变性高效液相色谱在分子生物学中的应用
分子生物学题库(含参考答案)
分子生物学题库（含参考答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、电脑显示和打印出的 DNA 碱基序列图谱中不出现的颜色：A、紫B、蓝C、绿D、黄E、红正确答案：A2、点突变引起的血友病 A 的分子诊断方法不包括A、PCR-SSCPB、PCR-RFLPC、PCR-VNTRD、PCR-STRE、长距离 PCR正确答案：E3、巢式 PCR 错误的是A、是对靶 DNA 进行二次扩增B、第二次扩增所用的模板为第一次扩增的产物C、巢式 PCR 可提高反应的灵敏度和特异性D、常用于靶基因的质和 (或) 量较低时E、第二对引物在靶序列上的位置应设计在第一对引物的外侧正确答案：E4、有下列哪项指征者应进行产前诊断A、夫妇之一有致畸因素接触史的B、习惯性流产的孕妇C、夫妇之一有染色体畸变的D、35 岁以上高龄的E、以上都是正确答案：E5、描述随机扩增多态性 DNA 技术不正确的是 ( )A、引物序列随机B、有多条引物C、电泳分离产物D、需要限制性内切酶酶切E、反应基因组多态性正确答案：D6、绝大多数β-地中海贫血系由位于第 11 号染色体上的β-珠蛋白基因中的基因突变所致，下列方法中不能用于分子生物学检验的技术是A、PCR-ASOB、PCR-RDBC、基因芯片D、多重 PCRE、MOEA-PCR正确答案：D7、关于测序策略的叙述正确的是A、应该具有最大重叠、最小数量的测序反应B、最小的目的DNA 片段 (如＜1kb) ，可以使用引物步移法C、最小的目的DNA 片段 (如＜1kb) ，可以使用随机克隆法D、大片段未知序列DNA 测序，可以直接测序E、大规模基因组计划，可以使用多个测序策略正确答案：E8、在人类基因组中，编码序列占的比例为A、5%B、1.5%C、21%D、3%E、23%正确答案：B9、PCR 反应体系的描述错误的是A、模板B、一条引物C、dNTPD、DNA 聚合酶E、缓冲液正确答案：B10、Tm 值主要取决于核酸分子的A、A-T 含量B、G-C 含量C、A-C 含量D、T-G 含量E、C-T 含量正确答案：B11、结构基因突变不包括A、基因扩增B、基因点突变C、基因表达异常D、基因缺失E、基因重排正确答案：C12、由于突变使编码密码子形成终止密码，此突变为：A、无义突变B、移码突变C、终止密码突变D、同义突变E、错义突变正确答案：A13、关于肺炎支原体的实验室检测，正确的是A、体外培养生长缓慢但阳性率很高B、免疫学方法检测的假阳性率较低C、体外培养在支原体感染的早期诊断上具有重要意义D、利用分子生物学方法可以进行流行病学调查和耐药基因分析E、PCR 技术可检测到极微量的 DNA，但特异性不高正确答案：D14、最早发现与 mtDNA 突变有关的疾病是A、肿瘤B、Leber 遗传性视神经病C、糖尿病D、耳聋E、MELAS 综合征正确答案：B15、关于核酸探针的种类下列不正确的是A、cDNA 探针B、寡核苷酸探针C、基因组 DNA 探针D、RNA 探针E、双链 DNA 探针正确答案：E16、关于SYBR Green Ⅰ 的描述，不正确的是A、荧光染料的成本低B、适用于任何反应体系C、操作亦比较简单D、特异性强E、不需要对引物或探针进行预先特殊的荧光标记正确答案：D17、转录依赖扩增系统的描述错误的是A、以 RNA 为模板B、首先由靶 RNA 合成 DNA 拷贝C、再由DNA 转录生成大量 RNA 拷贝D、产物为 DNAE、为等温扩增正确答案：D18、目前已知感染人类最小的 DNA 病毒 ( )A、HIVB、HPVC、HBVD、HAVE、HCV正确答案：C19、核酸分子杂交的基础是A、碱基互补配对B、甲基化C、磷酸化D、抗原抗体结合E、配体受体结合正确答案：A20、基因芯片技术在移植配型中有着越来越广泛的应用，也具有其他技术不能比拟的优点，以下不属于基因芯片技术特点的是A、观察判断直观B、自动化程度高C、微缩化D、操作繁琐E、高通量正确答案：D21、关于 NC 膜下列描述不正确的是A、能吸附单链 DNAB、能吸附单链 RNAC、依赖于高盐浓度结合靶分子D、对小分子 DNA 片段 (<200bp) 结合力强E、易脆正确答案：D22、线粒体糖尿病属于A、新发现的第 5 种糖尿病B、特殊类型糖尿病C、妊娠期糖尿病D、1 型糖尿病E、2 型糖尿病正确答案：B23、一般来说核酸杂交的温度低于其 Tm 值多少度A、15~25℃B、40~50℃C、5~10℃D、10~15℃E、30~40℃正确答案：A24、K-ras 基因最常见的激活方式是A、染色体重排B、插入突变C、点突变D、缺失突变E、基因扩增正确答案：C25、检测目标是 RNA 的技术是：A、Southern 杂交B、Western 杂交C、Northern 杂交D、Eastern 杂交E、杂交淋巴瘤正确答案：C26、以下关于原癌基因说法不正确的是A、普遍存在于人类或其他动物细胞基因组中的一类基因B、在生物进化过程中不稳定C、在控制细胞生长和分化中起重要作用D、容易在多种因素作用下激活成活性形式的癌基因E、活性形式的癌基因才引起细胞癌变正确答案：B27、关于 HPV 各亚型遗传物质的描述正确的是A、有的是脱氧核糖核酸，有的是核糖核酸B、都是核糖核酸C、同时存在脱氧核糖核酸和核糖核酸D、都是脱氧核糖核酸E、脱氧核糖核酸与核糖核酸可交替互换正确答案：D28、PCR 技术扩增 DNA，不需要的条件是 ( )A、目的基因B、引物C、四种脱氧核苷酸D、DNA 聚合酶E、mRNA正确答案：E29、延伸的温度通常为A、55℃B、95℃C、25℃D、37℃E、72℃正确答案：E30、下列密码子中，终止密码子是 ( )A、UUAB、UGAC、UGUD、UAUE、UGG正确答案：B31、影响DNA 分离纯化效果的是A、材料新鲜，低温保存B、加核酸酶抑制剂C、剧烈震荡D、除净蛋白质E、除净多糖正确答案：C32、丙型肝炎病毒基因组高变区位于A、E1 区B、C 区C、NS3 区D、NS4 区E、NS1/E2 区正确答案：E33、为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入A、ssDNAB、1 ×SSCC、10×SSCD、5×TBECE、50×TAE正确答案：A34、导致世界范围内性传播疾病的最为普遍的因素是A、沙眼衣原体B、鼠衣原体C、豚鼠衣原体D、鹦鹉热衣原体E、肺炎衣原体正确答案：A35、DNA 自动化测序技术中，不正确的荧光标记方法A、用荧光染料标记引物5’端B、用荧光染料标记引物3’-OHC、用荧光染料标记终止物D、使用一种或四种不同荧光染料标记E、使荧光染料标记的核苷酸渗入到新合成的 DNA 链中正确答案：B36、决定 PCR 反应特异性和PCR 长度的物质是( )A、引物B、模板C、dNTPD、Mg2+E、DMSO正确答案：A37、下列不是影响DNA 复性因素的是A、DNA 浓度B、DNA 的分子量C、温度D、碱基组成E、DNA 的来源正确答案：E38、下列不是目前用于 O157：H7 型大肠埃希菌分子生物学检验方法的是A、常规 PCRB、多重 PCRC、荧光定量 PCRD、基因芯片技术E、DNA 测序正确答案：E39、下列叙述哪项是错误的( )A、原核生物基因组具有操纵子结构B、原核生物结构基因是断裂基因C、原核生物基因组中含有插入序列D、原核生物基因组中含有重复序列E、原核生物结构基因的转录产物为多顺反子型mRNA 正确答案：B40、指导合成蛋白质的结构基因大多数为：A、中度重复序列B、散在核原件C、单拷贝序列D、高度重复序列E、回文序列正确答案：C41、双链 DNA 的 Tm 值主要与下列哪项有关 ( )A、A-T 含量B、G-T 含量C、A-G 含量D、T-G 含量E、C-G 含量正确答案：E42、第三代测序技术测定人全基因组的目标：A、30 分钟的测序时间及 5 万美元的测序价格B、3 小时的测序时间及 5 千美元的测序价格C、3 分钟的测序时间及 5 千美元的测序价格D、3 小时的测序时间及 5 万美元的测序价格E、30 分钟的测序时间及 5 千美元的测序价格正确答案：C43、阳性质控品失控的原因不包括A、提取的核酸残留有抑制物B、扩增仪孔间温度不一致C、Taq 酶失活D、扩增产物污染E、核酸提取试剂失效正确答案：D44、关于 DNA 芯片描述不正确的是A、探针为已知序列B、有序地高密度地固定于支持物上C、理论基础是核酸杂交D、可研究基因序列E、不能研究基因功能正确答案：E45、下列关于 real-time PCR 引物设计的原则中，不正确的是A、两条引物的Tm 值相差尽量大B、G+C 的含量应在 45%~55%之间C、尽量避免引物二聚体的出现D、反应体系中引物的浓度一般在0.1~0.2μmol/L 之间E、引物过长可能提高退火温度正确答案：A46、Southern 印迹杂交的描述正确的是A、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案：A47、变性梯度凝胶电泳的描述中错误的是A、使 DNA 双链分子局部变性B、采用梯度变性凝胶C、变性难易由核苷酸组成决定D、突变检测率高E、可确定突变位置正确答案：E48、纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8，可使比值升高的是：A、蛋白质B、酚C、RNAD、氯仿E、Mg2+正确答案：C49、人类可遗传的变异中最简单、最常见的一种是 ( )A、RFLPB、VNTRC、STRD、SNPE、CNV正确答案：D50、关于 DNA 变性的描述不正确的是A、二级结构破坏B、一级结构破坏C、黏度降低D、生物活性丧失E、浮力密度增加正确答案：B51、判断 HBV 复制及传染性的直接指标是检测A、HBV DNA 多聚酶活力B、HBsAgC、HBV DNAD、HBeAgE、HBcAg正确答案：C52、病毒的遗传物质是A、DNAB、RNA 和蛋白质C、DNA 或 RNAD、RNA 和 DNAE、DNA 和蛋白质正确答案：C53、单基因遗传病分子诊断的主要应用是A、携带者诊断B、产前诊断C、症状前诊断D、耐药基因检测E、携带者筛查正确答案：B54、mtDNA 突变不会导致A、综合征型耳聋B、非综合征型耳聋C、神经性耳聋D、药物性耳聋E、氨基糖苷类抗生素耳毒性正确答案：C55、关于真菌，以下描述正确的是A、真菌种类繁多，其中大多数对人类有害B、浅部真菌感染对治疗有顽固性，对机体的影响相对较小C、近年真菌病的发病率有明显下降趋势D、病原性真菌根据其入侵组织部位深浅的不同分为浅部真菌和内部真菌E、真菌感染对人体的危害不大正确答案：B56、利用DNA 芯片检测基因的表达情况，杂交条件应选( )A、高盐浓度、低温和长时间B、低盐浓度、低温和长时间C、高盐浓度、高温和长时间D、高盐浓度、低温和短时间E、高盐浓度、高温和短时间正确答案：A57、下列叙述不正确的是A、F 质粒的主要特征是带有耐药性基因B、R 质粒又称抗药性质粒C、Col质粒可产生大肠杆菌素D、F 质粒是一种游离基因E、F 和ColE1 质粒可以在同一菌株内稳定共存正确答案：A58、有关微卫星的描述正确的是A、散在重复序列的一种B、10~100bp 组成的重复单位C、主要存在于着丝粒区域，通常不被转录D、形式为 (CA) n/ (TG) n、 (AG) n、 (CAG) n 等E、又称为可变数目串联重复序列 (VNTR)正确答案：D59、以 SDA 技术检测结核杆菌时扩增靶点是A、SDAB、IS6110 和 18SrRNAC、IS6110 和 5SrRNAD、IS6110 和 16SrRNAE、IS6110 和 15SrRNA正确答案：D60、下列不属于血友病 B 间接诊断方法的是A、PCR-RFLPB、PCR-SSCPC、双脱氧指纹图谱D、毛细管电泳E、变性高效液相色谱正确答案：D61、关于支原体的描述错误的是A、支原体是一类在无生命培养基中能独立生长繁殖的最小原核细胞微生物B、支原体有一个环状双链 DNAC、以二分裂方式进行繁殖D、其分裂与 DNA 复制同步E、解脲脲原体、人型支原体和生殖器支原体均可引起泌尿生殖道感染正确答案：D62、关于 PCR 反应引物的描述，不正确的是A、引物的长度在 20~30bpB、引物自身或引物之间不应存在互补序列，防止产生二聚体和发夹结构C、引物中 G+C 的含量占 45%~55%D、引物的3’端可以带有生物素、荧光或酶切位点等作为标记E、两条引物的Tm 值应该尽量相近正确答案：D63、关于逆转录 PCR 的描述，不正确的是A、首先应将 RNA 转化为 cDNA 才能进行 PCRB、除了使用DNA 聚合酶外，还应使用逆转录酶C、模板为 RNAD、oligo-d (T) 理论上可以将所有的 mRNA 进行逆转录反应E、逆转录酶不需要引物进行逆转录反应正确答案：E64、以下对镰刀状红细胞贫血症叙述正确的是 ( )A、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成缬氨酸残基B、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成丝氨酸残基C、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成甘氨酸残基D、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成苯丙氨酸残基E、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成异亮氨酸残基正确答案：A65、逆转录 PCR 扩增最终产物的特异性由A、随机引物决定B、oligo-d (T) 决定C、PCR 扩增的特异引物决定D、扩增效率决定E、逆转录酶决定正确答案：C66、有关 SNP 位点的描述，不正确的是A、生物芯片技术可提高 SNP 位点的检测准确性B、单个 SNP 位点信息量大，具广泛的应用前景C、在整个基因组中大概有 300 万个 SNP 位点D、被称为第三代 DNA 遗传标志E、SNP 位点是单个核苷酸的变异正确答案：A67、下列不属于单基因遗传病产前诊断常用方法的是A、巢式 PCRB、全基因组扩增C、多重 PCRD、Western blotE、PCR-SSCP正确答案：D68、Sanger 双脱氧链终止法使用的链终止物是A、α-35S-dNTPB、dNTPC、ddNTPD、α-32P-dNTPE、NTP正确答案：C69、标记的参与杂交反应的核酸分子称为A、杂交B、复性C、变性D、复杂性E、探针正确答案：E70、关于 mtDNA 复制特点的描述正确的是A、线粒体密码子与核基因密码子相同B、mtDNA 以 D-环复制为主要模式，与核 DNA 复制同步C、mtDNA 两条链的复制是同步的D、mtDNA 为自主性复制，不受核内基因控制E、参与 mtDNA 复制所需的酶、调控因子等由核 DNA 编码正确答案：E71、Northern 印迹杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C、检测靶分子是 RNAD、用于基因定位分析E、用于阳性菌落的筛选正确答案：C72、线粒体基因组与核基因组之间，下面描述不正确的是A、线粒体基因组与核基因组分别在不同的位置进行自主复制和转录，之间互不影响B、mtDNA 突变可引起编码蛋白功能障碍，影响细胞呼吸、氧化功能，进而影响核 DNA 的表达C、mtDNA 自主性复制，但复制所需的酶、调控因子等由核基因编码D、二者虽在地理位置上独立，但二者之间关系十分密切E、线粒体基因组与核基因组之间存在“交叉对话” ，相互影响，相互协调正确答案：A73、基因芯片技术的优点不包括A、高通量B、操作简单C、芯片检测稳定性高D、观察结果直观E、微缩化正确答案：C74、基因多态性连锁分析中，第一、二、三代遗传标记分别是A、RFLP、SSCP、STRB、RFLP、SNP、STRC、RFLP、STR、SNPD、VNTR、SSCP、SNPE、VNTR、STR、RFLP正确答案：C75、PCR 反应必需的成分是A、BSAB、DTTC、Tween20D、明胶E、Mg2+正确答案：E76、SYBR Green Ⅰ技术常要求扩增片段不大于A、50bpB、100bpC、200bpD、300bpE、400bp正确答案：D77、任意引物 PCR 的特点描述错误的是A、需预知靶基因的核苷酸序列B、通过随机引物与模板序列随机互补C、扩增后可直接得到靶基因的多态性指纹图谱D、可用于基因组 DNA 图谱构建E、可用于临床致病菌的流行病学检测、分型正确答案：A78、下列说法错误的是A、用于 RNA 检测的样本短期可保存在-20℃B、用于 PCR 检测的样本可用肝素作为抗凝剂C、如使用血清标本进行检测应尽快分离血清D、外周血单个核细胞可从抗凝全血制备E、用于核酸提取的痰液标本应加入 1mol/L NaOH 初步处理正确答案：B79、以下哪种酶可用于 PCR 反应 ( )A、KlenowB、HindⅢC、Taq DNA 聚合酶D、RNaseE、Dnase正确答案：C80、相对于第一代测序技术，新一代测序技术不具有的优点：A、模板不需要克隆B、高通量C、并行D、较长的测序读长E、一次运行可产生海量的高质量数据正确答案：D81、下列几种 DNA 分子的碱基组成比例，哪一种的Tm 值最高 ( )A、A+T=15%B、G+C=25%C、G+C=40%D、A+T=80%E、G+C=60%正确答案：A82、某基因位点正常时表达为精氨酸，突变后为组氨酸，这种突变方式为：A、同义突变B、移码突变C、错义突变D、无义突变E、动态突变正确答案：C83、聚合酶链式反应是一种A、体外特异转录 RNA 的过程B、体外翻译蛋白质的过程C、体外特异转录 DNA 的过程D、体外特异复制 DNA 的过程E、体内特异复制 DNA 的过程正确答案：C84、最能直接反映生命现象的是：A、蛋白质组B、基因组C、mRNA 水平D、糖类E、脂类正确答案：A85、下列哪种病毒在复制过程中可产生 RNA-DNA 杂交体A、HIVB、HPVC、HBVD、HCVE、流感病毒正确答案：A86、丙型肝炎病毒的核酸类型 ( )A、双链 RNAB、单链正链 RNAC、双链环状 DNAD、单链 DNAE、单链负链 RNA正确答案：B87、关于 p53 基因说法不正确的是A、属于抑癌基因B、在进化过程中高度保守C、编码蛋白为转录因子p53 蛋白，与调控细胞生长周期、调节细胞转化、DNA 复制及诱导细胞凋亡有关D、可单独作为乳腺癌预后的分子标志E、定位于人染色体 17q13 上正确答案：E88、不能作为 PCR 模板的是A、DNAB、RNAC、质粒 DNAD、蛋白质E、cDNA正确答案：D89、关于 FISH 在白血病的应用中说法正确的是A、主要用于白血病的初诊和复发的检测B、只适用于体液、组织切片标本C、FISH 只能检测处于分裂中期的细胞D、FISH 的灵敏度高于 PCRE、FISH 是检测融合基因、确定染色体易位的首选方法正确答案：A90、检测融合基因、确定染色体易位的首选方法是A、FISHB、RT-PCRC、实时定量 PCRD、PCRE、DNA 芯片正确答案：D91、单细胞基因扩增一般采用下列何种技术增加检测的敏感性和特异性A、巢式 PCRB、多重 PCRC、PCR-RFLPD、等位基因特异性 PCRE、PCR-SSCP正确答案：A92、构成完整的病毒颗粒的成分是A、糖蛋白B、蛋白质与核酸C、核酸D、结构蛋白E、蛋白质正确答案：B93、TaqMan 探针技术要求扩增片段应在A、250~300bpB、50~150bpC、150~200bpD、200~250bpE、300~350bp正确答案：B94、产前诊断临床应用尚不广泛，原因不包括A、单个细胞的遗传诊断困难B、诊断的准确性受到多种制约C、需要生殖医学与遗传学技术的结合D、已明确母亲为携带者的婴儿E、诊断技术不成熟正确答案：E95、关于 TaqMan 探针技术的描述，不正确的是A、R 基团与Q 基团相距较远，淬灭不彻底，本底较高B、易受到Taq DNA 聚合酶5’→3’核酸外切酶活性的影响C、操作亦比较简单D、不需要进行寡核苷酸熔解曲线分析，减少了实验时间E、解决了荧光染料技术非特异性的缺点正确答案：C96、下面关于线粒体的描述不正确的是A、是真核细胞重要的细胞器B、线粒体的主要功能是氧化产能C、是细胞的能量工厂D、半寿期是 10 天左右，其数量和体积保存不变E、线粒体中存在基因，线粒体基因突变会导致疾病的发生正确答案：D97、关于特定突变位点探针的设计说法正确的是A、长度为 N 个碱基的突变区需要 2N 个探针B、检测变化点应该位于探针的中心C、检测变化点应该位于探针的两端D、探针设计时不需要知道待测样品中靶基因的精确细节E、采用等长移位设计法正确答案：B98、在人类基因组 DNA 序列中，DNA 甲基化主要发生在A、腺嘌呤的 N-6 位B、胞嘧啶的 N-4 位C、鸟嘌呤的 N-7 位D、胞嘧啶的 C-5 位E、鸟嘌呤的 C-5 位正确答案：D99、质粒的主要成分是A、多糖B、蛋白质C、氨基酸衍生物D、DNA 分子E、脂类正确答案：D100、HIV 最易发生变异的部位是A、核衣壳蛋白B、刺突蛋白C、逆转录酶D、包膜蛋白E、内膜蛋白正确答案：B。
分子生物学复习题(含答案)
分子生物学复习题（含答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、有关 SNP 位点的描述,不正确的是A、生物芯片技术可提高 SNP 位点的检测准确性B、单个 SNP 位点信息量大,具广泛的应用前景C、在整个基因组中大概有 300 万个 SNP 位点D、被称为第三代 DNA 遗传标志E、SNP 位点是单个核苷酸的变异正确答案：A2、硝酸纤维素膜最大的优点是( )A、高结合力B、非共价键结合C、本底低D、脆性大E、共价键结合正确答案：C3、关于核酸探针的种类下列不正确的是A、cDNA 探针B、寡核苷酸探针C、基因组 DNA 探针D、RNA 探针E、双链 DNA 探针正确答案：E4、目前白血病的发病机制的研究主要集中的领域不包括A、融合基因与白血病B、白血病复发的后天因素C、白血病发病的先天因素D、遗传学疾病及白血病发病的后天因素E、基因多态性与白血病正确答案：B5、下列属于抑癌基因的是( )A、c-erb-2B、mycC、sisD、p53E、ras正确答案：D6、下列有关 cDNA 探针的描述不正确的为A、利用 mRNA 通过 RT-PCR 在体外反转录可制备大量的 cDNA 探针B、cDNA 探针不包含内含子C、cDNA 探针不包含大量的高度重复序列D、由于 cDNA 探针自身所携带的 poly(dT),有可能产生非特异性杂交的问题E、cDNA 探针合成方便,成为探针的重要来源正确答案：E7、一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链,这一过程称A、探针B、杂交C、变性D、复杂性E、复性正确答案：B8、SYBR Green Ⅰ技术常要求扩增片段不大于A、50bpB、100bpC、200bpD、300bpE、400bp正确答案：D9、DNA 指纹分子的遗传性基础是A、连锁不平衡B、MHC 的多样性C、DNA 的多态性D、反向重复序列E、MHC 的限制性正确答案：C10、以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时,若能与突变探针及正常探针接合,则该样本为A、正常人B、不能确定C、纯合体患者D、杂合体患者E、携带者正确答案：E11、目前细菌表型分型的方法不包括A、血清学分型B、分子分型C、噬菌体分型D、生化分型E、抗生素敏感性分型正确答案：B12、不适宜于直接作为第一代测序技术测序的 DNA 模板( )A、双链 DNA 片段和 PCR 产物B、单链 DNA 片段C、克隆于质粒载体的 DNA 片段D、克隆于真核载体的 DNA 片段E、提取的染色质 DNA正确答案：E13、定点诱发突变可以通过以下哪个过程获得:A、PCRB、LCRC、RT-PCRD、SSCPE、ASO正确答案：A14、基因诊断对下列哪些疾病最具有确切的临床诊断意义A、肿瘤B、染色体疾病C、畸形D、单基因遗传病E、多基因遗传病正确答案：D15、下列关于细菌感染性疾病的分子生物学检验说法错误的是A、可以检测不能或不易培养、生长缓慢的病原菌B、可以实现对感染细菌的广谱快速检测C、可以对细菌进行基因分型D、可以检测病原菌耐药基因E、其检验技术都是 PCR 及其衍生技术正确答案：E16、操纵子结构不存在于:A、原核生物基因组中B、细菌基因组中C、大肠杆菌基因组中D、真核生物基因组中E、病毒基因组中正确答案：D17、分离纯化核酸的原则是( )A、保证一定浓度B、保持一级结构完整并保证纯度C、保持二级结构完整并保证纯度D、保持空间结构完整E、保证纯度与浓度正确答案：B18、关于切口平移法下述不正确的是A、可标记线性 DNAB、可标记松散螺旋 DNAC、可标记超螺旋 DNAD、可标记存在缺口的双链 DNAE、可标记随机引物正确答案：E19、未知突变的检测,下列最准确的方法是A、PCRB、RFLPC、核酸杂交D、序列测定E、ASO正确答案：D20、用于病毒基因突变检测的技术是A、荧光定量 PCR 技术B、PCR-RFLP 技术C、PCR 微卫星检测技术D、原位杂交技术E、cDNA 表达芯片技术正确答案：B21、有关微卫星的描述正确的是A、散在重复序列的一种B、10~100bp 组成的重复单位C、主要存在于着丝粒区域,通常不被转录D、形式为(CA)n/(TG)n、(AG)n、(CAG)n 等E、又称为可变数目串联重复序列(VNTR)正确答案：D22、关于抑癌基因的说法正确的是A、呈隐性作用方式B、可以使细胞丧失生长控制和正性调控功能C、是一类可编码对肿瘤形成起促进作用的蛋白质的基因D、抑癌基因又称为肿瘤分化抑制基因E、正常情况下促进细胞增殖、抑制细胞分化正确答案：A23、决定 PCR 反应特异性的是A、模板B、dNTPC、引物D、缓冲液E、Taq DNA 聚合酶正确答案：C24、关于 DNA 芯片原位合成法的描述错误的是:A、也称在片合成B、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针C、包括光导原位合成法D、包括原位喷印合成法E、包括直接点样法正确答案：E25、可作为分子遗传标记的是A、HLAB、单拷贝序列C、高表达蛋白D、RFLPE、染色体正确答案：D26、为了避免反复冻融对核酸样品产生的破坏作用,最好( )A、将核酸溶解保存B、将核酸小量分装保存C、将核酸冻干保存D、将核酸沉淀保存E、将核酸大量保存正确答案：B27、GeneXpert 全自动结核检测平台不具有的优势是( )A、检测高度自动化B、单标本单试剂检测,避免浪费C、检测快速准确D、同时检测 TB 与利福平耐药E、检测费用低廉正确答案：E28、Sanger 双脱氧链终止法使用的链终止物是A、α-32P-dNTPB、dNTPC、ddNTPD、α-35S-dNTPE、NTP正确答案：C29、导致世界范围内性传播疾病的最为普遍的因素是A、肺炎衣原体B、豚鼠衣原体C、沙眼衣原体D、鹦鹉热衣原体E、鼠衣原体正确答案：C30、实时荧光 PCR 中,GC 含量在 20%~80%(45%~55%最佳),单链引物的最适长度为A、35~50bpB、15~20bpC、5~70bpD、5~20bpE、70~90bp正确答案：B31、Southern 杂交通常是指( )A、DNA 与 RNA 杂交B、DNA 与 DNA 杂交C、RNA 与 RNA 杂交D、蛋白质与蛋白质杂交E、DNA 与蛋白质杂交正确答案：B32、具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链,这一过程称A、杂交B、变性C、复杂性D、复性E、探针正确答案：D33、第二代测序技术不能应用于A、从头测序、重测序B、转录组及表达谱分析C、小分子 RNA 研究D、个体基因组测序和 SNP 研究E、直接测甲基化的 DNA 序列正确答案：E34、目前已知感染人类最小的 DNA 病毒( )A、HIVB、HPVC、HBVD、HAVE、HCV正确答案：C35、下列方法中不属于 RNA 诊断的是A、Northern blotB、RNA 斑点杂交C、基因芯片D、mRNA 差异显示 PCR 技术E、逆转录 PCR正确答案：C36、RNA/RNA 杂交体的 Tm 值一般应增加A、1-5℃B、5~10℃C、10~15℃D、15~20℃E、20~25℃正确答案：E37、下列属于核苷酸三联体重复序列发生高度重复所致的是A、珠蛋白生成障碍性贫血B、脆性 X 综合症C、迪谢内肌营养不良D、血友病E、镰状细胞贫血正确答案：B38、逆转录 PCR 扩增最终产物的特异性由A、随机引物决定B、oligo-d(T)决定C、PCR 扩增的特异引物决定D、扩增效率决定E、逆转录酶决定正确答案：C39、检测融合基因、确定染色体易位的首选方法是A、FISHB、RT-PCRC、实时定量 PCRD、PCRE、DNA 芯片正确答案：D40、单基因遗传病分子诊断的主要应用是A、产前诊断B、携带者筛查C、症状前诊断D、携带者诊断E、耐药基因检测正确答案：A41、乳腺癌分子生物学检测的意义不包括A、预测早期乳腺癌复发、转移的风险B、筛选易感人群C、帮助减轻化疗的不良反应D、反映肿瘤的生物学行为E、筛选适合内分泌、化疗及靶向治疗的患者正确答案：C42、线粒体基因组与核基因组之间,下面描述不正确的是A、线粒体基因组与核基因组分别在不同的位置进行自主复制和转录,之间互不影响B、mtDNA 突变可引起编码蛋白功能障碍,影响细胞呼吸、氧化功能,进而影响核 DNA 的表达C、mtDNA 自主性复制,但复制所需的酶、调控因子等由核基因编码D、二者虽在地理位置上独立,但二者之间关系十分密切E、线粒体基因组与核基因组之间存在“交叉对话”,相互影响,相互协调正确答案：A43、STR 法医鉴定的基础是A、孟德尔遗传定律B、蛋白质空间结构C、基因扩增技术D、碱基配对原则E、基因多态性正确答案：A44、以下哪种酶可用于 PCR 反应( )A、KlenowB、HindⅢC、Taq DNA 聚合酶D、RNaseE、Dnase正确答案：C45、下列不能用于核酸转移作固相支持物的是A、NC 膜B、尼龙膜C、化学活性膜D、滤纸E、PVC 膜正确答案：E46、Southern 印迹杂交的描述正确的是A、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因,而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案：A47、在下列何种情况下可考虑进行基因连锁检测方法进行基因诊断A、表达异常B、基因结构变化未知C、点突变D、基因片段缺失E、基因片段插入正确答案：B48、关于 mtDNA 非编码序列,描述正确的是A、不参与 mtDNA 的复制、转录等,属于“无用”信息B、是高度重复序列C、占整个 mtDNA 的 15%,比例较大D、mtDNA 中有两段非编码区E、位于 mtDNA 的轻链正确答案：D49、变性梯度凝胶电泳的描述中错误的是A、使 DNA 双链分子局部变性B、采用梯度变性凝胶C、变性难易由核苷酸组成决定D、突变检测率高E、可确定突变位置正确答案：E50、以下对镰刀状红细胞贫血症叙述正确的是( )A、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成苯丙氨酸残基B、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成甘氨酸残基C、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成丝氨酸残基D、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成缬氨酸残基E、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成异亮氨酸残基正确答案：D51、关于测序策略的叙述正确的是A、应该具有最大重叠、最小数量的测序反应B、最小的目的 DNA 片段(如<1kb),可以使用引物步移法C、最小的目的 DNA 片段(如<1kb),可以使用随机克隆法D、大片段未知序列 DNA 测序,可以直接测序E、大规模基因组计划,可以使用多个测序策略正确答案：E52、组织 DNA 提取中,EDTA 的作用是A、抑制 DNaseB、沉淀 DNAC、减少液体表面张力D、抑制 RNaseE、去除蛋白质正确答案：A53、寡核苷酸探针的 Tm 简单计算公式为A、Tm=4(G+C)+2(A+T)B、Tm=2(G+C)+4(A+T)C、Tm=6(G+C)+4(A+T)D、Tm=2(G+C)+6(A+T)E、Tm=6(G+C)+2(A+T)正确答案：A54、对于 BRCA 基因突变的检测,以下最常用的方法是A、变性高效液相色谱法B、单链构象多态性分析C、变性梯度凝胶电泳D、异源双链分析E、直接 DNA 序列分析正确答案：E55、下列关于人类遗传病的叙述不正确的是A、人类遗传病是指由于遗传物质改变而引起的疾病B、遗传性疾病既可以直接诊断,也可以间接诊断C、人类遗传病包括单基因遗传病、多基因遗传病和染色体异常遗传病D、21-三体综合症患者体细胞中染色体数目为 47 条E、单基因病是指受一个基因控制的疾病正确答案：E56、第一个被发现可以预测晚期转移性结直肠癌患者是否能从靶向治疗药物西妥昔单抗中获益的生物标志物是A、K-rasB、EGFR 基因C、TTF-1D、CEAE、bcl-2 基因正确答案：A57、下列方法中能同时检测几种疟原虫混合感染的是A、竞争 PCRB、巢式 PCRC、多重 PCRD、普通 PCRE、PCR-RFLP正确答案：C58、关于 PCR-RFLP 错误的是A、采用特定的限制性内切酶对 PCR 产物进行处理B、对酶切后的片段长度进行分析C、判断有无点突变D、突变位点不必在限制酶识别序列中E、需先进行 PCR 扩增正确答案：D59、下列哪些技术不适用于鉴定菌种亲缘性:A、随机扩增 DNA 多态性分析B、连接酶链反应C、PCR-RFLPD、多位点测序分型E、DNA 测序技术正确答案：B60、点/狭缝杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因,而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C、用于基因定位分析D、阳性菌落的筛选E、蛋白水平的检测正确答案：A61、DNA 