的关系，为进一步进行肺癌的凋亡研究提供理论依据.

1材料和方法

1.1材料第四军医大学唐都医院胸外科手术切除标本57（男43，女14）例，年龄36~73（53.4±1.8）岁.其中小细胞肺癌14例，腺癌21例（低分化腺癌11例，高分化腺癌10例），鳞癌22例（低分化鳞癌10例，高分化鳞癌12例）.根据手术病理诊断按国际抗癌联盟分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期13例，Ⅲa期17例，Ⅳb期12例，Ⅴ期10例.SABC试剂盒购自广州华美公司，兔抗Fas多克隆抗体，鼠抗Bcl2mAb，兔抗Bax多克隆抗体及p53mAb均购自Doka公司，TUNEL试剂盒购自Sigma公司.常规100g/L甲醛固定，石蜡包埋，选取典型病变蜡块作为研究对象.肺癌组织学类型按WHO标准分类〔1〕.

1.2方法Fas，Bcl2，Bax，p53蛋白的表达均采用肺癌组织石蜡切片免疫组化染色SABC法〔2〕.TUNEL染色按试剂盒说明操作.光镜下从染色强度和阳性细胞比例两方面评价染色结果.

标本无阳性反应细胞，或背景同空白对照为阴性(-)，标本阳性细胞呈淡棕黄色或深棕色.

统计学方法：统计阳性标本例数，计数阳性率，率的比较用χ2检验，P0.05为有统计学差异. 2结果

肺癌组织Fas表达阳性28%(图1A)，其中鳞癌43%阳性，腺癌21%阳性，小细胞肺癌21%阳性.肺癌Bcl233%阳性表达(图1B)，其中小细胞肺癌71%，腺癌21%，鳞癌23%.小细胞肺癌Bcl2阳性表达率明显高于腺癌和鳞癌(P0.01)，而小细胞肺癌的凋亡细胞数(3.7±0.7)仅仅略低于腺癌的(4.7±0.6)和鳞癌的(4.3±0.8).肺癌Bax阳性70%(图1C)，Bax在各型肺癌中均呈现高表达率，虽然表达程度有所差异，但无统计学意义.癌旁组织中也有Bax的阳性表达.低Bcl2/Bax 的组织中凋亡率高于Bcl2/Bax较高的组织(P0.05).肺癌p53阳性69%(图1D)，其中，鳞癌68%，腺癌67%，小细胞肺癌64%，在小细胞肺癌和非小细胞肺癌中，p53阳性组凋亡细胞略低于p53阴性组，但两者之间均无显著性差异.肺癌的淋巴结转移与Fas，Bcl2，Bax，p53表达无明显关系(P>0.05)，在肺鳞癌和腺癌中，p53蛋白过度表达随病理分期的升高而增加；Bcl2过度表达则正相反，随病理分期的升高而降低，Fas过度表达亦随病理分期的升高而增加，而Bax表达与病理分期无明显关系(P>0.05，表1).

TUNEL原位末端标记荧光法见肺癌组织内散在点状荧光（图2），显示散在分布的凋亡细胞.未出现凋亡的细胞荧光呈阴性.