中国药科大学毒理学期末重点考研药理复试重点

毒理学上半部分总结

目前还存在以下几点需要补充和细化的地方：

⑴代谢活化的两相

⑵癌基因的分类，具体机制

⑶细胞恶性转化后的特点

第十六章药物致突变作用的研究及其试验方法

一、Ames试验

（一）原理

组氨酸缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌在缺乏组氨酸的培养基上不能生长，但在加有致突变原的培养基

上培养，可产生回复突变，恢复合成组氨酸的能力成为野生型，能在缺乏组氨酸的的培养基上生

长成为菌落，通过计数菌落出现的数目就可以估算药物诱变性的强弱。

正向突变

鼠伤寒沙门菌组氨酸+ 鼠伤寒沙门菌组氨酸-

（野生型）回复突变（突变型、营养缺陷型）

S9混合液

受试物

（二）常用试验菌株

菌株名称突变基因附加突变突变类型

修复LPS R因子

TA97、TA98 hisD △uvrB rfa PKM101 移码突变TA100 hisG △uvrB rfa PKM101 碱基取代TA102 hisG △uvrB rfa PKM101 移码突变、碱基取代注：hisD,组氨酸脱氢酶的结构基因；hisG，磷酸核糖ATP

合成酶的基因，TA100和TA98可推荐用于大多数致突变物和致癌物的检测

（三）计量设计

西药＜＝5mg/皿，中药可超过5mg/皿，最低剂量1ug/皿或0.1ug/皿，至少五种不同剂量（药物不溶于水可用DMSO或乙醇作溶剂）

（四）对照组

用溶媒作阴性对照；已知致突变作阳性对照；使用间接诱变物作对照时，注意平行设加S9与不加S9的对照。

（五）代谢活化：S9（经诱导剂处理过的肝脏微粒体酶）

（六）试验方法：渗入法；点试法

（七）结果判断

1、渗入法：当药物浓度达到5mg/皿仍为阴性者，可以认为是阴性。

2、点试法：凡在滤纸片周围长出一圈密集的回变菌落，该药物即为致突变物质，如只在平皿上出现少数散在的自发回变菌落，则为阴性。

二、哺乳动物培养细胞染色体畸变试验（对象，选材，剂量，实验设计（理解），结果判定，公式（考试不给））

（一）动物

1、细胞：中国仓鼠肺细胞（CHL）

2、剂量：至少三种不同剂量，高剂量以50%细胞生长抑制浓度，但最高不要超过10mmol/L，

中低剂量采用倍量稀释法。

3、代谢活化：S9（哺乳动物肝微粒体酶）进行体外代谢活化。

4、药物作用时间：非活化组分别作用24和28小时收获细胞，活化组作用6小时以上。

5、标本制作时间：分别在24和48h收获细胞制作标本，活化组可省略48h时间点。

6、对照：空白对照、阳性对照、溶剂对照和S9对照。

1 7、镜检：每种浓度至少观察100个中期分裂相细胞的染色体结构。

8、结果判定

染色体畸变率（%）= 染色体畸变总数/分析染色体的总数＊100%

细胞畸变率（%）=有染色体畸变的细胞数/分析染色体的细胞总数＊100%

畸变率<5%为阴性（-）；畸变率＞5%为可疑（+）；畸变率＞10%为弱阳性（++）；畸变率

＞20%为中度阳性；畸变率＞50%为强阳性；若某一测试点呈现可重复的并有统计学意义

的增加也为阳性。

（二）人体外周血淋巴细胞染色体畸变试验

1、剂量：同动物

2、对照：溶媒作阴性对照，已知染色体断裂剂作阳性对照。

3、外周血的采集与培养，静脉2-3ml，加抗凝剂，培养加肝微粒体酶，药物处理24h 或48h终止培养前

加秋水仙素获得更多中期细胞

4、培养细胞的处理，离心，固定

5、标本制作

6、染色，Giemsa染色20min

7、镜检

8、结果判定

三、啮齿动物微核试验（实验过程，剂量选择，步骤，镜检，如何分辨细胞）

（一）原理

骨髓细胞经致突变作用，染色体可发生畸变以致断裂，其断裂的碎片在分裂间期留在子代细

胞内形成规则的一个或几个圆形或椭圆形结构的小块物质，由于它比普通细胞核要小，

称之微核。

但骨髓细胞中缺乏代谢活化酶系，对间接诱变物反应较差。有核细胞胞浆少，正常核叶极难与微

粒相辨认，在无核的红细胞中才易于辨认。微核检出率与染色体畸变率之间有明显相关性。

（二）剂量：至少三种剂量，最高剂量以1/2LD50为基准，低剂量结合药效学及临床拟用剂量，

再按一定比例插入中间剂量。

（三）实验过程

NIH小鼠，每组10只性成熟动物（雌雄各半）或至少6只性成熟雄性动物

1、给药：一组生理盐水，一组环磷酰胺腹腔注射。

2、涂片：24h后处死，解剖取胸骨，骨髓挤于有一滴小牛血清的载玻片上，推片。

3、固定：甲醇固定15min

4、染色：Giemsa染液

5、观察计数：典型的微核呈圆形，边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，用Giemsa染色后呈紫红或蓝紫色。多染红细胞PCE呈灰蓝色，正染红细胞呈桔黄色。计数1000个PCE 中含有微核的PCE数。如不易区分，记录总的微核率即可。

四、果蝇伴性隐性致死试验（实验设计原理，结果鉴定）

（一）原理

亲代雄性果蝇接触药物后X染色体出现隐性致死突变，则F1代雌性果蝇中不表达，而F2代雄性果蝇数中因有一半接受了这个已发生突变的X染色体，结果F2代雄性果蝇比雌性果蝇数目少了一半。至少两个剂量：最高剂量为1/2LD50、低剂量为1/4LD50，无毒物最大给药量为5%

（二）结果判定

致死突变率%=致死管数/受试染色体数*100%

1、致死突变率大于自然突变率的2倍，并有剂量反应关系时为阳性；