提取中不能有效去除蛋白质的是A、酚/氯仿抽提B、SDSC、高盐洗涤D、蛋白酶 KE、RNase正确答案：E62、宫颈癌与 HPV 病毒感染密切相关,宫颈癌细胞产生的机制是A、HPV DNA 大量复制B、原癌基因被激活C、病毒增殖导致细胞破裂D、HPV 导致细胞凋亡E、病毒蛋白在细胞内堆积正确答案：B63、纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8,可使比值升高的是:A、蛋白质B、酚C、RNAD、氯仿E、Mg2+正确答案：C64、关于 TaqMan 探针技术的描述,不正确的是A、R 基团与 Q 基团相距较远,淬灭不彻底,本底较高B、易受到 Taq DNA 聚合酶5’→3’核酸外切酶活性的影响C、操作亦比较简单D、不需要进行寡核苷酸熔解曲线分析,减少了实验时间E、解决了荧光染料技术非特异性的缺点正确答案：C65、基因芯片技术的本质是( ):A、核酸分子杂交B、蛋白质分子杂交技术C、连接酶链反应D、DNA 重组技术E、酶切技术正确答案：A66、编码 HIV 衣壳蛋白的是A、env 基因B、gag 基因C、vif 基因D、tat 基因E、pol 基因正确答案：B67、HIV 核酸类型是A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：D68、检测靶序列是 DNA 的技术是:A、Southern 杂交B、Western 杂交C、Northern 杂交D、Eastern 杂交E、杂交淋巴瘤正确答案：A69、HCV 的核酸是A、+ssRNAB、dsRNAC、dsDNAD、ssDNAE、-ssRNA正确答案：A70、关于 Sanger 双脱氧链终止法叙述错误的是A、每个 DNA 模板需进行一个独立的测序反应B、需引入双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)作为链终止物C、链终止物缺少3’-OH,使链终止D、测序反应结果是产生 4 组不同长度的核苷酸链E、高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离仅差一个核苷酸的单链 DNA 正确答案：A71、PCR 中的脱氧核苷三磷酸不包括A、dATPB、dTTPC、dCTPD、dGTPE、dUTP正确答案：E72、以 mRNA 为模板合成 cDNA 的酶是A、DNA 酶B、Taq DNA 聚合酶C、限制性内切酶D、RNA 酶E、逆转录酶正确答案：E73、结核杆菌的分子生物学检验临床意义中不包括A、早期诊断B、耐药检测C、鉴别诊断D、疗效评价E、快速诊断正确答案：A74、目前被 DNA 自动化测序技术广泛采用的酶是A、大肠杆菌 DNA 聚合酶ⅠB、Klenow 片段C、测序酶D、耐热 DNA 聚合酶E、限制性内切核酸酶正确答案：D75、结构基因突变不包括A、基因表达异常B、基因点突变C、基因扩增D、基因缺失E、基因重排正确答案：A76、点突变引起的血友病 A 的分子诊断方法不包括A、PCR-SSCPB、PCR-RFLPC、PCR-VNTRD、PCR-STRE、长距离 PCR正确答案：E77、大肠杆菌类核结构的组成是A、双链 DNAB、RNAC、蛋白质+DNAD、支架蛋白E、RNA+支架蛋白+双链 DNA正确答案：E78、作为芯片固相载体的材料描述正确的是A、主要有玻片、硅片等实性材料B、不使用硝酸纤维素膜、尼龙膜及聚丙烯膜等膜性材料C、这些载体材料不需要处理,其表面存在活性基团(如羟基或者氨基)D、可以直接固定已经合成的寡核苷酸探针E、不需要对介质表面进行化学预处理--活化正确答案：A79、不属于脆性 X 综合征分子诊断人群的是A、已明确母亲为携带者的婴儿B、没有 FraX 家族史C、发育迟缓或自闭症的患者D、未诊断的 MR 家族史E、有 FraX 体格或性格阳性征象者正确答案：B80、关于人工合成的寡核苷酸探针,下列描述不正确的是A、特异性高B、可依赖氨基酸序列推测其序列C、分子量小D、可用于相似基因顺序差异性分析E、可用末端转移酶进行5’端标记正确答案：E81、下列哪一种病毒的遗传物质为 RNA( )A、乙肝病毒B、乳头瘤状病毒C、疱疹病毒D、人类免疫缺陷病毒E、腺病毒正确答案：D82、下列几种 DNA 分子的碱基组成比例,哪一种的 Tm 值最高( )A、A+T=15%B、G+C=25%C、G+C=40%D、A+T=80%E、G+C=60%正确答案：A83、关于逆转录 PCR 的描述,不正确的是A、首先应将 RNA 转化为 cDNA 才能进行 PCRB、除了使用 DNA 聚合酶外,还应使用逆转录酶C、模板为 RNAD、oligo-d(T)理论上可以将所有的 mRNA 进行逆转录反应E、逆转录酶不需要引物进行逆转录反应正确答案：E84、一个完整的生物芯片配套软件不包括A、统计分析软件B、生物芯片的图像处理软件C、画图软件D、生物芯片扫描仪的硬件控制软件E、数据提取软件正确答案：C85、线粒体疾病的遗传特征是A、女患者的子女约 1/2 发病B、母系遗传C、发病率有明显的性别差异D、交叉遗传E、近亲婚配的子女发病率增高正确答案：B86、在人类基因组中,编码序列占的比例为A、23%B、1.5%C、3%D、21%E、5%正确答案：B87、乙型肝炎病毒的核酸类型是( )A、双股 DNAB、负股 DNAC、正股 DNAD、单股 DNAE、DNA-RNA 二聚体正确答案：A88、对于相同大小的核酸片段,最快的转移方法是A、电转移B、真空转移C、毛细管电泳D、向下虹吸转移E、虹吸转移正确答案：B89、延伸的温度通常为A、95℃B、55℃C、37℃D、72℃E、25℃正确答案：D90、在 pH 为下述何种范围时,Tm 值变化不明显A、pH 为 5~9B、pH 为 3~5C、pH 为 5~6D、pH 为 8~11E、pH 为 4~5正确答案：A91、标记的参与杂交反应的核酸分子称为A、复性B、复杂性C、杂交D、变性E、探针正确答案：E92、对于镰刀状红细胞贫血的基因诊断不可以采用( ):A、PCR-RFLPB、DNA 测序C、核酸分子杂交D、设计等位基因特异性引物进行 PCRE、Western blot正确答案：E93、与耳聋有关的最主要的 mtDNA 突变是A、点突变B、插入或缺失C、大片段重组D、拷贝数变异E、异质性突变正确答案：A94、荧光原位杂交的描述正确的是A、快速确定是否存在目的基因B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案：C95、第三代测序技术的最主要特征:A、对单分子 DNA 进行非 PCR 的测序B、对 SNP 进行非 PCR 的测序C、高通量和并行 PCR 测序D、直接分析 SNPE、直接进行个体基因组测序和 SNP 研究正确答案：A96、关于 DNA 变性的描述不正确的是A、二级结构破坏B、一级结构破坏C、黏度降低D、生物活性丧失E、浮力密度增加正确答案：B97、下列不能被列入可移动基因范畴的是A、插入序列B、质粒C、染色体 DNAD、转座子E、可转座噬菌体正确答案：C98、生物芯片根据芯片上固定的探针种类不同可分为几种,不包括:A、DNA 芯片B、蛋白质芯片C、细胞芯片D、组织芯片E、测序芯片正确答案：E99、DNA 芯片的固相载体不可以用A、半导体硅片B、玻璃片C、滤纸D、硝酸纤维素膜E、尼龙膜正确答案：C100、DNA 自动化测序技术一般用不到的技术是A、Sanger 的双脱氧链终止法B、Maxam 和 Gilbert 的化学降解法C、荧光标记技术D、PCR 技术E、电泳技术正确答案：B。
临床分子生物学检验技术模拟练习题(附答案)
临床分子生物学检验技术模拟练习题（附答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、检测TB的实验室技术中，被认为是目前最先进的一种检测TB及其耐药性的方法是A、PCR技术B、荧光定量 PCR技术C、PCR-RFLP技术D、全自动结核杆菌检测技术E、DNA 测序技术正确答案：D2、属于微小缺失综合征的不包括A、Wilms瘤B、着色性干皮病C、Angelman 综合征D、Prader-Willi综合征E、WAGR综合征正确答案：B3、淋病奈瑟菌耐青霉素的分子机制与以下哪组基因有关A、katG和inhAB、gyrA和parCC、penA和ponAD、gyrA和gyrBE、rrs和rpsL正确答案：C4、下列不是影响DNA复性因素的是A、DNA浓度B、DNA的分子量C、温度D、碱基组成E、DNA 的来源正确答案：E5、硝酸纤维素和 PVDF膜结合蛋白主要靠A、疏水作用B、氢键作用C、离子键作用D、盐键作用E、酯键作用正确答案：A6、下列不能用于核酸转移作固相支持物的是A、NC膜B、尼龙膜C、化学活性膜D、滤纸E、PVC膜正确答案：E7、有关多重PCR的描述正确的是A、同一个模板，多种不同的引物B、相同的引物，多种不同的模板C、多个模板，多种引物D、引物的Tm值、反应时间和温度、反应缓冲液等尽量不一致以区分不同产物E、同一反应内各扩增产物片段的大小应尽可能相同或接近正确答案：A8、Western 印迹过程中若转移<20kD的蛋白质时应采用何种硝酸纤维素膜A、0.2μmB、0.3μmC、0.4μmD、0.5μmE、0.6μm正确答案：A9、双向电泳的样品制备目的不包括的是A、还原B、氧化C、变性D、去除蛋白质杂质E、溶解正确答案：B10、寡核苷酸探针的Tm简单计算公式为A、Tm=4(G+C)+2(A+T)B、Tm=2(G+C)+4(A+T)C、Tm=6(G+C)+4(A+T)D、Tm=2(G+C)+6(A+T)E、Tm=6(G+C)+2(A+T)正确答案：A11、骨髓移植后引起GVHD的主要效应细胞是A、T细胞B、B细胞C、基质细胞D、造血干细胞E、单核细胞正确答案：A12、阴性质控品失控的原因不包括A、扩增产物污染B、标本交叉污染C、放射性污染D、基因组DNA或质粒的污染E、试剂污染正确答案：C13、下列何种技术不可用于 PGDA、微卫星 DNA序列B、变性高效液相色谱分析法C、基因芯片D、基因测序E、Sourthern blot正确答案：E14、以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探针接合，则该样本为A、正常人B、杂合体患者C、携带者D、不能确定E、纯合体患者正确答案：C15、提高移植存活率的方法以下不可行的是A、HLA配型B、mH的鉴定C、ABO血型鉴定D、移植前输入补体和抗体E、移植前应用免疫抑制剂正确答案：D16、移植物抗宿主反应以下列何项为主要特征A、上皮癌的高发生率B、供者T淋巴细胞与受者同种异型抗原发生应答C、被移植的B淋巴细胞产生自身抗体D、常出现自然缓解E、被移植的T淋巴细胞产生自身抗体正确答案：B17、关于肺炎支原体的实验室检测，正确的是A、体外培养生长缓慢但阳性率很高B、免疫学方法检测的假阳性率较低C、体外培养在支原体感染的早期诊断上具有重要意义D、利用分子生物学方法可以进行流行病学调查和耐药基因分析E、PCR技术可检测到极微量的DNA，但特异性不高正确答案：D18、下列方法中不属于RNA诊断的是A、Northern blotB、RNA斑点杂交C、基因芯片D、mRNA差异显示PCR技术E、逆转录 PCR正确答案：C19、下列关于病毒基因组描述不正确的是A、基因组可以由DNA或RNA组成B、有重叠基因C、基因组大部分是用来编码蛋白质的D、有高度重复序列E、相关基因往往丛集形成一个功能单位正确答案：D20、纯DNA 的A₂₆₀/A₂₈₀比值为1.8,可使比值升高的是A、蛋白质B、酚C、氯仿D、RNAE、乙醇正确答案：D21、下列符合解脲脲原体基因组结构特征的是A、基因组大于肺炎支原体基因组B、UU为环状染色体C、终止密码子 UGA编码赖氨酸D、完全遵循遗传密码的通用性E、G+C含量丰富正确答案：B22、操纵子结构不存在于A、原核生物基因组中B、大肠杆菌基因组中C、真核生物基因组中D、病毒基因组中E、细菌基因组中正确答案：C23、下面关于线粒体的描述不正确的是A、是真核细胞重要的细胞器B、线粒体的主要功能是氧化产能C、是细胞的能量工厂D、半寿期是10天左右，其数量和体积保持不变E、线粒体中存在基因，线粒体基因突变会导致疾病的发生正确答案：D24、第一个被发现可以预测晚期转移性结直肠癌患者是否能从靶向治疗药物西妥昔单抗中获益的生物标志物是A、K-rasB、EGFR基因C、TTF-1D、CEAE、bcl-2基因正确答案：A25、目前国际唯一公认的线粒体糖尿病致病突变是A、C3254AB、T3271CC、A4833GD、A3243GE、T16189C正确答案：D26、可以用来检测具有生物活性的蛋白质的是A、native PAGEB、SDS-PAGEC、2-DED、IEFE、Western blotting正确答案：A27、人类染色体中，形态最小的是A、X染色体B、Y染色体C、22号染色体D、21号染色体E、1号染色体正确答案：D28、判断HBV复制及传染性的直接指标是检测A、HBV DNA多聚酶活力B、HBsAgC、HBV DNAD、HBeAgE、HBcAg正确答案：C29、经检查,某患者的核型为46,XY, del(6)p11-ter,说明其为何种患者A、染色体部分丢失B、染色体丢失C、嵌合体D、环状染色体E、染色体倒位正确答案：A30、著名的Ph1染色体发生的易位是A、t(9;22)(q11;q34)B、t(5;11)(q34;q22)C、t(9;22)(q34;q1l)D、t(9;21)(q33;q11)E、t(5;22)(q34;q11)正确答案：C31、线粒体基因组编码几种rRNAA、22种B、20种C、18种D、3种E、2种正确答案：E32、患者进行抗结核治疗2个月后检出结核杆菌的rpoB基因耐药突变，建议患者更换的药物是A、利福平B、左氧氟沙星C、吡嗪酰胺D、乙胺丁醇E、链霉素正确答案：A33、下列不是微流控芯片常用检测方法的是A、紫外吸收检测法B、化学发光检测法C、电泳检测法D、电化学检测法E、荧光检测法正确答案：C34、下列疾病中发病率与母亲年龄增大有关的是A、血友病 AB、着色性干皮病C、Patau 综合征D、猫叫综合征E、WAGR综合征正确答案：C35、Western 印迹过程中若转移>20kD的蛋白质时应采用何种硝酸纤维素膜A、0.25μmB、0.35μmC、0.45μmD、0.55μmE、0.65μm正确答案：C36、染色体结构畸变的基础是A、染色体核内复制B、染色体断裂及断裂后的异常重排C、姐妹染色单体交换D、染色体丢失E、染色体不分离正确答案：B37、任意引物 PCR的特点描述错误的是A、需预知靶基因的核苷酸序列B、通过随机引物与模板序列随机互补C、扩增后可直接得到靶基因的多态性指纹图谱D、可用于基因组DNA图谱构建E、可用于临床致病菌的流行病学检测、分型正确答案：A38、与异烟肼耐药无关的基因是A、katGB、ahpCC、embBD、inhAE、kasA正确答案：C39、生物传感器中的免疫传感器所使用的生物敏感材料是A、细胞B、酶C、核酸D、抗原和抗体E、微生物正确答案：D40、关于梅毒螺旋体的实验室检测，下列描述正确的是A、分子生物学方法是耐药基因分析和流行学研究的首选方法B、诊断梅毒的传统方法是体外培养C、分子生物学方法不能早期诊断梅毒感染D、血清学检查普遍用于梅毒的筛查、疗效观察和流行病学检查，对早期梅毒诊断敏感E、镜检法简便，特异性高，但不能用于皮肤黏膜损害的早期诊断正确答案：A41、可同时引起 MELAS 综合征、耳聋和糖尿病的mtDNA 突变是A、C3254AB、T3271CC、A4833GD、A3243GE、T16189C正确答案：D42、关于 Sanger双脱氧链终止法叙述错误的是A、每个 DNA模板需进行一个独立的测序反应B、需引入双脱氧核苷三磷酸(ddTNP)作为链终止物C、链终止物缺少3'-OH，使链终止D、测序反应结果是产生4组不同长度的核苷酸链E、高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离仅差一个核苷酸的单链DNA 正确答案：A43、关于 PCR-RFLP错误的是A、采用特定的限制性内切酶对 PCR产物进行处理B、对酶切后的片段长度进行分析C、判断有无点突变D、突变位点不必在限制酶识别序列中E、需先进行 PCR扩增正确答案：D44、基因诊断间接方法不包括A、基于SNP的单倍型分析B、Southern blotC、基于STR的微卫星分析D、PCR-RFLPE、RFLP连锁分析正确答案：B45、用于蛋白质检测的标本长期保存于A、8℃B、-20℃C、4℃D、-70℃E、室温正确答案：D46、下面对mtDNA中D环区(D-loop)的描述正确的是A、是结构基因，编码13个蛋白多肽B、编码22个 tRNAC、编码2种rRNA,即12S rRNA 和16S rRNAD、参与调控线粒体的复制和转录E、可折叠成茎环结构正确答案：D47、作为芯片固相载体的材料描述正确是A、主要有玻片、硅片等实性材料B、不使用硝酸纤维素膜、尼龙膜及聚丙烯膜等膜性材料C、这些载体材料不需要处理，其表面存在活性基团(如羟基或者氨基)D、可以直接固定已经合成的寡核苷酸探针E、不需要对介质表面进行化学预处理——活化正确答案：A48、点突变引起的血友病A的分子诊断方法不包括A、PCR-SSCPB、PCR-RFLPC、PCR-VNTRD、PCR-STRE、长距离 