蛋白质和多肽提取分离
HPLC色谱柱对蛋白质和多肽的分析介绍
分析也可以使用。
水系 SEC(GFC)用色谱柱 KW400 系列蛋白质的校正曲线如图(图 6)。
图 6：KW400-4F 系列的校正曲线
水系 SEC(GFC)用的高性能半微量色谱柱 KW402.5-4F 和早期产品 PROTEIN KW-802.5 分别 对蛋白质进行了分析(Fig. 1-1-6)。 KW400-4F 系列的理论塔板数与早期产品(KW-800 系列)相比 提高了约 1.5 倍。另外灵敏度与早期产品相比提高了 3 到 4 倍，适合高性能、高灵敏度的分析。
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7
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[KW400 系列（硅胶系）]
Shodex KW400 系列是 KW-800 高性能化的半微量色谱柱。粒径缩小到 3μm，实现了理论塔
板数和灵敏度的同时提高。还有，KW400-4F 系列比早期产品（PRPTEIN KW-800 系列)孔径大，对
早期产品无法测定的分子量在 1,000,000 以上的（蛋白质）高分子能够进行分析。对于蛋白质的全体
2. HPLC 对蛋白质・多肽的分离
建立分离精制计划，首先要明确对象试料的性质，然后选择最适合的分离模式。考虑选择什么
样的分离模式时，首先要分析一下试料的性质。
①目的成分和其它成分的分子量相差很大时 → 选择尺寸排阻模式
②目的成分和其它成分的等电点相差 1 以上时 → 离子交换模式
③目的成分和其它成分的疏水性有差别时
反逆相相
MW
Low
High
RP18-413, RP18-613 DE-413, DE-613 ODP-50, ODP-40 C8P-50 C4P-50 RP18-415
2
图３：Shodex 色谱柱的选择方法（离子交换、疏水性色谱、复合模式、亲和模式）
生物化学02第二章 多肽与蛋白质
Glu-Cys-Gly SH
Glu-Cys-Gly S S
Glu-Cys-Gly
谷胱甘肽的生理功用：
• 解毒作用：与毒物或药物结合，消除其 毒性作用；生物转化。
• 参与氧化还原反应：作为重要的还原剂， 参与体内多种氧化还原反应；
• 保护巯基酶的活性：使巯基酶的活性基 团-SH维持还原状态；
• 维持红细胞膜结构的稳定：消除氧化剂 对红细胞膜结构的破坏作用。
锌指结构是一个常见的模体。
由一个α-螺旋和两个反向平行的β-折迭组 成，形似手指。
Ｎ－端两个半胱氨酸，Ｃ－端两个组氨酸， 此四个氨基酸残基在空间上构成一个洞穴， 容纳一个锌，具结合锌离子功能。
含锌指结构的蛋白质都可与ＤＮＡ或ＲＮＡ 结合。
锌指结构 (折迭-折迭模序)
亮氨酸拉链结构：
• 见于真核生物DNA结合蛋白质的C端，与 癌基因表达调控有关。
第二章
多肽与蛋白质
Peptides and Proteins
1833年，Payen和Persoz分离出淀粉酶。 1864年，Hoppe-Seyler从血液分离出血红蛋白，
并将其制成结晶。 19世纪末，Fischer证明蛋白质是由氨基酸组成的，
并将氨基酸合成了多种短肽 。 1938年，德国化学家Gerardus J. Mulder引用
2. 蛋白质具有重要的生物学功能
1）作为生物催化剂（酶） 2）代谢调节作用 3）免疫保护作用 4）物质的转运和存储 5）运动与支持作用 6）参与细胞间信息传递
3. 氧化供能
第一节
肽和蛋白质的一级结构
Primary Structure of Peptides and Proteins
一、肽和蛋白质是由氨基酸组成的多聚体
宜用离子交换色谱法分离的化学成分
宜用离子交换色谱法分离的化学成分
离子交换色谱法可以用于分离各种具有离子性质的化合物。
以下是常见的可以宜用离子交换色谱法分离的化学成分：
1. 离子：离子交换色谱法主要用于分离离子性物质，如无机离子（如阳离子和阴离子）、有机离子（如氨基酸、多肽、有机酸和有机碱）等。
2. 酸和碱：离子交换色谱法可以用于分离含有酸基团或碱基团的化合物，如有机酸、有机碱和含有羧酸基团或胺基团的化合物。
3. 蛋白质和多肽：离子交换色谱法在生物化学领域中常用于蛋白质和多肽的分离和纯化。
通过调节溶液pH值和离子浓度，
可以实现对不同离子性蛋白质和多肽的选择性吸附和洗脱。
4. 配位化合物：离子交换色谱法也可以用于分离含有配位基团的化合物，如金属离子配合物、配位聚合物等。
5. 药物和天然产物：离子交换色谱法可以用于分离和纯化药物和天然产物，如植物次生代谢产物、天然产物中的草酸和多羟基酸等。
需要注意的是，离子交换色谱法在实际应用中需要根据样品的特性和需求，选择合适的离子交换剂（固定相）和流动相条件，以实现有效的分离和纯化。
多肽的分离纯化方法
多肽的分离纯化方法一、引言多肽是由氨基酸组成的生物大分子，其具有广泛的生物学功能和应用场景。
多肽的研究需要对其进行分离纯化，以获取高纯度的多肽样品。
本文将介绍多肽的分离纯化方法。
二、多肽的提取1. 细胞裂解法：将细胞裂解后，通过离心等方法去除细胞碎片和脂质等杂质，得到含有目标多肽的上清液。
2. 酸性水解法：将含有目标多肽的蛋白质样品加入酸性溶液中，在适当温度下进行水解反应，得到含有目标多肽的水解液。
三、分离方法1. 层析法：利用不同化学性质或大小形状等差异对混合物进行分离。
包括凝胶层析、离子交换层析、亲和层析等。
2. 电泳法：利用电场作用下不同电荷或大小形状等差异对混合物进行分离。
包括SDS-PAGE、IEF等。
3. 薄层色谱法：将混合物均匀地涂在薄层色谱板上，通过不同的溶剂系统进行分离。
4. 超滤法：利用超滤膜对混合物进行筛选，根据分子量和形状等差异进行分离。
四、纯化方法1. 透析法：将混合物放入透析袋中，在适当条件下通过半透膜进行渗透扩散，去除杂质，得到目标多肽。
2. 再结晶法：通过溶液浓缩、结晶等步骤得到高纯度的多肽样品。
3. 活性剂法：利用表面活性剂或有机溶剂等对混合物进行解聚和去除杂质。
