QiaGen粪便DNA提取试剂盒中文说明书
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注意:1.准备好70℃水浴锅。
2.所有的离心操作都在室温下(15-25℃),14000转/分钟
3.用BufferAL和InhibitEXBuffer溶解任何沉淀都要加热和混匀。
4.Buffer AW1和Buffer AW2都加乙醇。
5.使用之前混合所有缓冲液。
1.称取200ul样品在2ml的离心管中,离心管放在冰上。
2.每个样品添加1mlInhibitEXBuffer,然后持续旋涡混合1min或者直到样品混
合均匀。
3.在70℃加热悬浮液5min(难以溶解的细胞溶解温度可以提高到95℃),然后
旋涡混合15s。
4.离心样品1min析出沉淀。
5.另取1.5ml离心管加15ulProteinaseK。
6.移取200ul步骤4的上清液至1.5ml含ProteinaseK的离心管中。
7.然后添加200ulBufferAL,旋涡混合15s。(注意:不要直接添加ProteinaseK
到BufferAL中,样品和BufferAL必须充分混合成均匀混合液)
8.70℃孵育10min。
9.添加200ul乙醇到溶解液中,旋涡混合。
10.小心移取600ul步骤9的裂解液到QIAamp旋转柱中,盖上盖子,离心1min。
把QIAamp旋转柱放到一个新的2ml的收集管中,丢掉含有滤液的管。11.小心打开QIAamp旋转柱,添加500ulBufferAW1,离心1min。把QIAamp旋
转柱放到一个新的2ml收集管中,丢掉包含滤液的收集管。
12.小心打开QIAamp旋转柱,添加500ulBufferAW2,离心3min,丢掉包含滤
液的收集管。
13.把QIAamp旋转柱放到一个新的2ml的收集管中,丢掉旧的含有滤液的收集
管,离心3min。
14.把QIAamp旋转柱放到一个新的1.5ml的离心管,直接移取200ulBufferATE
到QIAamp薄膜上。室温孵育1min,然后离心1min洗提DNA。通过UV吸收度判断DNA纯度,使用BufferATE做空白设计避免结果错误。