PCR正确答案：E49、单基因遗传病分子诊断的主要应用是A、症状前诊断B、耐药基因检测C、携带者诊断D、携带者筛查E、产前诊断正确答案：E50、关于mtDNA非编码序列，描述正确的是A、不参与mtDNA 的复制、转录等，属“无用”信息B、是高度重复序列C、占整个mtDNA 的15%,比例较大D、mtDNA 中有两段非编码区E、位于 mtDNA的轻链正确答案：D51、到目前为止已确定的36个NAT2 基因变异种最常见的等位基因是A、NAT2*3B、NAT2*4C、NAT2*5D、NAT2*6E、NAT2*7正确答案：B52、在器官移植中HLA 配型最重要的位点是A、HLA-DRB、HLA-AC、HLA-BD、HLA-DPE、HLA-C正确答案：A53、属于染色体结构异常的染色体病为A、Klinefelter 综合征B、Patau 综合征C、Edward综合征D、猫叫综合征E、Down综合征正确答案：D54、猫叫综合征患者的核型为A、46, XY,r(5)(p14)B、46,XY, ins(5)(p14)C、46,XY, del(5)(p14)D、46,XY,t(5;8)(p14;p15)E、46, XY, dup(5)(p14)正确答案：C55、生殖健康的内容主要包括A、计划生育咨询、信息、教育、交流及服务，人工流产的预防和流产后果管理B、产前保健、安全分娩及产后保健的教育与服务，特别是母乳喂养和母婴保健C、不孕症的预防和适当治疗生殖道感染、性传播疾病及其他生殖健康问题治疗D、关于性行为、生殖健康及父母责任的信息、教育和咨询E、以上都是正确答案：E56、核酸序列的基本分析不包括A、测序分析B、限制性酶切分析C、序列变换分析D、统计分析E、分子量、碱基组成、碱基分布正确答案：D57、下列说法正确的是A、液状石蜡切片中缩短蛋白酶K的消化时间可增加提取DNA片段的长度B、组织样本不需蛋白酶K消化即可进行核酸提取C、用于提取核酸的石蜡切片需要先用二甲苯脱蜡D、用于提取核酸的石蜡切片不需脱蜡即可进行核酸提取E、新鲜的组织样本需要先用二甲苯脱蜡才能进行核酸提取正确答案：C58、PCR反应体系不包括A、耐热的 Taq DNA 聚合酶B、cDNA 探针C、4种dNTPD、合适的缓冲液体系E、模板DNA正确答案：B59、点/狭缝杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C、用于基因定位分析D、阳性菌落的筛选E、蛋白水平的检测正确答案：A60、HCV 基因分型的“金标准”是A、基因分型检测芯片B、测序分析法C、实时荧光 PCRD、基因型特异性引物扩增法E、RFLP正确答案：B61、人类基因组的组织特点描述不正确的是A、基因组中各个基因的大小和内部组织的差异不大B、基因组含重复序列C、大部分为非编码序列D、功能相关的基因常散在分布于不同的染色体上E、每个结构基因都有单独的调控序列正确答案：A62、荧光定量 PCR检测核酸量的时间段在A、非指数期B、PCR反应的最初阶段C、PCR反应最后的时间段D、指数期的起始阶段E、指数期的终末阶段正确答案：D63、通常标记第二抗体的酶是A、ALTB、ASTC、ACPD、ACATE、AKP正确答案：E64、ICAT碘代乙酰亚胺结构与哪一种氨基酸发生耦联A、半胱氨酸B、胱氨酸C、酪氨酸D、精氨酸E、碱性氨基酸正确答案：A65、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理不正确的是A、SDS是一种阴离子去污剂B、SDS可以与蛋白质的疏水部分相结合，从而使蛋白质获得负电荷C、SDS-PAGE时蛋白质的迁移率与分子大小相关D、SDS-PAGE使具有不同等电点的蛋白质得以分离E、SDS与蛋白质结合后可以屏蔽天然蛋白质的电荷正确答案：D66、Sanger双脱氧链终止法使用的链终止物是A、dNTPB、NTPC、ddNTP正确答案：C67、核酸分子杂交的基础是A、抗原抗体结合B、甲基化C、碱基互补配对D、配体受体结合E、磷酸化正确答案：C68、核型为47，XXY 的细胞中可见到几个X染色质A、0B、3C、2D、1E、2或3正确答案：D69、线粒体基因组22个tRNA 可转录几种 tRNAA、22种B、20种C、18种D、13种E、2种正确答案：B70、下列说法错误的是A、用于RNA检测的样本短期可保存在-20℃B、用于 PCR检测的样本可用肝素作为抗凝剂C、如使用血清标本进行检测应尽快分离血清D、外周血单个核细胞可从抗凝全血制备E、用于核酸提取的痰液标本应加入 1mol/L NaOH初步处理正确答案：B71、人类基因组的碱基数目为A、2.9×10⁶bpB、3.0×10⁹bpC、4.0×10⁹bpD、4.0×10⁶bpE、4.0×10⁸bp正确答案：B72、基因芯片技术的优点不包括A、操作简便B、缩微化C、观察结果直观D、芯片检测稳定性高E、高通量正确答案：D73、一些致死性呼吸障碍、乳酸酸中毒、肝肾衰竭病例mtDNA 突变形式是A、点突变B、插入C、缺失D、拷贝数变异E、动态突变正确答案：D74、关于AR说法不正确的是A、AR基因位于Xq11.2-q12,编码雄激素受体B、AR基因的内含子含有可变数目的CAG串联重复序列C、CAG序列具有多态性D、美国黑人易患前列腺癌的主要遗传基础就是AR基因的串联重复序列较短E、阻断 AR可以延缓前列腺癌的进展正确答案：B75、发出临床检验报告前应进行结果审核，审核内容不包括A、室间质量评价是否合格B、临床医生申请的检验项目是否已全部检验C、室内质控是否在控D、检验报告是否正确E、检验结果与临床诊断是否相符正确答案：A76、HBV DNA 中最小的一个开放阅读框是A、P基因区B、S基因区C、X基因区D、前S基因区E、C基因区正确答案：C77、目前测序读长最大的测序反应是A、双脱氧终止法B、边合成边测序C、焦磷酸测序D、化学裂解法E、寡连测序正确答案：A78、第二代测序技术一般不用到A、双脱氧链终止法B、文库接头C、高通量的并行PCRD、高通量的并行测序反应E、高性能计算机对测序数据进行拼接和分析正确答案：A79、常见的进行乳液 PCR(emulsion PCR)的场所是A、芯片表面B、磁珠表面C、PTP板孔D、尼龙膜上E、毛细管内正确答案：B80、关于 Leber遗传性视神经病的描述不正确的是A、mtDNA 突变是Leber遗传性视神经病的分子基础B、属母系遗传病C、病变会累及视网膜、巩膜等，最终导致视神经变性D、目前已发现与本病相关30多个mtDNA 突变位点E、mtDNA 突变分原发突变和继发突变，只有原发突变会导致本病的发生正确答案：E81、若某人既有睾丸又有卵巢，内外生殖器间性，第二性征发育异常，则此人患有以下哪种疾病A、性逆转综合征B、真两性畸形.C、男性假两性畸形D、女性假两性畸形E、性腺发育不全正确答案：D82、关于电转膜的描述不正确的是A、半干转特别适合大分子蛋白质的转移B、转膜的顺序是膜在负极一侧，凝胶靠近正极一侧C、缓冲液 pH过低会导致部分蛋白质凝集沉淀D、转膜缓冲液中含有甲醇成分E、转膜时间不宜过长正确答案：A83、基因芯片技术的临床应用不包括A、由于蛋白质翻译后修饰改变而引起的疾病的诊断B、疾病的诊断C、基因突变的检测D、指导个体用药E、药物的筛选正确答案：A84、可作为分子遗传标记的是A、HLAB、单拷贝序列C、高表达蛋白D、RFLPE、染色体正确答案：D85、关于单基因遗传病的叙述，正确的是A、原发性高血压是单基因遗传病B、发病机制都已阐明C、受多对等位基因控制D、可进行定性诊断和定量诊断E、在群体中发病率高正确答案：D86、最常用的DNA 探针标记方法是A、随机引物标记B、切口平移标记C、3'-末端标记D、5'-末端标记E、PCR法正确答案：A87、离子交换层析有效分离蛋白质的依据是A、蛋白的pIB、蛋白的分子大小C、配体的特异性亲和力D、蛋白的溶解度E、蛋白所带电荷正确答案：E88、探针基因芯片技术的本质就是A、基因重组技术B、酶切技术C、聚合酶链反应技术D、核酸分子杂交技术E、蛋白质分子杂交技术正确答案：D89、常见的常染色体病为A、Turner综合征B、Down综合征C、WAGR综合征D、猫叫综合征E、Klinefelter综合征正确答案：B90、G-6-PD缺乏时导致机体下列哪些物质增多(↑)或减少(↓)A、H₂O₂、GSH和NADPH↑B、H₂O₂和GSH↑,NADPH↓C、H₂O₂↑,GSH和NADPH↓D、GSH和NADPH↑,H₂O₂↓E、H₂O₂和NADPH↑,GSH↓正确答案：C91、基因芯片技术的主要步骤不包括A、杂交反应B、芯片的设计与制备C、信号检测D、酶切分析E、样品制备正确答案：D92、PCR-SSCP 描述中错误的是A、检测核酸点突变的技术B、需制备成单链DNAC、根据空间构象由DNA 的碱基组成决定的原理D、不需电泳E、敏感性与待分离DNA 的长度有关正确答案：D93、单基因遗传病诊断最重要的前提是A、了解患者的家族史B、疾病表型与基因关系已阐明C、了解相关基因的基因克隆和功能分析等知识D、了解相关基因的染色体定位E、进行个体的基因分型正确答案：A94、下列叙述错误的是A、原核生物基因组具有操纵子结构B、原核生物结构基因是断裂基因C、原核生物基因组中含有插入序列D、原核生物基因组中含有重复顺序E、原核生物结构基因的转录产物为多顺反子型mRNA 正确答案：B95、羊膜穿刺的最佳时间在孕期多少周时A、4B、30C、10D、2E、16正确答案：E96、下列方法中能同时检测几种疟原虫混合感染的是A、竞争PCRB、巢式PCRC、多重PCRD、普通PCRE、PCR-RFLP正确答案：C97、关于 Western 印迹以下说法正确的是A、固相膜保存时间短B、需要对靶蛋白进行放射性核素标记C、是由凝胶电泳和固相免疫组成的D、缺点是不能对转移到固相膜上的蛋白质进行连续分析E、检测的灵敏性为0.1~1ng正确答案：C98、下列哪种质粒带有抗性基因A、F质粒B、Col质粒C、接合型质粒D、Vi质粒E、R质粒正确答案：E99、pncA基因突变与下列哪种酶活性改变相关A、糖基转移酶B、DNA 旋转酶C、泵蛋白D、吡嗪酰胺酶E、DNA 依赖RNA 聚合酶正确答案：D100、下列哪一种病毒的遗传物质为RNAA、乙肝病毒B、乳头瘤状病毒C、疱疹病毒D、人类免疫缺陷病毒E、腺病毒正确答案：D。
液相色谱在生物大分子分离研究中的应用
液相色谱在生物大分子分离研究中的应用谷春秀;赵伟;于志勇;谷雪枫;徐宏博【摘要】本文讨论了液相色谱法在生物大分子分离过程中的应用,主要探讨色谱柱的选择以及分离条件的确定。
以糖类为例介绍了液相色谱分离生物分子的具体方法,同时对柱温流动相等因素进行分析和讨论。
液相色谱法应用于生物大学子实验教学,对学生掌握先进的分离方法具有很重要的意义。
%In this study,the application of liquid Chromatography in biological macromolecular separation was discussed.The factors discussed indicate the selection of the column and condition for separation.The carbohydrate r are taken as experimental sample an influent factors,such as temperature of column and different elution were observed an analyzed.It was conclusion that Liquid Chromatography can be used in the course of macromolecular separation to let our students master some advanced separation method.【期刊名称】《生命科学仪器》【年(卷),期】2012(010)002【总页数】5页(P40-44)【关键词】生物大分子;糖类;液相色谱法【作者】谷春秀;赵伟;于志勇;谷雪枫;徐宏博【作者单位】北京联合大学生物化学工程学院,北京100023;北京联合大学生物化学工程学院,北京100023;北京联合大学生物化学工程学院,北京100023;北京联合大学生物化学工程学院,北京100023;北京联合大学生物化学工程学院,北京100023【正文语种】中文【中图分类】O657.72生物大分子包括多肽、酶、蛋白质、核酸( DNA和RNA)以及多糖等[1]。
临床分子生物学复习题含参考答案 (2)
临床分子生物学复习题含参考答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1.上述移植类别中，目前组织相容性检测主要应用于A、异种移植B、同种同基因移植C、自体移植D、胚胎组织移植E、同种异基因移植正确答案：E2.K-ras野生型晚期转移性结直肠癌一线治疗方案是A、顺铂联合化疗B、姑息治疗C、手术切除D、西妥昔单抗联合化疗E、放射治疗正确答案：D3.下列DNA序列中的胞嗟嚏易发生甲基化修饰的是A、5'-CCCCCT-3'B、5'-GGGGCC-3'C、5'-CGCGCG-3'D、5'-GCACAC-3'E、5'-CTCTCCC-3'正确答案：C4.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症遗传方式为A、常染色体隐性遗传B、伴性遗传C、常染色体显性遗传D、X染色体连锁不完全隐性遗传E、X染色体连锁不完全显性遗传正确答案：E5.荧光原位杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、检测的目标是RNAC、用于基因的定位分析D、阳性菌落的筛选E、蛋白水平的检测正确答案：C6.会致氨基糖苷类抗生素耳毒性的突变基因是A、C3254AB、T3271CC、A1555GD、A3243GE、T3271C正确答案：C7.Down综合征为以下哪种染色体数目畸变A、单体型B、单倍体C、三体型D、三倍体E、多倍体正确答案：C8.输血后肝炎的主要致病因子是A、人流感病毒B、HBVC、HCVD、HIVE、SARS病毒正确答案：C9.血友病A缺乏的是能够编码血浆凝血活酶的A、FⅧ因子B、FⅨ因子C、FⅪ因子D、FⅩ因子E、FⅣ因子正确答案：A10.封闭易对膜产生“负染”的封闭剂是A、酪蛋白B、脱脂奶粉C、牛血清蛋白D、凝集素E、血红蛋白正确答案：E11.关于DHPLC技术的描述不正确的是A、可实现高通量检测B、自动化程度高C、灵敏度和特异性高D、是分析异质性突变的首选方法E、是分析突变的金标准正确答案：E12.众多肿瘤中遗传因素最突出的一种肿瘤是A、前列腺癌B、结直肠癌C、肺癌D、乳腺癌E、肝癌正确答案：B13.被称为细菌“分子化石”的是A、16SrRNAB、IS6110插入序列C、rfbEΟ157D、fliCH7E、rpoB正确答案：A14.丙型肝炎病毒基因组高变区位于A、E1区B、C区C、NS3区D、NS4区E、NS1/E2E正确答案：E15.一个完整的生物芯片配套软件A、数据提取软件B、生物芯片的图像处理软件C、统计分析软件D、生物芯片扫描仪的硬件控制软件E、画图软件正确答案：E16.双向电泳的第一向等电聚焦电泳常使用的去垢剂，除外A、NP-40B、SDSC、TritonX-100D、CHAPSE、CHAPSO正确答案：B17.下列与HPV早期蛋白编码产物功能有关的是A、合成包膜蛋白B、与细胞的亲嗜性有关C、合成衣壳蛋白D、病毒组装和释放E、病毒复制正确答案：E18.Western印迹杂交检测的物质是A、DNAB、RNAC、蛋白质D、脂肪E、糖正确答案：C19.单基因遗传病分子诊断的主要应用是A、症状前诊断B、携带者诊断C、产前诊断D、携带者筛查E、耐药基因检测正确答案：C20.MALDI分析生物大分子的过程中，下列不是一个合适基质应具备的是A、吸收能量B、使生物大分子彼此分离C、使被分析的生物大分子离子化D、基质分子与被分析物质间的摩尔比为100:1～50000:1E、烷基化蛋白质所带的自由筑基正确答案：E21.不正确的关于开放阅读框和编码序列分析的叙述是A、ORF的5'端具有起始密码子，3'端具有终止密码子B、原核生物基因不含有内含子C、真核生物的基因是“断裂基因”D、大部分内含子5'端起始是AG碱基，3'端最后是GT碱基E、根据已知基因的结构特点发展出多种基因识别软件正确答案：D22.可用于代谢组学筛选分子生物标志物研究的技术方法是A、SAGEB、GWASC、2D-PAGED、GC-MSE、Southern印迹杂交正确答案：D23.1992年最早发现与糖尿病有关的mtDNA突变是A、tRNALer(UUR)B、ND1G3460AC、12SrRNAD、tRNALysE、tRNASer(UCN)正确答案：A24.第一个被发现可以预测晚期转移性结直肠癌患者是否能从靶向治疗药物西妥昔单抗中获益的生物标志物是A、K-rasB、EGFR基因C、TTF-1D、CEAE、bcl-2基因正确答案：A25.IEF电泳具有A、分子筛效应B、电荷效应C、电渗效应D、浓缩效应E、稀释效应正确答案：B26.c-erbB-2/HER2位于人类染色体A、17q21B、8q34C、22q11D、15q22E、17q21正确答案：A27.