五、检测方法1. 比色法：利用多肽与某些化学试剂发生反应产生显色物质来检测多肽样品。
2. 质谱法：通过质谱仪对多肽样品进行检测，得到其分子量和组成信息。
3. 免疫学方法：利用特异性抗体对多肽样品进行检测。
六、结论多肽的分离纯化方法有很多种，选择合适的方法需要考虑到目标多肽的特性以及实验室条件等因素。
在分离纯化过程中，需要注意对样品的保护和操作的规范性，以获取高质量的多肽样品。
蛋白质、多肽提取分离
蛋白质、多肽提取分离1、分离方法采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。
对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。
这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等。
1.1 高效液相色谱（HPLC）HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的HPLC应用与其它化合物相比，在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是HPLC能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。
因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作。
如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。
1．1．1 反相高效液相色谱（RP-HPLC）结果与保留值之间的关系：利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。
为了获得一系列的保留系数，Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析，得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系，其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的肽中，可减少在柱上的保留时间；在10～60氨基酸组成的肽中，非极性氨基酸较多也可减少在柱上的保留时间，而含5～25个氨基酸的小肽中，非极性氨基酸增加可延长在柱上的保留时间。
同时有不少文献报道了肽链长度、氨基酸组成、温度等条件对保留情况的影响，并利用计算机处理分析得到每种多肽的分离提取的最佳条件。
肽图分析（Peptide Mapping）：肽图分析是根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶[一般未肽链内切酶（endopeptidase）]作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱，肽图分析对多肽结构研究合特性鉴别具有重要意义。
凝胶色谱柱的使用
凝胶色谱柱的使用凝胶色谱柱（Gel chromatography column），又称为凝胶过滤色谱柱，是一种常用于蛋白质和多肽分离纯化的柱层析技术。
它是根据溶质在凝胶颗粒孔隙和凝胶颗粒表面之间的扩散速率不同来实现分离的。
凝胶色谱柱由内核和包覆层构成。
内核是由纤维素、琼脂糖、琼脂和聚丙烯酰胺等材料制成的颗粒，颗粒大小一般在10-300微米之间。
内核是柱层析的主要分离介质，具有一定的孔隙结构，可以根据溶质的分子量来选择孔径大小。
包覆层是一层较细的凝胶层，在内核表面涂覆各种高分子材料，通过改变包覆层的化学性质，可以调控分离过程中的选择性和分离效果。
1.样品制备：准备待分离的样品溶液，通常需要用缓冲液进行稀释和调整pH值。
如果样品中含有高浓度的盐类或有机溶剂等，需要进行脱盐或柱外固相萃取处理。
2.样品加载：将样品溶液加载到凝胶色谱柱上，可以通过重力流动或使用泵进行加样。
3.柱洗脱：用缓冲液进行柱洗脱，一般要满足样品的最佳分离条件。
可以使用单一缓冲液或梯度洗脱，根据需要选择合适的洗脱方式。
4.收集分离物：根据需要，收集分离物进行后续分析或纯化。
1.蛋白质纯化：凝胶色谱柱可以根据蛋白质的分子量进行分离，常用于蛋白质的粗提和富集。
2.多肽纯化：凝胶色谱柱可以根据多肽的大小和亲水性进行分离，常用于多肽的富集和纯化。
3.药物研发：凝胶色谱柱可以用于药物分子的纯化和分析，有助于药物研发过程中的药物筛选和性质表征。
4.生物分析：凝胶色谱柱可以用于生物样品中复杂成分的富集和纯化，有助于生物样品的分析和研究。
1.分离效果好：凝胶色谱柱可以通过调控柱层析介质的孔隙大小和分离效果，达到较好的分离效果。
2.操作简单：凝胶色谱柱的操作相对简单，不需要复杂的设备和操作流程。
3.适用范围广：凝胶色谱柱适用于不同分子量和化学性质的样品，可以满足不同的纯化需求。
1.分离速度慢：由于样品分子需要通过凝胶层的扩散来实现分离，凝胶色谱柱的分离速度较慢。
从淡水鱼中提取活性多肽的方法与流程
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鸡蛋蛋白质和多肽的分离及功能性应用
鸡蛋蛋白质和多肽的分离及功能性应用摘要：本文综述了鸡蛋蛋白的主要成分、物理化学特性以及通过酶水解法从鸡蛋蛋白质中得到的生物活性肽的生物活性，并且对鸡蛋蛋白中分离和纯化制得的具有生命活性的蛋白质/多肽最新研究进展作了概述。
最后，进一步描述和探讨了分离制得特定的蛋白质/多肽技术发展，以及它们创造潜在的新的附加值成分应用于食品、营养食品和生物技术行业。
关键词：鸡蛋蛋白，蛋白质，多肽，分离，生物活性9.1 引言鸟类的蛋被认为是一个资源丰富的营养物质，如蛋白质、脂质、酶和像生长促进因子和防御因素等生物物质。
总的来说,一个鸡蛋由63%的蛋清,27.5%的蛋黄和9.5%的蛋壳组成(表19.1)。
尽管鸡蛋含有大约75%的水，它们富含优质蛋白质、不饱和脂肪酸、维生素和矿物质。
鸡蛋蛋白质基本上是分布在蛋清和蛋黄之间，此外，蛋壳中占有一小部分。
