实验一 薄层色谱及纸色谱

【实验原理】
薄层色谱和纸色谱是检识天然药物化学成分的常用方法。薄层色谱一般情况下是吸附色谱，适用于微量样品的分离、鉴定，天然药物的定性、定量分析，化合物的纯度检查，寻找柱色谱分离的最佳条件及检识柱色谱分离结果等。
纸色谱是一种以滤纸为支持剂，滤纸上吸着的水分为固定相的分配色谱，在分离鉴定水溶性化合物时应用较多。其原理是利用化合物在固定相和移动相中分配系数的不同而达到分离。
实验一 薄层色谱及纸色谱
【实验目的】
1.掌握制备硅胶和氧化铝薄层板的制备方法。
2.掌握薄层色谱法和纸色谱法的操作技术。
课型：实验课 课时：4学时
【实验材料】
硅胶（或硅胶G）粉、0.5%～0.8%羧甲基纤维素钠水溶液、2%罗丹明B与2%二甲基黄的乙醇混合溶液、2%罗丹明B乙醇溶液、2%二甲基黄乙醇溶液、95%乙醇、精氨酸和脯氨酸的混合溶液、精氨酸溶液、脯氨酸溶液、正丁醇－醋酸－水（4∶1∶5上层）、0.2%茚三酮溶液、薄层板（6cm×12cm）、中速色谱滤纸、色谱缸、色谱槽。
2.简述纸色谱法的原理及操作步骤。色谱滤纸在展开前为什么要进行饱和？
【实验内容】
一、薄层色谱
（一）硅胶板的制备
（二）点样
（三）展开
（四）Rf值的计算方法
来自百度文库二、纸色谱
（一）滤纸的选择
（二）点样
（三）展开
（四）显色
【实验说明及注意事项】
1.铺制薄层板用的羧甲基纤维素钠溶液的浓度为0.5%～0.8%，一般预先配制，静置，取其上清液或用棉花过滤后应用，则所制得的薄层板表面比较光滑细腻。
5.展开时，薄层板和色谱滤纸的两边不能与展开容器接触，起始线不能浸在移动相中，展开用的容器应密闭以及选择灵敏度高的显色剂。
6.移动相（正丁醇－醋酸－水）在放置过程中会发生酯化反应，故应提前配制，使其充分反应完全，以免影响分离效果。
【思考题】
1.简述薄层色谱法分离混合物各成分的原理及操作步骤，并说明在操作中应注意的问题。
2.薄层色谱制板前，应将薄层板洗净并干燥，待吸附剂与黏合剂混合均匀后，立即铺板，振荡均匀后水平放置，振荡时间不宜过长。
3.滤纸的裁剪应注意其纹路的方向应与展开方向垂直，滤纸应保持平整、洁净，不能折叠和污染。
4.点样时，应防止污染薄层板面和滤纸，点样应少量多次（一般为2～3次），且样点的直径不可过大，否则斑点过于扩散，影响分离效果。