核酸探针不可用什么标记A、抗体标记B、放射性核素标记C、生物素标记D、荧光标记E、地高辛标记正确答案：A28.核酸序列的基本分析不包括A、统计分析B、分子量、碱基组成、碱基分布C、序列变换分析D、测序分析E、限制性酶切分析正确答案：A29.第一个被证实和克隆的乳腺癌易感基因是A、BRAC1B、BRAC2C、c-erbB-2/HER2基因D、PS2E、c-myc基因正确答案：C30.基因组中含有线粒体DNA的是A、白假丝酵母菌B、新生隐球菌C、梅毒螺旋体D、沙眼衣原体E、弓形虫正确答案：E31.骨髓移植后引起GVHD的主要效应细胞是A、T细胞B、B细胞C、基质细胞D、造血干细胞E、单核细胞正确答案：A32.乙型肝炎病毒的核酸类型是A、双股DNAB、负股DNAC、正股DNAD、单股DNAE、DNA-RNA二聚体正确答案：A33.关于支原体的描述错误的是A、支原体是一类在无生命培养基中能独立生长繁殖的最小原核细胞微生物B、支原体有一个环状双链DNAC、以二分裂方式进行繁殖D、其分裂与DNA复制同步E、解脲脲原体、人型支原体和生殖器支原体均可引起泌尿生殖道感染正确答案：D34.一般来说，设计的寡核苷酸探针的长度为A、60〜lOObpB、100〜200bpC、17〜50bpD、200〜300bpE、2～10bp正确答案：C35.生物素和地高辛被用于DNA和RNA的全程标记的是A、随机引物标记B、DNA缺口平移标记C、全程RNA探针标记D、化学法全程标记E、3'或5'末端标记正确答案：D36.上述哪项技术不能用于移植配型的分子生物学检验A、Southern印迹杂交B、PCRC、Northern印迹杂交D、核酸序列测序分析E、分光光度法正确答案：E37.利用DNA芯片检测基因的表达情况，杂交条件应选A、高盐浓度、低温和长时间B、低盐浓度、低温和长时间C、高盐浓度、高温和长时间D、高盐浓度、低温和短时间E、高盐浓度、高温和短时间正确答案：A38.以下不需要对引物或探针预先标记的实时定量PCR方法是A、TaqMan水解探针技术B、探针杂交技术C、分子信标技术D、SYBRGreenI荧光染料技术E、数字PCR技术正确答案：D39.不符合分子诊断特点的是A、特异性强B、样品获取便利C、易于早期诊断D、灵敏度高E、检测对象为自体基因正确答案：E40.关于核酸探针的描述下列不正确的是A、可以是DNAB、可以是RNAC、可用放射性标记D、可用非放射性标记E、必须是单链核酸正确答案：E41.下面对mtDNA中D环区(D-loop)的描述正确的是A、是结构基因，编码13个蛋白多肽B、编码22个tRNAC、编码2种rRNA，即12SrRNA和16SrRNAD、参与调控线粒体的复制和转录E、可折叠成茎环结构正确答案：D42.人类基因计划的大部分工作草图绘制工作通过该载体完成A、M13mp质粒B、细菌质粒C、载体有酵母人工染色体(YAC)D、细菌人工染色体(BAC)E、穿梭质粒正确答案：C43.不可用于对病毒核苷酸片段突变检测的方法是A、基因测序B、PCR-SSPC、LiPAD、PCRE、RFLP正确答案：D44.Southern杂交通常是指A、DNA和RNA杂交B、DNA和DNA杂交C、RNA和RNA杂交D、蛋白质和蛋白质杂交E、DNA和蛋白质杂交正确答案：B45.上述配型技术中，应用到固相化技术的是A、PCR-SSP技术B、PCR-SSΟP技术C、PCR-SBT技术D、流式细胞术E、补体依赖的细胞毒分析技术正确答案：B46.阳性质控品失控的原因不包括A、扩增产物污染B、核酸提取试剂失效C、提取的核酸残留有抑制物D、扩增仪孔间温度不一致E、Taq酶失活正确答案：A47.下列疾病中属于常染色体疾病的是A、Klinefelter综合征B、血友病AC、Turner综合征D、13-三体综合征E、脆性X染色体综合征正确答案：D48.关于mtDNA密码子描述正确的是A、线粒体基因组密码子与核基因组密码子相同B、人类mtDNA起始密码子为AUGC、人类mtDNA终止蕾码子是UGAD、人类mtDNA中AGG是Arg的密码子E、人类mtDNA起始密码子为AUA正确答案：E49.HIV的gp120主要功能是A、逆转录酶功能B、介导膜融合C、与细胞CD4分子结合D、调控蛋白E、介导病毒基因组整合正确答案：C50.组织DNA提取中，EDTA的作用是A、抑制DNaseB、沉淀DNAC、减少液体表面张力D、抑制RNaseE、去除蛋白质正确答案：A51.多基因家族的特点描述错误的是A、由某一祖先基因经过重复和变异所产生的一组基因B、通常由于突变而失活C、假基因与有功能的基因是同源的D、所有成员均产生有功能的基因产物E、可以位于同一条染色体上正确答案：D52.以下是游离型Down综合征患者核型的为A、46，XY，-13，﹢t(13q21q)B、45，XY，-13，-21，﹢t(13q21q)C、47，XY，﹢21D、46，XY/47，XY，﹢21E、46，XY，-21，﹢t(21q21q)正确答案：C53.经检查，某患者的核型为46，XY，del(6)p11-ter，说明其为何种患者A、染色体丢失B、嵌合体C、环状染色体D、染色体部分丢失E、染色体倒位正确答案：D54.关于ATM基因说法正确的是A、ATM是继BRCA1/2以后发现的与结肠癌有较高相关性的基因B、是共济失调性步态毛细血管扩张症的致病基因C、定位于人染色体11q21-q23上D、属于原癌基因E、肿瘤细胞中ATM蛋白表达水平明显升高正确答案：B55.最常使用的封闭剂是A、HRPB、脱脂奶粉C、血红蛋白D、SDSE、DTT正确答案：B56.在多维液相分离技术中最常与其他色谱联合应用的是A、分子排阻色谱B、离子交换色谱C、亲和色谱D、色谱聚焦E、反向色谱正确答案：E57.关于肺炎支原体的实验室检测，正确的是A、体外培养生长缓慢但阳性率很高B、免疫学方法检测的假阳性率较低C、体外培养在支原体感染的早期诊断上具有重要意义D、利用分子生物学方法可以进行流行病学调查和耐药基因分析E、PCR技术可检测到极微量的DNA，但特异性不高正确答案：D58.下列说法错误的是A、用于RNA检测的样本短期可保存在-20°CB、用于PCR检测的样本可用肝素作为抗凝剂C、如使用血清标本进行检测应尽快分离血清D、外周血单个核细胞可从抗凝全血制备E、用于核酸提取的痰液标本应加入1mol/LNaOH初步处理正确答案：B59.到目前为止已确定的36个NAT2基因变异种最常见的等位基因是BA、N4T2*3B、NAT2*4C、N4T2*5D、NAT2*6E、NAT2*7正确答案：B60.关于电转膜的描述不正确的是A、半干转特别适合大分子蛋白质的转移B、缓冲液PH过低会导致部分蛋白质凝集沉淀C、转膜的顺序是膜在负极一侧，凝胶靠近正极一侧D、转膜缓冲液中含有甲醇成分E、转膜时间不宜过长正确答案：A61.原核生物基因组中没有A、插入序列B、转录因子C、操纵子D、内含子E、外显子正确答案：D62.TPMT在哪类药物的体内代谢中起着重要作用A、头抱类B、嘧啶类C、氨基糖苷类D、嘌呤类E、β内酰胺类正确答案：D63.人类的α-珠蛋白基因定位于A、9号染色体B、X染色体C、16号染色体D、18号染色体E、11号染色体正确答案：C64.可实现高通量、大规模筛查，已商品化应用的技术是A、PCR-RFLPB、PCR-DHPLECC、DNA测序D、荧光定量PCRE、基因芯片正确答案：E65.上述癌基因中属于srs家族的是A、fmsB、N-rasC、sisD、blkE、myb正确答案：D66.某个体体细胞中染色体数目为49，称为A、四倍体B、亚二倍体C、超二倍体D、三倍体E、超三倍体正确答案：B67.被视为人类基因组稳定卫士的基因是A、p53突变B、DCC突变C、APC突变D、BRCA突变E、PCC突变正确答案：A68.链置换扩增错误的是A、等温扩增技术B、利用的HincⅡ特性C、利用exo-klenow具有链置换活性D、dNTP为dATP、dCTP、dTTP和dGTPE、可用于结核分枝杆菌的检测正确答案：D69.以下不是在移植配型中常用的分子生物学检测技术是A、核酸分子杂交技术B、PCR技术C、基因芯片技术D、免疫组化技术E、基因测序技术正确答案：D70.衣原体中能够引起沙眼的血清型为A、A；B；Ba；CB、A；B；D；EC、A；B；F；HD、A；B；C；KE、A；B；F；L正确答案：A71.转录依赖扩增系统与其他PCR技术的区别是A、模板是RNAB、模板是DNAC、引物是RNAD、模板和产物都是RNAE、需要热循环正确答案：D72.下列不是临床分子生物学实验室分析前质量控制内容的是A、临床标本的釆集、运送和保存符合要求B、定期进行仪器设备的功能检査、维护和校准C、实验室严格分区D、所用试剂和耗材的质量符合要求E、进行核酸提取的有效性评价正确答案：E73.几乎所有人类肿瘤中都存在突变的基因是A、APCB、DCCC、p53D、c-mycE、BRCA正确答案：C74.关于电转移下列描述不正确的A、快速、高效B、需要特殊设备C、缓冲液用TAE或TBED、可产生高温E、常用NC膜作为支持介质正确答案：E75.受精卵中的线粒体A、几乎全部来自精子B、几乎全部来自卵子C、精子与卵子各提供1/2D、不会来自卵子E、大部分来自精子正确答案：B76.与耐链霉素相关的结核杆菌靶基因是A、rpsL和rrsB、rpoBC、katGD、pncAE、embB正确答案：A77.目前白血病的发病机制的研究主要集中的领域不包括A、白血病发病的先天因素B、融合基因与白血病C、基因多态性与白血病D、白血病复发的后天因素E、遗传性疾病及白血病发病的后天因素正确答案：D78.不符合分子诊断特点的是A、样品获取便利B、检测对象为自体基因C、特异性强D、易于早期诊断E、灵敏度高正确答案：B79.根据国际命名系统，人类染色体分为A、5组B、7组C、6组D、8组E、4组正确答案：B80.属于等温扩增技术的是A、荧光定量PCR技术B、PCR-RFLP技术C、SDA技术D、PCR-SSCP技术E、基因芯片技术正确答案：C81.预杂交中下列不能起封闭作用的是A、ssDNAB、BSAC、小牛胸腺DNAD、脱脂奶粉E、DTT正确答案：E82.与肝脏的疾病有关的是A、ALP2B、ALP3C、ALP4D、ALP5E、PSA正确答案：A83.在MSI-H的诊断标准中，5个位点中的多少个出现不稳定定义为MSI-HA、4个B、5个C、3个D、1个E、2个正确答案：E84.利用SAM作为甲基的供体，与嘌呤类药物的临床疗效和毒副作用密切相关的是A、TPMTB、CYP450C、G-6-PDD、HLA-B*1502E、NAT正确答案：A85.某人提取DNA后，将DNA溶液稀释10倍，然后经紫外分光光度计检测结果为A260=0.56，A280=0.31，比色皿光径1cm，该DNA样品的浓度为A、124μg/mlB、150μg/mlC、224μg/mlD、250μg/mlE、280μg/ml正确答案：E86.核型为45，X者可诊断为A、Klinefelter综合征B、Down综合征C、Turner综合征D、猫叫综合征E、Edward综合征正确答案：C87.以下不符合5p﹣综合征的临床表现是A、摇椅样足B、猫叫样哭声C、小头畸形D、耳低位E、严重智力低下正确答案：A88.属于抑癌基因的是A、p53B、MycC、MdrD、BCL-2E、c-jun正确答案：A89.数字PCR技术包括哪几部分A、缓冲溶液池、样品池和废液池以及连接各池之间的微沟道B、生物敏感材料、理化换能器及信号放大装置C、高压电源系统、进样系统、石英毛细管、电解质槽、检测器和数据处理系统D、芯片、芯片阅读器和分析软件和质谱仪E、PCR扩增和荧光信号分析两部分正确答案：E90.符合新生隐球菌的基因组结构特征的是A、有20条染色体B、有6对同源染色体C、二倍体真菌D、分为10种主要的基因型E、单倍体真菌正确答案：E91.Tm值主要取决于核酸分子的A、A-T含量B、G-C含量C、A-C含量D、T-G含量E、C-T含量正确答案：B92.在人体内超过半数药物的代谢清除是通过下列哪个系统来完成的A、CYP450B、N-乙酰基转移酶C、硫嘌呤S-甲基转移酶D、G-6-PDE、水解酶系统正确答案：A93.阴性质控品失控的原因不包括A、扩增产物污染B、标本交叉污染C、放射性污染D、基因组DNA或质粒的污染E、试剂污染正确答案：C94.关于p53基因说法不正确的是A、属于抑癌基因B、在进化过程中高度保守C、编码蛋白为转录因子p53蛋白，与调控细胞生长周期、调节细胞转化、DNA复制及诱导细胞凋亡有关D、可单独作为乳腺癌预后的分子标志E、定位于人染色体17q13上正确答案：E95.以RNA为模板、产物为DNA的技术是A、PCRB、逆转录PCRC、多重PCRD、长片段PCRE、转录依赖扩增系统正确答案：B96.DHPLC技术的中文全称是A、聚丙烯酰胺凝胶电泳B、变性梯度凝胶电泳C、变性高效液相色谱技术D、等位基因特异性寡核苷酸技术E、单链构象多态性分析正确答案：C97.脆性X综合征的临床表现有A、智力低下伴眼距宽、鼻梁塌陷、通贯手、趾间距宽B、智力低下伴头皮缺损、多指、严重唇裂及膊裂C、智力正常、身材矮小、肘外翻、乳腺发育差、乳间距宽、颈蹼D、智力低下伴长脸、大耳朵、大下颌、大睾丸E、智力正常张力亢进，特殊握拳姿势、摇椅足正确答案：A98.提高移植存活率的方法以下不可行的是A、HLA配型B、mH的鉴定C、ABΟ血型鉴定D、移植前输入补体和抗体E、移植前应用免疫抑制剂正确答案：D99.引起50%血友病A的原因是A、基因点突变B、基因插入C、基因缺失D、基因倒位E、基因移动正确答案：D100.HCV基因分型的“金标准”是A、基因分型检测芯片B、测序分析法C、实时荧光PCRD、基因型特异性引物扩增法E、RFLP正确答案：B。
高效液相色谱法的应用
在药品分析鉴定的作用
3 在西药鉴别中的应用 在HPLC法中,保留时间与组分的结构和性质有关,是定性的参数,可用于药物的鉴别.如中 国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定:在含量测定项下记录的色谱图中,供试品 主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致.头抱拉定,头孢噻酚钠等头孢类药物以 及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别. 4.在体内药物分析中的应用 HPLC由于测定迅速准确，流动相选择范围广，灵敏度高(10-12 g／mL以上)，填充柱种 类多，且可供选择的检测器也多。所以是实验室研究中一种很好的体内分析方法。在 国内外都很受重视．大多数药物都有紫外吸收，所以最常用的检测器是紫外检测器。 多数药物及内源性物质极性均较大，利用其极性差，可以采用RP-HPLC色谱柱，可获 得良好分离效果。
在药品分析鉴定的作用
1.天然药物分析 天然药物的来源有动物、植物和矿物之分，其中以植物类为主。由于天然药物的化学成 分复杂，其有效成分，可能有一个，也可以有多个，这对于控制药品质量，建立质量标 准来说比较困难，HPLC可通过对天然药物的有效成分进行式，可以判定药材的质量高低。 2..天然药物及复方成药分析 复方制剂、杂质或辅料干扰因素多的品种多采用高效液相色谱法。增免扶正片系由当 归、党参、黄芪（图3）等十几味天然药物精制而成，具有益气生津、活血养血、滋 补肝肾、健脾开胃之功效，主要用于抗缺氧、抗疲劳、抗衰老，长期服用可扶正祛邪 ，提高机体免疫功能，健身强体，益寿延年。该药对心、肝、脾、肾虚、纳差、心脑 血管疾病、神经衰弱、慢性肝炎、脂肪肝等都有较好的防治作用。 由于化学药品的开发费用昂贵，而且毒副作用大，近年来人们已把目光转向自然、民 族传统医药、草药、植物药等天然药物，据世界卫生组织统计，当前全世界60多亿人 口中80％的人使用过天然医药。在全世界药品市场中，天然物质制成的药品已占30％ ，国际上植物药市场份额已达300亿美元，且每年以20％ 以上的速度增长。HPLC分析 必定能为我国传统中医药实现现代化，走向世界提供强有力的技术支持。
肿瘤的分子生物学检验技术
二、线粒体病的分子生物学检验技术
（三）DNA芯片技术略 （四）DNA测序技术略
三、线粒体病的分子生物学检验应用
（一）MELAS综合征
11月23日，读初三的晓炎从学校回家后，顾春娜就感觉女儿脸色 不好，以为晓炎在学校吃的没有营养，就赶紧给女儿做了顿好饭。 可晓炎吃过饭后不久，就开始呕吐。
当晚凌晨2点钟，晓炎出现了全身抽搐的症状，看到女儿四肢
25号染色体
一、线粒体基因组及其表达系统
（一）人类线粒体基因组
1、基因组小, 16569 bp 2、双链环状DNA外环富含鸟 嘌呤称为重链，内环富含胞 嘧啶称轻链 3、1）编码区
13 结构基因 / mRNA 22 tRNA 基因 2 rRNA 基因 2）非编码区 D-loop（约1120bp） L链复制起始区（约30～ 50bp，tRNAAsn-tRNACys）
DHPLC检测的质量控制
1、 DHPLC检测的样本要求
（1）片段大小：最好在200-500bp.敏感性最好。 （2）样品质量：检测前不许纯化，核苷酸和引物
会很早被洗脱，模板大分子在样品峰后洗脱。引 物二聚体和非特异性扩增及碱基数类似的污染物 需优化PCR去除。 （3）样品含量：PCR浓度必须足够大，要求2微 升产物经琼脂糖凝胶电泳可见清晰条带，相当于 浓度至少20ng/ul.