脂质在卵蛋白中可以忽略不计，它几乎完全存在于蛋黄中，并且和蛋白质形成脂蛋白有关。
碳水化合物是鸡蛋的次要成分，它们以自由碳水化合物形式和嵌合在蛋白质/脂质的形式存在于鸡蛋中。
大多数的矿物质存在蛋壳和蛋黄中，其中磷和钾以可溶性形式存在。
19.1 鸡蛋蛋白的主要成分及其化学成分19.2 蛋清和蛋黄的主要成分表19.2列出了蛋清和蛋黄的主要蛋白质以及他们的平均浓度。
蛋清中的主要蛋白是卵清蛋白，卵铁传递蛋白，卵类粘蛋白，卵粘蛋白和溶菌酶，这些物质占总蛋白的含量>83%。
蛋黄中的主要蛋白以脂蛋白复合物形式存在，它分为等离子体和颗粒部分，包含卵黄脂磷蛋白，卵黄高磷蛋白，卵黄球蛋白和卵黄高脂磷蛋白。
大量的鸡蛋蛋白和它们的一些肽序列，具有生物活动，并且已得到相关鉴定。
例如，溶菌酶作为鸡蛋蛋白质，因为其可作为抗菌剂应用于食品的潜在价值而倍受关注。
鸡蛋溶菌酶所包含的肽序列，能够强有力地对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌产生抗性。
生物活性蛋白和多肽在食品中较低浓度下即可起作用，所以需要就地对纯化物进行预浓缩以获得一定剂量水平产生有利影响。
生物活性多肽的提取与分离
生物活性多肽的提取与分离多肽是由若干个氨基酸组成的分子，其分子量通常在1,000 ~ 10,000之间。
多肽在生物体内扮演着重要的角色，如激素、抗生素、酶、生长因子等。
由于其独特的生物活性和药理学作用，多肽成为了新药研发的热点。
而提取与分离是多肽研究的关键步骤之一。
一、多肽的提取方法1.枸橼酸盐缓冲液法枸橼酸盐缓冲液法是一种简单直接的多肽提取方法。
其基本原理是将样品加入枸橼酸盐缓冲液中，通过离心、过滤等操作，将细胞碎片和大分子蛋白质沉淀去除，获得含有多肽的上清液。
2.无机盐极性溶剂法无机盐极性溶剂法是一种常用的多肽提取方法。
其基本原理是将样品加入含有足够浓度的盐的极性溶剂中，多肽便会溶于极性溶剂中，大分子蛋白质则很容易发生沉淀而被去除。
3.小分子有机溶剂其基本原理在于用某些小分子有机溶剂或氢氧化钠溶液浸泡样品，溶解蛋白质后经离心或其他分离手段获得含有多肽的上清液。
二、多肽的分离方法1.凝胶过滤色谱法凝胶过滤色谱法是利用多肽和蛋白质分子大小的差异来进行分离的方法。
基本原理是将样品加入凝胶柱中，在重力或压力的作用下，多肽会被分离并筛选到相应的孔隙，大分子蛋白质则被滞留在柱床上。
2.酸性离子交换色谱法酸性离子交换色谱法是利用多肽和蛋白质表面电荷的不同来进行分离的方法。
基本原理是将样品加入多层电荷的树脂固相柱中，因为多肽对树脂的亲和性比较小，所以多肽很容易从固相柱中流出，而大分子蛋白质则会被树脂的吸附作用所捕捉，从而分离开来。
3.反相高效液相色谱法反相高效液相色谱法是利用多肽和蛋白质在疏水性介质中的溶解度不同来进行分离的方法。
基本原理是将样品加入具有疏水性的C18柱中，多肽和蛋白质分子在柱中和流动相之间的化学平衡会发生改变，从而实现分离。
总之，通过生物活性多肽的提取与分离，可以获得高纯度、高活性的多肽，为其后续的药理学研究和应用提供了有力的支持。
随着技术的不断发展，多肽研究也将会迎来更多的突破。
水溶性维生素的分析,多肽和蛋白质的分离
水溶性维生素的分析，多肽和蛋白质的分离1．办法原理水溶性维生素皆为强极性有机化合物，可用C18反相键合相色谱柱实现彻低分别。
用反相离子对色谱分别水溶性维生素9-72所示。
图9-72 反相离子对色谱分别水溶性维生素1-维生素C; 2-维生素B1；3-维生素B6；4-烟酸；5-维生素K3(亚硫酸氢钠甲基萘醌)；6-烟酰胺；7-对羟基苯甲酸；8-维生素B12 ; 9-维生素B2 2．色谱分析条件 (1)色谱柱Biophase ODS(5um, φ4.6mm×250mm)。
(2)流淌相(A) 1％＋0.5％溶液(pH= 4.5); (B)A＋(50：50)。
梯度洗脱程序在0～10min内，流淌相B由0增至80％，再维持15min。
流量为1mL/min。
(3)检测器UVD (275nm)。
3．分析结果样品溶于流淌相A后进样，维生素K3样品中应加入Na2SO3，以避开2-甲基萘醌的生成；维生素B12和在一起时不稳定，应在测定时现用现配。
离子对试剂的浓度对维生素B1、维生素B6、烟酸和维生素K3的分别影响很大，应选用最佳浓度。
水溶性也可在反相键合相柱(C8)或氨基键合相柱(u-Bondapak-NH2)实现分别。
二、在C4烷基反相键合相上，和的分别 1．办法原理YMC-Pack Protein-RP是在硅胶上键合短的C4烷基链的反相固定相，特殊适用于长链多肽和的分析。
图9-73 为多肽和蛋白质的分别谱图。
图9-73 在C4烷基反相固定相上，多肽和蛋白质的分别1-甲硫氨酸-脑啡肽；2-亮氨酸-脑啡肽；3-催产素；4-血管舒缓激肽；5-血管紧急素I；6-核糖核酸酶A; 7-a-交配因子；8-胰岛素(牛)；9-细胞色素c; 10-溶菌酶；11-牛血清白蛋白；12-β-乳球蛋白；13-卵清蛋白 2．色谙分析条件 (1)色谱柱：φ4.6mm×25cm, YMC-Pack Protein-RP(5um,30nm)，室温。
多级质谱进行蛋白质多肽测序的原理
多级质谱进行蛋白质多肽测序的原理一、引言多级质谱（MS）是一种用于分析蛋白质和多肽的技术，通过对这些生物分子进行碎片化和质量分析，可以揭示它们的结构和功能。
多级质谱在生物医学研究、药物开发和临床诊断中发挥着重要作用。
其中，蛋白质多肽测序是多级质谱应用中的一个重要领域，它可以帮助科研人员和临床医生深入理解蛋白质的组成和功能，以及相关疾病的发病机制。
二、多级质谱进行蛋白质多肽测序的基本原理1. 样品制备在进行多级质谱蛋白质多肽测序之前，首先需要从样品中提取蛋白质，并将其进行消化。
消化的目的是将蛋白质分解为多肽，为后续的分析提供基础。
2. 液相色谱-质谱联用（LC-MS）LC-MS技术是多级质谱进行蛋白质多肽测序不可或缺的环节。
液相色谱用于分离多肽混合物，质谱则用于对分离的多肽进行质量分析。
通过LC-MS，可以获取多肽的质量信息和碎片信息。
