毛细管电泳法的特点和CE-MS的构造
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2.毛细管电泳的缺点
(1) 由于进样量少,因而制备能力差; (2) 由于毛细管直径小,使光路太短, 用一些检测方法(如紫外吸收光谱法)时, 灵敏度较低; (3) 电渗会因样品组成而变化,进而影响 分离重现性。
3.与传统电泳技术相比,具备的特点
(1)分离效率高 (2)分离模式多:毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、胶 束电动毛细管色谱、毛细管等电聚焦 、毛细管等速电泳等。 (3)应用范围广:既能分析有机和无机小分子,又能分析 多肽和蛋白质大分子;既能用于带电离子的分离,又能用于 中性分子的测定。 (4)最小检出限低 (5)分析成本低 (6)样品用量少 (7)仪器简单 (8)环境友好
来自百度文库
不适合
毛细管电泳(CE)与质谱(MS) 联用技术(CE-MS)
能快速分离微体积样品中的化合物,及其高效分离 和基于分子量鉴定化合物的能力,使它成为分析复 杂生物样品的一种非常有价值的方法。 另外,在各种广泛的诸如毛细管区域电泳,毛细管 等电点调焦,和在线等速电泳等技术已经和MS结 合。这些优点使得CE-MS在分析复杂生物混合物中 广泛使用。CE-MS已经成功地广泛应用于复杂化合 物地分析包括氨基酸,蛋白质消化,蛋白质混合物, 单个细胞,寡核苷酸,和各种小分子相关的制药工 业。
毛细管电泳法的特点
1.毛细管电泳具备如下优点:
(1) 高效 塔板数目在105-106 片/m 间,当采用CGE 时 毛细管电泳色谱图,塔板数目可达107 片/m 以上; (2) 快速 一般在十几分钟内完成分离; (3) 微量 进样所需的样品体积为nL 级; (4) 多模式 可根据需要选用不同的分离模式且仅需一 台仪器; (5) 经济 实验消耗不过几毫升缓冲溶液,维持费用很 低; (6) 自动 CE 是目前自动化程度较高的分离方法。
CE-MS的结构
电喷雾技术
用来产生MS分析的所需的离子技术,特别适 用于与大分子的质谱分析,采用ESI,大分子 在离子化过程中不会碎裂。
电喷雾技术的优点
接口技术
接口技术是实现CE-MS 联用的关键所在。CE-MS 联用分为在线联用和离线联用。CE-MS离线联用的 关键是对已分离样品的有效收集,并不涉及真正意义 上的联用接口技术;而且与离线联用相比, CE-MS在 线联用具有样品损失少、自动化程度高、分析速度 快等优点,其应用要比离线联用广泛得多。CE-MS 在线联用需要设计合适的接口,能够将已分离的样品 全部转移到质谱仪中,同时实现样品快速高效的离子 化,同时接口对技术要求很高。
CE-ESI-MS接口主要分为鞘液接口和 无鞘液接口两种。
鞘液接口技术
鞘液接口技术是最早出现,其优点在于通过提高样 品流速使得喷雾更加稳定,有利于形成稳定的电流回 路,同时可改变CE运行缓冲液的组成, 使其满足ESI 源的检测要求。主要有低流速( low-flow )鞘液接口, 多通道的CE-ESI-MS联用鞘液接口。Chang等设计 了低流速鞘液接口,他们将毛细管末端套在装有鞘液 的离心管中,鞘液低速流出与CE 流出物混合,离心管 中插入一铂丝作为电极以构成电流回路; 低流速可 以降低鞘液的稀释作用,同时铂丝构成电流回路可以 避免因流速低所造成的断流。
无鞘液接口技术
无鞘液接口技术由于不存在任何稀释效应而 逐渐受到研究者的青睐。 液接型接口是无鞘液接口技术中比较特别的 一种。与其他无鞘液接口相比, 液接型接口可 以通过液接液体来改变CE运行缓冲液的组成, 使其满足电喷雾离子源的要求。与鞘液接口 相比, 液接型接口不存在鞘液的稀释作用,但 这种接口会存在液体死体积问题。
芯片CE与ESI-MS联用的方法主要分 为两类:
一类是将ESI源和CE 微芯片整合在一起, 另 一类是把毛细管喷雾器附加在CE 微芯片内。 后者的应用更为广泛, 其优势在于更有利于装 置的微型化。
4.与高效液相色谱相比,具备的特点
毛细管电泳 流体流动形式 组分分子移动 组分分子的扩散 组分分离 平流,峰展宽小 高效液相色谱 层流,峰展宽大
电渗流和电泳流的 有压力流带动 共同作用 扩散小,不存在传 有扩散,存在传质阻 质阻力,柱效高 力,柱效低 依据迁移速率的差 依据分配系数的差异 异
生物大分子的分离 适合
CE-MS的分类
CE-MS在线结合的仪器主要包括三个 部分:即CE系统,CE-MS接口和MS 检测器。
目前,成功地应用于CE-MS接口中的离子 化技术有连续流-快原子轰击(CF-FAB)、 离子喷雾(IS)、电喷雾(ESI)、大气压化 学电离、基质辅助激光解吸离子化和等离子 体解吸离子化技术等。其中电喷雾电离是最 常用、最成熟的技术。