（二）线粒体基因表达系统及特点
3、mtDNA转录的特点
对称性转录，重链启动子启动重链顺时针方向 转录，轻链启动子启动轻链逆时针方向转录。
成熟的mRNA只在3ˊ末端加polyA尾巴，5 ˊ末 端不修饰帽子结构
（二）线粒体基因表达系统及特点
4、线粒体蛋白质的合成特点
自主编码合成13个多肽，其余功能所需蛋 白均由核基因组编码，与细菌合成蛋白质体系 十分相似。“共生学说”
分子生物学技术
分子生物学技术近年来，心血管疾病的发病率和死亡率急剧增加，已成为危害我国人民群众生命和健康的重大疾病。
人们逐渐认识到,包括心血管疾病在内的许多疾病的生理、病理机制的本质问题是相关基因的表达及其调控。
随着研究的深入, 心血管疾病的研究已深入到分子生物学水平。
人们寻找疾病相关基因, 研究其表达调控机制, 希望在分子水平阐明疾病发生机制, 以期更有效地进行疾病的诊断、治疗。
相应地, 很多分子生物学研究技术也应用到对心血管疾病的研究中来, 成为不可或缺的基本手段, 如分子杂交技术、聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR）技术、反义核酸技术、DNA微阵列、转基因技术等等。
分子诊断学是以分子生物学理论为基础，利用分子生物学的技术和方法研究人体内源性或外源性生物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的变化，为疾病的预防、预测、诊断、治疗和转归提供信息和决策依据的一门学科。
1953年Watson & Crich发现DNA 双螺旋结构, 标志着分子生物学时代的到来。
随着研究的进展, 人们对心血管疾病的研究也逐步深入到分子水平, 很多分子生物学的研究技术也在疾病机理、药物机理的研究中广泛应用, 成为基本的研究手段。
人类基因组计划完成后, 生命科学研究进入后基因组时代, 进行功能基因组学、蛋白质组学的研究, 相应的实验技术也广泛应用并不断发展。
在过去的短短的10余年中,检验医学发展日新月异、发展迅猛,临床实验室的实验设备已高度自动化及网络化，“实验室全自动化”（Total Laboratory Automation,TLA）、分子诊断（MolecularDiagnostics）、床旁检验（Point of Care Tests,POCT）、循证检验医学（Evidence basedlaboratory medicine,EBLM）的兴起为心血管疾病的诊疗提供了极大帮助。
一、分子生物学技术由于分子生物学技术的快速发展,以及人类基因组序列认识的逐渐完善,以PCR为代表的体外核酸扩增技术已在临床基因诊断中得以较为广泛的应用,如病毒、细菌的基因快速检测,遗传性疾病的诊断,肿瘤的基因诊断等。
变性高效液相色谱及其在微生物领域的应用
目前全球使用最多的是美国Transgenomic公司开发的WAVE 核
苷酸片段分析系统, 它通过一个独特的DNA色谱柱DNASep柱 进行核酸片段的分离和分析。
DHPLC的优缺点 （1）优点
DHPLC具有检测效率高，对未知样品的准确率可达95%以
上。该技术具有完全自动化、灵敏度高、经济等优点，可以大
分析，得到拟态弧菌的特征峰型图谱，结果有很好的特异性。
仪 器 ： PE2400 PCR 仪 ， DHPLC Wave Optimized System Transgenomic 公司。 PCR 反应体系和条件：以拟态弧菌浓度相同的DNA 模板进行
PCR 反应，微调引物量，选出反应效果最佳的引物浓度。同时
灵敏度实验 实验结果表明，可检出56CFU/ml 的拟态弧菌。 实际样品检测 对水样、鱼类、虾蟹、贝类等3036 份样品检测，同时采 用培养法对比。实验结果表明，用PCR-DHPLC方法检出的11 份阳性样本，采用经典方法验证，均证实为阳性结果。
变性高效液相色谱在微生物领域的应用
2、徐君怡，曹继娟，郑秋月等.变性高效液相色谱检测食品中 致 泻 性 大 肠 杆 菌 ， 微 生 物 学 报 ， 2008 ， 48 （ 11 ） ： 1526~1531.
（单位：辽宁出入境检验检疫局）
分别根据4 种致泻性大肠杆菌的特异性毒力因子基因序列
设计引物，PCR 扩增产物经变性高效液相色谱快速检测。以
肠产毒性大肠杆菌等32 株试验菌株做特异性检测，4 种致泻 性大肠杆菌标准菌株进行灵敏度检测。试验结果表明方法特异 性好，灵敏度高，该方法可以快速、准确地检测食品中的致泻 性大肠杆菌。
物用量和循环条件优化，直至得出最佳反应体系。 PCR 反应采用25 μL 体系，优化后的反应条件为94℃ 3 min； 94℃ 60 s，60℃ 60 s，72℃ 60 s，35 个循环；72℃ 7 min 结 束反应；4℃保存反应产物。
DHPLC原理
DHPLC变性高效液相色谱(DHPLC)技术是一种能用于快速，自动和高通量检测基因的技术平台。
在分子生物学研究和临床基因诊断领域中，DHPLC技术可应用于DNA 的绝大部分检测，在很多领域已建立了快速、自动化核酸分析新方法和新标准。
利用该技术可以对单链和双链核酸进行快速、准确、自动化的分离、分析和定量；可用于单碱基替换（或单核苷酸多态性），小片段缺失或插入等多种已知和未知基因突变的检测；DNA/RNA片段大小判定；寡核苷酸分析及纯化；基因表达定量（Q-RT-PCR）和基因型分析（Genotyping）；基因表达差异分析；微卫星（MSI、STR）和杂和性丢失（LOH）分析；基因或染色体的部分缺失和多倍体的半定量分析等等；该技术可在生殖细胞系和体细胞系中筛查基因变异，它的应用范围包括：癌症基础研究、癌症放疗基因监控、癌症治疗药物基因组学监控、遗传性肿瘤早期诊断、肿瘤表观遗传学研究及诊断、各类遗传疾病的基因诊断、流行病学基因研究、临床微生物基因检测、法医鉴定、动植物遗传育种研究等。
原理DHPLC技术是利用液相色谱技术（HPLC），既在高压闭合液相流路中，将DNA 样品自动注入并在缓冲液携带下流过专利的DNA分离柱，通过缓冲液的不同梯度变化，在不同分离柱温度条件下实现对DNA不同的分析；由紫外检测或荧光检测被分离的DNA样品，自动DNA片段收集器可根据需要自动收集被分离后的DNA样品，整个分析过程都是在计算机通过专用软件包NAVIGATOR完成的，专利的DNA分离柱具有很好的温度稳定性和酸碱稳定性，具有很长的有效寿命（大于6000次进样）和极好的分析稳定性（99%）。
DHPLC DNA色谱分离柱工作原理DNA分离柱，是使用无孔多苯乙烯-二乙烯基苯（PS-DVB）共聚物微球体作为稳定基质。
因为这些微球体都与含有18个碳原子的烷基长碳链相连，所以色谱柱的基质是疏水，电中性的，不会与核酸分子直接发生反应。
三乙基铵醋酸盐（TEAA）是一种离子对试剂，离子对试剂既是疏水性的又带正电荷，既能与核酸主链上的磷酸基团的负电荷反应，同时TEAA的疏水基团又与固定相上碳-18链的疏水基团发生反应。
试论述核酸变性与复性以及分子杂交技术原理在医学领域的应用
试论述核酸变性与复性以及分子杂交技术原理在医学领域的应用以下是我整理的有关于试论述核酸变性与复性以及分子杂交技术原理在医学领域的应用，仅供参考：现代分子生物学是研究生物大分子--核酸及其表达产物蛋白质的结构、功能、遗传、调控、相互关系和相互作用，从分子水平上探讨生命现象的科学，其主要研究对象是核酸（DNA和RNA）和蛋白质。
自从1953年Watson和Crick发现DNA的双螺旋结构以来，分子生物学在短短五十年时间里以超乎想象的速度飞速发展，渗透到医学每一个领域。
可以毫不夸张的说，如果没有分子生物学的应用，人类探索生命活动的行为将会寸步难行。
将分子生物学技术应用到临床检验诊断学，使疾病诊断深入到基因水平，称为基因诊断。
基因诊断技术主要包括核酸分子杂交技术、聚合酶链式反应（PCR）技术、基因多态性分析技术、单链构象多态性（SSCP）分析技术、荧光原位杂交染色体分析（FISH）技术、波谱核型分析（SKY）技术、DNA测序技术、基因芯片技术以及蛋白质组技术等，一些先进的分离和检测技术大大促进了上述技术的完善和发展，如毛细管电泳技术（CE）、液质联用技术（LC/MS/MS）、变性高效液相色谱技术（DHPLC）、非荧光遗传标记分析技术等。
基因诊断在感染性疾病、遗传性疾病、肿瘤性疾病等的诊断中发挥越来越重要的作用。
下面，我们就临床检验诊断中涉及的主要分子生物学技术作一简要介绍。
1、核酸分子杂交技术即基因探针技术。
利用核酸的变性、复性和碱基互补配对的原理，用已知的探针序列检测样本中是否含有与之配对的核苷酸序列的技术。
是临床应用最早的，也是最基础的分子生物学技术，是印迹杂交、基因芯片等技术的基础。
不少探针已经商品化。
2、PCR技术PCR技术是一种特异扩增DNA的体外酶促反应，可以短时间扩增出两段已知序列之间的DNA，用于诊断、鉴定、制备探针及基因工程产品开发等，是一项及其有效和实用的技术。
由于PCR试验存在一定的假阳性和假阴性问题，导致PCR技术在我国临床诊断中的应用曾一度被叫停，近年来由于改进的PCR技术如巢式PCR（nestedPCR）、多重PCR(multiplexPCR)、荧光PCR技术等在较大程度上增加了该技术的敏感性和特异性。
分子生物学的新技术和应用
分子生物学的新技术和应用1. 引言分子生物学是研究生命体系分子机制的学科，在生物技术和医药领域中占据举足轻重的地位。
在过去几十年中，随着技术的不断创新和发展，分子生物学领域也涌现出许多新技术和应用，极大地推动了该领域的发展。
2. 基因组学和基因编辑技术基因组学是研究染色体、基因组和基因的全套信息的学科，是大规模研究生物分子之间相互作用的重要手段。
随着DNA测序技术的飞速发展，许多新的测序技术，如下一代测序技术和第三代测序技术，相继问世。
这些新技术的推出大大加快了DNA测序的速度和准确度，进一步推动了基因组学和分子生物学的发展。
同时，基因编辑技术也是分子生物学领域中的新兴技术，包括CRISPR-Cas9系统、基因剪切酶和转录调控因子。
这些技术可用于快速编辑和调控基因，从而增加基因功能的了解和潜在临床治疗方案。
3. 蛋白质组学蛋白质组学是研究生物体内蛋白质的组成和功能的学科。
近年来，液相色谱-质谱法和同位素标记-质谱法等技术的应用，使此领域得到了迅速发展并显著改善了蛋白质分析的灵敏度和鉴定质量。
同时，蛋白质芯片作为新兴的检测技术，可用于检测蛋白质的Expression和Interaction，在生物技术和医学诊断领域中拥有广阔的应用前景。
4. RNA组学和代谢组学RNA组学是研究基因表达水平的学科，在基因组学和蛋白质组学之外，RNA组学又形成了一条研究分子的途径。
RNA测序技术的引入和进一步的优化，使得我们可以更准确地检测RNA的不同类型或亚型，预测RNA剪切和剪接等变化，以及研究RNA在疾病发生和发展中的作用。
代谢组学则是研究在生物体内发生的代谢反应和代谢物在不同条件下的变化，关注的是生物分子和代谢通路在生物体内的调控和功能。
代谢组学技术的应用可用于鉴定和评估疾病的生物标志物，推动疾病的诊断和治疗进展。
5. 结语分子生物学是生命科学的重要分支之一，在技术的创新和应用的不断推动下，该领域的发展将更加迅速和广泛。
临床分子生物学选择测试题含参考答案
临床分子生物学选择测试题含参考答案一、单选题（共80题，每题1分，共80分）1、单链构象特异性是A、RFLPB、ASΟC、SSCPD、RT-PCRE、bDNA正确答案：C2、SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳具有A、分子筛效应B、电荷效应C、电渗效应D、浓缩效应E、稀释效应正确答案：A3、用于个体识别最常用的分子生物标志物是A、RFLPB、SNPsC、VNTRD、CNVsE、基因突变正确答案：C4、由线粒体基因编码的ATP酶亚基数目有A、1个B、2个C、7个D、3个E、13个正确答案：B5、关于肿瘤分子诊断的说法正确的是A、肿瘤的分子诊断中根据目的、对象、类型的不同要采取相似的诊断策略与方法B、肿瘤分子诊断就是利用分子生物学原理和技术建立的肿瘤诊断方法C、肿瘤分子诊断的研究成果仅用于临床肿瘤的诊断D、肿瘤分子诊断的核心是基于细胞水平的分子诊断技术E、肿瘤分子诊断的含义主要表现在虽然检测对象众多，但大多数标志物是特异性的肿瘤标志物正确答案：B6、PGS诊断方法主要借助于下列何种技术A、PCRB、CGHC、PGHD、FISHE、基因芯片正确答案：D7、不属于脆性X综合征分子诊断人群的是A、有FraX体格或性格阳性征象者B、没有FraX家族史C、发育迟缓或自闭症的患者D、未诊断的MR家族史E、已明确母亲为携带者的婴儿正确答案：B8、结核分枝杆菌耐呲嗪酰胺的突变基因是A、rrs与rpsLB、pncAC、embBD、gyrAE、rpoB正确答案：B9、BRCA1基因定位于人哪个染色体上A、染色体11q24B、染色体1p32C、染色体9p21D、染色体2p32E、染色体17q21正确答案：E10、Cpn感染的早期诊断需借助于A、病原体分离培养B、血清学检测C、分子生物学检査D、直接涂片镜检E、常规墨汁染色正确答案：C11、结核分枝杆菌耐乙胺丁醇的突变基因是A、rrs与rpsLB、pncAC、embBD、gyrAE、rpoB正确答案：C12、关于APC基因说法不正确的是A、是一种抑癌基因B、定位于染色体5q21上C、通过编码APC蛋白发挥作用D、APC蛋白在细胞周期进程、细胞生长调控及维持自身稳定中起着重要作用E、APC基因在肿瘤发生发展的全过程中并不稳定正确答案：E13、下列何种技术不可用于PGDA、微卫星DNA序列B、变性高效液相色谱分析法C、基因芯片D、基因测序E、Sourthem blot正确答案：E14、关于DNA变性的描述不正确的是A、二级结构破坏B、一级结构破坏C、黏度降低D、生物活性丧失E、浮力密度增加正确答案：B15、HIV-1中最易发生变异的基因是A、envB、polC、tatD、nefE、gag正确答案：A16、关于FISH在白血病的应用中说法正确的是A、主要用于白血病的初诊和复发的检测B、只适用于体液、组织切片标本C、FISH只能检测处于分裂中期的细胞D、FISH的灵敏度高于PCRE、FISH是检测融合基因、确定染色体易位的首选方法正确答案：A17、可以用来检测具有生物活性的蛋白质是A、mative PAGEB、SDS-PAGEC、2-DED、IEFE、Western blotting正确答案：A18、PCR的延伸温度一般为A、94〜95℃B、55℃左右C、75〜80℃D、72℃E、25℃正确答案：D19、检测MELAS综合征、线粒体糖尿病mtDNA突变位点tRNALeu(UUR)，A3243G常用的限制性内切酶是A、BsmAⅠB、MaeⅢC、SsaHⅠD、MvaⅠE、ApaⅠ正确答案：E20、下列符合解脲脲原体基因组结构特征的是A、基因组大于肺炎支原体基因组B、UU为环状染色体C、终止密码子UGA编码赖氨酸D、完全遵循遗传密码的通用性E、G+C含量丰富正确答案：B21、最早发现的Leber遗传性视神经病变mtDNA突变是A、ND1G3460AB、AO4G11778AC、nD6T14484CD、tRNAMetA4435GE、tRNThrAlSQSlG正确答案：B22、提高移植存活率的方法以下不可行的是A、HLA配型B、mH的鉴定C、ABΟ血型鉴定D、移植前输入补体和抗体E、移植前应用免疫抑制剂正确答案：D23、血友病A缺乏的是能够编码血浆凝血活酶的A、FⅧ因子B、FⅨ因子C、FⅪ因子D、FⅩ因子E、FⅣ因子正确答案：A24、基因组中含有线粒体DNA的是A、白假丝酵母菌B、新生隐球菌C、梅毒螺旋体D、沙眼衣原体E、弓形虫正确答案：E25、32p的半衰期是A、8.07天B、67.48天C、14.26天D、5730年E、60.20天正确答案：C26、关于非放射性探针标记，下列描述不正确的是A、灵敏度不如放射性探针B、目前应用的非放射性标志物都是抗原C、对人体危害小D、酶促显色检测最常使用的酶是碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶E、可长时间使用正确答案：B27、采用PCR-RFLP检测mtDNA