3. MS/MS数据分析MS/MS是质谱中的一个重要环节，它通过将多肽进行碎片化，然后对碎片进行质量分析，从而得到多肽序列的信息。
MS/MS数据分析需要利用生物信息学工具和数据库进行配对，得出多肽的序列信息和可能的氨基酸残基修饰信息。
三、多级质谱进行蛋白质多肽测序的深度与广度多级质谱进行蛋白质多肽测序既具有深度又具有广度。
在深度方面，多级质谱可以对样品中的数千种蛋白质进行分析，揭示它们的多肽组成、氨基酸残基修饰和空间结构；在广度方面，多级质谱可以对蛋白质进行全面的组学研究，包括蛋白质的表达水平、相互作用关系和功能富集通路。
四、多级质谱进行蛋白质多肽测序的个人观点和理解从我个人的观点来看，多级质谱进行蛋白质多肽测序是一项非常复杂而又强大的技术。
通过对蛋白质进行高效的分析，我们可以更深入地理解生命的奥秘，探寻疾病的发病机制，发现新的药物靶点，以及指导个性化医疗的实施。
然而，多级质谱进行蛋白质多肽测序也面临着诸多挑战，比如样品制备的标准化、数据解释的标准化和结果的可重复性。
蛋白质和多肽反相hplc分析和纯化指南
蛋白质和多肽反相hplc分析和纯化指南Protein and peptide reverse phase HPLC analysis and purification guideline蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南Introduction:引言：Protein and peptide analysis and purification are essential steps in protein research and the pharmaceutical industry. Reverse phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) is a widely used technique for separating, analyzing, and purifying proteins and peptides based on their hydrophobicity. This guideline aims to provide an overviewof the principles, methods, and best practices for RP-HPLC analysis and purification of proteins and peptides.蛋白质和多肽的分析与纯化是蛋白质研究和制药行业中的关键步骤。
反相高效液相色谱（RP-HPLC）是一种基于蛋白质和多肽亲疏水性的广泛应用技术，用于蛋白质和多肽的分离、分析和纯化。
本指南旨在提供关于RP-HPLC分析与纯化蛋白质和多肽的原理、方法以及最佳实践的概述。
Principles of RP-HPLC:RP-HPLC原理：Reverse phase chromatography involves the separation of analytes based on their hydrophobicity using a hydrophobic stationary phase and a polar mobile phase. In RP-HPLC, a sample containing proteins or peptides is injected onto a column packed with a hydrophobic stationary phase such asC18. The polarity of the mobile phase, typically a mixture of water and an organic solvent, is gradually increased to elute the analytes. Proteins and peptides with higher hydrophobicity will have a higher tendency to interact with the hydrophobic stationary phase, resulting in delayed elution.反相色谱是利用亲疏水性质将待分析物分离的方法，其中使用了一个疏水固定相和一个极性流动相。
生物提取多肽的技术及应用
生物提取多肽的技术及应用多肽是一种由氨基酸分子组成的生物分子，在人体内具有重要的生理功能和药理作用。
随着生物科技的发展，越来越多的专家开始关注，研究生物提取多肽的技术及应用。
在本文中，我们将对这个领域进行全面地介绍。
一、多肽的定义和性质多肽是由2-10个氨基酸分子组成的复合物，它们通常是蛋白质的分解产物，也可以由人工方式合成。
多肽的分子量较小，因此它们具有很好的水溶性，且易于在各种生物组织中扩散。
另外，多肽的生物活性较高，可以与生物体内的特定受体结合，发挥生理功能和药理作用。
因此，多肽被广泛应用于医药、生物工程和食品等领域。
二、多肽的提取方法多肽的提取技术通常分为生物法、物理法和化学法三种。
下面分别介绍这几种方法。
1、生物法生物法是指通过微生物、植物或动物等生物体来制备多肽。
最常用的提取生物体是动物，特别是一些能够分泌蛋白酶的动物。
常见的多肽来源包括蛇毒、蜂毒、鱼肉和动物胶原蛋白等。
通过加入某些配方或外源蛋白水解酶，使其水解生成多肽。
此外，还可以使用发酵和热处理等方式来提取和纯化多肽。
2、物理法物理法是指使用物理手段来提取多肽，最常用的方法是通过高温或高压处理蛋白质。
在这个过程中，一些化学键被打破，使蛋白质变成多肽，然后通过离心或过滤等方法将多肽分离出来。
虽然该方法操作简单，但提取效率较低，需要大量的物质和设备，因此应用不是很广泛。
3、化学法化学法是指使用化学方法来提取多肽。
常见的方法包括氨基酸交换、氢氧化物分解和金属离子亲和性层析等。
其中，氨基酸交换法是最常用的提取多肽的方法，因为它比较简单、安全且对多数蛋白质和多肽都有效。
通过这个方法，可以从复杂的混合物中纯化出目标多肽，且可控性较好，因此应用广泛。
三、多肽的应用多肽被广泛应用于医药、美容、保健品、食品等领域，其主要用途如下。
1、医药领域多肽作为一种天然生物活性物质，在药学领域中被广泛应用。
例如，脑垂体素常常用于调节生长激素、促卵泡激素等多种内分泌功能的应用于临床治疗。
蛋白、多肽提取试剂
蛋白、多肽提取试剂蛋白和多肽是生物体中非常重要的有机化合物，它们在细胞代谢、信号传导、结构支持等方面发挥着重要的作用。
为了研究和应用这些生物大分子，科学家们开发了各种蛋白和多肽提取试剂。
本文将介绍蛋白和多肽提取试剂的原理、应用和发展趋势。
一、蛋白和多肽提取试剂的原理蛋白和多肽提取试剂的原理主要是利用其与蛋白和多肽之间的物理或化学性质的差异，将目标蛋白和多肽从样品中分离出来。
常用的提取试剂包括有机溶剂、盐溶液、酸碱溶液、表面活性剂等。
有机溶剂如甲醇、乙醇、氯仿等可以破坏细胞膜结构，使蛋白和多肽释放出来；盐溶液如氯化钠、硫酸铵等可以通过离子的沉淀作用将蛋白和多肽从溶液中沉淀下来；酸碱溶液如盐酸、氢氧化钠等可以改变蛋白和多肽的电荷性质，使其在溶液中发生电荷相互作用而沉淀下来；表面活性剂如SDS（十二烷基硫酸钠）可以与蛋白发生疏水相互作用，使其从溶液中析出。
二、蛋白和多肽提取试剂的应用蛋白和多肽提取试剂广泛应用于生物学、医学、农业等领域的研究和应用中。
在生物学研究中，科学家们常常需要从细胞、组织或体液中提取蛋白和多肽，以进行蛋白质组学、代谢组学、蛋白结构与功能研究等。
在医学领域，蛋白和多肽提取试剂被广泛应用于临床诊断、疾病预防和治疗等方面。
例如，通过提取患者的血液样品中的蛋白和多肽，可以检测出许多疾病的标志物，为疾病的早期诊断和治疗提供重要依据。
在农业领域，蛋白和多肽提取试剂也被用于农作物的抗性研究、转基因植物的鉴定等方面。
三、蛋白和多肽提取试剂的发展趋势随着科学技术的进步和研究需求的不断增加，蛋白和多肽提取试剂也在不断发展和改进中。
一方面，科学家们致力于开发更高效、更精确的蛋白和多肽提取试剂，以满足对低丰度蛋白和多肽的提取需求。
另一方面，随着蛋白质组学和代谢组学的快速发展，蛋白和多肽提取试剂也越来越注重对蛋白和多肽的定量和定性分析。
因此，发展具有高灵敏度、高特异性的蛋白和多肽提取试剂成为了研究的热点。
蛋白质和多肽反相hplc分析和纯化指南
蛋白质和多肽反相hplc分析和纯化指南蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南1. 简介反相高效液相色谱(RP-HPLC)是一种常用的分析和纯化蛋白质和多肽的方法。
它利用疏水性相互作用将样品分离,可以有效地分离和纯化各种大小的蛋白质和多肽。
本指南旨在为您提供使用RP-HPLC分析和纯化蛋白质和多肽的基本原理和实践技巧。
2. 样品制备适当的样品制备对于成功的RP-HPLC分离至关重要。
样品应该溶解在与HPLC流动相相容的溶剂中,通常是水/醇混合物。
如果样品不溶于此类溶剂,可以考虑使用其他助溶剂,如尿素或盐酸胍。
样品浓度应适中,以避免过载和峰展宽。
3. 色谱条件- 色谱柱: C18反相柱是最常用的,但也可以尝试其他疏水性基团。
柱长和粒径的选择取决于分离需求。
- 流动相: 通常由水和有机溶剂(如乙腈或甲醇)组成的梯度洗脱。
添加小量三氟乙酸(TFA)或其他离子对调节pH和离子强度可能有助于改善分离。
- 检测器: 紫外/可见光检测器是最常用的,检测波长取决于蛋白质/多肽的吸收特性。
4. 方法开发开发RP-HPLC方法需要优化多个参数,包括梯度斜率、流速、温度和pH等。
可以尝试不同的梯度程序和流动相组成,以获得最佳分离。
5. 纯化利用RP-HPLC可以有效地纯化蛋白质和多肽。
根据初步分析结果,选择合适的梯度条件,收集目标峰。
必要时可进行多次重复注射和分馏,以提高纯度。
6. 样品回收纯化后的样品需要除去有机溶剂和其他添加剂。
常用的方法包括液体-液体萃取、离子交换、超滤和凝胶层析等。
回收的样品应进行浓缩和缓冲液交换,以适应后续用途。
7. 结语RP-HPLC是一种强大的分析和纯化蛋白质和多肽的工具。
掌握正确的技术和方法开发策略对于获得满意结果至关重要。
本指南概述了基本原理和关键步骤,为您成功应用RP-HPLC分析和纯化蛋白质和多肽提供参考。
(生物化学)蛋白质分离纯化技术
蛋白质分离纯化技术摘要：蛋白质分离纯化是蛋白质产品工业化生产的关键之一。
本文分析了蛋白质分离纯化的特点及一般原则；综述了蛋白质分离纯化的传统技术：凝胶过滤层析、离子交换层析、吸附层析、亲和层析、疏水作用层析、高效液相色谱层析(HPLC)、电泳法等及新型技术：亲和超滤、内含肽介导的蛋白质亲和纯化。
关键词：蛋白质分离纯化蛋白质是生命的物质基础,是生命活动的最终控制者和直接执行者,它参与生物体内几乎所有的生命活动过程,如生长、发育、遗传、代谢、应激、能量转换、信号传导等。
以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向。
对蛋白质进行纯化，得到高纯度的"高活性的蛋白质是生物学科研人员经常要面对的问题。
蛋白质的分离纯化主要包括4个步骤：预处理、蛋白质的抽提、蛋白质的粗分级和蛋白质的分离纯化[1]。
本文针对近年来有关蛋白质的分离纯化技术所取得的进展进行了综述,为今后的理论和应用研究提供依据。
1 蛋白质分离纯化的特点及一般原则1.1蛋白质分离纯化的特点1）大多数蛋白质产品是生物活性物质,在分离纯化过程中,有机溶剂、溶液pH值、离子强度的变化均可使蛋白质变性失活。
2）蛋白质产品在物料中含量很低,且物料组成非常复杂。
例如,利用基因工程菌发酵生产蛋白质,物料中含有大量组成复杂的培养基、菌体生产代谢物等,目标蛋白质的含量常常不到蛋白质总量的1%。
有些目标蛋白质存在于细胞内或在胞内形成包含体,为获取蛋白质,还需进行细胞破碎,结果物料中含有大量的细胞碎片和胞内产物。
3）含蛋白质产品的物料不稳定,蛋白质产品易受料液中蛋白水解酶降解。