A3243G常用的限制性内切酶是A、BsmAⅠB、ApaⅠC、XbaⅠD、BamHⅠE、KpnⅠ正确答案：B28、能够将蛋白质的分离、纯化、酶解和鉴定等步骤结合在一起的技术是A、2-DEB、ESIC、缩微芯片D、蛋白质功能芯片E、ICAT正确答案：C29、下列DNA序列中的胞嗟嚏易发生甲基化修饰的是A、5'-CCCCCT-3'B、5'-GGGGCC-3'C、5'-CGCGCG-3'D、5'-GCACAC-3'E、5'-CTCTCCC-3'正确答案：C30、细胞周期检查点激酶1基因定位于哪个染色体上A、5q21B、2p32C、4q11-12D、11q24E、1p32正确答案：D31、DHPLC检测要求样品片段大小范围是A、<200bpB、>500bpC、200～500bpD、300〜600bpE、100～300bp正确答案：C32、首个被确定的肿瘤抑制基因是A、p21B、p53C、RbD、CyclinE、p16正确答案：C33、微流控芯片技术的主要特点是A、灵敏度高、耗时短、高通量、可定量、标本需求量少、样本来源广泛B、液体流动可控、标本需求量少、分析速度快、整体微型化、自动化、集成化C、选择性高、分析速度快、操作简易、仪器价格低廉D、分离效率髙、分析速度快、分离模式多、标本需求量少、应用广、可自动化E、灵敏度高、准确度高、特异性强、高通量、可自动化、可绝对定量正确答案：B34、DNA P基因可发生YMDD突变的病毒是A、HCVB、HIVC、HBVD、HPVE、流感病毒正确答案：C35、重复序列通常只有1〜6bp，重复10-60次并呈高度多态性的DNA序列称为A、微卫星DNAB、小卫星DNAC、cDNAD、高度重复顺序DNAE、单拷贝顺序DNA正确答案：B36、目前基于MALDI-TOF-MS进行细菌鉴定的主要标志物是A、16SrRNAB、IS6110C、katGD、特异性保守蛋白-核糖体蛋白E、丰度较高的管家基因正确答案：D37、容易造成“负染”的封闭剂是A、HRPB、脱脂奶粉C、血红蛋白D、SDSE、DTT正确答案：C38、不适宜于直接作为第一代测序技术测序的DNA模板是A、双链DNA片段和PCR产物B、单链DNA片段C、克隆于质粒载体的DNA片段D、克隆于真核载体的DNA片段E、提取的染色质DNA正确答案：E39、淋病奈瑟菌耐青霉素的分子机制与以下哪组基因有关A、katG和inhAB、gyrA和parCC、penA和ponAD、gyrA和gyrBE、rrs和rpsL正确答案：C40、可作为器官移植中供受体是否匹配的配型分子是A、HLAB、单拷贝序列C、高表达蛋白D、RFLPE、染色体正确答案：A41、下列哪种病毒在复制过程中可产生RNA-DNA杂交体A、HIVB、HPVC、HBVD、HCVE、流感病毒正确答案：A42、TaqMan探针技术要求扩增片段应在A、250〜300bpB、200〜250bpC、150〜200bpD、300～350bpE、50〜150bp正确答案：E43、MALDI分析生物大分子的过程中，下列不是一个合适基质应具备的是A、吸收能量B、使生物大分子彼此分离C、使被分析的生物大分子离子化D、基质分子与被分析物质间的摩尔比为100:1～50000:1E、烷基化蛋白质所带的自由筑基正确答案：E44、可负性调控抗凋亡基因BCL2的miRNA是A、miR-155B、miR-15a和miR-16-1C、miR-221D、miR-155E、miR-17-92正确答案：B45、关于定量PCR的描述，不正确的是A、可以定量或半定量PCR产物的方法B、定量PCR主要进行基因表达的分析和病原体的核酸检测C、水解探针技术中TaqMan探针的位置位于两条引物之间D、分子信标在自由状态下为发夹结构，荧光信号极低E、定量PCR在封闭状态下进行，有效避免了产物的实验室污染正确答案：A46、存在于浆液性卵巢癌而不存在于黏液性卵巢癌中的是A、CA72-4B、CA12-5C、CA24-2D、CA15-3E、NSE正确答案：B47、下列叙述不正确的是A、F质粒的主要特征是带有耐药性基因B、R质粒又称抗药性质粒C、CoI质粒可产生大肠杆菌素D、F质粒是一种游离基因E、F和CoIE1质粒可以在同一菌株内稳定共存正确答案：A48、T-ALL中最常见的活化癌基因是A、N-rasB、NOTCH1C、NPMD、FLT3E、C-KIT正确答案：B49、组织DNA提取中，EDTA的作用是A、抑制DNaseB、沉淀DNAC、减少液体表面张力D、抑制RNaseE、去除蛋白质正确答案：A50、下列不属于基因突变的类型是A、等位基因B、插入C、同义突变D、无义突变E、错义突变正确答案：A51、引起线粒体糖尿病、MELAS综合征、综合征耳聋的突变位点是A、C3254AB、T3271CC、A1555GD、A3243GE、T3271C正确答案：D52、检测靶分子是DNA的技术是A、Southern印迹杂交B、Western印迹杂交C、Northern印迹杂交D、Eastern印迹杂交E、杂交淋巴瘤正确答案：A53、PCR中的脱氧核昔三磷酸不包括A、dATPB、dTTPC、dCTPD、dGTPE、dUTP正确答案：E54、SELDI-TOF-MS中，质荷比越大的离子在电场中飞行的时间A、越短B、越长C、与质荷比小的离子没有差异D、无法计算E、无法分离正确答案：B55、G-6-PD缺乏时导致机体下列哪些物质增多(↑)或减少(↓)A、H2O2、GSH和NADPH↑B、H2O2和GSH↑，NADPH↓C、H2O2↑，GSH和NADPH↓D、GSH和NADPH↑，H2O2↓E、H2O2和NADPH↑，GSH↓正确答案：C56、启动子预测分析常涉及A、核心启动子，如TATA盒等元件B、近端启动子，如几个调控元件C、远端启动子，如增强子、沉默子等元件D、基因内部区域的特征，如GC含量、CpG比率E、转录因子结合位点正确答案：D57、镰状细胞贫血患者，代替其血红蛋白β链N端第六个氨基酸残基谷氨酸的是A、丙氨酸B、酪氨酸C、苯丙氨酸D、丝氨酸E、缬氨酸正确答案：E58、DCC基因突变的主要方式不包括A、等位基因杂合性缺失B、5'端纯合性缺失C、3'端纯合性缺失D、DCC基因过甲基化E、外显子的点突变正确答案：C59、上述检测方法中，不可用于对核酸片段突变的检测方法是A、基因测序B、Southern blotC、Western blotD、PCRE、RFLP正确答案：C60、关于RNA探针的描述下列不正确的是A、可用于随机引物标记B、特异性高C、灵敏度高D、可用非同位素标记法标记E、不易降解正确答案：E61、某人核型为46，XY，性腺为睾丸，内外生殖器呈间性，第二性征异常，说明此人为何种患者A、男性假两性畸形B、性逆转综合征C、女性假两性畸形D、性腺发育不全E、真两性畸形正确答案：A62、转座因子是A、质粒B、类核结构C、断裂基因D、可移动基因成分E、基因重叠现象正确答案：D63、作为芯片固相载体的材料描述正确是A、主要有玻片、硅片等实性材料B、不使用硝酸纤维素膜、尼龙膜及聚丙烯膜等膜性材料C、这些载体材料不需要处理，其表面存在活性基团(如羟基或者氨基)D、可以直接固定已经合成的寡核甘酸探针E、不需要对介质表面进行化学预处理——活化正确答案：A64、异种移植的首要障碍是A、超急性排斥反应B、器官大小和功能的匹配C、伦理道德问题D、供器官来源的选择E、人畜共患病正确答案：A65、基因多态性连锁分析中，第一、二、三代遗传标记分别是A、RFLP、SSCP、STRB、RFLP、SNP、STRC、RFLP、STR、SNPD、VNTR、SCCP、SNPE、VNTR、STR、RFLP正确答案：C66、关于mtDNA非编码序列，描述正确的是A、不参与mtDNA的复制、转录等，属“无用”信息B、是高度重复序列C、占整个mtDNA的15%，比例较大D、mtDNA中有两段非编码区E、位于mtDNA的轻链正确答案：D67、关于随机克隆法或称鸟枪法测序策略的叙述不准确的是A、可用于各种大型的测序计划B、是一种完全定向的测序策略C、需将目的DNA大片段随机切割成小片段，并分别进行亚克隆D、可利用通用引物测定亚克隆的序列E、一些区段往往被重复测定正确答案：B68、某临床分子生物学检验项目每2周检测1次，最适用的统计学质控方法是A、Levey-Jennings质控图方法B、6 Sigma质控方法C、Westgard多规则质控方法D、即刻法质控方法E、累积和质控方法正确答案：D69、阳性质控品失控的原因不包括A、扩增产物污染B、核酸提取试剂失效C、扩增仪孔间温度不一致D、Taq酶失活E、提取的核酸残留有抑制物正确答案：A70、构成完整的病毒颗粒的成分是A、核酸B、结构蛋白C、蛋白质与核酸D、糖蛋白E、蛋白质正确答案：C71、最常用的DNA探针标记方法是A、随机引物标记B、切口平移标记C、3'-末端标记D、5'-末端标记E、PCR法正确答案：A72、不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布信息的是A、点/狭缝杂交B、菌落杂交C、Southern印迹杂交D、Northern印迹杂交E、原位杂交正确答案：C73、将能识别靶多肽高度特异性的配体放置在芯片上进行检测的是A、蛋白质功能芯片B、缩微芯片C、化学型芯片D、生物化学芯片E、蛋白质检测芯片正确答案：E74、以下不符合沙眼衣原体基因组结构特征的是A、CT染色体为一闭合环状双链DNAB、CT有一个隐蔽性质粒，此质粒与其他生物间没有同源序列C、DNA修复能力较弱D、CT原体和网状体内皆含有DNA和RNA两种核酸E、G+C含量小于A+T正确答案：C75、线粒体基因组编码几种rRNAA、22种B、20种C、18种D、3种E、2种正确答案：E76、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理不正确的是A、SDS是一种阴离子去污剂B、SDS可以与蛋白质的疏水部分相结合，从而使蛋白质获得负电荷C、SDS-PAGE时蛋白质的迁移率与分子大小相关D、SDS-PAGE使具有不同等电点的蛋白质得以分离E、SDS与蛋白质结合后可以屏蔽天然蛋白质的电荷正确答案：D77、用于病毒基因突变检测的技术是A、荧光定量PCR技术B、PCR-RFLP技术C、PCR微卫星检测技术D、原位杂交技术E、cDNA表达芯片技术正确答案：B78、荧光定量PCR检测核酸量的时间段在A、非指数期B、PCR反应的最初阶段C、PCR反应最后的时间段D、指数期的起始阶段E、指数期的终末阶段正确答案：D79、第一个被发现可以预测晚期转移性结直肠癌患者是否能从靶向治疗药物西妥昔单抗中获益的生物标志物是A、K-rasB、EGFR基因C、TTF-1D、CEAE、bcl-2基因正确答案：A80、可用于转录组学筛选分子生物标志物研究的技术方法是A、SAGEB、GWASC、2D-PAGED、GC-MSE、Southern印迹杂交正确答案：A。
911.4线粒体疾病的分子生物学检验
图12-3 mtDNA 11778位点G→A的突变
遗传性耳聋
线粒体基因突变主要导致遗传性耳聋，研究发现，无论在耳 蜗外毛细胞还是支持细胞等组织中都含有丰富的线粒体，线粒体 的结构与功能对维持听觉具有重要的作用。位于mtDNA 12S rRNA 上的A1555G、C1494T突变是人们最早发现的与遗传性耳聋有关的 线粒体突变位点，12S rRNA上的A827G通过影响线粒体12S核糖体 RNA的空间结构来影响患者听力。tRNASer(UCN) T7511C等突变与非 综合征型耳聋有关，tRNALeu(UUR) A3243G突变可导致综合型耳聋。 目前有关线粒体tRNASer(UCN)突变与耳聋发病机制的研究是当前线 粒体tRNA众多突变中研究最多也是最明确的。
俗称老年痴呆，是一种神经退行性疾病，高发人群为65岁以 上的老年人。研究发现，线粒体DNA功能异常是导致该病的主要原 因，通过聚合酶链式反应（PCR）与印迹杂交（Southern blot） 检测发现，散发型AD患者脑组织mtDNA存在断裂、碱基缺失、错义 突变等情况，而且在电镜下观察发现线粒体数目增加。溶酶体功 能减弱，也导致线粒体自噬功能降低，活性氧增多以及多种酶活 性降低，造成氧化过激以及代谢损伤。β-淀粉样蛋白损害葡萄糖 等营养物质的传送，使突触末端线粒体功能失常，导致患者认知 能力下降。此外mtDNA的缺失还导致神经细胞中钙离子稳态被破坏， 线粒体摄取多余钙离子，最终诱导线粒体凋亡。由此可见，阿兹 海默病与线粒体的功能息息相关。
高效液相色谱的应用研究进展
高效液相色谱的应用研究进展【摘要】从1903年，色谱的开始使用，各种色谱技术应运而生，其中高效液相色谱由于其分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广等优点，作为物质分离的重要工具，在各个方面都取得了很大的发展，并且出现了许多的新型色谱。
本文综述了变性高效液相色谱在生物遗传方面的应用，及高效液相色谱在医学方面的应用。
【关键字】HPLC（高效液相色谱） DHPLC（变性高效液相色谱）1.高效液相色谱概要色谱法是利用混合物中各组分在两相中分配系数不同，当流动相推动样品中的组分通过固定相时，在两相中进行连续反复多次分配，从而形成差速移动，达到分离的方法。
根据流动相的状态可分为气相色谱法和液相色谱法。
在液相色谱中，采用颗粒十分细的高效固定相并采用高压泵输送流动相，全部工作通过仪器来完成。
这种色谱称为高效液相色谱(1iighperformance liquid chromatography，HPLC)。
由于高效液相色谱法有分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广等优点，高效液相色谱成为最为常用的分离和检测手段，在有机化学、生物化学、医学、药物学与检测、化工、食品科学、环境监测、商检和法检等方面都有广泛。
另外，在高效液相色谱法的基础上不断发展，变性高效液相色谱法(DHPLC)随之兴起，广泛用于生物学、遗传学等领域。
2.高效液相色谱在生物学的应用变性高效液相色谱法(DHPLC)是在高效液相色谱法的基础上发展起来的一种新方法。
DHPLC采用高压闭合液相流路，将DNA样品自动注入并在缓冲液携带下流过DNA分离柱，通过缓冲液的不同梯度变化，在不同分离柱温度条件下，由荧光检测被分离的DNA样品，从而实现对DNA不同的分析它因使用的温度不同而有不同的应用价值：①在非变性温度(40℃～5O℃ )条件下对不同长度的双链DNA进行分离，用于定量反相PCR、长度多态性分析以及杂合性缺失(LOH)分析等；②在部分变性温度(51℃～75℃)条件下进行基因突变，单核苷酸多态性和CpG甲基化的检测；③在完全变性温度(70℃～8O℃)条件下对寡核苷[1]酸进行质量控制和纯化，RNA分离及已知位点基因型的分析等。