4）很多蛋白质产品作为医药、食品被人类利用,因而要求蛋白质产品必须是高度纯化的,产品无菌、无致热源等[2]。
1.2蛋白纯化的一般原则1）蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。
蛋白质的分离纯化技术
蛋白质的分离纯化技术1、根据蛋白质带电性质不同的分离技术1.1离子交换层析以离子交换剂作为柱填充物，在中性条件下，根据由于蛋白质和多肽的带电性不同而引起的离子交换亲和力的不同而得到分离。
其可分为阳离子柱和阴离子柱两大类, 还有一些新型树脂，如大孔型树脂、均孔型树脂、离子交换纤维素、葡聚糖凝胶琼脂糖凝胶树脂等。
离子交换剂有阳离子交换剂和阴离子交换剂。
当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时，带有与离子交换剂可交换基团相同电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上，带同种净电荷越多，吸附力越强。
随后用改变pH或离子强度的办法将吸附的蛋白质按吸附能力从小到大的顺序先后洗脱下来。
1.2电泳法电泳为带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。
蛋白质混合样品经过电泳后，被分离的各蛋白质组分的电泳迁移率互不相同，由各蛋白质组分所带的静电荷以及分子大小和形状的不同而达到分离。
现在常用的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），可以因不同蛋白质所带电荷的差异和大小差异高分辨率地分离或分析蛋白质。
在PAGE系统中加入十二烷基磺酸钠（SDS）,可以消除蛋白质所带电荷的差异，构成的SDS-PAGE系统是测定蛋白质的相对分子质量最常用的方法。
2、根据蛋白质溶解度不同的分离技术2.1蛋白质的盐析蛋白质在低盐浓度下的溶解度随着盐溶液浓度升高而增加，此称盐溶；当盐浓度不断上升时，蛋白质的溶解度又以不同程度下降并先后析出，此称盐析，从而达到分离纯化的效果。
2.2有机溶剂沉淀法有机溶剂能降低溶液的介电常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力，导致溶解度的降低；另有机溶剂与水的作用，能破坏蛋白质的水化膜，故蛋白质在一定浓度的有机溶剂中便沉淀析出。
近年来的研究认为，有机溶剂可能破坏某种键如氢键，使空间结构发生变化，致使一些原来包在内部的疏水集团暴露于表面并与有机溶剂的疏水基团结合形成疏水层，从而使蛋白质沉淀。
利用不同蛋白质在不同浓度的有机溶剂中的溶解度差异而分离的方法即为有机溶剂沉淀法。
蛋白、多肽提取试剂
蛋白、多肽提取试剂蛋白质和多肽是构成生物体的重要分子，具有极其重要的生物学功能。
为了研究和应用蛋白质和多肽，科学家们开发了一系列蛋白质和多肽提取试剂，用于从生物样品中提取这些分子。
蛋白质和多肽提取试剂是一种用于从生物样品中分离和纯化蛋白质和多肽的化学试剂。
这些试剂通常由多种化学物质组成，包括缓冲液、洗涤液和溶解液等。
通过使用这些试剂，科学家们可以有效地将蛋白质和多肽从样品中提取出来，以便进一步的研究和分析。
蛋白质和多肽提取试剂的选择对于提取效果至关重要。
不同的生物样品可能含有不同类型和含量的蛋白质和多肽，因此需要根据样品的特性选择合适的试剂。
一般来说，选择试剂时需要考虑以下几个因素：1. pH值：不同的蛋白质和多肽在不同的pH值下具有不同的溶解性。
因此，在选择试剂时需要根据目标蛋白质和多肽的特性选择适当的pH值。
2. 盐浓度：盐浓度可以影响蛋白质和多肽的溶解性和稳定性。
一般来说，较低的盐浓度有利于蛋白质和多肽的溶解和稳定。
3. 温度：温度也会影响蛋白质和多肽的溶解性和稳定性。
通常情况下，较低的温度有利于蛋白质和多肽的溶解和稳定。
4. 洗涤液：洗涤液用于去除样品中的杂质和其他非目标蛋白质和多肽。
选择合适的洗涤液可以提高提取效果。
蛋白质和多肽提取试剂的使用步骤通常包括以下几个步骤：1. 样品制备：将生物样品加入到提取试剂中，并进行适当的处理，如破碎细胞壁等。
2. 提取：将样品在适当的条件下与提取试剂进行充分的混合和反应，使蛋白质和多肽溶解到试剂中。
3. 分离：通过离心或其他分离技术，将溶解的蛋白质和多肽与样品中的其他成分分离。
4. 纯化：通过进一步的处理和分离步骤，将目标蛋白质和多肽从其他杂质中纯化出来。
5. 分析：对提取和纯化得到的蛋白质和多肽进行进一步的分析和鉴定，如电泳、质谱等。
蛋白质和多肽提取试剂在生物医学研究、药物开发、食品安全等领域具有广泛的应用。
通过使用这些试剂，科学家们可以从复杂的生物样品中提取出目标蛋白质和多肽，为进一步的研究和应用提供了有力的工具。
食品中多肽的提取与鉴定研究
食品中多肽的提取与鉴定研究随着人们对健康饮食的追求和食品安全的关注，食品科学领域的研究越来越受到人们的重视。
其中，食品中多肽的提取与鉴定研究成为了一个重要的研究方向。
本文将介绍多肽的概念，提取方法以及鉴定技术，并探讨其在食品科学中的应用。
多肽（Peptides）是由两个以上氨基酸残基通过肽键连接而成的化合物。
它们常常存在于食物中，是蛋白质分解产物的一部分。
多肽有着丰富的生物活性，可以调节人体代谢和免疫机能，具有抗菌、抗氧化、抗癌等多种功能。
因此，研究食品中的多肽对人们的健康具有重要意义。
多肽的提取方法多种多样，可以根据不同的食物组织和特性来选择合适的提取方式。
传统的提取方法包括酸性提取、碱性提取和酶解提取。
酸性提取方法适用于富含胶原蛋白的食品，如鱼皮、动物骨骼等。
碱性提取方法则适用于带有酰胺键的多肽，如豆类、谷物等。
而酶解提取是通过加入适当的蛋白酶来分解食物中的蛋白质，从而提取多肽。
近年来，一些新的高效提取技术也被开发出来，如超声波辅助提取、微波辅助提取和高压提取等，这些技术能够提高提取效率和多肽的纯度。
鉴定多肽的方法主要通过质谱技术和色谱技术来实现。
质谱技术是一种非常有效的手段，能够准确识别和定量多肽。
传统的质谱技术包括液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）和气相色谱-质谱联用（GC-MS）。
色谱技术则通过分离多肽中的组分，再通过质谱技术进行鉴定。
目前，高效液相色谱（HPLC）和超高效液相色谱（UPLC）是最常用的色谱技术。
在食品科学领域，多肽的研究具有重要的应用价值。
食品中的多肽可以应用于功能性食品的开发。
将富含多肽的食物或多肽提取物添加到食品中，可以赋予其更多的功能性，如改善免疫力、提高抗氧化能力等。
此外，多肽的研究还可以应用于食品的加工过程中。
通过了解食品中多肽的结构和功能，可以优化加工技术，提高食品的品质和口感。
然而，多肽的研究仍面临一些挑战和限制。
首先，多肽的提取和鉴定过程中，可能会受到食物基质的干扰，从而使得多肽的分离和检测困难。
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蛋白质与多肽提取分离1 分离方法采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。
对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。
这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等。
1.1 高效液相色谱（HPLC）HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的HPLC应用与其它化合物相比，在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是HPLC 能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。
因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作。
如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。
1．1．1 反相高效液相色谱（RP-HPLC）结果与保留值之间的关系：利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。
为了获得一系列的保留系数，Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析，得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系，其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的肽中，可减少在柱上的保留时间；在10～60氨基酸组成的肽中，非极性氨基酸较多也可减少在柱上的保留时间，而含5～25个氨基酸的小肽中，非极性氨基酸增加可延长在柱上的保留时间。
同时有不少文献报道了肽链长度、氨基酸组成、温度等条件对保留情况的影响，并利用计算机处理分析得到每种多肽的分离提取的最佳条件。
肽图分析（Peptide Mapping）：肽图分析是根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶[一般未肽链内切酶（endopeptidase）]作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱，肽图分析对多肽结构研究合特性鉴别具有重要意义。
利用胰蛋白酶能特意性作用于Arg和Lys羧基端的肽链的性质，通过RP-HPLC法采用C18柱检测了重组人生长激素特征性胰肽图谱。
同时胰岛素的肽图经V8酶专一裂解也制得，并可鉴别仅相差一个氨基酸残疾的不同种属来源的胰岛素。
人类肿瘤坏死因子的单克隆抗体结构也应用酶解法及在线分析技术确定了肽图，便于鉴定分析。
此项技术已经在新药开发中得到广泛应用。
1.1.2疏水作用色谱（Hydrophobic interaction chromatogrphy，HIC）HIC是利用多肽中含有疏水基因，可与固定相之间产生疏水作用而达到分离分析的目的，其比RP-GPLC具有较少使多肽变性的特点。
利用GIC分离生产激素（GH）产品的结构与活性比EP-GPLC分离的要稳定，活性较稳定。
Geng等利用HIC柱的低变性特点，将大肠杆菌表达出的经盐酸胍乙啶变性得到人重组干扰素-γ。
通过HIC柱纯化、折叠出高生物活性的产品。
不同人尿表皮生长因子（EGF）也利用HIC纯化到了，均具有良好的生物活性。
HIC可将未经离子交换柱的样品纯化。
而RP-HPLC则不能达到这一要求。
1.1.3 分子排阻色谱（Sizs-Exclusion chromatogrphy，SEC）SEC是利用多肽分子大小、形状差异来分离纯化多肽物质，特别对一些较大的聚集态的分子更为方便，如人重组生长激素（hgH）的分离，不同结构、构型的GH在SEC柱上分离行为完全不同，从而可分离不同构型或在氨基酸序列上有微小差异的变异体，利用SEC研究修饰化的PEG的分离方法，此PEC具有半衰期长、作用强的特点。
一些分子量较大的肽或蛋白均可利用此法分离分析。
1．1．4离子交换色谱（Iron-Exchange chromatography,IEXC）IEXC可在中性条件下，利用多肽的带电性不同分离纯化具有生物活性的多肽。
其可分为阳离子柱与阴离子柱两大类，还有一些新型树脂，如大孔型树脂、均孔型树脂、离子交换纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶树脂等。
在多肽类物质的分离分析研究中，对多肽的性质、洗脱剂、洗脱条件的研究较多，不同的多肽分离条件有所不同，特别是洗脱剂的离子强度、盐浓度等对纯化影响较大。
Wu等报道利用离子交换柱层析法，探讨分离牛碳酸酐异构体和牛血清白蛋白、鸡血清白蛋白酶的提取条件，获得了有价值的数据供今后此类物质分离研究。