生物化学及分子生物学(人卫第八版)-第25章-基因诊断与基因治疗
基因分型 检测基因突变
测定基因拷贝数 测定基因表达产物量
分子杂交
信号检测
基因诊断的基础
DNA序列分析技术 几种技术联合使用
目录
（一）基因缺失或插入的诊断
1．DNA印迹法
其可以区分正常和突变样品的基因型，并可获得 基因缺失或插入片段大小等信息。 DNA 印迹一般可 以显示50 bp～20 kbp的DNA片段，片段大小的信息 是该技术诊断基因缺陷的重要依据。
血、血友病等。基本方案是通过一定的方法
把正常的基因导入到病人体内，表达出正常
的功能蛋白。
目录
2.针对多基因病的基因治疗 由多个基因相互作用结果，并受环境因素影 响而发生的疾病属于多基因病，如高血压、动脉 粥样硬化、糖尿病、肿瘤等。 恶性肿瘤的基因治疗包括：针对癌基因表达 的各种基因沉默、针对抑癌基因的基因增补、针 对肿瘤免疫反应的细胞因子基因导入和针对肿瘤 血管生成的基因失活等等。
目录
（二）基因增补
不删除突变的致病基因，而在基因组的某
一位点额外插入正常基因，在体内表达出功能
正常的蛋白质，达到治疗疾病的目的。这种对
基因进行异位替代的方法称为基因添加（ gene augmentation ）或称基因增补，是目前临床上 使用的主要基因治疗策略。
目录
（三）基因沉默或失活
有些疾病是由于某一或某些基因的过度表 达引起的，向患者体内导入有抑制基因表达作 用的核酸，如反义RNA、核酶、干扰小RNA等，
因的表达状态可以用 PCR 、 RNA 印迹、
蛋白印迹及ELISA等方法去检测。对于导
入基因是否整合到基因组以及整合的部位，
可以用DNA印迹技术进行分析。
目录
三、基因治疗的临床应用现状
高效液相色谱 作用
高效液相色谱作用：
1.有机物分析：在有机化学中，高效液相色谱法被广泛应用于分离和分析有机溶剂中的化合物，如药物、天然产物、有
机合成物等。
它可以检测和定量分析这些化合物的含量、纯度和杂质。
2.生物分子分析：在生物化学和生物医学领域中，高效液相色谱常用于分离和分析蛋白质、肽段、核酸、糖类等生物分
子。
在生物药物研发中，它常用于分析药物的纯度、杂质、降解产物等。
3.环境分析：高效液相色谱可以用于环境样品中污染物的分离和测定。
例如，它可以检测水样中的有机污染物、土壤和
空气样品中的农药残留、环境样品中的重金属等。
测序反应体系优化的背景和意义
测序反应体系优化的背景和意义一个测序反应体系的优化包括哪些方面？其背景和意义是什么？随着现代分子生物学技术的不断发展，人们对 DNA 进行大规模测序时得到了大量高质量的测序数据。
但由于各种原因使这些反应在设计、操作及实验中暴露出许多问题。
例如：样品提取后离心力过强或是温度控制不当都会导致部分序列丢失；测序仪器加样速率太快，造成样品损失；某些序列产生的 PCR 产物不稳定，而导致所需反应体积增大等等。
这就迫切要求建立一个能保证每次获得尽可能多的测序片段以及可靠地实现高通量测序的有效策略与手段，这也正是本文的研究目的之一。
本文从试剂盒配置到反应体系优化主要涉及三个内容。
第一章介绍用于测序的各类化合物的基本特点、提取、纯化与鉴定步骤以及常见方法的检测限、特异性和敏感性等，最后给出一个用于测序的简单平台。
第二章介绍了利用光催化还原氧化反应制备光催化纳米金属粉末的研究进展并阐述了光催化剂粒径对纳米颗粒光催化活性的影响。
第三章采用核磁共振波谱方法结合质谱技术研究测序反应体系中溶剂的迁移和取向，同时探讨了样品中干扰碱基的鉴别问题。
第四章通过加入变性高效液相色谱柱，改善了常规的测序条件下的稳定性，解决了化学修饰引起的扩增信号重叠问题，同时还考察了基质效应、内标影响以及核酸酶的反应活性。
第五章则详细阐述了测序反应体系的优化问题，通过实验确定了测序反应体系中6种变量的最佳取值范围，同时也分析了反应体系中存在的其他非线性现象，以期为建立更好的测序反应体系奠定坚实的理论基础。
本课题来源于课程设计的项目，我认为在课程设计中遇到很多困难，只有克服这些困难才能让自己变得更加强大，才能将理论知识运用于实践。
总之，此次设计让我收获颇丰，感谢指导老师的悉心教诲！理论上讲，样品纯度越高则测序片段越长。
当然，其价格也就越昂贵。
因此，对于很少量的样品可以选择更便宜的测序技术。
当前，在核酸测序领域已经拥有了很多新型测序技术，它们的反应体系具有低表达量、高表达效率、灵敏度高的特点，适合于小量样品测序的需求。
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变性高效液相色谱在分子生物学中的应用白 桦综述 邓大君 潘凯枫审阅北京市肿瘤防治研究所病因室(北京,100034)摘要变性高效液相色谱法(DHPL C)是在高效液相色谱法的基础上发展起来的一种新方法。
它因使用的温度不同而有不同的应用价值:在非变性温度下进行双链DN A 分离,在部分变性温度下进行基因突变、单核苷酸多态性和甲基化测定,在完全变性温度下对寡核苷酸进行质控和纯化等。
由于该技术具有快速、经济、准确和自动化程度高等特点,目前已经成为分子生物学常用技术之一。
关键词 变性高效液相色谱法;突变;单核苷酸多态性;甲基化;基因型DNA 序列变异分析是遗传学研究的基础。
随着人类基因组计划的完成,迫切需要一种敏感、高效、经济的方法来检测庞大的序列变异。
大规模检测SNP 和突变的技术要求经济、自动化,高通量,无需修饰引物,无需纯化样品等。
在目前分析点突变的诸多方法中,变性高效液相色谱法是少数能同时满足上述条件的技术之一。
它可以自动检测单碱基置换,小片段插入和缺失。
DHPLC 利用杂合双链和纯合双链部分变性温度的不同来检测这些变异。
1 DHPLC 的基本工作原理DNA 分子带负电荷,而分离用色谱柱的固相呈电中性疏水性,因此DNA 分子本身不能直接吸附到柱子上。
一种充当-桥梁.作用的分子)))离子对试剂TEAA(三乙铵醋酸盐),可以帮助DNA 分子与柱子固相填料表面分子结合,使TEAA 的阳性铵离子与DNA 相互作用,同时烷基链与柱子的疏水表面相互作用。
这样DNA 分子越长,结合的TEAA 越多,与固相结合得越牢固。
羟基链与固相结合的强度会随着流动相中乙睛浓度的增加而减弱,DNA 片段越长,结合的TEAA 越多,越不易被洗脱。
因此DNA 片段大小分析是长度依赖性分离,而非序列依赖性分离。
变性温度是影响DNA 片段分析的一个重要因素,变性温度升高保留时间缩短,在适宜的温度下可使DNA 双螺旋呈舒展状态,最大限度的暴露出用于离子对形成的磷酸根基团,使DNA 分子与分离柱产生很强的相互作用,因此40e ~50e 最适合做DNA 片段大小分析,随着温度的升高,分离效率迅速下降,较高的温度常用于进行突变分析。
如果一个二倍体细胞的单拷贝DNA 序列中的碱基存在多态性,或其中一个等位基因(点)存在胚系突变,则其杂合或突变位点上2种碱基的出现频率均等;如果组织中的部分细胞发生了均一的体细胞点突变(如肿瘤细胞),则组织中突变位点上2种碱基的出现比例不均等。
在经历95e 变性再缓慢复性后,这种存在多态或突变位点的靶序列PCR 产物会杂交形成杂合双链(heteroduplex )和纯合双链(homoduplex )混合物(图1)。
图2 N 端晶体结构通常一个杂合个体中突变型G/C(或多态性)与野生型A /T 的比例是1B 1。
分别进行P CR 扩增后,将两种产物混合并加热至95e 再缓慢降温,形成2种杂合双链(A/C 和G/T )和2种纯合双链(A /T 和G/C)如果PCR 产物源自纯合子或者发生了纯合突变的个体,那么只有在与另外一种纯合野生型序列的PCR 产物混合,再变性复性,才能够形成上述杂合和纯合双链。
杂合双链存在错配碱基,其变性温度低于纯合双链,当温度升高到一定程度,先于纯合双链在错配碱基周围解链变性,导致双链减少和单链增多。
由于单链比双链所带的负电荷少,杂合双链比纯合双链更容易形成单链,其保留时间短于纯合双链,在图谱上先于未解链的纯合双链出现。
随着变性温度升高,纯合双链也会部分变性,A=T 含有2个氢键,C S G 含有3个氢键,前者变性程度比后者低,因此先出现的峰为含有AT 的双链,后出现的为含CG 的双链。
利用这种杂合和纯合双链在保留时间上的差异,可以快速分析单个核苷酸的突变和多态性。
当温度升高到70e以上,双链呈完全变性状态,形成4种单链。
寡核苷酸的分离是长度和序列依赖性的,在链长度相同时,依靠碱基组成不同引起的保留时间的差异达到分离寡核苷酸的目的。
T带有甲基基团,保留时间最长,G含有一个羰基和一个氨基,比只含有一个氨基的A保留时间短,C疏水性最弱,保留时间最短,因此保留顺序为C<G<A <T。
在该温度下可进行寡核苷酸的纯化,质量控制,同时利用引物延伸进行已知位点基因型的分析。
2DHPLC的实际应用¹在非变性温度(40e~50e)条件下对不同长度的双链DNA进行分离,用于定量反相PCR、长度多态性分析以及杂合性缺失(LOH)分析等;º在部分变性温度(51e~75e)条件下进行基因突变,单核苷酸多态性和CpG甲基化的检测;»在完全变性温度(70e~80e)条件下对寡核苷酸进行质量控制和纯化,RNA分离及已知位点基因型的分析等。
这种利用双链分子变性温度的差异,对DNA进行分离的高效液相色谱分离技术称为变性高效液相色谱法(DHPLC)。
211微卫星分析Devaney等在非变性温度下分析了人类酪氨酸基因第一内含子HUM TH01区微卫星序列,得到了8类等位基因的精确长度,这些等位基因含有不同数量的重复序列,具个体特异性,将这些片段作为对照,利用在保留时间上的微小差异来鉴别受检个体的特征。
在司法案件中常利用该区域做身份鉴定[1]。
212Q-RT-PC R将精确定量的竞争子与未知质量的mRNA共同扩增后,在非变性温度下将这两种不同长度的RNA分离开来,在WAVEMAKER TM4.0软件支持下得出待测RNA的原始拷贝数[2]。
213DNA片段长度分析DHPLC能利用不同长度双链在保留时间上的微小差异精确地将它们分离开来。
性别分析是司法鉴定的一部分,利用性别特异性片段的长度差异可进行性别鉴定。
人类X-Y同源基因amelogenin是用于做性别鉴定的基因。
X-特异性产物长为212 bp,Y-特异性产物长为218bp,即使只有4个碱基的差异,WAVE系统在非变性温度下仍能精确的将两者分开,而且通过整合峰区域还可知晓原始基因的拷贝数[3]。
214单核苷酸多态性和突变分析近几年,应用DH PLC成功检测突变的报道逐渐增多,显示了该方法卓越的特异性和敏感性。
O. Donovant等[4]用该方法检测凝血因子Ù(F9)的外显子H和NF1基因(neurofibromamatosis ty pe1)外显子16的变异情况,发现敏感性和特异性都达到100%,而单链构象多态性分析(SSCP)仅检测到F9基因50%的突变率。
Liu等[5]检测Marfan综合征病人FBN1基因,不仅发现了所有SSCP检测到的突变,而且还观察到17个新的突变类型,SSCP的检测率仅达到DH PLC的69%。
Dobson等[6]发现DH-PLC和F-SSCP(capillary electrophoresis-based fluo-rescent single-strand conformation polymorphism analysis)在突变检测率上基本相同,敏感性达到93%~100%,特异性为100%。
然而SSCP要求片段长度在164~270bp,而且需要荧光素标记,纯化,浓缩产物,增加了分析成本,而且该方法的敏感性易受片段大小和序列的影响,当片段大于300bp或突变位于发卡结构中时,会导致敏感性大大降低;而DHPLC允许的片段长度在150~700bp,基本不会影响敏感性。
Skopek等[7]检测人类HPRT基因ex-on8,20个点突变散布在279bp长的片段内,其检测率达到100%,每个区域的熔解温度在65e~69e 之间,而变性梯度凝胶电泳在如此高的熔解温度下无法进行变异分析。
Van den Bosch等[8]检测肿瘤病人线粒体DNA(mtDNA)突变情况,发现A8344G 突变率在0.5%时仍有信号。
长期以来,测序被认为是检测基因变异的金标准。
然而,Jones等[9]证实当DHPLC能再现杂合峰而直接测序结果为阴性时,不应过早地认为是假阳性结果,而应将目的片段克隆到足够数量再进行测序。
DH PLC检测突变的能力通常取决于纯合双链和杂合双链的变性温度以及PCR产物的纯度。
当突变率达20%时,DHPLC检测率为100%,而直接测序的检出率仅达80%。
因此,对于镶嵌性基因或异质性基因来说,DH PLC仍不失为一个首选方法。
215甲基化分析邓大君等[10~12]创建了DH PLC法检测CpG岛甲基化的新方法:由于亚硫酸氢钠基本不会修饰5-甲基胞嘧啶(5mC),与未甲基化的CpG岛模板相比,甲基化CpG岛模板中保留了数目众多的未修饰5mC,变性温度明显高于前者(2e~3e),在DH-PLC中保留时间显著延长。
所以在DH PLC中2者能被轻易区分。
因为该方法使用与测序法和CO-BRA 相同的引物设计策略,所以单链特异性PCR (ssPCR)扩增过程不受CpG 点甲基化程度的影响,适用于所有的CpG 岛扩增。
因为DHPLC 能够检出95%以上的碱基点突变,所以能够轻易分离存在多点(取决于存在甲基化差异的CpG 位点数目)/突变0的各种甲基化和非甲基化CpG 岛。
与特定CpG 位点(酶切位点、引物/探针配对CpG 位点)甲基化检测方法(例如COBRA 、MSP 等)不同,该方法能够检出整个扩增片段中CpG 位点的甲基化差别,不一定要预先得知关键性CpG 位点所在。
这种方法往往还需要排除点突变的干扰,同时进行未修饰序列的点突变检测,所以还能获得点突变或单核苷酸多态性的资料。
这种方法的另外一个优点是能够对样品中模板的甲基化比例进行定量测定。
其缺点是不能指出具体的甲基化CpG 位点。
目前已经成功地应用DH PLC 进行了hMLH 1、cox -2、MT -3和SNRPN 基因的甲基化研究。
216 引物延伸法该方法能迅速定量分析已知位点基因型,可用于多态性和甲基化研究工作。
含有待测位点的目的片段完全变性形成单链产物,针对多态位点设计两对引物,扩增液中加入ddNTP(假如存在A/C 多态性,则加入ddATP 和ddCTP),根据这两种双脱氧核糖核酸的掺入量可以得到特异性位点多态性的比例或者甲基化频率[13]。
217 寡核苷酸的纯化寡核苷酸是现代分子生物学常用反应物,人工合成的寡核苷酸的性质尤其是纯度对于新药研制和疾病诊断至关重要。
DHPLC 能迅速有效地纯化产物,在完全变性温度下能溶解单链核苷酸,单链越长,保留时间越长,它能分析长度在十几到二十几的寡核苷酸;当单链长度相同时,DH PLC 采用序列依赖性分离。
DHPLC 的广泛应用加速了遗传标记物的产生,这些标记物可用于连锁分析、人类进化研究以及疾病相关基因的鉴定。
至今,人类对于癌症和其他常见病的病因认识非常有限,主要原因在于很多疾病是多基因联合变异的结果,而且环境因素也在疾病发生中发挥重要作用。