1．1．5膜蛋白色谱（Chromatography of Membrane Protein,CMP）CMP+分离强蔬水性蛋白、多肽混合物的层析系统，一般有去垢剂（如SDS）溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白，并由羟基磷灰石为固定相的柱子分离纯化。
羟基磷灰石柱具有阴离子磷酸基团（P-端），又具有阳离子钙（C-端），与固定相结合主要决定于膜蛋白的大小、SDS 结合量有关。
利用原子散射法研究cAMP的分离机制发现，样品与SDS结合后在离子交换柱上存在SDS分子、带电荷氨基酸与固定相中带电离子间的交换，从而达到分级分离的目的。
1．1．6高效置换色谱（High-Performance Displacement Chromatography,HPDC）HPDC是利用小分子高效置换剂来交换色谱柱上的样品，从而达到分离的目的。
它具有分离组分含量较少成分的特性。
利用HPDC鉴定分离了低于总量1%组分的活性人重组生长激素（rHG ）。
在研究非毒性的交换剂时Jayarama发现硫酸化葡萄糖（Detran Sulfate，DS）是对β乳球蛋白A和B的良好置换剂，一般DS的相对分子质量为1×104和4×104最宜。
研究表明置换剂的相对分子质量越低，越易于与固定相结合，因此在分离相对分子质量小的多肽时，需要更小的置换剂才能将其置换纯化出来。
1.1.7 灌注层析（Perfusion Chromatography，PC）PC是一种基于分子筛原理与高速流动的流动相的层析分离方法，固定相孔径大小及流动相速度直接影响分离效果。
试验证明其在生产、制备过程中具有低投入、高产出的特性。
目前市场上可供应的PC固定相种类较多，适合于不同分子量的多肽分离使用。
1.2 亲和层析（Affinity Chromatography，AC）AC是利用连接在固定相基质上的配基与可以和其特异性产生作用的配体之间的特异亲和性而分离物质的层析方法。
自1968年Cuatrecasas提出亲和层析概念以来，在寻找特异亲和作用物质上发现了许多组合，如抗原-抗体、酶-催化底物、凝集素-多糖、寡核苷酸与其互补链等等。
对多肽类物质分离目前主要应用其单抗或生物模拟配基与其亲和，这些配基由天然的，也有根据其结构人工合成的。
Patel等人利用一系列亲和柱分离纯化到了组织血浆纤维蛋白酶原激活剂蛋白多肽。
固定金属亲和层析（Immobilized Metal Affinity Chromatography.LMAC）是近年来发展起来的一种亲和方法。
其固定相基质上鳌合了一些金属离子，如Cu2+、Ni 2+、Fe3+等，此柱可通过配为键鳌合侧链含有Lys、Met、Asp、Arg、Tyr、Glu和His的多肽，特别是肽序列中含有His-X-X-X-His的结构最易结合到金属离子亲和柱上，纯化效果较好。
其中胰岛素样生长因子（Insylin Like Growth Factor，IGF）、二氢叶还原酶融合蛋白等均用此方法分离到纯度较高的产品。
Chaiken等人报道了另一种亲和层析方法，利用反义DNA表达产生，其与正链DNA表达产生的肽或蛋白具有一定的亲和性，如Arg加压素受体复合物，已用此法分离得到。
DNA与蛋白、多肽复合物之间的作用也是生物亲和中常用的方法。
将人工合成的寡核苷酸结合在固定相基质上，将样品蛋白或多肽从柱中流过，与之结合可达到分离特定结构多肽的目的。
1.3 毛细管电泳（Capillary electrophoresis，CE）--分离分析方法CE是在传统的电泳技术基础上于本世纪60年代末由Hjerten发明的，其利用小的毛细管代替传统的大电泳槽，使电泳效率提高了几十倍。
此技术从80年代以来发展迅速，是生物化学分析工作者与生化学家分离、定性多肽与蛋白类物质的有利工具。
CE根据应用原理不同可分为以下几种；毛细管区带电泳Capillary Zone electrophoresis，CZE）、毛细管等电聚焦电泳（Capillary Isoeletric Focusing，CIEF）毛细管凝胶电泳（CapillaryGelElectrophoresis，CGE）和胶束电动毛细管层析（Micellar Electokinetic Electrophoresis Chromatorgraphy,MECC）等。
1.3.1 毛细管区带电泳（Capillary Zone Electrophoresis，CZE）CZE分离多肽类物质主要是依据不同组分中的化合物所带电性决定，比传统凝胶电泳更准确。
目前存在于CZE分离分析多肽物质的主要问题是天然蛋白或肽易与毛细管硅胶柱上的硅醇发生反应，影响峰形与电泳时间，针对这些问题不少学者做了大量实验进行改进，如调节电池泳液的PH值，使与硅醇反应的极性基团减少；改进毛细管柱材料的组成，针对多肽性质的不同采取不同的CZE方法研究分离5个含9个氨基酸残基的小肽，确定了小肽分析的基本条件，即在低PH条件下，缓冲液中含有一定浓度的金属离子如Zn2+等，此时分离速度快而且准确。
1．3．2细管等电聚电泳（Capillary Isleletric Focusing,CIEF）由于不同的蛋白、多肽的等电点（PI）不同，因此在具有不同pH梯度的电泳槽中，其可在等电点pH条件下聚集沉淀下来，而与其他肽类分离开来。
CIEF在分离、分析混合多肽物质中应用不多，主要应用与不同来源的多肽异构体之间的分离，如对rHG不同异构体分离。
由于在CIEF柱表面覆盖物的不稳定性限制了此法的广泛应用。
1．3. 3毛细管凝胶电泳(Capillary Gel Electrophoresis,CGE)CGE是基于分子筛原理，经十二烷基磺酸钠（SDS）处理的蛋白或多肽在电泳过程中主要靠分子形状、分子量不同而分离。
目前，又有一种非交联欢、线性、疏水多聚凝胶柱被用于多肽物质的分离分析，此电泳法适于含疏水侧链较多的肽分离，这种凝胶易于灌注，使用寿命长，性质较为稳定。
1．3．4胶束电动毛细管层析（Micellar Electrokinetic Electorphoresis Chromatography, MECC）MECC的原理是在电泳液中加入表面活性剂，如SDS，使一些中性分子带相同电荷分子得以分离。